Bu iş için bir işbirlikçi translasyonel araştırma bursu San Diego C3 Padres Pedal tarafından finanse edilen üzerinden (#PTC2017) neden RRW destek aldı.

Tüm hayvan deneyleri aşağıda bu iletişim kuralı ilgili kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanması gerekir gerçekleştirilen. Burada açıklanan tüm yordamları IACUC UCSD tarafından onaylanmıştır.
1. alıcı hayvan alımı
Not: KPC-Luc 4580 hücre kültürünü LSL Kras doğan bir tümör üzerinden kurulanG12D / +; LSI-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSI-ROSA26 Luc / + PC genetik bir model C57BL/6 arka plan üzerinde fare (KPC),. Bu hücre kültürünü avantajı bu yapısal luciferase etkinleştirme tümör orthotopic modellerinde izleme ifade olduğunu. Ancak, alıcı Farelerin genetik arka plan ile uyumlu oldukları sürece diğer hücre hatları da kullanılabilir.
<ol><li>Deneysel grupları ve grup başına hayvan sayısını önceden belirler.</li>
	<li>Yaş (önerilen 6 - 10 - hafta eski fareler) seçin ve cinsel kullanılan hipotez ve hücre göre hayvanların kullanılır.</li>
</ol>2. kültür hücreleri
<ol><li>Kullanım Dulbecco'nın modifiye kartal Orta (DMEM): besin karışımı F12% 10 fetal Sığır serum (FBS) ve % 1 penisilin-streptomisin antibiyotik (tam büyüme medya) KPC-Luc 4580 hücreleri büyümeye içeren (50: 50) medya.</li>
	<li>Eğer dondurulmuş, hücreleri tümör implantasyon öncesinde 4 gün çözülme.</li>
	<li>Aseptik koşullar altında % 5 CO2 ve % 95 nem ile 37 ° C'de hücrelerin büyümesine.</li>
	<li>% 0.25 hücrelerle trypsinize tripsin onlar ulaşmadan 37 ° C'de 5 min için > % 80 confluency ve iki kez tam büyüme medya hacmi ekleyerek tripsin etkisiz hale getirin. Not: Bu hücreler tümör verimli farelerde % 100 confluency kullandıysanız veya onlar için 12'den fazla kez pasajlı Eğer oluşturmayan. Bu nedenle, en iyi confluency altında önceki pasajlar, hücreleri dondurmak için tavsiye edilir.</li>
	<li>Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak ve yeterli sayı varsa tümör indüksiyon devam edin (0.5 - 1 x 106 hücreler/fare). Eğer değilse, bir daha fazla geçiş için hücreleri yeterli hücre sayıları elde edilen kadar genişletin.</li>
</ol>3. indüksiyon SQ tümörleri
<ol><li>Gerekli malzemeleri hazırlamak: P1000 ve P100 Pipetler ve ipuçları, 1 mL şırınga, 25G iğneler, membran matris (BMM), DMEM bazal medya, 1.5 mL tüpler santrifüj kapasitesi. Tüm malzemeler steril ve soğuk (4 ° C) yordamı sonuna kadar devam et. Ayrıca saç kesme makineleri ve alkol bezlerden hayvan kullanıma hazır tutun.</li>
	<li>(Adım başı olarak 2.4) trypsinize ve hücreleri saymak ve onları bir konsantrasyon 2-4 x 107 hücre/mL soğuk DMEM, resuspend.</li>
	<li>% 100 eşit bir birim eklemek son hücre süspansiyon % 50 olarak yapmak için BMM BMM. Son hacim için hücre süspansiyon gerekli her fare için 50 µL tutar. % 10 fazla ölü boşluk şırınga ve pipetting hatalar için karşılamak için hazır olun.</li>
	<li>Aliquot 550 µL Cilt 1,5 mL santrifüj tüpleri olarak süspansiyon buzun içinde yerleştirilir.</li>
	<li>Bir restrainer kullanarak hayvanlar (6 - hafta eski erkek C57BL/6 fareler) dizginlemek veya el ile. Not: Alternatif olarak, fare ile oksijen gazı 2 L/dak hassas Buharlaştırıcı kullanarak akış hızında % 2.5 isoflurane anaesthetized.</li>
	<li>Tercihen bir kanadının bir bacak üzerinde bir kırpma makası kullanarak Enjeksiyon Makinası tıraş. Bir alkol pamuklu çubuk kullanarak, iki kez Enjeksiyon Makinası temiz.</li>
	<li>1-2 x 107 hücre/mL 1 mL soğuk şırınga son bir konsantrasyon, hücre süspansiyon 250 µL çizmek ve herhangi bir hava kabarcıkları pistonu yukarı ve aşağı hareket ettirerek kaldırın. 25 G iğne şırıngaya takın ve iğne içinde boşluğu doldurmak emin olun.</li>
	<li>Dikkatle iğne derinin altında cesedinin yanında iğne periton boşluğuna veya bacaklarda kas delip değil emin yanları için 30 ° açıyla yerleştirin.</li>
	<li>İğneyi vücuduna paralel dümdüz ve cilt kırışıklıkları düzleştirin. Yavaş yavaş hücre süspansiyon 50 µL enjekte et. İğne 10 için enjeksiyon yerinde tutun s herhangi bir sızıntı önlemek için katılaşmaya BMM izin vermek için.</li>
	<li>Yavaş yavaş herhangi bir yana doğru hareket etmeden paralel tutmak iğne geri alıyorum. Yavaşça bir alkol bez ile Enjeksiyon Makinası temiz ve onun konut için fare düğmesini serbest bırakın. Not: Eğer fare işlem sırasında anestezi, onun iyileştiren refleksleri tekrar yerine geleceğinden hayvan monitör.</li>
	<li>5 mm çapında ulaşıncaya kadar düzenli olarak Çap pergeli kullanarak tümör büyümesini izlemek.</li>
</ol>4. indüksiyon Orthotopic tümörlerin
<ol><li>Gerekli malzemeleri hazırlayın. Otoklav cerrahi gibi neşter, iğne sürücüleri, makas ve işaret ve düz uçlu forseps araçları. Kullanışlı steril dikiş (absorbe 6-0 ve absorbe olmayan 4-0), alkol bezlerden, saç kesme makineleri, depilatory krem, göz yağı, pamuk gazlı bez, % 10 povidone iyot çözüm, cerrahi perdeler, Isıtma pedleri, buprenorfin ve anestezik ajanların tutun.</li>
