עבודה זו נתמכה על ידי NIH T32AI 106704-01A1, קרן פלש טי השתלת איברים, זלוף, הנדסה, התחדשות ב אוניברסיטת אוהיו.

כל ההליכים בוצעו בהתאם לקווים המנחים של טיפול בעלי חיים מוסדיים, המועצה הלאומית למחקר של מדריך עבור טיפול אנושי ו שימוש של מעבדה בעלי חיים (IACUC), עבר אישור על-ידי ועדת IACUC אוניברסיטת מדינת אוהיו.
1. הגדרת הראשונית
<ol><li>
להכין את הפתרון זלוף על-ידי שילוב הבאות: 86 מ של 25% אלבומין, 184 מ של המדיה של וויליאמס, 30 מ של פניצילין/סטרפטומיצין (10 U/mL פניצילין ו- 0.01 מ"ג/מ"ל סטרפטומיצין), אינסולין (50 U/L), הפרין (0.01 U/mL),-גלוטמין (0.292 g/L), ו הידרוקורטיזון (0.010 g/L) את הנפח הכולל של 300 מ. כדי להפוך את הבסיס perfusate פג-חתול קבוצה, הוסף 625 U/mL של פג-חתול.
	<ol>
<li>מאגר הפתרון perfusate באמצעות טריס (hydroxymethyl) aminomethane (תאם) ל pH 7.4. השתמש מכונת גזים בדם כדי לאשר את רמת החומציות של perfusate.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
להגדיר את המעגל (איור 1).
	<ol>
<li>להפעיל את האמבטיה במים חמים יותר ולהגדיר אותו 37 מעלות צלזיוס. לאפשר לתא איברים להתחמם.</li>
		<li>שופכים את perfusate מעורב, במאגר לתוך המאגר ולהתחיל מחזור הדם. הערה: perfusate שהוזכר בשלב זה הוכן בשלב 1.1.1.</li>
		<li>הפעל את הגז oxygenating (95% חמצן ו-5% פחמן דו-חמצני) לדלפק זרימה דרך oxygenator בתוך השורה.</li>
		<li>להפעיל את התוכנה אוסף נתונים ולחץ על "התחל" כדי להקליט את משך זמן הניסוי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
כיוונון מיקרוסקופ כירורגי מחדר ניתוח (איור 2).
	<ol>
<li>הפעל את כל הציוד כולל לוח התחממות כדור הארץ, electrocautery, ואת הרדמה סימנים חיוניים (לב קצב וחמצן רוויה) פיקוח על ציוד. הערה: ההגדרות מיקרוסקופ ישתנו בהתבסס על המיקרוסקופ בשימוש ולא ניתן לכוונן נוחות המשתמש.</li>
		<li>למלא את המזרק הרדמה 10 מ ל 10 מ של איזופלוריין נוזלי האינהלציה (משקל מולקולרי 184.5 g/mol) ולמקם יחידת הרדמה.</li>
		<li>עמדה מזרק 0.5 מ"ל של הפארין (50 U), מכשירי הניתוח, 4-0 ו- 7-0 משי תפר ספוגיות כותנה סטרילי, 4 ס"מ על 4 ס"מ ארוגים גזה ספוגים כראוי (איור 2).</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכינו את תא איזופלוריין.</li>
</ol>2. אינדוקציה של הרדמה
<ol><li>ללבוש את הבאים ציוד מגן אישי (עיקרון השוויון הפוליטי): מסכה רפואית, כפפות כירורגי, שמלת חד פעמיות.</li>
	<li>שוקלים את החולדה. הערה: אנו משתמשים ספראג-Dawley חולדות בין 250 – 350 גר'.</li>
	<li>הפעל את מדחס חמצן ואיזופלוריין. הנח את העכבר, לאחר נשקל, אל החדר איזופלוריין ולאבטח את המכסה. לגרום הרדמה באמצעות איזופלוריין 6% הנכללת 2 ל'/דקה של חמצן. הערה: המינון המדויק איזופלוריין בשימוש יהיה תלוי במערכת הרדמה ספציפי בשימוש.</li>
	<li>השתמש קוצץ אלקטרונית קליפ שיער בטן החיה.
</li>
	<li>החלף את החיה בבית הבליעה איזופלוריין.</li>
	<li>הפעל את יחידת הרדמה ממוקם בחדר הניתוח.</li>
	<li>הסר את החולדה תא איזופלוריין כאשר הרדמה מלאה מושרה. לאשר את עומק ההרדמה באמצעות צביטה הבוהן.</li>
</ol>3. נוהל רכש
<ol><li>
להכין שהקפל פורטל 16 גרם (איור 3).
	<ol>
<li>מתחילים עם angiocatheter 16 גרם. לחתוך קטע 7 מ מ של אבובים. לקבוע את נקודת האמצע של מקטע 7 מ מ על ידי מדידת 3.5 מ מ. Incise אל נקודת האמצע ולהסיר את החלק הקדמי של הצנרת.</li>
		<li>השתמש עוצר דימום לרסק חלק שטוח עכשיו זה. להשתמש במשחה כדי להמיס את הקצה השני של angiocatheter כדי ליצור שפה. אין למקם את הטיפ ישירות על הלהבה או זה תוצת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הכינו את הצינורית צינור המרה.
	<ol>
<li>קח angiocath 27 G, לחתוך את הנמל הזרקת להשאיר רק את הקטטר. להתחבר זה קטע 10 ס מ של הצנרת cannular 27 G.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מקם את העכברוש עם האף שלה בקונוס האף בהרדמה, שלה ארבע הגפיים. מרותק למיטה. לפקח על סימני החיים על ידי הצמדת שהצג הגפיים האחוריות השמאלי. לבצע צביטה הבוהן כדי לאשר עומק ההרדמה המתאימה. המשך הרדמה איזופלוריין 4% (לבעלי שמכבידים > 250 גרם).</li>
	<li>תרסיס הבטן של החיה עם אלכוהול איזופרופיל 70%. אפשר להתייבש. המקום סטרילי תלוי מעל בעל החיים.</li>
	<li>עושים קו האמצע חתך של מצאתי לשימוש לחיקו חדות מספריים והרחבת דרך העור (איור 4). הזן של הצפק ובעדינות תחתכי את השריר. לטפל כדי למנוע נזק לשלפוחית השתן של ההיבט נחות של החתך הזה ולכבד בהיבט מעולה של החתך.</li>
	<li>להרחיב את החתך רוחבית על ימין ועל שמאל כדי ליצור צלב ברמה של הגבול נחות של הכבד.</li>
	<li>להפוך את ההרדמה עד 2% (לבעלי שקילה > 250 גרם).</li>
	<li>. משכי הסרעפת באמצעות מלחציים נגד יתושים מעוקל הצלעות באמצעות צלעות רטרקטורים (איור 5).</li>
	<li>לחתוך את falciform, הסרעפת, והרצועות gastrohepatic עם מספריים חדות.</li>
	<li>אתר את העניבה-off הווריד הסרעפת 7-0 בתפר כמו קרוב ומקורו ככל האפשר למנוע דליפה.</li>
	<li>המעיים העכברוש באמצעות המוליך עצה של כותנה בטעימת סטרילי, עוטף את המעי גזה לחלח עם תמיסת מלח 0.9%. הקפידו לא למתוח את להערכת של המעי הדק.</li>
	<li>לנתח מעל הכלילי התחתון (IVC) כדי להסיר את עודפי רקמת. לנתח מאחורי IVC פשוט נעלה ההסתעפות ולהעביר לולאה של 4-0 בתפר משי לשימוש מאוחר יותר (איור 6).</li>
	<li>. משכי את הכליה הימנית כדי לספק חשיפה וריד הכליה. . משכי את האונה הימנית של הכבד עליונית עם גזה... . תקשור וריד הכליה 7-0 בתפר משי קרוב IVC ככל האפשר, לצרוב על פני זה דיסטלי השולטת (איור 7).</li>
	<li>בזהירות שווייץ וריד הטחול, תקשור אותו בעזרת שני תפרים משי 7-0, חצו אותה בין שתי התפרים.</li>
	<li>תקשור, מאתרים ומפסיקים ורידים נוספים באמצעות תפרים משי 7-0 עבור אורך נוסף על וריד שער הכבד, במידת הצורך. הערה: ישנם לפעמים ענפים קטנים של infrahepatic IVC בין וריד הכליה נכון את הכבד נחות.</li>
	<li>לנתח סביב העורק gastroduodenal, לקשור את העורק gastroduodenal 7-0 בתפר משי, מאתרים ומפסיקים את העורק gastroduodenal.</li>
	<li>לנתח סביב עורק הכבד ולאחר מכן מקם עניבה תפר משי 7-0 סביבו (איור 8).</li>
	<li>
שווייץ המרה.
	<ol>
<li>בדוק את האורך של המרה. . תקשור צינור המרה בקצה הדיסטלי באמצעות 7-0 בתפר משי. במקום הלולאה של 7-0 בתפר משי סביב המרה הציר הקרוב ככל האפשר.</li>
		<li>לחתוך חור זה מחצית מהקוטר התעלה עם מספריים קטנות, למקם צנתר 27 G המרה הציר הקרוב. לקשור את הצנתר במקום באמצעות בתפר העניבה סנדל הרומי (איור 9).</li>
	</ol>
</li>
	<li>להזריק 0.5 מ של הפארין (50 U) לתוך הווריד הפין או IVC של החיה באמצעות מחט 27 גרם. הערה: מזרק אינסולין 27 G גם ניתן להשתמש במקום זאת.</li>
