Name: fluorescent orthotopic mouse model of pancreatic cancer
Uploaded: 2016-09-20T08:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer at JoVE.com

We thank the Western University of Health Sciences for the Intramural Grant.

הפרוטוקול המתואר להלן מבוצע תחת הדרכתו ואישור של טיפול בבעלי חיים מערבי אוניברסיטת ועדת שימוש. כל הניסויים מבוצעים בהתאם לכל ההנחיות הרלוונטיות, רגולציה רשויות רגולטוריות. 1. תרבית תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת בינוני מלא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בארון בטיחות ביולוגי Class II, להכין מדיום מלא ידי בסביבה נקיה מחיידקי הוספה בסרום שור עוברי (FBS) ו סטרפטומיצין פניצילין (P / S) כדי בקבוק 500 מיליליטר של מדיום RPMI. מערבבים בעדינות על ידי מתערבל. הריכוז הסופי של כל תוסף הוא 10% FBS ו -1% P / S (v / v). לדוגמה, להשלים 500 מ&quot;ל של התקשורת עם 56 FBS מ&quot;ל ו -6 מ&quot;ל P / S. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים בינוני מלא באמבט מים ב 37 ° C. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מפשיר תאים Propagating <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחזר תאי GFP Panc-1 מ חנקן נוזלי. להפשיר את הבקבוקון על ידי תסיסה עדינה באמבט מים ב 37 ° C. הערה:פשרה צריכה להיות מהירות (כ 2 - 3 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבל T-75 צלוחיות לשמש עם (א) שם תא אונליין, (ב) מספר המעבר, (ג) תאריך, ו- (ד) ראשי התיבות של החוקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את הבקבוקון עם 70% אתנול ו העברת בקבוקון בארון בטיחות ביולוגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפיץ את התאים, להוסיף 9.0 מ&quot;ל של בינוני מלא צינור חרוטי 15 מ&quot;ל. בעזרת פיפטה 1.0 מ&quot;ל, ולהעביר את ההשעיה התא בזהירות להתלותו ב 9 מ&quot;ל של מדיום שלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב 125 XG במשך 8 דקות ב RT. מעביר את בקבוקון החרוטים לארון בטיחות ביולוגי ו לשאוב supernatant מבלי להפריע הגלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשעות גלולה ב 10 מ&quot;ל של מדיום שלם טרי ידי pipetting ההשעיה בעדינות מעלה ומטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים עם hemocytometer צלחת אותם צלוחיות T-75 בצפיפות של 2.1 x 10 6 תאים / בקבוקון. מניחים בקבוק באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג התאים יומי לפי עין ותחת מיקרוסקופ. אם שפעתid חידוש נדרש, בסביבה נקיה מחיידקים לשאוב את מדיום הגידול להשלים מהבקבוק וזורק. להוסיף נפח שווה של בינוני שלם טרי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפצת תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסביבה נקייה מחיידקים, להסיר בינוני מהבקבוק. הוסף 5 מ&quot;ל של תמיסת מלח פוספט חיץ של Dulbecco (DPBS) כדי לשטוף תאים וזורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתק את התאים מהבקבוק על ידי הוספת 3 מ&quot;ל של טריפסין 0.25%. דגירת בקבוק המכיל טריפסין ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 למשך 5 עד 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו לב תאים תחת המיקרוסקופ (בהגדלת 10X) ולוודא שהם עגולים וחלצו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנטרל טריפסין על ידי הוספת נפח שווה של בינוני מלא ולשבור את גושים ידי pipetting בעדינות מעלה ומטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים באמצעות hemocytometer ולהעביר את נפח תא ההשעיה המתאים צלוחיות חדשות על צפיפות התאים מוזכרת 1.2.7; להוסיף מספיק תקשורת טריה ולכן הנפח הסופי הוא 10 מ&quot;ל לכל בקבוק. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cell Suspensהכנת יון עבור הזרקה הערה: מאז מטריקס הקרום במרתף, ריכוז גבוה, מבצר ב RT, לשמור את כל החומרים על קרח. מניחים את כל הטיפים פיפטה סטרילית בקבוקונים במקפיא למשך הלילה, ולשמור על הקרח תוך כדי עבודה על ההשעיה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור בקבוק של RPMI תקשורת ללא כל תוספים על קרח. להפשיר את מטריקס קרום במרתף, ריכוז גבוה, על ידי ביצוע הוראות היצרן. רצוי, aliquot לתוך צלוחיות קטנות יותר כדי למנוע להקפיא להפשיר מחזורים מרובים 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקשורת לשאוב מכל צלוחיות, ולשטוף עם 5 מ&quot;ל של DPBS. חזרה על כל השלבים בסעיף הקודם עד שלב 1.3.