이 작품은 장기 이식, 관류, 엔지니어링 및 오하이오 주립 대학에서 재생에 대 한 NIH T32AI 106704-01A1와 토니 flesch 식 기금에 의해 지원 되었다.

모든 절차는 기관 동물 관리의 지침에 따라 수행 했다 국가 연구 위원회의 자비 롭 배려 그리고 사용의 실험실 동물 (IACUC)에 대 한 가이드 하 고 오하이오 주립 대학 IACUC 위원회에 의해 승인을 받은.
1. 초기 설정
<ol><li>
다음 결합 하 여 관류 솔루션 준비: 25% 알 부 민 86 mL, 윌리엄스 미디어의 184 mL, 페니실린/스 (10 U/mL 페니실린과 0.01 mg/mL 스), 인슐린 (50 U/L), 헤 파 린 (0.01 U/mL), L-글루타민 (0.292 g/L), 30 mL 및 300 mL의 총 볼륨을 날린 (0.010 g/L). 기본 perfusate를 못 고양이 그룹, 페그-고양이의 625 U/mL를 추가 합니다.
	<ol>
<li>PH 7.4에 트리 (hydroxymethyl) aminomethane (THAM)를 사용 하 여 perfusate 솔루션을 버퍼링 합니다. 동맥 혈액 가스 기계를 사용 하 여 perfusate pH를 확인.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
회로 (그림 1)을 설정 합니다.
	<ol>
<li>따뜻한 물 욕조에 설정 하 고 37 ° c.에 설정 워밍업을 기관 실을 수 있습니다.</li>
		<li>저수지에 혼합 및 버퍼 된 perfusate를 부 어 하 고 순환을 시작 합니다. 참고:이 단계에서 언급 한 perfusate 단계 1.1.1에서에서 준비 되었다.</li>
		<li>인라인 oxygenator 통해 흐름 카운터에 의하여 가스 (95% 산소와 5% 이산화탄소)를 켭니다.</li>
		<li>데이터 수집 소프트웨어를 켜고 클릭 "시작" 실험의 기간에 대 한 기록.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수술 현미경과 수술 실 (그림 2)를 설정 합니다.
	<ol>
<li>지구 온난화 보드, electrocautery, 마 취 및 생체 신호 (심장 박동과 산소 포화) 장비를 모니터링을 포함 하 여 모든 장비를 켜십시오. 참고: 현미경 설정을 사용 하는 현미경에 따라 달라 집니다 및 사용자의 편안 하 게 조정 될 수 있다.</li>
		<li>흡입 (분자량 184.5 g/mol)에 대 한 액체 isoflurane의 10 mL와 10 mL 마 취 주사기와 마 취 단위에.</li>
		<li>헤 파 린 (50 U), 외과 악기의 0.5 mL 주사기를 위치, 4-0와 7-0 비단 봉합, 멸 균 면봉, 및 4 cm x 4 cm 직 거 즈 스폰지 적절 하 게 (그림 2).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isoflurane 챔버를 준비 합니다.</li>
</ol>2입니다. 마 취의 유도
<ol><li>다음과 같은 개인 보호 장비 (PPE) 착용: 수술 용 마스크, 수술 용 장갑, 일회용 가운.</li>
	<li>쥐의 무게. 참고: 우리는 250-350 g 사이 Sprague-Dawley 쥐를 사용합니다.</li>
	<li>산소 압축기 및 isoflurane 켭니다. Isoflurane 챔버에 무게 되 고 후는 쥐를 놓고 뚜껑을 확보 합니다. 6% isoflurane 2 L/min의 산소 전달 사용 하 여 마 취를 유도. 참고: 사용 하는 정확한 isoflurane 복용량 사용 되 고 특정 마 취 시스템에 따라 달라 집니다.</li>
