Name: a syngeneic pancreatic cancer mouse model to study the effects of irreversible electroporation
Uploaded: 2018-06-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation at JoVE.com

Bu iş için bir işbirlikçi translasyonel araştırma bursu San Diego C3 Padres Pedal tarafından finanse edilen üzerinden (#PTC2017) neden RRW destek aldı.

Tüm hayvan deneyleri aşağıda bu iletişim kuralı ilgili kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanması gerekir gerçekleştirilen. Burada açıklanan tüm yordamları IACUC UCSD tarafından onaylanmıştır.
1. alıcı hayvan alımı
Not: KPC-Luc 4580 hücre kültürünü LSL Kras doğan bir tümör üzerinden kurulanG12D / +; LSI-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSI-ROSA26 Luc / + PC genetik bir model C57BL/6 arka plan üzerinde fare (KPC),. Bu hücre kültürünü avantajı bu yapısal luciferase etkinleştirme tümör orthotopic modellerinde izleme ifade olduğunu. Ancak, alıcı Farelerin genetik arka plan ile uyumlu oldukları sürece diğer hücre hatları da kullanılabilir.
<ol><li>Deneysel grupları ve grup başına hayvan sayısını önceden belirler.</li>
	<li>Yaş (önerilen 6 - 10 - hafta eski fareler) seçin ve cinsel kullanılan hipotez ve hücre göre hayvanların kullanılır.</li>
</ol>2. kültür hücreleri
<ol><li>Kullanım Dulbecco'nın modifiye kartal Orta (DMEM): besin karışımı F12% 10 fetal Sığır serum (FBS) ve % 1 penisilin-streptomisin antibiyotik (tam büyüme medya) KPC-Luc 4580 hücreleri büyümeye içeren (50: 50) medya.</li>
	<li>Eğer dondurulmuş, hücreleri tümör implantasyon öncesinde 4 gün çözülme.</li>
	<li>Aseptik koşullar altında % 5 CO2 ve % 95 nem ile 37 ° C'de hücrelerin büyümesine.</li>
	<li>% 0.25 hücrelerle trypsinize tripsin onlar ulaşmadan 37 ° C'de 5 min için > % 80 confluency ve iki kez tam büyüme medya hacmi ekleyerek tripsin etkisiz hale getirin. Not: Bu hücreler tümör verimli farelerde % 100 confluency kullandıysanız veya onlar için 12'den fazla kez pasajlı Eğer oluşturmayan. Bu nedenle, en iyi confluency altında önceki pasajlar, hücreleri dondurmak için tavsiye edilir.</li>
	<li>Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak ve yeterli sayı varsa tümör indüksiyon devam edin (0.5 - 1 x 106 hücreler/fare). Eğer değilse, bir daha fazla geçiş için hücreleri yeterli hücre sayıları elde edilen kadar genişletin.</li>
</ol>3. indüksiyon SQ tümörleri
<ol><li>Gerekli malzemeleri hazırlamak: P1000 ve P100 Pipetler ve ipuçları, 1 mL şırınga, 25G iğneler, membran matris (BMM), DMEM bazal medya, 1.5 mL tüpler santrifüj kapasitesi. Tüm malzemeler steril ve soğuk (4 ° C) yordamı sonuna kadar devam et. Ayrıca saç kesme makineleri ve alkol bezlerden hayvan kullanıma hazır tutun.</li>
	<li>(Adım başı olarak 2.4) trypsinize ve hücreleri saymak ve onları bir konsantrasyon 2-4 x 107 hücre/mL soğuk DMEM, resuspend.</li>
	<li>% 100 eşit bir birim eklemek son hücre süspansiyon % 50 olarak yapmak için BMM BMM. Son hacim için hücre süspansiyon gerekli her fare için 50 µL tutar. % 10 fazla ölü boşluk şırınga ve pipetting hatalar için karşılamak için hazır olun.</li>
	<li>Aliquot 550 µL Cilt 1,5 mL santrifüj tüpleri olarak süspansiyon buzun içinde yerleştirilir.</li>
	<li>Bir restrainer kullanarak hayvanlar (6 - hafta eski erkek C57BL/6 fareler) dizginlemek veya el ile. Not: Alternatif olarak, fare ile oksijen gazı 2 L/dak hassas Buharlaştırıcı kullanarak akış hızında % 2.5 isoflurane anaesthetized.</li>
	<li>Tercihen bir kanadının bir bacak üzerinde bir kırpma makası kullanarak Enjeksiyon Makinası tıraş. Bir alkol pamuklu çubuk kullanarak, iki kez Enjeksiyon Makinası temiz.</li>
	<li>1-2 x 107 hücre/mL 1 mL soğuk şırınga son bir konsantrasyon, hücre süspansiyon 250 µL çizmek ve herhangi bir hava kabarcıkları pistonu yukarı ve aşağı hareket ettirerek kaldırın. 25 G iğne şırıngaya takın ve iğne içinde boşluğu doldurmak emin olun.</li>
	<li>Dikkatle iğne derinin altında cesedinin yanında iğne periton boşluğuna veya bacaklarda kas delip değil emin yanları için 30 ° açıyla yerleştirin.</li>
	<li>İğneyi vücuduna paralel dümdüz ve cilt kırışıklıkları düzleştirin. Yavaş yavaş hücre süspansiyon 50 µL enjekte et. İğne 10 için enjeksiyon yerinde tutun s herhangi bir sızıntı önlemek için katılaşmaya BMM izin vermek için.</li>
	<li>Yavaş yavaş herhangi bir yana doğru hareket etmeden paralel tutmak iğne geri alıyorum. Yavaşça bir alkol bez ile Enjeksiyon Makinası temiz ve onun konut için fare düğmesini serbest bırakın. Not: Eğer fare işlem sırasında anestezi, onun iyileştiren refleksleri tekrar yerine geleceğinden hayvan monitör.</li>
	<li>5 mm çapında ulaşıncaya kadar düzenli olarak Çap pergeli kullanarak tümör büyümesini izlemek.</li>
</ol>4. indüksiyon Orthotopic tümörlerin
<ol><li>Gerekli malzemeleri hazırlayın. Otoklav cerrahi gibi neşter, iğne sürücüleri, makas ve işaret ve düz uçlu forseps araçları. Kullanışlı steril dikiş (absorbe 6-0 ve absorbe olmayan 4-0), alkol bezlerden, saç kesme makineleri, depilatory krem, göz yağı, pamuk gazlı bez, % 10 povidone iyot çözüm, cerrahi perdeler, Isıtma pedleri, buprenorfin ve anestezik ajanların tutun.</li>