	<li>מלחציים, תקשור IVC באמצעות הקודם שמוקם תפר משי 4-0.</li>
	<li>. תקשור עורק הכבד באמצעות הקודם שמוקם תפר משי 7-0</li>
	<li>. להסיר וריד שער הכבד באמצעות סרטון המיקרוכירורגית מלקחיים נקרר את וריד שער הכבד באמצעות angiocatheter של 22 גרם. מיושרות וריד שער הכבד עם 60 מ ל תמיסת קר 0.9% עם הפרין 1 מ"ל (100 U) עד הכבד blanches (איור 10). הערה: אם הכבד לא בלנש מיד זה אפשר לעסות עם צמר גפן סטרילי עצה applicators.</li>
	<li>לחשוף את suprahepatic IVC, חצו אותו בתור גבוה בחזה ככל האפשר.</li>
	<li>בצע hepatectomy כדלקמן. . לחתוך את הסרעפת חתך את עורק הכבד, לחתוך את IVC, לחתוך וריד שער הכבד, לחתוך כל הרצועות נוספים, להוציא את הכבד. מקם את הכבד קרח קר 0.9% תמיסת מלח (איור 11).</li>
	<li>מקום מגבון וסקולרית 16 גרם וריד שער הכבד (איור 12). מקם את הכבד על המעגל זלוף הכבד normothermic ex-vivo .</li>
</ol>4. זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר
הערה: perfusate המשמש כאן הוכן פרוטוקול שלב 1.1.1.
<ol><li>מקם את הצינורית וריד שער הכבד לווריד פורטל בעצור (איור 13).</li>
	<li>במהלך מיקום בצינורית וריד שער הכבד, לשמור על זרימה של perfusate דרך המעגל ב 2 מ ל/דקה כדי להתחיל. תסתכלו על המסך עבור התוך וריד שער לחץ; זה עשוי להצביע על הספינה יש להפוך occluded, מיקום מחדש של צנתרים הדרוש.</li>
	<li>תפר ב הצינורית IVC זרימה החזרה של perfusate השימוש בתפר משי 7-0.</li>
	<li>לאחר שני קנולות במקום, מתחילים להופיע את הזרימה ב- 1 מ ל/דקה עד לחץ פיזיולוגיים בטווח של 10-16 cmH2O.</li>
	<li>
לקחת דגימה 1 מ"ל מן קדם ויציאות פוסט--0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ו 240 דקות של זלוף. לחלק את הדגימה 1 מ"ל בשתי הדגימות 0.5 mL. הערה: 0.5 מ ל זה ישמש בשלב פרוטוקול 4.5.1, ו- 0.5 מ ל ישמש בשלב פרוטוקול 4.5.2.<ol>
<li>הצמד להקפיא 0.5 מ של דגימה זו צינורות קריוגני בחנקן נוזלי.</li>
		<li>להפעיל ניתוח גזים בדם באמצעות 0.5 mL הנותרים של perfusate.</li>
		<li>לאחר הפעלת הבדיקה גז דם בכל נקודה בזמן (0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ו- 240 דקות) לבחון את דרגות החומציות ואת החיץ את perfusate לפי הצורך כדי לחזור pH 7.4.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בתום 4 שעות של זלוף, נתק את הכבד של המעגל זלוף. לחלק הכבד 0.5 ג'י מקטעים. הצמד הקפאת רקמת הכבד צינורות קריוגני בחנקן נוזלי.</li>
</ol>5. ניסוי שלאחר ניתוח
<ol><li>
לקבוע אלנין aminotransferase (ALT) ברמה perfusate-0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ו 240 דקות באמצעות ערכת מסחרי assay ערכי צבע מוחלטים.
	<ol>
<li>בקצרה, דגירה של perfusate עם ריאגנטים לערבב התגובה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 60 דק מדד הצפיפות האופטית ערכים-570 nm באמצעות קורא microplate.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Homogenize 0.5 גרם של רקמת הכבד עם 100 µL פירוק מאגר ולנתח את הרקמה lysate אדנוזין טריפוספט (ATP), גלוטתיון (GSH) של malondialdehyde (מד א).
	<ol>
<li>בקצרה, למדוד את רמות ATP הדגימות רקמת הכבד באמצעות ערכת וזמינותו המסחרית. לערבב את הדגימה עם המאגר התגובה, דגירה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות מדד הצפיפות האופטית-570 nm באמצעות קורא microplate.</li>
		<li>למדוד את רמות GSH הדגימות רקמת הכבד באמצעות ערכת וזמינותו המסחרית. מערבבים את דגימות רקמה עם קוקטייל וזמינותו. למדוד את ערכי צפיפות אופטית-405-414 nm.</li>
		<li>למדוד את רמות מד"א של הדגימות רקמת הכבד באמצעות ערכת וזמינותו המסחרית. לערבב את הדגימות עם יפורסם ומחממים עד 95 מעלות צלזיוס במשך 60 דק צנטריפוגה מגיבים, להעביר את תגובת שיקוע צלחת 96-ובכן. למדוד את הצפיפות האופטית-532 ננומטר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Homogenize 0.5 גרם של רקמת הכבד עם 100 µL פירוק מאגר ולנתח את הרקמה lysate לפעילות היחסי של קספאז-3/7 באמצעות ערכת וזמינותו המסחרית.
	<ol>
<li>לערבב את הרקמה lysate עם המאגר assay ריאגנט קספאז-3-7, דגירה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.</li>
		<li>למדוד את רמת קרינה פלואורסצנטית כל טוב באמצעות קורא microplate.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
לקבוע את הרמה של מוות תאים הדגימות רקמת הכבד באמצעות ערכת זיהוי מוות מסחרי ב באתרו .
	<ol>
<li>מראש לטיפול של 0.5 g רקמות חלקים עם Proteinase U/mL 10 K 10 דקות, ואז דגירה עם תערובת התגובה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 60 דקות לבצע ניתוח באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>. National Data. Overall by Organ. Current U.S. Waiting List. Based on OPTN data as of October 19, 2017 Available from: <a target="_blank" href="https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/">https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/</a> (2017)</li><li>. National Data, Transplants by Donor Type, U.S. Transplants Performed January 1, 1988 - December 31, 2016, For Organ = Liver Available from: <a target="_blank" href="https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/">https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/</a> (2017)</li><li>Nemes, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+criteria+donors+in+liver+transplantation+Part+I:+reviewing+the+impact+of+determining+factors.">Extended criteria donors in liver transplantation Part I: reviewing the impact of determining factors.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 10 (7), 827-839 (2016).</li><li>Nemes, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended-criteria+donors+in+liver+transplantation+Part+II:+reviewing+the+impact+of+extended-criteria+donors+on+the+complications+and+outcomes+of+liver+transplantation.">Extended-criteria donors in liver transplantation Part II: reviewing the impact of extended-criteria donors on the complications and outcomes of liver transplantation.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 10 (7), 841-859 (2016).</li><li>Pezzati, D., Ghinolfi, D., De Simone, P., Balzano, E., Filipponi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+optimize+the+use+of+marginal+donors+in+liver+transplantation.">Strategies to optimize the use of marginal donors in liver transplantation.