	<li>전자 면도기를 사용 하 여 동물의 복 부 머리. 클립
</li>
	<li>동물 isoflurane 챔버에 장착.</li>
	<li>수술 실에서 마 취 장치를 켭니다.</li>
	<li>마 취 유도 완전히 isoflurane 상공에서 쥐를 제거. 발가락 핀치를 사용 하 여 마 취의 깊이 확인 합니다.</li>
</ol>3. 조달 절차
<ol><li>
16 G 포털 갑 (그림 3)를 준비 합니다.
	<ol>
<li>16 G angiocatheter로 시작 합니다. 튜빙의 7mm 섹션을 잘라. 3.5. 절 개를 중간 지점에서 측정 하 여 7 mm 섹션의 중간점을 확인 하 고 튜브의 앞쪽 절반을 제거.</li>
		<li>이 지금은 평평한 부분을 분쇄 하는 hemostat를 사용 합니다. 라이터를 사용 하 여 입술을 만드는 angiocatheter의 다른 쪽 끝을 녹기. 불꽃에 직접 팁을 배치 하지 마십시오 또는 그것은 점화 하는 것입니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
담 관 정을 준비 합니다.
	<ol>
<li>27 G angiocath 고만 카 테 터를 떠나 주입 포트 차단. 27 G cannular 튜브의 10 cm 섹션에이 연결 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>그것의 코를 가진 쥐를 마 취 코 콘에 놓고 그것의 4 개의 사지를 움직일 수 있습니다. 왼쪽된 뒷 끝에 모니터를 연결 하 여 생체 신호를 모니터링 합니다. 마 취의 적절 한 깊이 확인 하는 발가락 핀치를 수행 합니다. 4 %isoflurane 마 취를 계속 (무게 동물 > 250 g).</li>
	<li>70% 이소프로필 알코올로 동물의 복 부를 스프레이. 건조를 허용 합니다. 동물 살 균 드 레이프를 놓습니다.</li>
	<li>중간 절 개를 고 칼에서 사용 하 여 액을 날카로운가 위 (그림 4) 피부를 통해 확장을 확인 합니다. 부드럽게 복을 입력 하 고 근육을 incise. 이 절 개의 열 등 한 측면에서 방광과 간이 절이 개의 우수한 측면에서 손상 되지 않도록 주의 하십시오.</li>
	<li>간 열 등 한 국경의 수준에서 크로스를 오른쪽과 왼쪽에 옆으로 절 개를 확장 합니다.</li>
	<li>2%까지 마 취를 설정 (동물 무게 > 250 g).</li>
	<li>곡선된 모기 클램프와 갈비뼈 늑 골 견인 기 (그림 5)를 사용 하 여 사용 하 여 칼 과정을 철회.</li>
	<li>falciform 인할지, 컷과 날카로운가 위 gastrohepatic 인 대.</li>
	<li>찾아서 타이-오프 인할지 정 맥 누출을 방지 하기 위해 가능한 그것의 근원에 가까운로 7-0 봉합을 합니다.</li>
	<li>쥐 살 균 moistened 목화 제보 주걱을 사용 하 여 내장을 들어낸 고 창 0.9% 정상적인 염 분을 적신 거 즈에 포장. 알아서 하지 작은 창 자의 맥 관 구조를 스트레칭.</li>
	<li>열 등 한 베 나 정 맥 (IVC) 초과 조직을 제거를 통해 해 부. 그냥 분기점을 우수한 IVC 뒤에 dissect 그리고 나중에 사용 (그림 6)에 대 한 4-0 비단 봉합의 루프를 전달 합니다.</li>
	<li>바로 부 신 정 맥에 노출을 제공 하는 오른쪽 신장 철회. 거 즈와 머리 간 오른쪽 엽을 철회. 최대한 IVC 가까이로 7-0 비단 봉합 사로 바로 부 신 정 맥에서 고 원심 넥타이 (그림 7)에 걸쳐 부식.</li>
	<li>신중 하 게 비장 정 맥 밖으로 해 부, 그것은 2 개의 7-0 비단 봉합을 사용 하 여 고 두 봉합 사이 가로질러.</li>
	<li>고 추가 혈관 포털 정 맥에 추가 길이 대 한 7-0 비단 봉합 사를 사용 하 여 필요한 경우 선. 참고: 있습니다 때로는 바로 부 신 정 맥 및 열 등 한 간 사이 infrahepatic IVC의 작은 분 지.</li>
	<li>Gastroduodenal 동맥 주위 dissect, 7-0 비단 봉합으로 gastroduodenal 동맥에서 고 gastroduodenal 동맥 선.</li>
	<li>간 동맥 주위 dissect 하 고 장소 주위 (그림 8) 7-0 비단 봉합 넥타이.</li>
	<li>
담 즙 덕트에 밖으로 해 부.