	<li>Bir donör fare (tercihen orthotopic modeli için gerekli aynı arka plan), ötenazi yavaş dolgu CO2 odası kullanarak SQ KPC tümör taşıyor. Steril forseps ve microscissors kısa bir süre önce orthotopic implantasyon kullanarak BSL-2 başlıklı steril koşullarda dikkatle SQ tümör tüketim. Tümör eksizyonu sırasında periton boşluğuna ponksiyon ve steril PBS 2 değişimi hemen tümörle yıkamak için dikkat ediniz.</li>
	<li>Steril neşter kullanarak, 1 mm3 parçalar halinde çıkarılan tümör kıyma, onları soğuk steril DMEM bazal ortamı içeren bir petri yer ve buza implantasyon kadar saklayın.</li>
	<li>Alıcı fare 0,05 - 1 mg/kg buprenorfin analjezik SQ, ameliyat öncesi 30 dk yönetmek.</li>
	<li>Hassas Buharlaştırıcı (veya diğer anestezik ajanların) kullanarak alıcı fare ile % 2-3 isoflurane oksijen (2 L/dak) anestezi. 37 ° C üzerinde fare yastık yordamın tamamı için Isıtma tutun. Yağ kuruma önlemek için gözler için geçerlidir. Anestezi derinliği refleks başlangıçta şaşırtıcı eksikliği tarafından test ve nazik ayak çimdik için pedal refleks eksikliği ile cerrahi uçak anestezi onaylayın. Anestezi tüm cerrahi işlem sırasında korumak.</li>
	<li>Sırtında fareyi getirin ve karın sol tarafındaki maruz böylece nazikçe bunu onun için düzeltmesi. Depilatory krem kullanarak fare karın saç çıkarın ve hiçbir ücretsiz saç karın sonrası insizyon girer emin olmak için gazlı bez ile temizleyin. Sol karın % 10 povidone iyot alkol mendil tarafından takip 3 kür cilt dezenfekte için kullanma ameliyat için hazırlayın.</li>
	<li>Steril neşter kullanmadan, 1.5 cm enine veya oblik insizyon cilt, 1-cm aşağıda göğüs kafesi, orta hat solundaki dalak için biraz medial olun. O zaman, belgili tanımlık kesme örten yüzeysel kesik yansıtma karın kas aracılığıyla genişletmek.</li>
	<li>Düz kullanarak dalak uçlu forseps bulun ve yavaşça Karın boşluğundan yansıtmak. Steril Pamuklu aplikatör kullanarak dalak geri çekmek ve dalak altına yapıştırılmış Pankreas kuyruk bulmak.</li>
	<li>Düz uçlu forseps kullanarak, Pankreas kuyruk yanal geri çek.</li>
	<li>Donör fare ile bir güzel (6-0) steril dikiş iğne ucu kadar bir ince kıyılmış tümör parça seçim ve steril forseps kullanarak konumlandırın.</li>
	<li>Yavaşça Pankreas kuyruk/beden yanal geri çeker iken, Pankreas kuyruk tümör parçası içeren dikiş iğne yerleştirin. Dikiş yavaş yavaş doku tümörü Pankreas kuyruk ile temas halinde tutan, üzerinden geçmek. Bir veya iki ek dikiş doku ile ilgili olarak çekirdeğin yönlendirme bağlı olarak uygulanır.</li>
	<li>İğneyi tamamen dokudan kaldırmak ve pankreas/dalak için ek bir 60 externalized saklamak kanama veya sızıntı belirtisi için teftiş ederken s. O zaman, onları hafifçe künt forseps kullanarak karın boşluğuna özümsemek.</li>
	<li>6-0 absorbe dikiş ile kullanarak karın kas sürekli ya da dikiş ve örten deri bir 3-0 6-0 absorbe olmayan kesintiye uğramış dikiş kullanarak kapatın. Anestezi bu noktada durdurun.</li>
	<li>Ev onun kafes yiyecek ve su için ücretsiz erişimi kurtarmak için fareyi izin. Kafes kurtarma kolaylaştırmak için ısıtma yastığını yerleştirin. Nefes, kurtarma işlemi sırasında perfüzyon vb gibi hayati izlemek.</li>
	<li>Refleks kez fare kurtarır ve sonra dönüş kafes düzenli konut olabilir keşfetmiş belirtileri onaylamak.</li>
	<li>Buprenorfin 0,05 - 0,1 mg/kg yönetmek 8-12 h ameliyattan sonra ve her 8-12 saat sonra ağrı belirtileri için gerektiği gibi yordam.</li>
	<li>İzlemek bir vivo içinde bioluminescence görüntüleme sistemi kullanarak tümör büyüme ( Tablo reçetesigörmek).<ol>
<li>Günde 4 orthotopic implantasyonu sonrası başlayan Imaging tarafından tümör büyümesini izleyin ve haftada iki kez Imaging gerçekleştirin.</li>
		<li>Görüntüleme gününde (mayi enjeksiyon) yönetmek 30 mg/kg D-biyoluminesans için bir imzalat (oksijen (2 L/dak) % 2-3 isoflurane) alıcı fare görüntüleme önce 10 dak.</li>
		<li>Görüntü için en az 5 s maruz kalma bir ışıldama Imager otomatik floresans ücretsiz ısıtmalı sahne ile ve anestezi fareler için hala korurken içinde herhangi bir emisyon filtre olmadan ışıldama ayarı kullanarak luciferase etkinliğini.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. mustafa SQ tümörlerin
<ol><li>Gerekli malzemeleri hazırlamak: kare dalga electroporator, Emanet ayak pedalı anahtarı, elektrotlar (iğne dizi cımbız-trode karşı) ve adaptörler. Steril dikiş (absorbe olmayan 4-0), alkol bezlerden, saç kesme makineleri, depilatory krem, göz yağı, pamuk gazlı bez, buprenorfin ve anestezi tutun da yakın.</li>
	<li>Cımbız sterilize veya gaz sterilizasyon kullanarak dizi elektrotlar iğne. Isıyla tavsiye edilmez. Cam boncuk Sterilizatör hayvanlar arasında elektrotlar sterilize etmek için kullanın.</li>
	<li>Buprenorfin 0,05 - 0,1 mg/Kg tümörü taşıyan fareler 30 dk önce yordamı için yönetmek.</li>