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר תוכן לצינור צנטריפוגות חרוטי 15 מ&quot;ל ב 125 XG במשך 8 דקות ב RT. עבר בקבוקון חרוטים לארון biosafety מחדש להשעות גלולה באמצעות 10 מיליליטר של DPBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות פיפטה ההשעיה למעלה ולמטה כדי לשבור את הגלולה. ספירת תאים באמצעות hemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגות שוב כמתואר בסעיףTEP 1.4.3. לשאוב supernatant תלוי במספר התאים, להוסיף diluent המתאים להניב 3 x 10 6 תאים לתוך נפח של 50 μl. Diluent יהיה תערובת של תקשורת חופשית בסרום קרום מטריקס במרתף בריכוז גבוה במיוחד ביחס של 1: 1 (V / V). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> וורטקס ההשעיה בעדינות ולשמור על הקרח בכל עת. ההשעיה היא כעת מוכנה להזרקה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השרשה כירורגי הערה: ודא שכל החומרים והכלים כירורגית הם עקרים. לתרגל טכניקות מזוהמות בכל העת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח כרית חימום על השולחן ומכסה וילון סטרילית. הגדר את מכונת ההרדמה ולהבטיח את כל האספקה ​​היא בהישג היד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את האף של בעל החיים לתוך מסכת ההרדמה ולהקים ההרדמה עד 1 L / min חמצן ו -2.5 isoflurane%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשפשף בעדינות את צד גופה של חיה עם יוד, ולשטוף עם אתנול 70%. חזור שלוש פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשר אתחיה בהרדמה מלאה על ידי צובט את הכף האחורית. החיה היא בהרדמה מלאה ומוכנה לניתוח אם אין תגובה הוא ציין. עם זאת, אם בעל החיים נרתע, להבטיח שיש הרדמה מספיק מאדה ולאפשר החיה יותר זמן ללכת לגמרי בהרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען כ 200 μl של השעיה התא לתוך מזרק TB 1.0 מ&quot;ל עם מחט 18 G (מקורר בעבר). החלף את המחט עם מחט 27 G ולחזור קרח עד מוכן לשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את האזור הכללי של הטחול (ברבע העליון השמאלי של הבטן) ו מלקחיים באמצעות לצבוט את העור על גבי אזור זה. בעזרת מספריים כירורגיות עושים חתך של כ 1.0 ס&quot;מ כדי ליצור כיס. באופן דומה, לצבוט את השריר החלק על גבי הטחול לחתוך כדי לגשת חלל הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לתפוס את סוף הזנב של הטחול ולמשוך אותו אל מחוץ לגוף. הלבלב יצורף הטחול. מורחים את הלבלב באמצעות רטוב stQ-Tip erile ולאתר את הזנב של הלבלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק את הזריקה 50 μl לתוך הזנב של הלבלב, להשאיר את המחט בתוך 10 שניות לאט לסובב את המחט של הלבלב. השתלה מוצלחת תיראה כמו בועה שטחית ללא דליפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את הלבלב והטחול אל חלל הצפק. ראשית להקיף את השריר ואז להקיף את העור בנפרד. השתמש 6-0 תפר או מצרך כדי לסגור את החתך. כדי למנוע כאבים בעלי חיים, לנהל ketoprofen תת עורית (SC) (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) מעל 24 שעות. לחלופין, לנהל sc עצירות (0.05 - 0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג) כל 12 שעות במשך 36 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחזר את החיה מן ההרדמה ולהחזירו לכלוב שלה. גם לפקח על כאב. בעלי חיים חייבים להיות מסופקים עם הקלה על כאב בזמן (או אפילו לפני - מנע) ניתוח. הקלה על כאב נוסף חייבת להינתן לבעלי חיים החווים כאב פי IACCUC-פרוטוקול או כפי שקבע בוטיפל וטרינר או שלוחיהם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתחום ההדמיה vivo הערה: לכידת תמונה בוצעה באמצעות מערכת הדמיה מסחרית מצוידת בתא חושך את המסננים המתאימים הדמית GFP. תמונה הרכישה נעשתה באמצעות מצלמת CCD ו מערכת אופטית המורכבת עדשות עירור להחלפה / פליטה (עירור: 455 - 495 ננומטר; פליטה: 513 - 557 ננומטר). תמונות שדה מוארות נתפסו ללא מסנן 1 x 1 binning עבור כל נקודת זמן. עירור של ה- GFP מנוצל מקור אור multispectral קסנון. בעלי החיים היו מתוחזקים בהרדמה לאורך כל תהליך ההדמיה ידי חיבור מכונת הרדמת סעפת גז הרדמה משולבת לתוך התא האפל של מערכת