	<li>Bir donör fare (tercihen orthotopic modeli için gerekli aynı arka plan), ötenazi yavaş dolgu CO2 odası kullanarak SQ KPC tümör taşıyor. Steril forseps ve microscissors kısa bir süre önce orthotopic implantasyon kullanarak BSL-2 başlıklı steril koşullarda dikkatle SQ tümör tüketim. Tümör eksizyonu sırasında periton boşluğuna ponksiyon ve steril PBS 2 değişimi hemen tümörle yıkamak için dikkat ediniz.</li>
	<li>Steril neşter kullanarak, 1 mm3 parçalar halinde çıkarılan tümör kıyma, onları soğuk steril DMEM bazal ortamı içeren bir petri yer ve buza implantasyon kadar saklayın.</li>
	<li>Alıcı fare 0,05 - 1 mg/kg buprenorfin analjezik SQ, ameliyat öncesi 30 dk yönetmek.</li>
	<li>Hassas Buharlaştırıcı (veya diğer anestezik ajanların) kullanarak alıcı fare ile % 2-3 isoflurane oksijen (2 L/dak) anestezi. 37 ° C üzerinde fare yastık yordamın tamamı için Isıtma tutun. Yağ kuruma önlemek için gözler için geçerlidir. Anestezi derinliği refleks başlangıçta şaşırtıcı eksikliği tarafından test ve nazik ayak çimdik için pedal refleks eksikliği ile cerrahi uçak anestezi onaylayın. Anestezi tüm cerrahi işlem sırasında korumak.</li>
	<li>Sırtında fareyi getirin ve karın sol tarafındaki maruz böylece nazikçe bunu onun için düzeltmesi. Depilatory krem kullanarak fare karın saç çıkarın ve hiçbir ücretsiz saç karın sonrası insizyon girer emin olmak için gazlı bez ile temizleyin. Sol karın % 10 povidone iyot alkol mendil tarafından takip 3 kür cilt dezenfekte için kullanma ameliyat için hazırlayın.</li>
	<li>Steril neşter kullanmadan, 1.5 cm enine veya oblik insizyon cilt, 1-cm aşağıda göğüs kafesi, orta hat solundaki dalak için biraz medial olun. O zaman, belgili tanımlık kesme örten yüzeysel kesik yansıtma karın kas aracılığıyla genişletmek.</li>
	<li>Düz kullanarak dalak uçlu forseps bulun ve yavaşça Karın boşluğundan yansıtmak. Steril Pamuklu aplikatör kullanarak dalak geri çekmek ve dalak altına yapıştırılmış Pankreas kuyruk bulmak.</li>
	<li>Düz uçlu forseps kullanarak, Pankreas kuyruk yanal geri çek.</li>
	<li>Donör fare ile bir güzel (6-0) steril dikiş iğne ucu kadar bir ince kıyılmış tümör parça seçim ve steril forseps kullanarak konumlandırın.</li>
	<li>Yavaşça Pankreas kuyruk/beden yanal geri çeker iken, Pankreas kuyruk tümör parçası içeren dikiş iğne yerleştirin. Dikiş yavaş yavaş doku tümörü Pankreas kuyruk ile temas halinde tutan, üzerinden geçmek. Bir veya iki ek dikiş doku ile ilgili olarak çekirdeğin yönlendirme bağlı olarak uygulanır.</li>
	<li>İğneyi tamamen dokudan kaldırmak ve pankreas/dalak için ek bir 60 externalized saklamak kanama veya sızıntı belirtisi için teftiş ederken s. O zaman, onları hafifçe künt forseps kullanarak karın boşluğuna özümsemek.</li>
	<li>6-0 absorbe dikiş ile kullanarak karın kas sürekli ya da dikiş ve örten deri bir 3-0 6-0 absorbe olmayan kesintiye uğramış dikiş kullanarak kapatın. Anestezi bu noktada durdurun.</li>
	<li>Ev onun kafes yiyecek ve su için ücretsiz erişimi kurtarmak için fareyi izin. Kafes kurtarma kolaylaştırmak için ısıtma yastığını yerleştirin. Nefes, kurtarma işlemi sırasında perfüzyon vb gibi hayati izlemek.</li>
	<li>Refleks kez fare kurtarır ve sonra dönüş kafes düzenli konut olabilir keşfetmiş belirtileri onaylamak.</li>
	<li>Buprenorfin 0,05 - 0,1 mg/kg yönetmek 8-12 h ameliyattan sonra ve her 8-12 saat sonra ağrı belirtileri için gerektiği gibi yordam.</li>
	<li>İzlemek bir vivo içinde bioluminescence görüntüleme sistemi kullanarak tümör büyüme ( Tablo reçetesigörmek).<ol>
<li>Günde 4 orthotopic implantasyonu sonrası başlayan Imaging tarafından tümör büyümesini izleyin ve haftada iki kez Imaging gerçekleştirin.</li>
		<li>Görüntüleme gününde (mayi enjeksiyon) yönetmek 30 mg/kg D-biyoluminesans için bir imzalat (oksijen (2 L/dak) % 2-3 isoflurane) alıcı fare görüntüleme önce 10 dak.</li>
		<li>Görüntü için en az 5 s maruz kalma bir ışıldama Imager otomatik floresans ücretsiz ısıtmalı sahne ile ve anestezi fareler için hala korurken içinde herhangi bir emisyon filtre olmadan ışıldama ayarı kullanarak luciferase etkinliğini.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. mustafa SQ tümörlerin
<ol><li>Gerekli malzemeleri hazırlamak: kare dalga electroporator, Emanet ayak pedalı anahtarı, elektrotlar (iğne dizi cımbız-trode karşı) ve adaptörler. Steril dikiş (absorbe olmayan 4-0), alkol bezlerden, saç kesme makineleri, depilatory krem, göz yağı, pamuk gazlı bez, buprenorfin ve anestezi tutun da yakın.</li>
	<li>Cımbız sterilize veya gaz sterilizasyon kullanarak dizi elektrotlar iğne. Isıyla tavsiye edilmez. Cam boncuk Sterilizatör hayvanlar arasında elektrotlar sterilize etmek için kullanın.</li>
	<li>Buprenorfin 0,05 - 0,1 mg/Kg tümörü taşıyan fareler 30 dk önce yordamı için yönetmek.</li>