	<li>SQ tümör implantı 5 mm çap ulaştıktan sonra anestezi farelerde başarılı bir şekilde ikna etmek için 4.4-4.5 adımları izleyin.</li>
	<li>Yan tarafı olarak SQ tümör erişmek için kendi tarafında imzalat fareyi getirin. Saç kesme makineleri ve temiz cilt bir alkol pamuklu çubuk kullanarak kullanarak kaldırın.</li>
	<li>SQ tümörler için 2-iğne dizi elektrotlar kullanın. Deri altında doğrudan forseps kullanarak tümör sitesi yüceltmek ve periton boşluğuna nüfuz değil emin vücut paralel deri yoluyla elektrotlar yerleştirin. Bir kez deri yoluyla elektrotlar tümör ayraç şekilde konumlandırın.</li>
	<li>100 µs bakliyat 150 bakliyat 1.500 V/cm toplam 1 Hz frekansta sunmak için electroporator program. Ayak pedalı kullanarak darbeleri teslim. 10 Bakliyat her kümesi tarafından 10 ayrı s ısı dağıtımı için izin ve elektrotlar doğru konumunu doğrulamak için. Not: paralitik aracıları kullanmadan, kas kasılmaları elektrotlar deplasman el ile güvenli sürece neden olabilir öfke ile fareler yaşayacaksınız.</li>
	<li>Electroporator üzerinde görüntülenen gerçek gerilim teslim, 200 s. kaydı geçmemelidir tam dozaj sonra elektrotlar kaldırın. Fareler 4.14-4.16 adımlara göre IRE kurtarmak izin verir.</li>
</ol>6. IRE Orthotopic tümörlerin
Not: IRE orthotopic tümörlerin üzerinde böylece özel başlamadan yerel IACUC onayını gerektiren aynı fare ikinci bir hayatta kalma ameliyat içerir.
<ol><li>Gerekli malzemeler hazırlamak: otoklav cerrahi alet öyle aynı derecede makas, neşter, iğne sürücüleri, sivri uçlu forseps ve düz uçlu forseps. Aşağıdaki yakın de bulundurun: steril dikiş (absorbe 6-0 ve absorbe olmayan 4-0), alkol bezlerden, saç kesme makineleri, depilatory krem, göz yağı, pamuk gazlı bez, % 10 povidone iyot çözüm, cerrahi perdeler, Isıtma pedleri, kare dalga electroporator, Emanet ayak pedalı anahtarı, elektrotlar ve adaptörler, buprenorfin ve anestezi.</li>
	<li>Fareler orthotopic tümör büyümesi için in vivo görüntüleme tarafından değerlendirmek (bkz. Adım 4,17) intraperitoneally 30 mg/kg D-biyoluminesans enjekte edilerek. Not: tümör ( Temsilcisi sonuçlarıgörmek) Luciferase ışıma görüntülerde görüleceği üzere pankreas için açıkça görülebilir ve hala kapalı olduğunda orthotopic tümör IRE tedavi 8 ila 10 gün sonrası implantasyon için idealdir.</li>
	<li>4.4-4,9, implante tümör bulmak için adımları izleyin. Eğer tümör bulmak kolay değil, küt burunlu forseps yavaşça tümör tanımlamak için dalak ve mide taşımak için kullanın.</li>
	<li>Tümör Küt burunlu forseps ile yansıtmak ve tümör sıkıca cımbız trode platin elektrotlar ile yakalamak. Elektroporasyon bakliyat adım 5,7 kare dalga electroporator setler halinde 10 Bakliyat ayak pedalı anahtarı tarafından kontrol kullanarak programlanmış gibi teslim.</li>
	<li>En az 60 s yazı IRE kanama belirtisi için izlemek için externalized tümör tutun. Tümör karın boşluğuna yerleştirin ve belgili tanımlık kesme olarak açıklanan önceki (adım 4.13-4.16) kapatın ve farenin bunu iyileşene kadar izlemek.</li>
	<li>Vivo luciferase görüntüleme adım 4,17 göre kullanarak tümör büyüme IRE etkilerini izlemek.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Rahib, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projecting+cancer+incidence+and+deaths+to+2030:+the+unexpected+burden+of+thyroid,+liver,+and+pancreas+cancers+in+the+United+States.">Projecting cancer incidence and deaths to 2030: the unexpected burden of thyroid, liver, and pancreas cancers in the United States.</a> Cancer Res. 74 (11), 2913-2921 (2014).</li><li>Howlader, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> SEER Cancer Statistic Review, 1975-2013. , (1975).</li><li>Clark, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+immune+reaction+to+pancreatic+cancer+from+inception+to+invasion.">Dynamics of the immune reaction to pancreatic cancer from inception to invasion.</a> Cancer Res. 67 (19), 9518-9527 (2007).</li><li>Lee, E. W., Loh, C. T., Kee, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+guided+percutaneous+irreversible+electroporation:+ultrasound+and+immunohistological+correlation.">Imaging guided percutaneous irreversible electroporation: ultrasound and immunohistological correlation.</a> Technol Cancer Res Treat. 6 (4), 287-294 (2007).</li><li>Charpentier, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+for+the+ablation+of+liver+tumors:+are+we+there+yet?.">Irreversible electroporation for the ablation of liver tumors: are we there yet?.</a> Arch Surg. 147 (11), 1053-1061 (2012).</li><li>Narayanan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+Electroporation.">Irreversible Electroporation.</a> Seminars in Interventional Radiology. 32 (4), 349-355 (2015).</li><li>Martin, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+200+locally+advanced+(stage+III)+pancreatic+adenocarcinoma+patients+with+irreversible+electroporation:+safety+and+efficacy.">Treatment of 200 locally advanced (stage III) pancreatic adenocarcinoma patients with irreversible electroporation: safety and efficacy.