</a> World J Hepatol. 7 (26), 2636-2647 (2015).</li><li>Marecki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+ex+situ+machine+perfusion+preservation:+A+review+of+the+methodology+and+results+of+large+animal+studies+and+clinical+trials.">Liver ex situ machine perfusion preservation: A review of the methodology and results of large animal studies and clinical trials.</a> Liver Transpl. 23 (5), 679-695 (2017).</li><li>Barbas, A. S., Knechtle, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+the+Donor+Pool+With+Normothermic+Ex+Vivo+Liver+Perfusion:+The+Future+Is+Now.">Expanding the Donor Pool With Normothermic Ex Vivo Liver Perfusion: The Future Is Now.</a> Am J Transplant. 16 (11), 3075-3076 (2016).</li><li>Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers.">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> Am J Transplant. 13 (5), 1327-1335 (2013).</li><li>Westerkamp, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=End-ischemic+machine+perfusion+reduces+bile+duct+injury+in+donation+after+circulatory+death+rat+donor+livers+independent+of+the+machine+perfusion+temperature.">End-ischemic machine perfusion reduces bile duct injury in donation after circulatory death rat donor livers independent of the machine perfusion temperature.</a> Liver Transpl. 21 (10), 1300-1311 (2015).</li><li>Selzner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+liver+perfusion+using+steen+solution+as+perfusate+for+human+liver+transplantation:+First+North+American+results.">Normothermic ex vivo liver perfusion using steen solution as perfusate for human liver transplantation: First North American results.</a> Liver Transpl. 22 (11), 1501-1508 (2016).</li><li>Whitson, B. A., Black, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+assessment+and+repair+centers:+The+future+of+transplantation+is+near.">Organ assessment and repair centers: The future of transplantation is near.</a> World J Transplant. 4 (2), 40-42 (2014).</li><li>Tolboom, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+machine+perfusion+at+both+20&#176;C+and+30&#176;C+recovers+ischemic+rat+livers+for+successful+transplantation.">Subnormothermic machine perfusion at both 20&#176;C and 30&#176;C recovers ischemic rat livers for successful transplantation.</a> J Surg Res. 175 (1), 149-156 (2012).</li><li>Nagrath, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+preconditioning+of+donor+organs:+defatting+fatty+livers+by+normothermic+perfusion+ex+vivo.">Metabolic preconditioning of donor organs: defatting fatty livers by normothermic perfusion ex vivo.</a> Metab Eng. 11 (4-5), 274-283 (2009).</li><li>Boehnert, M. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+acellular+ex+vivo+liver+perfusion+reduces+liver+and+bile+duct+injury+of+pig+livers+retrieved+after+cardiac+death.">Normothermic acellular ex vivo liver perfusion reduces liver and bile duct injury of pig livers retrieved after cardiac death.</a> Am J Transplant. 13 (6), 1441-1449 (2013).</li><li>Sch&#246;n, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+transplantation+after+organ+preservation+with+normothermic+extracorporeal+perfusion.">Liver transplantation after organ preservation with normothermic extracorporeal perfusion.</a> Ann Surg. 233 (1), 114-123 (2001).</li><li>Reddy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-heart-beating+donor+porcine+livers:+the+adverse+effect+of+cooling.">Non-heart-beating donor porcine livers: the adverse effect of cooling.</a> Liver Transpl. 11 (1), 35-38 (2005).</li><li>Banan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+strategy+to+decrease+reperfusion+injuries+and+improve+function+of+cold-preserved+livers+using+normothermic+ex+vivo+liver+perfusion+machine.">Novel strategy to decrease reperfusion injuries and improve function of cold-preserved livers using normothermic ex vivo liver perfusion machine.</a> Liver Transpl. 22 (3), 333-343 (2016).</li><li>Held, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> An Introduction to Reactive Oxygen Species: Measurement of ROS in Cells. , 1-14 (2012).</li><li>Chen, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reperfusion+liver+injury-induced+superoxide+dismutase+and+catalase+expressions+and+the+protective+effects+of+N-acetyl+cysteine.">Reperfusion liver injury-induced superoxide dismutase and catalase expressions and the protective effects of N-acetyl cysteine.</a> Transplant Proc. 39 (4), 858-860 (2007).</li><li>Chen, B., Tang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+catalase+on+retinal+ischemia/reperfusion+injury+in+rats.">Protective effects of catalase on retinal ischemia/reperfusion injury in rats.</a> Exp Eye Res. 93 (5), 599-606 (2011).</li><li>He, Y. Y., Hsu, C. Y., Ezrin, A. M., Miller, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyethylene+glycol-conjugated+superoxide+dismutase+in+focal+cerebral+ischemia-reperfusion.">Polyethylene glycol-conjugated superoxide dismutase in focal cerebral ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol. 265 (1 Pt 2), H252-H256 (1993).</li><li>I&#351;lekel, S., I&#351;lekel, H., G&#252;ner, G., Ozdamar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+superoxide+dismutase,+glutathione+peroxidase+and+catalase+activities+in+experimental+cerebral+ischemia-reperfusion.">Alterations in superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase activities in experimental cerebral ischemia-reperfusion.</a> Res Exp Med (Berl). 199 (3), 167-176 (1999).</li><li>Li, G., Chen, Y., Saari, J. T., Kang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catalase-overexpressing+transgenic+mouse+heart+is+resistant+to+ischemia-reperfusion+injury.">Catalase-overexpressing transgenic mouse heart is resistant to ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol. 273 (3 Pt 2), H1090-H1095 (1997).