	<li>SQ tümör implantı 5 mm çap ulaştıktan sonra anestezi farelerde başarılı bir şekilde ikna etmek için 4.4-4.5 adımları izleyin.</li>
	<li>Yan tarafı olarak SQ tümör erişmek için kendi tarafında imzalat fareyi getirin. Saç kesme makineleri ve temiz cilt bir alkol pamuklu çubuk kullanarak kullanarak kaldırın.</li>
	<li>SQ tümörler için 2-iğne dizi elektrotlar kullanın. Deri altında doğrudan forseps kullanarak tümör sitesi yüceltmek ve periton boşluğuna nüfuz değil emin vücut paralel deri yoluyla elektrotlar yerleştirin. Bir kez deri yoluyla elektrotlar tümör ayraç şekilde konumlandırın.</li>
	<li>100 µs bakliyat 150 bakliyat 1.500 V/cm toplam 1 Hz frekansta sunmak için electroporator program. Ayak pedalı kullanarak darbeleri teslim. 10 Bakliyat her kümesi tarafından 10 ayrı s ısı dağıtımı için izin ve elektrotlar doğru konumunu doğrulamak için. Not: paralitik aracıları kullanmadan, kas kasılmaları elektrotlar deplasman el ile güvenli sürece neden olabilir öfke ile fareler yaşayacaksınız.</li>
	<li>Electroporator üzerinde görüntülenen gerçek gerilim teslim, 200 s. kaydı geçmemelidir tam dozaj sonra elektrotlar kaldırın. Fareler 4.14-4.16 adımlara göre IRE kurtarmak izin verir.</li>
</ol>6. IRE Orthotopic tümörlerin
Not: IRE orthotopic tümörlerin üzerinde böylece özel başlamadan yerel IACUC onayını gerektiren aynı fare ikinci bir hayatta kalma ameliyat içerir.
<ol><li>Gerekli malzemeler hazırlamak: otoklav cerrahi alet öyle aynı derecede makas, neşter, iğne sürücüleri, sivri uçlu forseps ve düz uçlu forseps. Aşağıdaki yakın de bulundurun: steril dikiş (absorbe 6-0 ve absorbe olmayan 4-0), alkol bezlerden, saç kesme makineleri, depilatory krem, göz yağı, pamuk gazlı bez, % 10 povidone iyot çözüm, cerrahi perdeler, Isıtma pedleri, kare dalga electroporator, Emanet ayak pedalı anahtarı, elektrotlar ve adaptörler, buprenorfin ve anestezi.</li>
	<li>Fareler orthotopic tümör büyümesi için in vivo görüntüleme tarafından değerlendirmek (bkz. Adım 4,17) intraperitoneally 30 mg/kg D-biyoluminesans enjekte edilerek. Not: tümör ( Temsilcisi sonuçlarıgörmek) Luciferase ışıma görüntülerde görüleceği üzere pankreas için açıkça görülebilir ve hala kapalı olduğunda orthotopic tümör IRE tedavi 8 ila 10 gün sonrası implantasyon için idealdir.</li>
	<li>4.4-4,9, implante tümör bulmak için adımları izleyin. Eğer tümör bulmak kolay değil, küt burunlu forseps yavaşça tümör tanımlamak için dalak ve mide taşımak için kullanın.</li>
	<li>Tümör Küt burunlu forseps ile yansıtmak ve tümör sıkıca cımbız trode platin elektrotlar ile yakalamak. Elektroporasyon bakliyat adım 5,7 kare dalga electroporator setler halinde 10 Bakliyat ayak pedalı anahtarı tarafından kontrol kullanarak programlanmış gibi teslim.</li>
	<li>En az 60 s yazı IRE kanama belirtisi için izlemek için externalized tümör tutun. Tümör karın boşluğuna yerleştirin ve belgili tanımlık kesme olarak açıklanan önceki (adım 4.13-4.16) kapatın ve farenin bunu iyileşene kadar izlemek.</li>
	<li>Vivo luciferase görüntüleme adım 4,17 göre kullanarak tümör büyüme IRE etkilerini izlemek.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Rahib, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projecting+cancer+incidence+and+deaths+to+2030:+the+unexpected+burden+of+thyroid,+liver,+and+pancreas+cancers+in+the+United+States.">Projecting cancer incidence and deaths to 2030: the unexpected burden of thyroid, liver, and pancreas cancers in the United States.</a> Cancer Res. 74 (11), 2913-2921 (2014).</li><li>Howlader, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> SEER Cancer Statistic Review, 1975-2013. , (1975).</li><li>Clark, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+immune+reaction+to+pancreatic+cancer+from+inception+to+invasion.">Dynamics of the immune reaction to pancreatic cancer from inception to invasion.</a> Cancer Res. 67 (19), 9518-9527 (2007).</li><li>Lee, E. W., Loh, C. T., Kee, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+guided+percutaneous+irreversible+electroporation:+ultrasound+and+immunohistological+correlation.">Imaging guided percutaneous irreversible electroporation: ultrasound and immunohistological correlation.</a> Technol Cancer Res Treat. 6 (4), 287-294 (2007).</li><li>Charpentier, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+for+the+ablation+of+liver+tumors:+are+we+there+yet?.">Irreversible electroporation for the ablation of liver tumors: are we there yet?.</a> Arch Surg. 147 (11), 1053-1061 (2012).</li><li>Narayanan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+Electroporation.">Irreversible Electroporation.</a> Seminars in Interventional Radiology. 32 (4), 349-355 (2015).</li><li>Martin, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+200+locally+advanced+(stage+III)+pancreatic+adenocarcinoma+patients+with+irreversible+electroporation:+safety+and+efficacy.">Treatment of 200 locally advanced (stage III) pancreatic adenocarcinoma patients with irreversible electroporation: safety and efficacy.