</a> Ann Surg. 262 (3), 486-494 (2015).</li><li>Belfiore, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+CT-guided+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+as+a+novel+neoadjuvant+protocol+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+Our+preliminary+experience.">Percutaneous CT-guided irreversible electroporation followed by chemotherapy as a novel neoadjuvant protocol in locally advanced pancreatic cancer: Our preliminary experience.</a> Int J Surg. 21 Suppl 1, S34-S39 (2015).</li><li>Belfiore, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+chemotherapy+alone+versus+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+on+survival+in+patients+with+locally+advanced+pancreatic+cancer.">Concurrent chemotherapy alone versus irreversible electroporation followed by chemotherapy on survival in patients with locally advanced pancreatic cancer.</a> Med Oncol. 34 (3), 38 (2017).</li><li>Chu, K. F., Dupuy, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+ablation+of+tumours:+biological+mechanisms+and+advances+in+therapy.">Thermal ablation of tumours: biological mechanisms and advances in therapy.</a> Nat Rev Cancer. 14 (3), 199-208 (2014).</li><li>Wissniowski, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+tumor-specific+T+lymphocytes+by+radio-frequency+ablation+of+the+VX2+hepatoma+in+rabbits.">Activation of tumor-specific T lymphocytes by radio-frequency ablation of the VX2 hepatoma in rabbits.</a> Cancer Res. 63 (19), 6496-6500 (2003).</li><li>Eros de Bethlenfalva-Hora, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+ablation+suppresses+distant+tumour+growth+in+a+novel+rat+model+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma.">Radiofrequency ablation suppresses distant tumour growth in a novel rat model of multifocal hepatocellular carcinoma.</a> Clin Sci (Lond). 126 (3), 243-252 (2014).</li><li>Zerbini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+thermal+ablation+for+hepatocellular+carcinoma+stimulates+autologous+NK-cell+response.">Radiofrequency thermal ablation for hepatocellular carcinoma stimulates autologous NK-cell response.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1931-1942 (2010).</li><li>Ali, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dendritic+cells+by+local+ablation+of+hepatocellular+carcinoma.">Activation of dendritic cells by local ablation of hepatocellular carcinoma.</a> J Hepatol. 43 (5), 817-822 (2005).</li><li>Fietta, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammatory+response+and+downmodulation+of+peripheral+CD25+Foxp3++T-regulatory+cells+in+patients+undergoing+radiofrequency+thermal+ablation+for+lung+cancer.">Systemic inflammatory response and downmodulation of peripheral CD25+Foxp3+ T-regulatory cells in patients undergoing radiofrequency thermal ablation for lung cancer.</a> Hum Immunol. 70 (7), 477-486 (2009).</li><li>Jiang, C., Davalos, R. V., Bischof, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+basic+to+clinical+studies+of+irreversible+electroporation+therapy.">A review of basic to clinical studies of irreversible electroporation therapy.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 62 (1), 4-20 (2015).</li><li>Neal, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+local+and+systemic+anti-tumor+efficacy+for+irreversible+electroporation+in+immunocompetent+versus+immunodeficient+mice.">Improved local and systemic anti-tumor efficacy for irreversible electroporation in immunocompetent versus immunodeficient mice.</a> PLoS One. 8 (5), e64559 (2013).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Safran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+reporter+strain+for+noninvasive+bioluminescent+imaging+of+cells+that+have+undergone+Cre-mediated+recombination.">Mouse reporter strain for noninvasive bioluminescent imaging of cells that have undergone Cre-mediated recombination.</a> Mol Imaging. 2 (4), 297-302 (2003).</li><li>Martin, R. C., McFarland, K., Ellis, S., Velanovich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+potential+improved+overall+survival.">Irreversible electroporation in locally advanced pancreatic cancer: potential improved overall survival.</a> Ann Surg Oncol. 20 Suppl 3, S443-S449 (2013).</li><li>Neal, R. E., Garcia, P. A., Robertson, J. L., Davalos, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Characterization+and+Numerical+Modeling+of+Tissue+Electrical+Conductivity+during+Pulsed+Electric+Fields+for+Irreversible+Electroporation+Treatment+Planning.">Experimental Characterization and Numerical Modeling of Tissue Electrical Conductivity during Pulsed Electric Fields for Irreversible Electroporation Treatment Planning.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 59 (4), 1076-1085 (2012).</li></ol>