ההדמיה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את החיה כפי שמתואר 1.5.2. מסיכת הרדמה היא בחלק הפנימי של החדר החשוך של מערכת ההדמיה המסחרית כדי לשמור על בעלי החיים תחת הרדמה במהלך ההדמיהתַהֲלִיך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת מסננים עירור ופליטה הנכון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין על ידי קבלת תמונה ראשונית באמצעות אור לבן בלבד. שמור באותה תנוחה של החיה לאורך כל הפגישה הדמיה ולעבור מסננים GFP לקחת דימוי נוסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת התוצאות הטובות ביותר להרכיב שתי התמונות. לנתח את התמונה עבור אזור העוצם פלורסנט. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Smyth, E., Cunningham, D., Kasper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Harrison's Principles of Internal Medicine. , (2015).</li><li>Mahipal, A., Frakes, J., Hoffe, S., Kim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+borderline+resectable+pancreatic+cancer.">Management of borderline resectable pancreatic cancer.</a> World J Gastrointest Oncol. 7, 241-249 (2015).</li><li>De La Cruz, M. S., Young, A. P., Ruffin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+pancreatic+cancer.">Diagnosis and management of pancreatic cancer.</a> Am Fam Physician. 89, 626-632 (2014).</li><li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+mouse+cancer+models.">Maximizing mouse cancer models.</a> Nat Rev Cancer. 7, 645-658 (2007).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+orthotopic+xenografts:+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts.">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nat Rev Cancer. 15, 451-452 (2015).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multiple+uses+of+fluorescent+proteins+to+visualize+cancer+in+vivo.">The multiple uses of fluorescent proteins to visualize cancer in vivo.</a> Nat Rev Cancer. 5, 796-806 (2005).</li><li>Jiang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+orthotopic+pancreatic+cancer+mouse+model:+cells+suspended+and+injected+in+Matrigel.">Establishment of an orthotopic pancreatic cancer mouse model: cells suspended and injected in Matrigel.</a> World J Gastroenterol. 20, 9476-9485 (2014).</li><li>Arranz, A., Ripoll, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+optical+imaging+for+pharmacological+studies.">Advances in optical imaging for pharmacological studies.</a> Front Pharmacol. 6, 189 (2015).</li><li>Metildi, C. A., Kaushal, S., Hoffman, R. M., Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+serial+selection+of+human+pancreatic+cancer+cells+in+orthotopic+mouse+models+produces+high+metastatic+variants+irrespective+of+Kras+status.">In vivo serial selection of human pancreatic cancer cells in orthotopic mouse models produces high metastatic variants irrespective of Kras status.</a> J Surg Res. 184, 290-298 (2013).</li><li>Kim, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+orthotopic+and+heterotopic+human+pancreatic+cancer+xenografts+in+immunodeficient+mice.">Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 4, 1670-1680 (2009).</li><li>Katz, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+efficacy+of+adjuvant+cytosine-analogue+CS-682+in+a+fluorescent+orthotopic+model+of+human+pancreatic+cancer.">Survival efficacy of adjuvant cytosine-analogue CS-682 in a fluorescent orthotopic model of human pancreatic cancer.</a> Cancer Res. 64, 1828-1833 (2004).</li><li>Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optical+imaging+of+primary+tumor+growth+and+multiple+metastatic+events+in+a+pancreatic+cancer+orthotopic+model.">Real-time optical imaging of primary tumor growth and multiple metastatic events in a pancreatic cancer orthotopic model.</a> Cancer Res. 62, 1534-1540 (2002).</li></ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