</a> Ann Surg. 262 (3), 486-494 (2015).</li><li>Belfiore, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+CT-guided+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+as+a+novel+neoadjuvant+protocol+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+Our+preliminary+experience.">Percutaneous CT-guided irreversible electroporation followed by chemotherapy as a novel neoadjuvant protocol in locally advanced pancreatic cancer: Our preliminary experience.</a> Int J Surg. 21 Suppl 1, S34-S39 (2015).</li><li>Belfiore, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+chemotherapy+alone+versus+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+on+survival+in+patients+with+locally+advanced+pancreatic+cancer.">Concurrent chemotherapy alone versus irreversible electroporation followed by chemotherapy on survival in patients with locally advanced pancreatic cancer.</a> Med Oncol. 34 (3), 38 (2017).</li><li>Chu, K. F., Dupuy, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+ablation+of+tumours:+biological+mechanisms+and+advances+in+therapy.">Thermal ablation of tumours: biological mechanisms and advances in therapy.</a> Nat Rev Cancer. 14 (3), 199-208 (2014).</li><li>Wissniowski, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+tumor-specific+T+lymphocytes+by+radio-frequency+ablation+of+the+VX2+hepatoma+in+rabbits.">Activation of tumor-specific T lymphocytes by radio-frequency ablation of the VX2 hepatoma in rabbits.</a> Cancer Res. 63 (19), 6496-6500 (2003).</li><li>Eros de Bethlenfalva-Hora, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+ablation+suppresses+distant+tumour+growth+in+a+novel+rat+model+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma.">Radiofrequency ablation suppresses distant tumour growth in a novel rat model of multifocal hepatocellular carcinoma.</a> Clin Sci (Lond). 126 (3), 243-252 (2014).</li><li>Zerbini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+thermal+ablation+for+hepatocellular+carcinoma+stimulates+autologous+NK-cell+response.">Radiofrequency thermal ablation for hepatocellular carcinoma stimulates autologous NK-cell response.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1931-1942 (2010).</li><li>Ali, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dendritic+cells+by+local+ablation+of+hepatocellular+carcinoma.">Activation of dendritic cells by local ablation of hepatocellular carcinoma.</a> J Hepatol. 43 (5), 817-822 (2005).</li><li>Fietta, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammatory+response+and+downmodulation+of+peripheral+CD25+Foxp3++T-regulatory+cells+in+patients+undergoing+radiofrequency+thermal+ablation+for+lung+cancer.">Systemic inflammatory response and downmodulation of peripheral CD25+Foxp3+ T-regulatory cells in patients undergoing radiofrequency thermal ablation for lung cancer.</a> Hum Immunol. 70 (7), 477-486 (2009).</li><li>Jiang, C., Davalos, R. V., Bischof, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+basic+to+clinical+studies+of+irreversible+electroporation+therapy.">A review of basic to clinical studies of irreversible electroporation therapy.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 62 (1), 4-20 (2015).</li><li>Neal, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+local+and+systemic+anti-tumor+efficacy+for+irreversible+electroporation+in+immunocompetent+versus+immunodeficient+mice.">Improved local and systemic anti-tumor efficacy for irreversible electroporation in immunocompetent versus immunodeficient mice.</a> PLoS One. 8 (5), e64559 (2013).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Safran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+reporter+strain+for+noninvasive+bioluminescent+imaging+of+cells+that+have+undergone+Cre-mediated+recombination.">Mouse reporter strain for noninvasive bioluminescent imaging of cells that have undergone Cre-mediated recombination.</a> Mol Imaging. 2 (4), 297-302 (2003).</li><li>Martin, R. C., McFarland, K., Ellis, S., Velanovich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+potential+improved+overall+survival.">Irreversible electroporation in locally advanced pancreatic cancer: potential improved overall survival.</a> Ann Surg Oncol. 20 Suppl 3, S443-S449 (2013).</li><li>Neal, R. E., Garcia, P. A., Robertson, J. L., Davalos, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Characterization+and+Numerical+Modeling+of+Tissue+Electrical+Conductivity+during+Pulsed+Electric+Fields+for+Irreversible+Electroporation+Treatment+Planning.">Experimental Characterization and Numerical Modeling of Tissue Electrical Conductivity during Pulsed Electric Fields for Irreversible Electroporation Treatment Planning.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 59 (4), 1076-1085 (2012).</li></ol>