Yazarların ilgili hiçbir mali açıklamalar vardır.

Bu çalışmada, tümör büyüme IRE etkilerini incelemek için kullanılan PC için bir immün fare modeli göstermiştir. Şu anda, IRE hastalarda ameliyat öncesi terapi ay sonra uzak hastalık ilerleme olmayan sadece son derece seçili yerel olarak gelişmiş PC-termal ablasyon tekniği olarak kullanılıyor. Yerel olarak gelişmiş PC ile hastaların çoğunda uzak metastatik hastalık20geliştirmek çünkü kullanımı bu nedenle sınırlı olmuştur. Bu model çeşitli genişletilmiş teda...

Pankreas duktal adenokarsinom (PC) kanser ölüm ikinci önde gelen nedenidir ABD'de 20201etrafında olmak için tahmin edilmektedir. PC ile tanısı hastaların büyük çoğunluğu uzak metastatik hastalık2den sonunda ölecek. PC microenvironment Rootkitler immünsüpresif ve chemoresistant. Bir kıtlık efektör (anti-tümör) T hücrelerinin ve immünsupresif lökosit, tümör ilişkili makrofajlar (TAMs) dahil olmak üzere bir çıkıntı onun desmoplastic stroma içeren, myeloid türetilmiş bastırıcı (MDSCs) hücreleri ve düzenleyici T hücreleri (Tregs)3 . Bunlar microenvironment bu etkilerini multimodal stratejiler geliştirmek gerek altında yatan.
IRE tümör ablasyon termal olmayan şekli olarak geliştirilmiştir. Termal ablasyon teknikleri, aksine IRE hızlı koagülatif nekroz neden olmaz ancak bunun yerine yavaş yavaş apoptotik hücre ölüm4' te sonuç. Önemlisi pankreas tümörleri, öfke "ısı emici" etkileri için güvenlik açığından etkilenmez ve yanındaki şu5kan damarları gerçekleştirilebilir. Bu teknoloji 510(k) yetkisi FDA6 ve şu anda klinik olarak, seçilen yerel olarak gelişmiş ya da sınırda çevrimsel pankreas kanseri hastalarda kullanılıyor. En büyük yayımlanmış IRE içinde PC7için öfke geçiren hastaların ortalama yaşama yaklaşık iki katı modern kemoterapi rezeksiyon8,9yalnız ile tedavi edilen hastaların sağkalım serisidir.
Çeşitli çalışmalarda bu termal ablasyon (gözden Chu vd. diğer tümör türleri bir sistemik Bağışıklık yanıtında indükler göstermiştir 10). radyofrekans ablasyon (RFA) hayvan tümör modelleri götürmek-e doğru artan T hücre içinde infiltratlar11,12artış hepatosellüler kanser hastaları13, hücrelerde aktif doğal öldürücü (NK) de dahil olmak üzere, 14ve immünsupresif Tregs akciğer kanseri hastaları15dakika sonra bir düşüş. Çalışmaları bir çok daha az sayıda bağışıklık, microenvironmental ve yaralanma yanıt IRE16için inceledik. ÖFKE içinde ikincil (kontralateral) renal hücreli allogrefler büyüme azaltılmış veya birincil tümör IRE tarafından iki hafta engelledi immün fare modellerinde sistemik bir bağışıklık yanıtı uyarmak için gösterilen önceki17. Onlar da immün fareler immün fareler daha az voltaj tam regresyon için gerekli görülmektedir. Olan IRE termal ablasyon koagülatif nekrozu ile karşılaştırıldığında geliştirilmiş antijen sunumu neden olabilir, ama bu değil özellikle çalışılmıştır.
PC syngeneic fare modeli erkek LSL Kras geliştirilen bir tümör üzerinden türetilmiş KPC-Luc 4580 hücre satırından (hediye J.J. Yeh, University of North Carolina), geliştirdiğimizG12D / +; LSI-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSI-ROSA26 Luc / + fare IRE18,19yerel ve sistemik etkileri çalışmaya,. Bu luciferase ifade hücre kültürünü immunojenik ve ayrıca tumorigenic immün C57BL/6 fare olarak SQ veya orthotopically enjekte ve güvenilir bir şekilde dalak enjekte edildiğinde karaciğer metastaz üretir. Biz bir programlanabilir kare dalga darbe jeneratör 100 µs bakliyat elektrik voltaj/mesafe oranı 1500 V/cm (5 mm tarafından ayrılmış) iki iğneli dizi sonda veya platin cımbız-trodes SQ veya orthotopic tümörler için kullanarak sunmak için kullanılan sırasıyla, küçük bir hayvan IRE Effects'te modellemek için fareler.