אנו מתארים מודל בעכברים orthotopic של סרטן הלבלב המבטא GFP, ובכך מאפשר ניטור פולשני של הגידול באמצעות הגוף כולו בתחום ההדמיה ניאון vivo (איור 1). טכניקה זו מאפשרת לנו לפקח על התפתחות גידולים בזמן אמת (איור 3); זה יכול להיות כלי חשוב לחוקרים ללמוד את הי...

סרטן הלבלב מאובחן עם שכיחות מוגברת בהשוואה לסוגים אחרים של סרטן, והוא הגורם המוביל 4 th של מקרי מוות הקשורים לסרטן בארצות הברית. מרגע אבחון, מעל 90% מהחולים מתים תוך חמש שנים 1,2. נכון לעכשיו, הסרת גידול כירורגית היא התרופה היחידה לסרטן לבלב, אך פחות מ -20% מהחולים כשירים לעבור ניתוח בעיקר בגלל בעת אבחנת המחלה נמצאת בשלב מתקדם יש גרורות 3,4. היעדר סימפטומים ספציפיים עושה סרטן לבלב מחלה שקטה; חלק מהתסמינים כולל כאבי בטן, כאבי גב, חוסר תיאבון, צהבת ובחילות; אשר יכול להתפרש בקלות כמו מחלות עיכול נפוצות 4. מסיבה זו, חשוב לפתח כלים תרופתיים חדשים כדי לסייע באבחון והטיפול בסרטן לבלב. השימוש במודלים של בעלי החיים מאפשר לנו להבין את הביולוגיה של pancreסרטן atic ומספק תובנה יישום הידע הזה לבני אדם. מודלים orthotopic xenograft של סרטן הלבלב הם מציאותיים, כי גידולים לגדול האיבר ממוצא 5. בניגוד למודלי heterotopic, שבו שורות תאים או שברי גידול הם מושתלים מתחת לעור, דוגמנות orthotopic מאפשרת הבילוי של microenvironment הגידול ומחק את האינטראקציה של תאים סרטניים עם סביבתה 6. המודל xenograft המתואר כאן נובעת גידולים משורת תאים סרטניים אנושיים הלבלב GFP Panc-1, אשר מהונדסים גנטית כדי לבטא את חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP). זיהוי GFP מאפשר עבור הדמיה לא פולשנית וניטור של גידול וגרור 7. התפתחות גידולים מתרחשת במהירות, באופן ספונטני, דומה מאוד לזה של גידולים ראשוניים של חולי סרטן לבלב אנושיים 8. מודלי Orthotopic לספק חיזוי מדויק יותר של יעילות תרופה בתגובת סוכנים טיפוליים, תוךמחקה את המיקרו-סביבה של הגידול. כאמור, מודל זה חי מאפשר זיהוי ניאון של גידול וגרור בזמן אמת. איתור פלורסנט מאפשר הדמיה ישירה / חיות לעומת הארה. עם קרינת האור הנפלט היא תוצאה של עירור על ידי אור אחר של אורך גל קצר יותר; ואילו הארה, האור הנפלט הוא התוצאה של תגובה כימית, וייתכן שלא יהיה 9 פליטה חזקה. יתר על כן, כל הגוף הדמיה ניאון vivo אינה מזיקה החיה מאפשר לחוקרים לעקוב אחר גדילת הגידול לאורך זמן בתגובה לטיפולים.