</li><li>Nowak, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotargeting+of+catalase+to+lung+endothelium+via+anti-angiotensin-converting+enzyme+antibodies+attenuates+ischemia-reperfusion+injury+of+the+lung+in+vivo.">Immunotargeting of catalase to lung endothelium via anti-angiotensin-converting enzyme antibodies attenuates ischemia-reperfusion injury of the lung in vivo.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 293 (1), L162-L169 (2007).</li><li>Beckman, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+dismutase+and+catalase+conjugated+to+polyethylene+glycol+increases+endothelial+enzyme+activity+and+oxidant+resistance.">Superoxide dismutase and catalase conjugated to polyethylene glycol increases endothelial enzyme activity and oxidant resistance.</a> J Biol Chem. 263 (14), 6884-6892 (1988).</li><li>Yabe, Y., Nishikawa, M., Tamada, A., Takakura, Y., Hashida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+and+improved+therapeutic+potential+of+catalase+by+chemical+modification:+combination+with+superoxide+dismutase+derivatives.">Targeted delivery and improved therapeutic potential of catalase by chemical modification: combination with superoxide dismutase derivatives.</a> J Pharmacol Exp Ther. 289 (2), 1176-1184 (1999).</li><li>Yabe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+neutrophil-mediated+hepatic+ischemia/reperfusion+injury+by+superoxide+dismutase+and+catalase+derivatives.">Prevention of neutrophil-mediated hepatic ischemia/reperfusion injury by superoxide dismutase and catalase derivatives.</a> J Pharmacol Exp Ther. 298 (3), 894-899 (2001).</li><li>Ushitora, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+hepatic+ischemia-reperfusion+injury+by+pre-administration+of+catalase-expressing+adenovirus+vectors.">Prevention of hepatic ischemia-reperfusion injury by pre-administration of catalase-expressing adenovirus vectors.</a> J Control Release. 142 (3), 431-437 (2010).</li><li>Kakizaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effects+of+Short-Term+Subnormothermic+Perfusion+after+Cold+Preservation+on+Liver+Grafts+from+Donors+after+Cardiac+Death:+An+Ex+Vivo+Rat+Model.">The Effects of Short-Term Subnormothermic Perfusion after Cold Preservation on Liver Grafts from Donors after Cardiac Death: An Ex Vivo Rat Model.</a> Transplantation. , (2018).</li><li>Kumar, R., Chung, W. Y., Dennison, A. R., Garcea, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+Vivo+Porcine+Organ+Perfusion+Models+as+a+Suitable+Platform+for+Translational+Transplant+Research.">Ex Vivo Porcine Organ Perfusion Models as a Suitable Platform for Translational Transplant Research.</a> Artif Organs. , (2017).</li><li>Nativ, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+defatting:+an+alternative+approach+to+enable+steatotic+liver+transplantation.">Liver defatting: an alternative approach to enable steatotic liver transplantation.</a> Am J Transplant. 12 (12), 3176-3183 (2012).</li><li>Yeung, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+adenoviral+vector+gene+delivery+results+in+decreased+vector-associated+inflammation+pre-+and+post-lung+transplantation+in+the+pig.">Ex vivo adenoviral vector gene delivery results in decreased vector-associated inflammation pre- and post-lung transplantation in the pig.</a> Mol Ther. 20 (6), 1204-1211 (2012).</li><li>Goldaracena, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+Hepatitis+C+Virus+Resistance+After+Pig+Liver+Transplantation-A+Proof+of+Concept+of+Liver+Graft+Modification+Using+Warm+Ex+Vivo+Perfusion.">Inducing Hepatitis C Virus Resistance After Pig Liver Transplantation-A Proof of Concept of Liver Graft Modification Using Warm Ex Vivo Perfusion.</a> Am J Transplant. 17 (4), 970-978 (2017).</li><li>Van Raemdonck, D., Neyrinck, A., Rega, F., Devos, T., Pirenne, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Machine+perfusion+in+organ+transplantation:+a+tool+for+ex+vivo+graft+conditioning+with+mesenchymal+stem+cells?.">Machine perfusion in organ transplantation: a tool for ex vivo graft conditioning with mesenchymal stem cells?.</a> Curr Opin Organ Transplant. 18 (1), 24-33 (2013).</li><li>Pratschke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+the+TOP+Study:+Prospectively+Randomized+Multicenter+Trial+of+an+Ex+Vivo+Tacrolimus+Rinse+Before+Transplantation+in+EDC+Livers.">Results of the TOP Study: Prospectively Randomized Multicenter Trial of an Ex Vivo Tacrolimus Rinse Before Transplantation in EDC Livers.</a> Transplant Direct. 2 (6), e76 (2016).</li><li>Pratschke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+TOP-Study+(tacrolimus+organ+perfusion):+a+prospective+randomized+multicenter+trial+to+reduce+ischemia+reperfusion+injury+in+transplantation+of+marginal+liver+grafts+with+an+ex+vivo+tacrolimus+perfusion.">Protocol TOP-Study (tacrolimus organ perfusion): a prospective randomized multicenter trial to reduce ischemia reperfusion injury in transplantation of marginal liver grafts with an ex vivo tacrolimus perfusion.</a> Transplant Res. 2 (1), 3 (2013).</li><li>Nativ, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+sensitivity+of+macrosteatotic+hepatocytes+to+hypoxia/reoxygenation+stress+is+reversed+by+a+novel+defatting+protocol.">Elevated sensitivity of macrosteatotic hepatocytes to hypoxia/reoxygenation stress is reversed by a novel defatting protocol.</a> Liver Transpl. 20 (8), 1000-1011 (2014).</li><li>Lonze, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+ex+vivo+delivery+of+short+hairpin+RNAs+for+control+of+hepatitis+C+viral+transcript+expression.">In vitro and ex vivo delivery of short hairpin RNAs for control of hepatitis C viral transcript expression.</a> Arch Surg. 147 (4), 384-387 (2012).</li></ol>