<table><tbody><tr><td>ECM 830 square wave electroporator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BTX # 45-0002 ( 58018-004 )</td><td></td></tr><tr><td>2 needle array electrode</td><td>Harvard Apparatus</td><td>45-0167</td><td></td></tr><tr><td>Safety foot switch</td><td>Harvard Apparatus</td><td>45-0211</td><td></td></tr><tr><td>Platinum Tweezer-trode</td><td>Harvard Apparatus</td><td>&amp;nbsp;45-0486</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12 media</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning&amp;nbsp;</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>792632</td><td></td></tr><tr><td>Lacrilube</td><td>Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>19090646</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>NC1292810</td><td></td></tr><tr><td>D-luciferrin</td><td>Perkin Elmer</td><td>122799</td><td></td></tr><tr><td>IVIS&amp;nbsp; Spectrum In Vivo Imaging System</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>Mouse strain C57BL/6J</td><td>The Jackson Laboratory&amp;nbsp;</td><td>000664/Black 6</td><td></td></tr><tr><td>Cell line (KPC-Luc 4580)</td><td>J.J. Yeh Lab at University of North Carolina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Precisionglide syringe needles</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>Z192406</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Swab(70% isopropyl alcohol )</td><td>BD</td><td>326895</td><td></td></tr><tr><td>Digital calipers</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-648-17</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Scalpels, Sterile</td><td>VWR</td><td>21909</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Tipped Applicators</td><td>VWR</td><td>89198</td><td></td></tr><tr><td>Suture Needle, 45 cm, Size 6-0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-3308</td><td></td></tr><tr><td>Suture Needle, 45 cm, Size 4-0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-3314</td><td></td></tr><tr><td>Povidone-iodine 10%</td><td>BD</td><td>29900-404</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Warming Pad&amp;nbsp;</td><td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td><td>TP-3E</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Hair Clipper</td><td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td><td>CL8787</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Drape</td><td>Harvard Apparatus</td><td>59-7421</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-buffered Saline</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr></tbody></table>

a syngeneic pancreatic cancer mouse model to study the effects of irreversible electroporation

Pankreas kanseri (PC), yaklaşık 40.000 hasta her yıl ABD'de, öldüren bir hastalık başarıyla umut verici immunotherapeutic stratejileri de dahil olmak üzere çeşitli tedavi yaklaşımları yapmamış olan. Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon (IRE) tümör hücre ölümü böylece tümörler çok yakın kan damarları içinde gerçekleştirilecek yordam etkinleştirme bitişik kolajen yapılarını imha olmadan indükler bir sigara-termal ablasyon tekniktir. Termal ablasyon teknikleri, aksine IRE kademeli apoptotik hücre ölüm, hemen ablasyon indüklenen nekroz, birlikte ve şu anda seçili yerel olarak gelişmiş PC hastalarda klinik kullanımda olan. Bir Ablatif olmayan hedef belirli yordam IRE gibi tümör microenvironment yanıtlarında sayısız tetikleyebilir. Bir kaç çalışmalar diğer tümör türleri tümör büyüme IRE etkilerini ele sahip, ama hiçbiri PC üzerinde odaklanmıştır. Hangi cilt altı (SQ) ve orthotopic tümörlerin başarıyla tedavi edilebilir bilgisayarla IRE syngeneic fare modeli son derece kontrollü bir ortamda çeşitli uzunlamasına çalışmalar sonrası yordamı kolaylaştırmak geliştirdik. Bu hayvan modeli öfke ve öfke klinik etkinliği arttırmanın yolları etkilerini incelemek için sağlam bir sistem hizmet vermektedir.