<table><tbody><tr><td>RPMI media 1640</td><td>Caisson Labs</td><td>RPL03-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10437-077</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel HC basement membrane, high concentration</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>SutureVet PGA 6-0 PGA</td><td>Henry Schein</td><td>39010</td><td></td></tr><tr><td>Alcare or Foamed Antiseptic Handrub</td><td>Steris</td><td>639680</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dubelcco&#039;s Phosphate-Buffered saline)&amp;nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>21300025</td><td></td></tr><tr><td>TB Syringe 27 G 1/2</td><td>Becton Dickinson</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Blutler Schein</td><td>50562</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors, 5.5&quot; straight mayo&amp;nbsp;</td><td>Henry Schein</td><td>22-1600</td><td></td></tr><tr><td>PANC-1 GFP cell line&amp;nbsp;</td><td>Anticancer, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Small Animal Imaging System: iBox Scientia</td><td>UVP, LLC. Upland, CA.</td><td></td><td>Small Animal Imaging System to observe the fluorescent tumor in live animals</td></tr></tbody></table>

fluorescent orthotopic mouse model of pancreatic cancer

סרטן לבלב נשאר אחד מסוגי הסרטן עבורו הישרדות לא השתפרה באופן משמעותי בעשורים האחרונים. רק 7% מהחולים מאובחנים ישרדו יותר מחמש שנים. על מנת להבין לחקות את המיקרו-סביבה של גידולים בלבלב, השתמשנו במודל orthotopic Murine של סרטן הלבלב, המאפשרת הדמיה לא פולשנית של התקדמות הגידול בזמן אמת. תאי סרטן לבלב לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק (Panc-1 GFP) הושעו במטריצת קרום במרתף, ריכוז גבוה, (למשל, Matrigel HC) עם סרום ללא מדיה ולאחר מכן מוזרק לתוך הזנב של הלבלב באמצעות פיום בטן. השעית התא במטריצת הקרום במרתף ריכוז הגבוה הופכת חומר דמוי ג&#39;ל ברגע שהוא מגיע לטמפרטורת חדר; ולכן, זה ג&#39;לים כאשר הוא בא במגע עם הלבלב, יצירת חותם במקום ההזרקה ומניעת דליפת תא. צמיחת גידולים וגרורות לאיברים אחרים מנוטרים חיחיות באמצעות קרינה. זה קריטי להשתמש במסנני מתאים עירור ופליטה של ​​GFP. הצעדים להשתלה orthotopic מפורטים במאמר זה כל כך החוקרים יכולים לשכפל את ההליך בקלות בעכברים בעירום. השלבים העיקריים של פרוטוקול זה הם הכנת תרחיף תאים, ההשתלה כירורגית, ו פלורסנט הגוף כולו בתחום ההדמיה vivo. מודל orthotopic זה נועד לחקור את היעילות של הרפוי רומן על גידולים ראשוניים גרורתי.

שיטה זו מתארת ​​השתלת orthotopic כירורגית של תאי סרטן לבלב אנושיים פלורסנט, התמקדות הכנת השעית התא להזרקה, הרדמה תקינה מכרסמים, משלוח של תרחיף תאים באמצעות פיום בטן, ושימוש ניאון in vivo הדמית חיה קטנה. הגילוי של אותות קרינה ירוקים (אות ה- GFP) בין שניים ו...

Watch this Scientific Journal Video about Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer at JoVE.com

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

fluorescent-orthotopic-mouse-model-of-pancreatic-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

16.6K Views.  Western University of Health Sciences. A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here. 

Video: Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less aggressive breast tumors, the 5-year survival rate of TNBC patients is 77% due to their characteristic drug-resistant phenotype and metastatic burden. Toward this end, murine models have been established aimed at identifying novel therapeutic strategies limiting TNBC tumor growth and metastatic spread. This work describes a practical guide for the TNBC orthotopic model where MDA-MB-231 breast cancer cells suspended in a basement membrane matrix are implanted in the fourth mammary fat pad, which closely mimics the cancer cell behavior in humans. Measurement of tumors by caliper, lung metastasis assessment via in vivo and ex vivo imaging, and molecular detection are discussed. This model provides an excellent platform to study therapeutic efficacy and is especially suitable for the study of the interaction between the primary tumor and distal metastatic sites.