כל המחברים מדווחים שיש להם אין גילויים הרלוונטיים.

קיים מחסור משמעותי של allografts הכבד זמין עבור השתלת, בתגובה קריטריונים התורם היה מורחב1,2,3,4,5. בשל המחסור התורם, NEVLP כבר הציג כשיטה להעריך ולשנות איברים פונקציה6,7. עיצבנו עכ...

ישנם חולים 14,578 ברשימת ההמתנה עבור השתלת כבד, כ 7,000 השתלות מתבצעות לכל השנה1,2. בתגובה פירוש הדבר תורם משמעותית, הרחיבו הקריטריונים עבור התורמים כבד; אלה מכונים לעתים קרובות שולי איברים או קריטריונים המורחבת תורמים, צפויים לבצע פחות טוב לאחר ההשתלה מאשר allografts הקריטריונים הסטנדרטיים, עם שיעור גבוה יותר של תפקוד שתל ראשי ושתל עיכוב הפונקציה3, 4,5,6. כתוצאה מכך, NEVLP כבר הציג כשיטה להעריך ולשנות איברים פונקציה6,7. יש מעוצב דגם עכברוש של NEVLP ואנו בשימוש מודל זה כדי להדגים אחד שלה יישומים פוטנציאליים חשובים – בדיקה של מולקולה הרומן תוספות כדי perfusate הכבד.
NEVLP יוערכו מאתר (עכברים) והן מודלים חזירי, כמו גם איברי אדם שהושלך6,8,9. התוצאות של הניסויים האנושי הראשון של NEVLP היו גם לאחרונה פורסם10. למרות מכונת בהיפותרמיה זלוף הפך בבירור התקן לשימור הכליה, הטמפרטורה במכונת הכבד אשר זלוף צריכה להתרחש הוא עדיין שנוי במחלוקת. NEVLP יתרונות רבים המוצע לעומת בהיפותרמיה זלוף subnormothermic. אלה כוללים פגיעה השימור מופחתים, שיקום תפקוד האיברים נורמלי בתנאים הפיזיולוגיות, היכולת להעריך את ביצועי איברים, ולא כפלטפורמה איברים תיקון, שיפוץ של השינוי7,11, 12,13,14,15,16,17.
מספר רב של מחקרים הושלמו באמצעות מודלים NEVLP חזירי. למרות מודלים אלה הם זולים יחסית, כאשר דגמי שקילת שימוש שנמחקו איברי אדם או ניסויים קליניים בבני, הם מאוד יקר בהשוואה שלנו דגם NEVLP בעלי חיים קטנים. מרכיב משמעותי של לכל ניסוי העלות היא perfusate. אנחנו יכולים להשלים זלוף 4 שעות עם 300 מ של perfusate במחיר נמוך יחסית. בנוסף, העלות של חיות קטנות כולל חולדות הוא נמוך מאוד לעומת העלות של חזירים.
לעומת דגמים אחרים של NEVLP בחולדה, המודל המוצג כאן הוא פשוט יחסית ליישום ובעל מגוון רחב של יישומים. המעגל זלוף ניתן לראות באיור1. Perfusate מתחיל במאגר perfusate (1), אשר הוא מיכל מים המעטפת. Perfusate הוא שלף מתוך המאגר על ידי משאבה רולר (2), דחף לתוך windkessel (3), ולאחר מכן את oxygenator (4). Oxygenator מוגדרת עבור גז countercurrent perfusate זרימה לספק חילוף הגזים המרבי. Perfusate ואז מההכנסות כדי חימום סליל (5) בתוך התא זלוף כדי להבטיח זאת היא בטמפרטורה הפיזיולוגיות, מלכודת בועות (6) כדי למנוע זלוף של בועות אוויר שם הם איברים מראש (7) ו עוגב שלאחר (8) מדגם יציאות, אשר מאפשרים את perfusate. לטעום. Perfusate ואז נכנס דרך הצינורית וריד שער הכבד. הצינורית וריד שער הכבד מחובר צג לחץ תרשימים הערכים על התוכנה אוסף נתונים. לאחר מכן, perfusate היציאות הכבד דרך הצינורית IVC, זורם לתוך הרחוב אקולייזר לחץ (9). לבסוף, perfusate משך מהגוש לחץ בחזרה דרך המשאבה רולר, רוקן לתוך המאגר. מודל זה כולל זלוף רציפה כדי וריד שער הכבד, משאיר בחוץ זרימה פועמת עורק הכבד, דיאליזה בשימוש גם דגמים אחרים, שכל אחד מהם דורש מעגל נוסף ונפרד, אך בעבר הוכחו לא להיות נדרש9,13.
על מנת לחקור התוספת של מולקולה טיפוליים חדשניים כדי perfusate, בחרנו את האנזים קטלאז. קטלאז הוא נבלות ROS אנדוגני, המהווה חלק של מנגנון ההגנה הפנימית תאים כדי. לרכך את ההשפעות של רוס18. הביטוי קטלאז הוא גדל איסכמיה הכבד פגיעה reperfusion פציעה19. תוספת ניסיוני של קטלאז הוכח כדי להקטין איסכמיה-פגיעה reperfusion, עיניים, המוח, ואת ריאות20,21,22,23,24. Pegylation הוכח למטרה קטלאז אנדותל, סיוע קטלאז ספיגת לתוך תאי אנדותל25. פג-חתול מנוהל מערכתית עם יעילות מוגבלת בהפחתת פגיעה כבדית איסכמיה-פגיעה reperfusion; עם זאת, שיערנו כי הוספת שפג-החתול מעגל זלוף מטלטלים יוביל ל שיפור תוצאות26,27,28. כאן, אנו מוסיפים פג-חתול perfusate הבסיס שלנו להדגים את יכולתו לצמצם פגיעה בכבד שימור.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Perfusate&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8% Albumin</td><td>CLS Behring, King of Prussia, PA</td><td>0053-7680-32</td><td></td></tr><tr><td>Williams Media</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>W1878</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Eli Lilly, Indianapolis, IL</td><td>0002-8215-91</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Fresnius Lab, Lake Zurich, IL</td><td>C504701</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>G3126</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>H0888</td><td></td></tr><tr><td>THAM</td><td>Hospira, Inc,</td><td>0409-1593-04</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylene Glycol - Catalase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9549 SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Personal Protective Equipment &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical Mask</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Protective Gown</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Gloves</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Liver Procurement&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley Rat</td><td>Harlan Sprague Dawley Inc.</td><td>250 -350 grams</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Microscope</td><td>Leica</td><td>M500-N w/ OHS</td><td></td></tr><tr><td>Charcoal Canisters</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-2001-8</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pressure-Lok Precision Analytical Syringe&amp;nbsp;</td><td>Valco Instruments Co, Inc.</td><td>SOMNO-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Electrosurgical Unit</td><td>Macan</td><td>MV-7A</td><td></td></tr><tr><td>Warming Pad</td><td>Braintree Scientific</td><td>HHP2</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Small Animal Anesthesia System</td><td>Kent Scientific</td><td>SS-MVG-Module</td><td></td></tr><tr><td>PhysioSuite</td><td>Kent Scientific</td><td>PS-MSTAT-RT</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane chamber</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0530LG</td><td></td></tr><tr><td>SurgiVet</td><td>Isotec</td><td>CDS 9000 Tabletop</td><td></td></tr><tr><td>Oxygen</td><td>Praxair</td><td>98015</td><td></td></tr><tr><td>Rib retractors</td><td>Kent Scientific</td><td>INS600240</td><td></td></tr><tr><td>GenieTouch</td><td>Kent Scientific</td><td>GenieTouch</td><td></td></tr><tr><td>Normal Saline</td><td>Baxter</td><td>NDC 0338-0048-04</td><td></td></tr><tr><td>4x4 Non-Woven Sponges</td><td>Criterion</td><td>104-2411</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Q-Tips</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>1009175</td><td></td></tr><tr><td>U-100 27 Gauge Insulin Syringe</td><td>Terumo</td><td>22-272328</td><td></td></tr><tr><td>5mL Syringe</td><td>BD</td><td>REF 309603</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Braided Silk Suture</td><td>Deknatel, Inc.</td><td>198737LP</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Braided Silk Suture</td><td>Teleflex Medical</td><td>REF 103-S</td><td></td></tr><tr><td>16 gauge Catheters</td><td>BBraun Introcan Safety</td><td>4252586-02</td><td></td></tr><tr><td>14 gauge Catheters</td><td>BBraun Introcan Safety</td><td>4251717-02</td><td></td></tr><tr><td>Bile Duct Cannular Tubing</td><td>Altec</td><td>01-96-1727&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Liver Perfusion Circuit Components &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water Bath Warmer</td><td>Lauda Ecoline Staredition</td><td>E103</td><td></td></tr><tr><td>Data Collection Software</td><td>ADInstruments&amp;nbsp;</td><td>Labchart 7</td><td></td></tr><tr><td>Liver Perfusion Circuit</td><td>Harvard Apparatus</td><td>73-2901</td><td></td></tr><tr><td>Membrane Oxygenator</td><td>Mediac SPA</td><td>M03069</td><td></td></tr><tr><td>Roller Pump</td><td>Ismatec</td><td>ISM827B</td><td></td></tr><tr><td>Gas (95% oxygen and 5% carbon dioxide)</td><td>Praxair</td><td>98015</td><td></td></tr><tr><td>Organ Chamber</td><td>Harvard Apparatus</td><td>ILP-2</td><td></td></tr><tr><td>1.8 mL Arcticle Cryogenic Tube</td><td>USA Scientific</td><td>1418-7410</td><td></td></tr><tr><td>Mucasol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z637181</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Microsurgical Instruments&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Small Scissors</td><td>Roboz</td><td>RS-5610</td><td></td></tr><tr><td>Large Scissors</td><td>S&amp;amp;T</td><td>SAA-15</td><td></td></tr><tr><td>Forceps - Large Angled</td><td>S&amp;amp;T</td><td>JFCL-7</td><td></td></tr><tr><td>Forceps - Small Angled</td><td>S&amp;amp;T</td><td>FRAS-15 RM-8</td><td></td></tr><tr><td>Clip Applier</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5440</td><td></td></tr><tr><td>Scissors - non micro</td><td>FST 14958-11</td><td>14958-11</td><td></td></tr><tr><td>Forceps - Straight Tip</td><td>S&amp;amp;T</td><td>FRS-15 RM8TC</td><td></td></tr><tr><td>Large Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-01</td><td></td></tr><tr><td>Small Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-01</td><td></td></tr><tr><td>Small Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-02</td><td></td></tr><tr><td>Small Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-03</td><td></td></tr><tr><td>Small Mosquito Clamps</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Post-Experiment Analysis &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alanine Aminotransferase (ALT) Activity Colorimetric/Fluorometric Assay Kit</td><td>BioVision</td><td>K752</td><td></td></tr><tr><td>Adenosine Triphosphate (ATP) Colorimetric/Fluorometric Assay Kit</td><td>BioVision</td><td>K354</td><td></td></tr><tr><td>Glutathione Assay Kit</td><td>Cayman Chemical</td><td>703002</td><td></td></tr><tr><td>Lipid Peroxidation (MDA) Assay Kit</td><td>Abcam</td><td>ab118970</td><td></td></tr><tr><td>Caspase-Glo 3/7 Assay Systems</td><td>Promega</td><td>G8090</td><td></td></tr><tr><td>POLARstar OMEGA Microplate Reader</td><td>BMG LABTECH</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