	<ol>
<li>담 즙 덕트의 길이 확인 합니다. 7-0 비단 봉합 사를 사용 하 여 선단부에서 담 즙 덕트에서 타이. 담 관 주위 7-0 비단 봉합의 루프를 가능한 proximally 놓습니다.</li>
		<li>작은 위로 덕트의 절반 직경 구멍을 뚫고 고 27 G 테 담 즙 덕트 proximally 합니다. 로마 샌들 넥타이 봉합 (그림 9)를 사용 하 여 장소에 테를 묶어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>음 경 정 맥 또는 IVC 27g 바늘을 사용 하 여 동물의 헤 파 린 (50 U)의 0.5 mL를 주사. 참고: 27 G 인슐린 주사기가 대신 사용할 수도 있습니다.</li>
	<li>클램프와 IVC 이전 배치를 사용 하 여에서 4-0 비단 봉합 넥타이.</li>
	<li>이전 배치를 사용 하 여 간 동맥을 묶어 7-0 비단 봉합.</li>
	<li>Microsurgical 클립을 사용 하 여 문맥을 클램프. 22 G angiocatheter를 사용 하 여 문맥 cannulate 플러시 간까지 1 mL 헤 파 린 (100 U)와 차가운 0.9% 정상적인 염 분의 60 mL와 문맥 blanches (그림 10). 참고: 간 즉시 희게 하지 않습니다 그것은 메 마른 면 끝 도포와 마사지 될 수 있습니다.</li>
	<li>IVC suprahepatic 하 고 높은 가능한 가슴에 그것을 통해 잘라.</li>
	<li>hepatectomy 다음과 같이 수행 합니다. 막 주위, 간 동맥을 잘라, 잘라는 IVC, 포털 정 맥을 잘라, 어떤 추가 인 대를 잘라 잘라내어 간 꺼내. 간 얼음 차가운 0.9% 정상적인 염 분 (그림 11)에 놓습니다.</li>
	<li>문맥 (그림 12)에서 16 G 혈관 팔목을 놓습니다. 간 비보 전 normothermic 간 관류 회로에 배치 합니다.</li>
</ol>4. 전 비보 Normothermic 간 관류
참고: 여기에 사용 되는 perfusate 프로토콜 단계 1.1.1에서에서 준비 되었다.
<ol><li>(그림 13) cuffed 문맥에 문맥 정 맥을 놓습니다.</li>
	<li>문맥 정 맥 배치 하는 동안 하려면 2 mL/min에서 회로 통해 perfusate의 흐름을 유지 합니다. 시계 어떤 스파이크 문맥 압력;에 대 한 모니터 이 선박 차단 되 고 필요 하다는 정 맥의 위치를 나타낼 수 있습니다.</li>
	<li>7-0 비단 봉합 사를 사용 하 여 perfusate의 반환 교류에 대 한 IVC 정에 봉합.</li>
	<li>일단 두 뉼 그 자리에 이면, 10-16 cmH2O의 범위에서 생리 적 압력에 도달할 때까지 1 mL/min에서 흐름을 선회 시작 합니다.</li>
	<li>
사전에서 1 mL 샘플 및 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 및 관류의 240 분에 후 포트를 가져가 라. 1 mL 샘플을 두 0.5 mL 샘플 나눕니다. 참고: 0.5 mL이 프로토콜 단계 4.5.1에서 사용 될 것입니다 그리고 0.5 mL 프로토콜 단계 4.5.2에서에서 사용 될 것입니다.<ol>
<li>스냅 액체 질소에 저온 관에이 샘플의 0.5 mL를 고정 합니다.</li>
		<li>Perfusate의 나머지 0.5 mL를 사용 하 여 동맥 혈 가스 분석을 실행 합니다.</li>
		<li>각 시간 지점에서 혈액 가스 분석을 실행 한 후 (0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 및 240 분) pH 수준을 검토 하 고 pH 7.4로 돌아갈 필요는 perfusate 버퍼.</li>
	</ol>
</li>
	<li>4 h 관류의의 결론에 간 관류 회로에서 분리 합니다. 간 0.5 g 세그먼트로 나눕니다. 스냅 액체 질소에 저온 관에 간 조직 고정.</li>
</ol>5. 사후 실험 분석
<ol><li>
0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 및 상업 색도계 분석 실험 키트를 사용 하 여 240 분에서 perfusate에 알라닌 aminotransferase (ALT) 레벨을 결정 합니다.