This work presets an advanced protocol to accurately assess tumor loading by detection of green fluorescent protein and bioluminescence signals as well as the integration of quantitative molecular detection technique.

לומדת משולשת סרטן השד שלילי באמצעות אורתובנושא שד סרטן השד מודל

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

אולטרה סאונד-הדרכה אורתודפית של הלבלב מורלין אדנוקרצינומה

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer (PC). To address this deficiency, we describe a mouse model involving orthotopic implantation of PC followed by distal pancreatectomy and splenectomy. The model has been demonstrated to be safe and suitably flexible for the study of various therapeutic approaches in adjuvant and neo adjuvant settings.
In this model, a pancreatic tumor is first generated by implanting a mixture of human pancreatic cancer cells (luciferase-tagged AsPC-1) and human cancer associated pancreatic stellate cells into the distal pancreas of Balb/c athymic nude mice. After three weeks, the cancer is resected by re-laparotomy, distal pancreatectomy and splenectomy. In this model, bioluminescence imaging can be used to follow the progress of cancer development and effects of resection/treatments. Following resection, adjuvant therapy can be given. Alternatively, neoadjuvant treatment can be given prior to resection.
Representative data from 45 mice are presented. All mice underwent successful distal pancreatectomy/splenectomy with no issues of hemostasis. A macroscopic proximal pancreatic margin greater than 5 mm was achieved in 43 (96%) mice. The technical success rate of pancreatic resection was 100%, with 0% early mortality and morbidity. None of the animals died during the week after resection.
In summary, we describe a robust and reproducible technique for a surgical resection model of pancreatic cancer in mice which mimics the clinical scenario. The model may be useful for the testing of both adjuvant and neoadjuvant treatments.

In the clinical context, patients with localized pancreatic cancer will undergo pancreatectomy followed by adjuvant treatment. This protocol reported here aims to establish a safe and effective method of modelling this clinical scenario in nude mice, through orthotopic implantation of pancreatic cancer followed by distal pancreatectomy and splenectomy.

מודל עכבר כריתה אורתוטופי של סרטן הלבלב

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

דגם orthotopic bioluminescent של התקדמות סרטן הלבלב

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

Medicine

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, immune cells, vessels, nerves, and extracellular matrix components. Over the years, different mouse models of PDAC have been developed to address the challenges posed by its progression, metastatic potential, and phenotypic heterogeneity. Immunocompetent mouse orthotopic allografts of PDAC have shown good promise owing to their fast and reproducible tumor progression in comparison to genetically engineered mouse models. Moreover, combined with their ability to mimic the biological features observed in autochthonous PDAC, cell line-based orthotopic allograft mouse models enable large-scale in vivo experiments. Thus, these models are widely used in preclinical studies for rapid genotype-phenotype and drug-response analyses. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach to successfully inject primary mouse PDAC cell cultures into the pancreas of syngeneic recipient mice. In addition to the technical details, important information is given that must be considered before performing these experiments.

Syngeneic mouse orthotopic allografts of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) recapitulate the biology, phenotypes, and therapeutic responses of disease subtypes. Owing to their fast, reproducible tumor progression, they are widely used in preclinical studies. Here, we show common practices to generate these models, injecting syngeneic murine PDAC cultures into the pancreas.

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts למודל סרטן הלבלב

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.

הדמיית תהודה מגנטית משופרת ניגודיות דינמית של דגם orthotopic סרטן לבלב עכבר

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe ...

<meta charset="utf8"></head><body>טיפול מאמץ באמצעות לימפוציטים חודרים לגידול במודלים של סרטן הלבלב