a small animal model of ex vivo normothermic liver perfusion

קיים מחסור משמעותי של allografts הכבד זמין עבור השתלת, בתגובה שהורחבו הקריטריונים התורם. כתוצאה מכך, normothermic ex-vivo הכבד זלוף (NEVLP) כבר הציג כשיטה להעריך ולשנות את תפקוד האיבר. NEVLP יתרונות רבים בהשוואה בהיפותרמיה ו subnormothermic כולל זלוף מופחת פגיעה שימור, שיקום תפקוד האיברים נורמלי בתנאים הפיזיולוגיות, הערכה של ביצועי איברים, כפלטפורמה לתיקון איברים , שיפוצים ושינויים. מודלים NEVLP מאתר והן חזירי תוארו. אנו מדגימים מודל עכברוש של NEVLP ולהשתמש מודל זה להראות אחד מהיישומים החשובים שלה – השימוש של מולקולה טיפולית נוספו perfusate הכבד. קטלאז נבלות מינים (ROS) חמצן תגובתי אנדוגני, הוכח כדי להקטין איסכמיה-פגיעה reperfusion בתוך העין, מוח, ריאות. Pegylation הוכח למטרה קטלאז אנדותל. כאן, הוספנו pegylated-קטלאז (פג-חתול) הבסיס perfusate הדגימו את יכולתה לצמצם פגיעה בכבד שימור. יתרון של המודל NEVLP מכרסם שלנו היא שזה זול לעומת דגמים בעלי חיים גדולים. מגבלה של מחקר זה היא כי היא אינה כיום כוללת זלוף שלאחר השתלת כבד. לכן, אין אפשרות לבצע חיזוי של הפונקציה של השתלת איברים שלאחר בוודאות. עם זאת, הדגם השתלת הכבד עכברוש מבוססת היטב, בהחלט יכול לשמש בשילוב עם מודל זה. לסיכום, הראו מודל NEVLP זול, פשוט, בקלות ניתן לשכפול באמצעות חולדות. יישומים של מודל זה יכול לכלול בדיקות perfusates הרומן תוספים perfusate, בדיקות תוכנה שתוכננה עבור איברים הערכה ואני ניסויים שנועדו לתקן את האיברים.