Prosedürü takip yukarıda açıklanan ve 5-6 hafta eski vahşi türü C57BL/6 fareler aşısını 1 x 106 hücreler % 50 olarak SQ tümörler oluşturulan BMM. Tümör boyutu 5-6 mm çapında ulaştığı zaman, fareyi birkaç ötenazi, onların tümörleri eksize ve orthotopically bir alıcı C57BL/6 farelerde implante. IRE gerçekleştirilen 10 gün sonrası implantasyon Şekil 1cetvelinde gösterildiği gibi oldu. IRE SQ tümörler taşıyan k...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation at JoVE.com

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon etkilerini incelemek için bir Syngeneic pankreas kanseri fare modeli

Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon (IRE) yerel olarak gelişmiş pankreas kanseri tedavisi için kullanılan bir sigara-termal ablasyon tekniği kullanıyor. Nispeten yeni bir teknik olarak, tümör büyüme IRE etkileri kötü anlaşılır. Pankreas kanseri IRE etkilerini eğitim kolaylaştırır bir syngeneic fare modeli geliştirdik.

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

a-syngeneic-pancreatic-cancer-mouse-model-to-study-effects

Research

JoVE Journal

Cancer Research

11.4K Görüntüleme.  University California San Diego. Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon (IRE) yerel olarak gelişmiş pankreas kanseri tedavisi için kullanılan bir sigara-termal ablasyon tekniği kullanıyor. Nispeten yeni bir teknik olarak, tümör büyüme IRE etkileri kötü anlaşılır. Pankreas kanseri IRE etkilerini eğitim kolaylaştırır bir syngeneic fare modeli geliştirdik.

Video: A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will survive longer than five years. In order to understand and mimic the microenvironment of pancreatic tumors, we utilized a murine orthotopic model of pancreatic cancer that allows non-invasive imaging of tumor progression in real time. Pancreatic cancer cells expressing green fluorescent protein (PANC-1 GFP) were suspended in basement membrane matrix, high concentration, (e.g., Matrigel HC) with serum-free media and then injected into the tail of the pancreas via laparotomy. The cell suspension in the high concentration basement membrane matrix becomes a gel-like substance once it reaches room temperature; therefore, it gels when it comes in contact with the pancreas, creating a seal at the injection site and preventing any cell leakage. Tumor growth and metastasis to other organs are monitored in live animals by using fluorescence. It is critical to use the appropriate filters for excitation and emission of GFP. The steps for the orthotopic implantation are detailed in this article so researchers can easily replicate the procedure in nude mice. The main steps of this protocol are preparation of the cell suspension, surgical implantation, and whole body fluorescent in vivo imaging. This orthotopic model is designed to investigate the efficacy of novel therapeutics on primary and metastatic tumors.

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Kanser Araştırmaları

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel therapies in pancreatic cancer. Tumor onset is variable in the KPC model between 8 weeks and several months. Therefore, non-invasive imaging tools are required to screen for tumor onset and monitor for response to treatment. To address this issue, different approaches have emerged over the last years. High resolution ultrasound has major advantages such as non-invasiveness, fast session times and a high image resolution without radiation exposure. However, ultrasound in mice is not trivial and sufficient anatomical knowledge and practical skills are required to successfully perform high resolution ultrasound in preclinical pancreatic cancer models. With the following article, a detailed hands-on guide for abdominal ultrasound in murine models with a particular focus on endogenous pancreatic cancer models is presented. Furthermore, a summary of common mistakes and how to avoid them is provided.

This article describes the utilization of high-resolution ultrasound in genetically engineered pancreatic cancer mice. The primary aim is to provide a detailed instruction for detection and evaluation of endogenous pancreatic tumors.

Yüksek çözünürlüklü ultrason monitör tümör başlangıçlı ve büyüme genetiği pankreas kanseri modellerinde kullanmak

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The orthotopic murine model can be performed on large cohorts of immunocompetent mice simultaneously, is relatively inexpensive and preserves the cognate tissue microenvironment. The quantification of T cell infiltration and cytotoxic activity within orthotopic tumors provides a useful indicator of an antitumoral response.
This protocol describes the methodology for surgical generation of orthotopic pancreatic tumors by injection of a low number of syngeneic tumor cells resuspended in 5 &#181;L basement membrane directly into the pancreas. Mice bearing orthotopic tumors take approximately 30 days to reach endpoint, at which point tumors can be harvested and processed for characterization of tumor-infiltrating T cell activity. Rapid enzymatic digestion using collagenase and DNase allows a single-cell suspension to be extracted from tumors. The viability and cell surface markers of immune cells extracted from the tumor are preserved; therefore, it is appropriate for multiple downstream applications, including flow-assisted cell sorting of immune cells for culture or RNA extraction, flow cytometry analysis of immune cell populations. Here, we describe the ex vivo stimulation of T cell populations for intracellular cytokine quantification (IFN&#947; and TNF&#945;) and degranulation activity (CD107a) as a measure of overall cytotoxicity. Whole-tumor digests were stimulated with phorbol myristate acetate and ionomycin for 5 h, in the presence of anti-CD107a antibody in order to upregulate cytokine production and degranulation. The addition of brefeldin A and monensin for the final 4 h was performed to block extracellular transport and maximize cytokine detection. Extra- and intra-cellular staining of cells was then performed for flow cytometry analysis, where the proportion of IFN&#947;+, TNF&#945;+ and CD107a+ CD4+ and CD8+ T cells was quantified.
This method provides a starting base to perform comprehensive analysis of the tumor microenvironment.

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

This protocol describes the surgical generation of orthotopic pancreatic tumors and the rapid digestion of freshly isolated murine pancreatic tumors. Following digestion, viable immune cell populations can be used for further downstream analysis, including ex vivo stimulation of T cells for intracellular cytokine detection by flow cytometry.