Flow Cytometry-Based Isolation and Therapeutic Evaluation of Tumor-Infiltrating Lymphocytes in a Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer is an aggressive malignancy with a dismal prognosis and limited therapeutic options. Adoptive cell therapy, which involves isolating and activating a patient&#39;s own immune cells, such as tumor-infiltrating lymphocytes (TILs), before re-infusing them, represents a promising experimental approach. However, techniques for adoptive cell transfer in preclinical pancreatic cancer models are not well established. Here, we describe a detailed protocol for adoptive cell therapy using TILs from a syngeneic pancreatic cancer mouse model. The procedure involves implanting live or irradiated mouse pancreatic cancer cells in fluorescence-labeled reporter mice to initiate immune cell influx, then isolating lymphocytes from primary tumors via flow cytometry sorting and/or activating and expanding tumor-reactive T cells ex vivo, and adoptively transferring these activated T cells intraperitoneally into tumor-bearing mice, followed by interleukin-2 administration.&#160;Bioluminescent tumor imaging allows for longitudinal monitoring of orthotopic tumor growth and response to therapy, especially evaluating the tumor-specific cytotoxic effects. This approach recapitulates the logistics involved in developing adoptive cell transfer therapies for pancreatic cancer patients. The results demonstrate enhanced antitumor efficacy of adoptively transferred tumor-reactive T cells compared to irrelevant lymphocyte controls. This versatile methodology enables the in vivo study of adoptive immunotherapy in pancreatic cancer as well as the optimization of cell processing parameters and combination treatment regimens.

<meta charset="utf8"></head><body>בידוד מבוסס זרימה ציטומטריה והערכה טיפולית של לימפוציטים חודרים לגידול במודל עכבר של סרטן הלבלב

We describe a method to utilize tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) from mice through flow cytometry for adoptive cell transfer. This protocol aims to verify the specific cytotoxicity of TILs against tumors in a syngeneic pancreatic cancer mouse model, providing insights into the development of adoptive cell therapies for pancreatic cancer.

בידוד מבוסס זרימה ציטומטריה והערכה טיפולית של לימפוציטים חודרים לגידול במודל עכבר של סרטן הלבלב

Pancreatic cancer is an aggressive malignancy with a dismal prognosis and limited therapeutic options. Adoptive cell therapy, which involves isolating and ...

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging study, with an abdominal imaging window, enabled visualization of the cellular dynamics in abdominal organs in vivo. However, due to the soft sheet-like architecture of the mouse pancreas that can be easily influenced by physiologic movement (e.g., peristalsis and respiration), it was difficult to perform stabilized longitudinal in vivo imaging over several weeks at the cellular level to identify, track, and quantify islets or cancer cells in the mouse pancreas. Herein, we describe a method for implanting a novel supporting base, an integrated pancreatic intravital imaging window, that can spatially separate the pancreas from the bowel for longitudinal time-lapse intravital imaging of the pancreas microstructure. Longitudinal in vivo imaging with the imaging window enables stable visualization, allowing for the tracking of islets over a period of 3 weeks and high-resolution three-dimensional imaging of the microstructure, as evidenced here in an orthotopic pancreatic cancer model. With our method, further intravital imaging studies can elucidate the pathophysiology of various diseases involving the pancreas at the cellular level.

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

In vivo high-resolution imaging of the pancreas was facilitated with the pancreatic intravital imaging window.

הדמיה מיוצבת של אורך ב-Vivo ברמה התאית של הלבלב במודל מורין עם חלון הדמיה תוך-וינטלית של הלבלב

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

לומדת משולשת סרטן השד שלילי באמצעות אורתובנושא שד סרטן השד מודל

אולטרה סאונד-הדרכה אורתודפית של הלבלב מורלין אדנוקרצינומה

מודל עכבר כריתה אורתוטופי של סרטן הלבלב

דגם orthotopic bioluminescent של התקדמות סרטן הלבלב

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts למודל סרטן הלבלב

הדמיית תהודה מגנטית משופרת ניגודיות דינמית של דגם orthotopic סרטן לבלב עכבר

בידוד מבוסס זרימה ציטומטריה והערכה טיפולית של לימפוציטים חודרים לגידול במודל עכבר של סרטן הלבלב

בידוד מבוסס זרימה ציטומטריה והערכה טיפולית של לימפוציטים חודרים לגידול במודל עכבר של סרטן הלבלב

בידוד מבוסס זרימה ציטומטריה והערכה טיפולית של לימפוציטים חודרים לגידול במודל עכבר של סרטן הלבלב

הדמיה מיוצבת של אורך ב-Vivo ברמה התאית של הלבלב במודל מורין עם חלון הדמיה תוך-וינטלית של הלבלב