גודל דגימה של חולדות שלוש לכל קבוצה היה בשימוש. ALT נמדדה ב 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ו 240 דקות של זלוף. השתמשנו הסטודנט t-בדיקות כדי להשוות בין תוצאות בין הבסיס perfusate ו perfusate בסיס בתוספת פג-חתול קבוצות בכל נקודה בזמן. השוואת את הבסיס perfusate ו perfusate בסיס בתוספת קבוצות פג-חתול, יש פח?...

Watch this Scientific Journal Video about A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion at JoVE.com

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

שיש מחסור משמעותי לתורם כבד, הקריטריונים עבור התורמים הכבד שהורחבו. Normothermic ex-vivo הכבד זלוף (NEVLP) פותחה כדי להעריך ולשנות את תפקוד האיבר. מחקר זה מדגים מודל עכברוש של NEVLP, בדיקות היכולת של pegylated-קטלאז, להקל על פגיעה בכבד שימור.

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

a-small-animal-model-of-ex-vivo-normothermic-liver-perfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

13.3K Views.  Ohio State University Wexner Medical Center. שיש מחסור משמעותי לתורם כבד, הקריטריונים עבור התורמים הכבד שהורחבו. Normothermic ex-vivo הכבד זלוף (NEVLP) פותחה כדי להעריך ולשנות את תפקוד האיבר. מחקר זה מדגים מודל עכברוש של NEVLP, בדיקות היכולת של pegylated-קטלאז, להקל על פגיעה בכבד שימור.

Video: A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an extended perfusion period is challenging. We have added the kidney to our previous ex vivo perfused liver experiment model to reproduce a more accurate physiological state for prolonged experiments without using live animals. Five intact livers and kidneys were retrieved post-mortem from sacrificed pigs on different days and perfused for a minimum of 6 hr. Hourly arterial blood gases were obtained to analyze pH, lactate, glucose and renal parameters. The primary endpoint was to investigate the effect of adding one kidney to the model on the acid base balance, glucose, and electrolyte levels. The result of this liver-kidney experiment was compared to the results of five previous liver only perfusion models. In summary, with the addition of one kidney to the ex vivo liver circuit, hyperglycemia and metabolic acidosis were improved. In addition this model reproduces the physiological and metabolic responses of the liver sufficiently accurately to obviate the need for the use of live animals. The ex vivo liver-kidney perfusion model can be used as an alternative method in organ specific studies. It provides a disconnection from numerous systemic influences and allows specific and accurate adjustments of arterial and venous pressures and flow.

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Study of the animal organ physiology can be achieved by performing an experimental ex vivo perfusion system. The addition of a porcine kidney, as a homeostatic organ to our previously developed ex vivo liver perfusion model can be a principal step to achieve a better physiological environment.

צעדים לעצמיים ב<em&gt; Ex vivo</emניסוי כבד וכליה&gt; perfused בשר חזירים

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

טכניקה של Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; הכבד זלוף לאחסון, ההערכה, ותיקון שתלי כבד שולי

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming increasingly common. Ex vivo liver perfusions allow for a comprehensive analysis of liver metabolism using nuclear magnetic resonance (NMR), in nutritional conditions that can be rigorously controlled. As in silico simulations remain a primarily theoretical means of assessing hormone actions and the effects of pharmaceutical intervention, the perfused liver remains one of the most valuable test beds for understanding hepatic metabolism. As these studies guide basic insights into hepatic physiology, results must be accurate and reproducible. The greatest factor in the reproducibility of ex vivo hepatic perfusion is the quality of surgery. Therefore, we have introduced an organized and streamlined method to perform ex vivo mouse liver perfusions in the context of in situ NMR experiments. We also describe a unique application and discuss common issues encountered in these studies. The overall purpose is to provide an uncomplicated guide to a technique we have refined over several years that we deem the golden standard for obtaining reproducible results in hepatic resections and perfusions in the context of in situ NMR experiments. The distance to the center of the field for the magnet as well as the inaccessibility of the tissue to intervention during the NMR experiment makes our methods novel.

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

The protocol describes a straightforward method of resectioning an intact mouse liver for metabolic studies through portal vein perfusion.

אקס ויוו זלוף כבד דרך וריד הפורטל בעכבר

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

Biochemistry

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

שיטה של ​​מבודד<em&gt; Ex Vivo</em&gt; ריאות זלוף במודל עכברוש: ​​לקחים מפיתוח תכנית EVLP עכברוש

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing modified cannulas and techniques adapted from conventional commercial ex vivo perfusion equipment. The system was utilized to evaluate the preservation outcomes following 12 h of perfusion. C57BL/6J mice served as liver donors, and the livers were explanted by cannulating the portal vein (PV) and bile duct (BD), and subsequently flushing the organ with warm (37 &#176;C) heparinized saline. Then, the explanted livers were transferred to the perfusion chamber and subjected to normothermic oxygenated machine perfusion (NEVLP). Inlet and outlet perfusate samples were collected at 3 h intervals for perfusate analysis. Upon completion of the perfusion, liver samples were obtained for histological analysis, with morphological integrity assessed using modified Suzuki-Score through Hematoxylin-Eosin (HE) staining. The optimization experiments yielded the following findings: (1) mice weighing over 30 g were deemed more suitable for the experiment due to the larger size of their bile duct (BD). (2) a 2 Fr (outer diameter = 0.66 mm) polyurethane cannula was better suited for cannulating the portal vein (PV) when compared to a polypropylene cannula. This was attributed to the polyurethane material&#39;s enhanced grip, resulting in reduced catheter slippage during the transfer from the body to the organ chamber. (3) for cannulation of the bile duct (BD), a 1 Fr (outer diameter = 0.33 mm) polyurethane cannula was found to be more effective compared to the polypropylene UT - 03 (outer diameter = 0.30 mm) cannula. With this optimized protocol, mouse livers were successfully preserved for a duration of 12 h without significant impact on the histological structure. Hematoxylin-Eosin (HE) staining revealed a well-preserved morphological architecture of the liver, characterized by predominantly viable hepatocytes with clearly visible nuclei and mild dilation of hepatic sinusoids.

