פרוטוקול זה מאפשר חקר סרטן הלבלב באתר הרקמה המקומית, תוך מזעור דלקת במהלך הזרקת תאים סרטניים ומספק שיטת תפוקה גבוהה ליצירת קבוצות גדולות של עכברים. באמצעות הנחיית אולטרסאונד, הצורך בניתוח בטן מסולק. בידינו, UG-OTIM יש שיעור נמוך בהרבה של זריעת קיר צפי בהשוואה להשתלה אורתוטופית מסורתית.
UG-OTIM מייצרת גידולים המאכלסים מחדש תכונות היסטולוגיות ואימונוביולוגיות האופייניות לסביבת מיקרו הגידול בלבלב ולכן ניתן להשתמש בהם כדי לחקור שילובים טיפוליים חדשניים בסביבה רלוונטית מבחינה קלינית. פיתחנו פרוטוקול זה לטיפולים אימונו-אונקולוגיים וביולוגיה של סרטן, אך ניתן להשתמש בו בתחומי מחקר אחרים, כולל חקירות של תפקוד לבלב תקין או מצבי מחלה כגון סוכרת. הדמיית אולטרסאונד בזמן אמת של החדרת מחט והזרקה היא חלק בלתי נפרד של שיטה זו.
אז הדגמה חזותית של הצעד היא קריטית לטכניקה הנכונה. לפני תחילת ההליך, אנו להשעות את קו התא אדנוקרצינומה צינור הלבלב אדנוקרצינומה של עניין בנפח מתאים של סטרילי, קר PBS על קרח. מניחים כלובים על צלחת חימום של 37 מעלות צלזיוס, ומנקים ביסודיות את ארון הבטיחות הביולוגי, תא אינדוקציה ושלב אולטרסאונד עם עיקור מתאים.
הגדר את פונקציית ההתחממות של שלב אולטרסאונד ל 37 מעלות צלזיוס ולאחר אינדוקציה של הרדמה, להחיל משחה על העיניים של החיה הראשונה. מניחים את העכבר ב recumbency הגב על הבמה אולטרסאונד, בעדינות לאבטח את הגפיים העליונות והתחתונות לבמה עם קלטת. השתמש במוליך קצה כותנה סטרילי כדי להחיל שכבה נדיבה של קרם depilatory לרביע השמאלי העליון של הבטן מעל אזור הטחול לקו האמצע.
לאחר דקה אחת, השתמש כרית גזה יבשה כדי להסיר בעדינות את השיער לפני הסרת קרם depilatory עודף עם גזה רטובה מלוחים. לאחר מכן מניחים את העכבר באחד הכלובים החדשים והנקיים על החם יותר. עבור השתלת תא גידול מונחה אולטרסאונד, להתאים את פלטפורמת אולטרסאונד, כך פני השטח מקבילים לרצפה, ולעמוד בצד שמאל של החיה עם הראש של העכבר פונה ימינה.
כוונן את תנוחת המתמר כך שתתקבל תמונת בטן רוחבית, ואבטח את גפי העכבר לפלטפורמה באמצעות סרט הדבקה. מנמיך בעדינות את מתמר כדי ליצור קשר עם בטן העכבר ולהתאים את מתמר עד הלבלב גלוי בבירור. אתר את הכליה השמאלית ואת הטחול כדי לספק אוריינטציה מדויקת בחלל הבטן.
כאשר אתר ההזרקה אותר, לטעון מזרק אינסולין 29 gage 1/2 אינץ ' עם 25 מיקרו ליטר של ההשעיה תא הגידול, ולנגב את קצה המחט עם כרית הכנה אלכוהול סטרילי. השתמש מטלפסי קצה קהה כדי לתפוס את עור העכבר ואת הקיר הצפי כדי להגביר את המתח באתר ההזרקה. החזקת המזרק בזווית של כ 25 עד 45 מעלות אל משטח פלטפורמת אולטרסאונד, לאט לקדם את המחט דרך העור ואת הקיר צפק.
אשר את המחט יש ניקב דרך הקיר צפק לפני ניצול הדמיה אולטרסאונד כדי להנחות את המחט ישירות לתוך הלבלב. כאשר המחט נמצאת במקום, לאט להזריק את התאים הגידול. היווצרות של בולוס נוזלי בתוך הלבלב יהיה ניכר בלבלב מוזרק כראוי על ידי אולטרסאונד.
לאחר נפח מלא של ההשעיה הוזרק, ואת בולוס נוזל ניתן לראות על ידי אולטרסאונד, להחזיק את המזרק עדיין מאוד במשך כמה שניות לפני לאט נסיגה המחט מהבטן העכבר, דואג לא להפריע לתאים מוזרק. לאחר מכן מניחים את העכבר לתוך כלוב חדש ונקי על החם עם ניטור עד להחלמה מלאה. מיקום מחט נכון בלבלב, כולל עומק מחט וזווית הוא צעד קריטי בפרוטוקול זה.
הדמיה של בולוס הנוזל מסייע לאשר הזרקת גידול מוצלחת. שליטה בעומק ההזרקה היא ההיבט הקשה ביותר. העצה שלי היא להתאמן עם זריקות tripamboo ולאשר בולוס נוזלים על ידי אולטרסאונד והן necropsy.
ניטור של השתלת הגידול וקצב הצמיחה על ידי הדמיה אולטרסאונד שבועי מגלה גידולים הכלולים בתוך גבולות הלבלב לאורך כל תקופת הניסוי. זריקות גידול טיטר גבוה לגרום שיעור גבוה יותר של בעלי חיים נושאי גידול שלושה שבועות לאחר ההזרקה לעומת קבוצת טיטר נמוך. למרות העיכוב בהתפרצות הגידול, קצב הגידול הכולל אינו שונה באופן משמעותי בין שתי המנות.
באופן דומה, בעוד שיעור ההישרדות בין שתי הקבוצות אינו שונה באופן משמעותי, הם נוטים מגמה לקראת הישרדות משופרת במקצת בקבוצה טיטר נמוך. קבוצת הטיטרים הגבוהה מייצרת גם שיעור גדול יותר של עכברים עם גידולים שאינם ניתנים לעצירה במחקרים פרה-קליניים, בארבעה שבועות לאחר ההזרקה. לאחר ההקרבה, האנטומיה הגולמית של גידולים מודל השתלת גידול אורתוטופי מונחה אולטרסאונד דומה לזה של גידולים KPC ספונטני ניתוח היסטולוגי מדגים דפוס של מבנים צינוריים חריגים הדומים בשני המודלים וכי recapitulates המורפולוגיה של המחלה האנושית.
בשני המודלים, הגידולים הם הסתננו בצורה גרועה על ידי תאי T, אבל הסתננו מאוד על ידי מקרופאגים. זכור להחזיק את המזרק בזווית המתאימה כדי לאפשר כניסה חלקה לתוך הלבלב, ולאשר כי המחט של הלבלב לפני שתמשיך עם הזריקה. גידול הגידול ניתן לפקח גידולים ניתן לקצור לניתוח על ידי pho cytometry או immunohistochemistry כדי לקבוע את ההשפעה של התערבות.