	<ol>
<li>간단히, 60 분 측정 570에서 광학 밀도 값에 대 한 37 ° C에서 반응 혼합 시 약으로 perfusate를 품 어 nm microplate 리더를 사용 하 여.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
0.5 g의 간 조직 세포의 용 해 버퍼의 100 µ L 균질 하 고 조직 lysate 아데노신 3 인산 염 (ATP), 티 (GSH) 및 malondialdehyde (MDA)에 대 한 분석.
	<ol>
<li>간단히, 상업 시험 키트를 사용 하 여 간 조직 샘플의 ATP 수준을 측정 합니다. 반응 버퍼와 샘플을 혼합 하 고 30 분 측정 570에서 광학 밀도 대 한 실 온에서 품 어 nm microplate 리더를 사용 하 여.</li>
		<li>상용 시험 키트를 사용 하 여 간 조직 샘플의 GSH 레벨을 측정 합니다. 조직 샘플 분석 결과 칵테일 믹스. 405-414 nm에 광학 밀도 값을 측정 합니다.</li>
		<li>상용 시험 키트를 사용 하 여 간 조직 샘플의 MDA 레벨을 측정 합니다. TBA와 60 분 분리기 반응에 대 한 95 ° C에 열 샘플을 혼합 하 고 96 잘 접시에는 상쾌한 전송. 532에서 광학 밀도 측정 nm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
0.5 g의 간 조직 세포의 용 해 버퍼의 100 µ L 균질 하 고 상업 시험 키트를 사용 하 여 상대 caspase-3/7 활동에 대 한 lysate 조직 분석.
	<ol>
<li>Caspase-3-7 시 분석 결과 버퍼와 조직 lysate를 혼합 하 고 30 분 동안 실 온에서 품 어.</li>
		<li>잘 사용 하 여 각 microplate 리더에 형광 레벨을 측정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
상업적인 제자리에 죽음 탐지 키트를 사용 하 여 간 조직 샘플에 apoptotic 세포의 수준을 결정 합니다.
	<ol>
<li>사전 치료는 0.5 g 조직 섹션 10 U/mL 가수분해 K 10 분으로 하 고 60 분 수행 형광 현미경을 사용 하 여 분석에 대 한 37 ° C에서 반응 혼합물으로 품 어.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Network, O. P. aT. National Data. Overall by Organ. Current U.S. Waiting List. Based on OPTN data as of October 19, 2017. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/#">https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/#</a> (2017).</li>
<li>OPTN, O. P. aT. N. National Data, Transplants by Donor Type, U.S. Transplants Performed January 1, 1988 - December 31, 2016, For Organ = Liver. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/#">https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/#</a> (2017).</li>
<li>Nemes, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extended+criteria+donors+in+liver+transplantation+Part+I%3A+reviewing+the+impact+of+determining+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Extended criteria donors in liver transplantation Part I: reviewing the impact of determining factors.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 10 (7), 827-839 (2016).</li>
<li>Nemes, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extended-criteria+donors+in+liver+transplantation+Part+II%3A+reviewing+the+impact+of+extended-criteria+donors+on+the+complications+and+outcomes+of+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Extended-criteria donors in liver transplantation Part II: reviewing the impact of extended-criteria donors on the complications and outcomes of liver transplantation.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 10 (7), 841-859 (2016).</li>
<li>Pezzati, D., Ghinolfi, D., De Simone, P., Balzano, E., Filipponi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+to+optimize+the+use+of+marginal+donors+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Strategies to optimize the use of marginal donors in liver transplantation.</a> World J Hepatol. 7 (26), 2636-2647 (2015).</li>
<li>Marecki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+ex+situ+machine+perfusion+preservation%3A+A+review+of+the+methodology+and+results+of+large+animal+studies+and+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Liver ex situ machine perfusion preservation: A review of the methodology and results of large animal studies and clinical trials.</a> Liver Transpl. 23 (5), 679-695 (2017).</li>
<li>Barbas, A. S., Knechtle, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+Donor+Pool+With+Normothermic+Ex+Vivo+Liver+Perfusion%3A+The+Future+Is+Now%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Expanding the Donor Pool With Normothermic Ex Vivo Liver Perfusion: The Future Is Now.</a> Am J Transplant. 16 (11), 3075-3076 (2016).</li>
<li>Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> Am J Transplant. 13 (5), 1327-1335 (2013).</li>