Yazarların ilgili hiçbir mali açıklamalar vardır.

Bu çalışmada, tümör büyüme IRE etkilerini incelemek için kullanılan PC için bir immün fare modeli göstermiştir. Şu anda, IRE hastalarda ameliyat öncesi terapi ay sonra uzak hastalık ilerleme olmayan sadece son derece seçili yerel olarak gelişmiş PC-termal ablasyon tekniği olarak kullanılıyor. Yerel olarak gelişmiş PC ile hastaların çoğunda uzak metastatik hastalık20geliştirmek çünkü kullanımı bu nedenle sınırlı olmuştur. Bu model çeşitli genişletilmiş teda...

Pankreas duktal adenokarsinom (PC) kanser ölüm ikinci önde gelen nedenidir ABD'de 20201etrafında olmak için tahmin edilmektedir. PC ile tanısı hastaların büyük çoğunluğu uzak metastatik hastalık2den sonunda ölecek. PC microenvironment Rootkitler immünsüpresif ve chemoresistant. Bir kıtlık efektör (anti-tümör) T hücrelerinin ve immünsupresif lökosit, tümör ilişkili makrofajlar (TAMs) dahil olmak üzere bir çıkıntı onun desmoplastic stroma içeren, myeloid türetilmiş bastırıcı (MDSCs) hücreleri ve düzenleyici T hücreleri (Tregs)3 . Bunlar microenvironment bu etkilerini multimodal stratejiler geliştirmek gerek altında yatan.
IRE tümör ablasyon termal olmayan şekli olarak geliştirilmiştir. Termal ablasyon teknikleri, aksine IRE hızlı koagülatif nekroz neden olmaz ancak bunun yerine yavaş yavaş apoptotik hücre ölüm4' te sonuç. Önemlisi pankreas tümörleri, öfke "ısı emici" etkileri için güvenlik açığından etkilenmez ve yanındaki şu5kan damarları gerçekleştirilebilir. Bu teknoloji 510(k) yetkisi FDA6 ve şu anda klinik olarak, seçilen yerel olarak gelişmiş ya da sınırda çevrimsel pankreas kanseri hastalarda kullanılıyor. En büyük yayımlanmış IRE içinde PC7için öfke geçiren hastaların ortalama yaşama yaklaşık iki katı modern kemoterapi rezeksiyon8,9yalnız ile tedavi edilen hastaların sağkalım serisidir.
Çeşitli çalışmalarda bu termal ablasyon (gözden Chu vd. diğer tümör türleri bir sistemik Bağışıklık yanıtında indükler göstermiştir 10). radyofrekans ablasyon (RFA) hayvan tümör modelleri götürmek-e doğru artan T hücre içinde infiltratlar11,12artış hepatosellüler kanser hastaları13, hücrelerde aktif doğal öldürücü (NK) de dahil olmak üzere, 14ve immünsupresif Tregs akciğer kanseri hastaları15dakika sonra bir düşüş. Çalışmaları bir çok daha az sayıda bağışıklık, microenvironmental ve yaralanma yanıt IRE16için inceledik. ÖFKE içinde ikincil (kontralateral) renal hücreli allogrefler büyüme azaltılmış veya birincil tümör IRE tarafından iki hafta engelledi immün fare modellerinde sistemik bir bağışıklık yanıtı uyarmak için gösterilen önceki17. Onlar da immün fareler immün fareler daha az voltaj tam regresyon için gerekli görülmektedir. Olan IRE termal ablasyon koagülatif nekrozu ile karşılaştırıldığında geliştirilmiş antijen sunumu neden olabilir, ama bu değil özellikle çalışılmıştır.
PC syngeneic fare modeli erkek LSL Kras geliştirilen bir tümör üzerinden türetilmiş KPC-Luc 4580 hücre satırından (hediye J.J. Yeh, University of North Carolina), geliştirdiğimizG12D / +; LSI-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSI-ROSA26 Luc / + fare IRE18,19yerel ve sistemik etkileri çalışmaya,. Bu luciferase ifade hücre kültürünü immunojenik ve ayrıca tumorigenic immün C57BL/6 fare olarak SQ veya orthotopically enjekte ve güvenilir bir şekilde dalak enjekte edildiğinde karaciğer metastaz üretir. Biz bir programlanabilir kare dalga darbe jeneratör 100 µs bakliyat elektrik voltaj/mesafe oranı 1500 V/cm (5 mm tarafından ayrılmış) iki iğneli dizi sonda veya platin cımbız-trodes SQ veya orthotopic tümörler için kullanarak sunmak için kullanılan sırasıyla, küçük bir hayvan IRE Effects'te modellemek için fareler.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="873">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">ECM 830 square wave electroporator</td>
			<td style="width:147px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:344px;">BTX # 45-0002 ( 58018-004 )</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2 needle array electrode</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Safety foot switch</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Platinum Tweezer-trode</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>&#160;45-0486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM-F12 media</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10437028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Matrigel</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>792632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lacrilube</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>19090646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Buprenorphine</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>NC1292810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">D-luciferrin</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>122799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">IVIS&#160; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse strain C57BL/6J</td>
			<td>The Jackson Laboratory&#160;</td>
			<td>000664/Black 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cell line (KPC-Luc 4580)</td>
			<td colspan="2">J.J. Yeh Lab at University of North Carolina</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BD Precisionglide syringe needles</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>Z192406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Alcohol Swab(70% isopropyl alcohol )</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital calipers</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14-648-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disposable Scalpels, Sterile</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cotton Tipped Applicators</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Suture Needle, 45 cm, Size 6-0</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-3308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Suture Needle, 45 cm, Size 4-0</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-3314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone-iodine 10%</td>
			<td>BD</td>
			<td>29900-404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable Warming Pad&#160;</td>
			<td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td>
			<td>TP-3E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse Hair Clipper</td>
			<td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td>
			<td>CL8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Drape</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>59-7421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered Saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic pancreatic cancer mouse model to study the effects of irreversible electroporation