Ortotopik Pankreas Tümörlerinin Üretimi ve Tümör Efiltrasyonu T Hücre Sitotoksisitesinin Ex vivo Karakterizasyonu

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer (PC). To address this deficiency, we describe a mouse model involving orthotopic implantation of PC followed by distal pancreatectomy and splenectomy. The model has been demonstrated to be safe and suitably flexible for the study of various therapeutic approaches in adjuvant and neo adjuvant settings.
In this model, a pancreatic tumor is first generated by implanting a mixture of human pancreatic cancer cells (luciferase-tagged AsPC-1) and human cancer associated pancreatic stellate cells into the distal pancreas of Balb/c athymic nude mice. After three weeks, the cancer is resected by re-laparotomy, distal pancreatectomy and splenectomy. In this model, bioluminescence imaging can be used to follow the progress of cancer development and effects of resection/treatments. Following resection, adjuvant therapy can be given. Alternatively, neoadjuvant treatment can be given prior to resection.
Representative data from 45 mice are presented. All mice underwent successful distal pancreatectomy/splenectomy with no issues of hemostasis. A macroscopic proximal pancreatic margin greater than 5 mm was achieved in 43 (96%) mice. The technical success rate of pancreatic resection was 100%, with 0% early mortality and morbidity. None of the animals died during the week after resection.
In summary, we describe a robust and reproducible technique for a surgical resection model of pancreatic cancer in mice which mimics the clinical scenario. The model may be useful for the testing of both adjuvant and neoadjuvant treatments.

In the clinical context, patients with localized pancreatic cancer will undergo pancreatectomy followed by adjuvant treatment. This protocol reported here aims to establish a safe and effective method of modelling this clinical scenario in nude mice, through orthotopic implantation of pancreatic cancer followed by distal pancreatectomy and splenectomy.

Pankreas Kanserinin Ortotopik Rezeksiyonlu Fare Modeli

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, immune cells, vessels, nerves, and extracellular matrix components. Over the years, different mouse models of PDAC have been developed to address the challenges posed by its progression, metastatic potential, and phenotypic heterogeneity. Immunocompetent mouse orthotopic allografts of PDAC have shown good promise owing to their fast and reproducible tumor progression in comparison to genetically engineered mouse models. Moreover, combined with their ability to mimic the biological features observed in autochthonous PDAC, cell line-based orthotopic allograft mouse models enable large-scale in vivo experiments. Thus, these models are widely used in preclinical studies for rapid genotype-phenotype and drug-response analyses. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach to successfully inject primary mouse PDAC cell cultures into the pancreas of syngeneic recipient mice. In addition to the technical details, important information is given that must be considered before performing these experiments.

Syngeneic mouse orthotopic allografts of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) recapitulate the biology, phenotypes, and therapeutic responses of disease subtypes. Owing to their fast, reproducible tumor progression, they are widely used in preclinical studies. Here, we show common practices to generate these models, injecting syngeneic murine PDAC cultures into the pancreas.

Pankreas Kanserini Modellemek için Sinjenik Fare Ortotopik Allogreftleri

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, murine pancreatic tumor model of hepatic metastases via a hemispleen injection of syngeneic murine pancreatic tumor cells is described. This model mimics many of the clinical conditions in patients with metastatic disease to the liver. Mice consistently develop metastases in the liver allowing for investigation of the metastatic process, experimental therapy testing, and tumor immunology research.

A preclinical, murine model of hepatic metastases performed via a hemispleen injection technique.

Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

Tıp

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.

Ortotopik Pankreas Kanseri Fare Modeli Dinamik Kontrast Geliştirilmiş Manyetik Rezonans Görüntüleme

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe ...

Bioluminescent Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model: A Non-invasive Technique to Monitor Cancer Progression in Mice

Source: Chai, M. G., et al. <a href="https://www.jove.com/v/50395/" target="_blank">Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression</a>.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2013).
This video demonstrates an orthotopic model of pancreatic cancer that utilizes Matrigel for localized cell delivery and&#160;in vivo&#160;bioluminescence imaging for non-invasive monitoring of tumor progression. The orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and could be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Biyolüminesan Ortotopik Pankreas Kanseri Fare Modeli: Farelerde Kanser İlerlemesini İzlemek İçin İnvaziv Olmayan Bir Teknik

Source: Chai, M. G., et al. Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2013).
This video demonstrates an ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Pankreas Kanseri

Analizler ve teknikler

Orthotopic Homograft Tumor Transplantation: A Technique to Generate Pancreatic Tumor Mouse Models

Source: An, X. et al.&#160;<a href="https://www.jove.com/v/57460/" target="_blank">Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry</a>. J. Vis. Exp. (2018)
The video explains a stepwise surgical method for orthotopic implantation of a tumor fragment from a cancerous donor to the pancreas of a non-cancerous recipient mice for development of pancreatic cancer. Orthotopically implanted PDAC could recapture the tissue microenvironment of human pancreatic cancers than conventional subcutaneous (SC) models more accurately.

Ortotopik Homogreft Tümör Transplantasyonu: Pankreas Tümörü Fare Modelleri Oluşturmak İçin Bir Teknik

Source: An, X. et al.&#160;Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry. ...