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

A normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) system was created for mouse livers. This system requires experience in microsurgery but allows for reproducible perfusion results. The ability to utilize mouse livers facilitates the investigation of molecular pathways to identify novel perfusate additives and enables the execution of experiments focused on organ repair.

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing ...

Engineering

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

באתרו לשעבר Normothermic מכונת זלוף של כבדים תורמים

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Large-Animal Model of Donation after Circulatory Death and Normothermic Regional Perfusion for Cardiac Assessment

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ donor pool. However, the DCD process is associated with the risk of cardiac tissue injury due to the inevitable period of warm ischemia. Normothermic regional perfusion (NRP) allows for an in situ organ assessment, allowing the procurement of hearts determined to be viable. Here, we describe a clinically relevant large-animal model of DCD followed by NRP. Circulatory death is established in anesthetized pigs by stopping mechanical ventilation. After a preset warm ischemia period, an extracorporeal membrane oxygenator (ECMO) is used for a NRP period lasting at least 30 min. During this reperfusion period, the model allows the collection of various myocardial biopsies and blood samples for initial cardiac evaluation. Once NRP is weaned, biochemical, hemodynamic, and echocardiographic assessments of cardiac function and metabolism can be performed before organ procurement. This protocol closely simulates the clinical scenario previously described for DCD and NRP in heart transplantation and has the potential to facilitate studies aimed at decreasing ischemia-reperfusion injury and enhance cardiac functional preservation and recovery.

The protocol describes a large-animal (porcine) model of donation after circulatory death, followed by thoracoabdominal normothermic regional perfusion that closely simulates the clinical scenario in heart transplantation, and has the potential to facilitate therapeutic studies and strategies.

מודל תרומה של בעלי חיים גדולים לאחר מוות במחזור הדם וזילוח אזורי נורממי להערכת לב

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ ...

Rat Model of Normothermic Ex-Situ Perfused Heterotopic Heart Transplantation

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the number of heart failure patients waiting for transplantation is still increasing. The normothermic ex situ preservation technique has been established as a comparable method to the conventional static cold storage technique. The main advantage of this technique is that donor hearts can be preserved for up to 12 h in a physiologic condition. Moreover, this technique allows resuscitation of the donor hearts after circulatory death and applies required pharmacologic interventions to improve donor function after implantation. Numerous animal models have been established to improve normothermic ex situ preservation techniques and eliminate preservation-related complications. Although large animal models are easy to handle compared to small animal models, it is costly and challenging. We present a rat model of normothermic ex situ donor heart preservation followed by heterotopic abdominal transplantation. This model is relatively cheap and can be accomplished by a single experimenter.

Here, we present an assessment protocol of a heterotopically implanted heart after normothermic ex situ preservation in the rat model.

מודל עכברוש של השתלת לב הטרוטופית נורמומית לשעבר

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the ...

<meta charset="utf8"></head><body>פיתוח ותיקוף של מודל זלוף כבד מבודד חזיר מחוץ למקום

Porcine Normothermic Isolated Liver Perfusion

Porcine models of liver ex situ normothermic machine perfusion (NMP) are increasingly being used in transplant research. Contrary to rodents, porcine livers are anatomically and physiologically close to humans, with similar organ size and bile composition. NMP preserves the liver graft at near-to-physiological conditions by recirculating a warm, oxygenated, and nutrient-enriched red blood cell-based perfusate through the liver vasculature. NMP can be used to study ischemia-reperfusion injury, preserve a liver ex situ before transplantation, assess the liver's function prior to implantation, and provide a platform for organ repair and regeneration. Alternatively, NMP with a whole blood-based perfusate can be used to mimic transplantation. Nevertheless, this model is labor-intensive, technically challenging, and carries a high financial cost.
In this porcine NMP model, we use warm ischemic damaged livers (corresponding to donation after circulatory death). First, general anesthesia with mechanical ventilation is initiated, followed by the induction of warm ischemia by clamping the thoracic aorta for 60 min. Cannulas inserted in the abdominal aorta and portal vein allow flush-out of the liver with cold preservation solution. The flushed-out blood is washed with a cell saver to obtain concentrated red blood cells. Following hepatectomy, cannulas are inserted in the portal vein, hepatic artery, and infra-hepatic vena cava and connected to a closed perfusion circuit primed with a plasma expander and red blood cells. A hollow fiber oxygenator is included in the circuit and coupled to a heat exchanger to maintain a pO2 of 70-100 mmHg at 38 &#176;C. NMP is achieved by a continuous flow directly through the artery and via a venous reservoir through the portal vein. Flows, pressures, and blood gas values are continuously monitored. To evaluate the liver injury, perfusate and tissue are sampled at predefined time points; bile is collected via a cannula in the common bile duct.

<meta charset="utf8"></head><body>חזיר נורמתרמי מבודד כבד פרפוזיה

The porcine model of liver normothermic machine perfusion (NMP), described here, can be successfully used to study NMP as a preservation strategy, a tool for viability assessment, and a platform for organ repair. It holds a high translational value, however it is technically challenging and labor-intensive.

חזיר נורמתרמי מבודד כבד פרפוזיה

Porcine models of liver ex situ normothermic machine perfusion (NMP) are increasingly being used in transplant research. Contrary to rodents, porcine ...

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

צעדים לעצמיים ב

טכניקה של Subnormothermic

אקס ויוו זלוף כבד דרך וריד הפורטל בעכבר

שיטה של מבודד

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

באתרו לשעבר Normothermic מכונת זלוף של כבדים תורמים

מודל תרומה של בעלי חיים גדולים לאחר מוות במחזור הדם וזילוח אזורי נורממי להערכת לב

מודל עכברוש של השתלת לב הטרוטופית נורמומית לשעבר

חזיר נורמתרמי מבודד כבד פרפוזיה

חזיר נורמתרמי מבודד כבד פרפוזיה

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

צעדים לעצמיים ב

טכניקה של Subnormothermic

אקס ויוו זלוף כבד דרך וריד הפורטל בעכבר

שיטה של ​​מבודד

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

באתרו לשעבר Normothermic מכונת זלוף של כבדים תורמים

מודל תרומה של בעלי חיים גדולים לאחר מוות במחזור הדם וזילוח אזורי נורממי להערכת לב

מודל עכברוש של השתלת לב הטרוטופית נורמומית לשעבר

חזיר נורמתרמי מבודד כבד פרפוזיה

חזיר נורמתרמי מבודד כבד פרפוזיה

שיטה של מבודד