Pankreas kanseri (PC), yaklaşık 40.000 hasta her yıl ABD'de, öldüren bir hastalık başarıyla umut verici immunotherapeutic stratejileri de dahil olmak üzere çeşitli tedavi yaklaşımları yapmamış olan. Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon (IRE) tümör hücre ölümü böylece tümörler çok yakın kan damarları içinde gerçekleştirilecek yordam etkinleştirme bitişik kolajen yapılarını imha olmadan indükler bir sigara-termal ablasyon tekniktir. Termal ablasyon teknikleri, aksine IRE kademeli apoptotik hücre ölüm, hemen ablasyon indüklenen nekroz, birlikte ve şu anda seçili yerel olarak gelişmiş PC hastalarda klinik kullanımda olan. Bir Ablatif olmayan hedef belirli yordam IRE gibi tümör microenvironment yanıtlarında sayısız tetikleyebilir. Bir kaç çalışmalar diğer tümör türleri tümör büyüme IRE etkilerini ele sahip, ama hiçbiri PC üzerinde odaklanmıştır. Hangi cilt altı (SQ) ve orthotopic tümörlerin başarıyla tedavi edilebilir bilgisayarla IRE syngeneic fare modeli son derece kontrollü bir ortamda çeşitli uzunlamasına çalışmalar sonrası yordamı kolaylaştırmak geliştirdik. Bu hayvan modeli öfke ve öfke klinik etkinliği arttırmanın yolları etkilerini incelemek için sağlam bir sistem hizmet vermektedir.

Prosedürü takip yukarıda açıklanan ve 5-6 hafta eski vahşi türü C57BL/6 fareler aşısını 1 x 106 hücreler % 50 olarak SQ tümörler oluşturulan BMM. Tümör boyutu 5-6 mm çapında ulaştığı zaman, fareyi birkaç ötenazi, onların tümörleri eksize ve orthotopically bir alıcı C57BL/6 farelerde implante. IRE gerçekleştirilen 10 gün sonrası implantasyon Şekil 1cetvelinde gösterildiği gibi oldu. IRE SQ tümörler taşıyan k...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation at JoVE.com

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon etkilerini incelemek için bir Syngeneic pankreas kanseri fare modeli

Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon (IRE) yerel olarak gelişmiş pankreas kanseri tedavisi için kullanılan bir sigara-termal ablasyon tekniği kullanıyor. Nispeten yeni bir teknik olarak, tümör büyüme IRE etkileri kötü anlaşılır. Pankreas kanseri IRE etkilerini eğitim kolaylaştırır bir syngeneic fare modeli geliştirdik.

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

a-syngeneic-pancreatic-cancer-mouse-model-to-study-effects

Research

JoVE Journal

Cancer Research

11.4K Görüntüleme.  University California San Diego. Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon (IRE) yerel olarak gelişmiş pankreas kanseri tedavisi için kullanılan bir sigara-termal ablasyon tekniği kullanıyor. Nispeten yeni bir teknik olarak, tümör büyüme IRE etkileri kötü anlaşılır. Pankreas kanseri IRE etkilerini eğitim kolaylaştırır bir syngeneic fare modeli geliştirdik.

Video: A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will survive longer than five years. In order to understand and mimic the microenvironment of pancreatic tumors, we utilized a murine orthotopic model of pancreatic cancer that allows non-invasive imaging of tumor progression in real time. Pancreatic cancer cells expressing green fluorescent protein (PANC-1 GFP) were suspended in basement membrane matrix, high concentration, (e.g., Matrigel HC) with serum-free media and then injected into the tail of the pancreas via laparotomy. The cell suspension in the high concentration basement membrane matrix becomes a gel-like substance once it reaches room temperature; therefore, it gels when it comes in contact with the pancreas, creating a seal at the injection site and preventing any cell leakage. Tumor growth and metastasis to other organs are monitored in live animals by using fluorescence. It is critical to use the appropriate filters for excitation and emission of GFP. The steps for the orthotopic implantation are detailed in this article so researchers can easily replicate the procedure in nude mice. The main steps of this protocol are preparation of the cell suspension, surgical implantation, and whole body fluorescent in vivo imaging. This orthotopic model is designed to investigate the efficacy of novel therapeutics on primary and metastatic tumors.

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Kanser Araştırmaları

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and activation of lipolysis and proteolysis systems. Cancer patients with cachexia benefit less from anti-neoplastic therapies and show increased mortality1. Several animal models have been established in order to investigate the molecular causes responsible for body and muscle wasting as a result of tumor growth. Here, we describe methodologies pertaining to a well-characterized model of cancer cachexia: mice bearing the C26 carcinoma2-4. Although this model is heavily used in cachexia research, different approaches make reproducibility a potential issue. The growth of the C26 tumor causes a marked and progressive loss of body and skeletal muscle mass, accompanied by reduced muscle cross-sectional area and muscle strength3-5. Adipose tissue is also lost. Wasting is coincident with elevated circulating levels of pro-inflammatory cytokines, particularly Interleukin-6 (IL-6)3, which is directly, although not entirely, responsible for C26 cachexia. It is well-accepted that a primary mechanism by which the C26 tumor induces muscle tissue depletion is the activation of skeletal muscle proteolytic systems. Thus, expression of muscle-specific ubiquitin ligases, such as atrogin-1/MAFbx and MuRF-1, represent an accepted method for the evaluation of the ongoing muscle catabolism2. Here, we present how to execute this model in a reproducible manner and how to excise several tissues and organs (the liver, spleen, and heart), as well as fat and skeletal muscles (the gastrocnemius, tibialis anterior, and quadriceps). We also provide useful protocols that describe how to perform muscle freezing, sectioning, and fiber size quantification.

Mice bearing the Colon-26 (C26) carcinoma represent a classical model of cancer cachexia. Progressive muscle wasting occurs in association with tumor growth, over-expression of muscle-specific ubiquitin ligases, and reductions in muscle cross-sectional area. Fat loss is also observed. Cachexia is studied in a time-dependent manner with increasing severity of wasting.

Kolon-26 Karsinoma Tümör taşıyan Kanser Kaşeksi Araştırmaları Modeli Olarak Fare

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of diagnosis. Metastatic RCC (mRCC) is incurable, with a median survival time of only 18 months. Immune-based interventions (e.g., interferon (IFN) and interleukin (IL)-2) induce durable responses in a fraction of mRCC patients, and multikinase inhibitors (e.g., sunitinib or sorafenib) or anti-VEGF receptor monoclonal antibodies (mAb) are largely palliative, as complete remissions are rare. Such shortcomings in current therapies for mRCC patients provide the rationale for the development of novel treatment protocols. A key component in the preclinical testing of new therapies for mRCC is a suitable animal model. Beneficial features that recapitulate the human condition include a primary renal tumor, renal tumor metastases, and an intact immune system to investigate any therapy-driven immune effector responses and the formation of tumor-induced immunosuppressive factors. This report describes an orthotopic mRCC mouse model that has all of these features. We describe an intrarenal implantation technique using the mouse renal adenocarcinoma cell line Renca, followed by the assessment of tumor growth in the kidney (primary site) and lungs (metastatic site).

Implementation of an orthotopic model of renal cell carcinoma in immunocompetent mice affords the investigator a clinically-relevant system defined by the presence of a primary renal tumor and lung metastases in the same animal. This system can be used to preclinically test a variety of treatments in vivo.

Preklinik Tedaviler Nicel ve Boyuna Değerlendirme A sinjeneik Fare Modeli Yapmış Bir Renal Hücreli Karsinom

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Method to Define the Effects of Environmental Enrichment on Colon Microbiome Biodiversity in a Mouse Colon Tumor Model

Several recent studies have illustrated the beneficial effects of living in an enriched environment on improving human disease. In mice, environmental enrichment (EE) reduces tumorigenesis by activating the mouse immune system, or affects tumor bearing animal survival by stimulating the wound repair response, including improved microbiome diversity, in the tumor microenvironment. Provided here is a detailed procedure to assess the effects of environmental enrichment on the biodiversity of the microbiome in a mouse colon tumor model. Precautions regarding animal breeding and considerations for animal genotype and mouse colony integration are described, all of which ultimately affect microbial biodiversity. Heeding these precautions may allow more uniform microbiome transmission, and consequently will alleviate non-treatment dependent effects that can confound study findings. Further, in this procedure, microbiota changes are characterized using 16S rDNA sequencing of DNA isolated from stool collected from the distal colon following long-term environmental enrichment. Gut microbiota imbalance is associated with the pathogenesis of inflammatory bowel disease and colon cancer, but also of obesity and diabetes among others. Importantly, this protocol for EE and microbiome analysis can be utilized to study the role of microbiome pathogenesis across a variety of diseases where robust mouse models exist that can recapitulate human disease.

Environmental Enrichment (EE) is an animal housing environment that is used to reveal mechanisms that underlie the connections between lifestyle, stress, and disease. This protocol describes a procedure that uses a mouse model of colon tumorigenesis and EE to specifically define alterations in microbiota biodiversity that may impact animal mortality.

Çevre zenginleştirme etkileri kolon Microbiome biyolojik çeşitliliğin bir fare kolon tümörü modeli tanımlamak için bir yöntem

Several recent studies have illustrated the beneficial effects of living in an enriched environment on improving human disease. In mice, environmental ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models. Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents. Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of mice. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration. Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

The goal of this protocol is to demonstrate the intra-prostatic injection of prostate cancer cells, with subsequent castration. Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease in the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly its immune-components, is vital to the prognosis and prediction of treatment outcomes, especially those of immunotherapy. TME immune-components are composed of different subsets of tumor-infiltrating immune cells assessable by multi-color FACS. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is among the deadliest malignances lacking good treatment options, thus an urgent and unmet medical need. One important reason for its non-responsiveness to various therapies (chemo-, targeted, I/O) has been its abundant TME, consisting of fibroblasts and leukocytes that protect tumor cells from these therapies. Orthotopically implanted PDAC is believed to more accurately recapture the TME of human pancreatic cancers than conventional subcutaneous (SC) models.
Homograft tumors (KPC) are transplants of mouse spontaneous PDAC originating from genetically engineered KPC-mice (KrasG12D/+/P53-/-/Pdx1-Cre) (KPC-GEMM). The primary tumor tissue is cut into small fragments (~2 mm3) and transplanted subcutaneously (SC) to the syngeneic recipients (C57BL/6, 7&#8211;9 weeks old). The homografts were then surgically orthotopically transplanted onto the pancreas of new C57BL/6 mice, along with SC-implantation, which reached tumor volumes of 300&#8211;1,000 mm3 by 17 days. Only tumors of 400&#8211;600 mm3 were harvested per approved autopsy procedure and cleaned to remove the adjacent non-tumor tissues. They were dissociated per protocol using a tissue dissociator into single-cell suspensions, followed by staining with designated panels of fluorescently-labeled antibodies for various markers of different immune cells (lymphoid, myeloid and NK, DCs). The stained samples were analyzed using multi-color FACS to determine numbers of immune cells of different lineages, as well as their relative percentage within tumors. The immune profiles of orthotopic tumors were then compared to those of SC tumors. The preliminary data demonstrated significantly elevated infiltrating TILs/TAMs in tumors over the pancreas, and higher B-cell infiltration into orthotopic rather than SC tumors.

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

The experimental procedure on the immunophenotyping of murine orthotopic PDAC homografts aims at profiling the tumor immuno-microenvironment. Tumors are orthotopically implanted via surgery. Tumors of 200&#8211;600 mm3 in size were harvested and dissociated to prepare single-cell suspensions, followed by multi-immune marker FACS analysis using different fluorescently-labeled antibodies.

Orthotopic Homogref (Syngeneic) fare birincil KPC pankreas duktal adenokarsinom, akış sitometresi tarafından Immunophenotyping

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, including genetically engineered models as well as transplantation models. However, genetically engineered mouse models are time-consuming and expensive, whereas some orthotopic transplantation models are difficult to reproduce. Here, a non-invasive intratracheal delivery method of lung tumor cells as an alternative orthotopic transplantation model is described. The use of mouse lung adenocarcinoma cells and syngeneic graft recipients allows studying tumorigenesis under the presence of a fully active immune system. Furthermore, genetic manipulations of tumor cells before transplantation makes this model an attractive time-saving approach to study the impact of genetic factors on tumor growth and tumor cell gene expression profiles under physiological conditions. Using this model, we show that lung adenocarcinoma cells express increased levels of the T-cell suppressor programmed death-ligand 1 (PD-L1) when grown in their natural environment as compared to cultivation in vitro.

Here we describe a minimally invasive syngeneic orthotopic transplantation model of mouse lung adenocarcinoma cells as a time- and cost-reducing model to study non-small cell lung cancer.

Orthotopic nakli PD-L1 ifade çalışmaya Syngeneic akciğer adenokarsinom hücre

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen receptors (CARs) for acute lymphoblastic leukemia (ALL) andnon-Hodgkin lymphoma (NHL). The focus of the field is now on emulating these successes in other hematological malignancies where less impressive complete response rates are observed. Further engineering of CAR T cells or co-administration of other treatment modalities may successfully overcome obstacles to successful therapy in other cancer settings.
We therefore present a model in which others can conduct pre-clinical testing of CD19 CAR T cells. Results in this well tested B-cell lymphoma model are likely to be informative CAR T-cell therapy in general.
This protocol allows the reproducible production of mouse CAR T cells through calcium phosphate transfection of Plat-E producer cells with MP71 retroviral constructs and pCL-Eco packaging plasmid followed by collection of secreted retroviral particles and transduction using recombinant human fibronectin fragment and centrifugation. Validation of retroviral transduction, and confirmation of the ability of CAR T cells to kill target lymphoma cells ex vivo, through the use of flow cytometry, luminometry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), is also described.
Protocols for testing CAR T cells in vivo in lymphoreplete and lymphodepleted syngeneic mice, bearing established, systemic lymphoma are described. Anti-cancer activity is monitored by in vivo bioluminescence and disease progression. We show typical results of eradication of established B-cell lymphoma when utilizing 1st or 2nd generation CARs in combination with lymphodepleting pre-conditioning and a minority of mice achieving long term remissions when utilizing CAR T cells expressing IL-12 in lymphoreplete mice.
These protocols can be used to evaluate CD19 CAR T cells with different additional modification, combinations of CAR T cells and other therapeutic agents or adapted for the use of CAR T cells against different target antigens.

Here, we present a protocol for the production and pre-clinical testing of murine CD19 CAR T cells by retroviral transduction and utilization as a therapy against established syngeneic A20 B-cell lymphoma in BALB/c mice with or without lymphodepleting pre-conditioning.

Syngeneic fare B hücreli lenfoma manken CD19 araba T hücrelerinin önceden klinik değerlendirme için

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer (PC). To address this deficiency, we describe a mouse model involving orthotopic implantation of PC followed by distal pancreatectomy and splenectomy. The model has been demonstrated to be safe and suitably flexible for the study of various therapeutic approaches in adjuvant and neo adjuvant settings.
In this model, a pancreatic tumor is first generated by implanting a mixture of human pancreatic cancer cells (luciferase-tagged AsPC-1) and human cancer associated pancreatic stellate cells into the distal pancreas of Balb/c athymic nude mice. After three weeks, the cancer is resected by re-laparotomy, distal pancreatectomy and splenectomy. In this model, bioluminescence imaging can be used to follow the progress of cancer development and effects of resection/treatments. Following resection, adjuvant therapy can be given. Alternatively, neoadjuvant treatment can be given prior to resection.
Representative data from 45 mice are presented. All mice underwent successful distal pancreatectomy/splenectomy with no issues of hemostasis. A macroscopic proximal pancreatic margin greater than 5 mm was achieved in 43 (96%) mice. The technical success rate of pancreatic resection was 100%, with 0% early mortality and morbidity. None of the animals died during the week after resection.
In summary, we describe a robust and reproducible technique for a surgical resection model of pancreatic cancer in mice which mimics the clinical scenario. The model may be useful for the testing of both adjuvant and neoadjuvant treatments.

In the clinical context, patients with localized pancreatic cancer will undergo pancreatectomy followed by adjuvant treatment. This protocol reported here aims to establish a safe and effective method of modelling this clinical scenario in nude mice, through orthotopic implantation of pancreatic cancer followed by distal pancreatectomy and splenectomy.

Pankreas Kanserinin Ortotopik Rezeksiyonlu Fare Modeli

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...