<li>Westerkamp, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((End-ischemic+machine+perfusion+reduces+bile+duct+injury+in+donation+after+circulatory+death+rat+donor+livers+independent+of+the+machine+perfusion+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">End-ischemic machine perfusion reduces bile duct injury in donation after circulatory death rat donor livers independent of the machine perfusion temperature.</a> Liver Transpl. 21 (10), 1300-1311 (2015).</li>
<li>Selzner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normothermic+ex+vivo+liver+perfusion+using+steen+solution+as+perfusate+for+human+liver+transplantation%3A+First+North+American+results%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Normothermic ex vivo liver perfusion using steen solution as perfusate for human liver transplantation: First North American results.</a> Liver Transpl. 22 (11), 1501-1508 (2016).</li>
<li>Whitson, B. A., Black, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+assessment+and+repair+centers%3A+The+future+of+transplantation+is+near%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Organ assessment and repair centers: The future of transplantation is near.</a> World J Transplant. 4 (2), 40-42 (2014).</li>
<li>Tolboom, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subnormothermic+machine+perfusion+at+both+20%C2%B0C+and+30%C2%B0C+recovers+ischemic+rat+livers+for+successful+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Subnormothermic machine perfusion at both 20°C and 30°C recovers ischemic rat livers for successful transplantation.</a> J Surg Res. 175 (1), 149-156 (2012).</li>
<li>Nagrath, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+preconditioning+of+donor+organs%3A+defatting+fatty+livers+by+normothermic+perfusion+ex+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Metab+Eng%22%5BJournal%5D)">Metabolic preconditioning of donor organs: defatting fatty livers by normothermic perfusion ex vivo.</a> Metab Eng. 11 (4-5), 274-283 (2009).</li>
<li>Boehnert, M. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normothermic+acellular+ex+vivo+liver+perfusion+reduces+liver+and+bile+duct+injury+of+pig+livers+retrieved+after+cardiac+death%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Normothermic acellular ex vivo liver perfusion reduces liver and bile duct injury of pig livers retrieved after cardiac death.</a> Am J Transplant. 13 (6), 1441-1449 (2013).</li>
<li>Schön, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+after+organ+preservation+with+normothermic+extracorporeal+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation after organ preservation with normothermic extracorporeal perfusion.</a> Ann Surg. 233 (1), 114-123 (2001).</li>
<li>Reddy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-heart-beating+donor+porcine+livers%3A+the+adverse+effect+of+cooling%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Non-heart-beating donor porcine livers: the adverse effect of cooling.</a> Liver Transpl. 11 (1), 35-38 (2005).</li>
<li>Banan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+strategy+to+decrease+reperfusion+injuries+and+improve+function+of+cold-preserved+livers+using+normothermic+ex+vivo+liver+perfusion+machine%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Novel strategy to decrease reperfusion injuries and improve function of cold-preserved livers using normothermic ex vivo liver perfusion machine.</a> Liver Transpl. 22 (3), 333-343 (2016).</li>
<li>Held, P. <a target="_blank" href="https://www.biotek.com/assets/tech_resources/ROS%20White%20Paper.pdf">An Introduction to Reactive Oxygen Species: Measurement of ROS in Cells</a>. , BioTek Instruments, Inc. Vinooski, Vermont. 1-14 (2012).</li>
<li>Chen, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reperfusion+liver+injury-induced+superoxide+dismutase+and+catalase+expressions+and+the+protective+effects+of+N-acetyl+cysteine%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Reperfusion liver injury-induced superoxide dismutase and catalase expressions and the protective effects of N-acetyl cysteine.</a> Transplant Proc. 39 (4), 858-860 (2007).</li>
<li>Chen, B., Tang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+catalase+on+retinal+ischemia%2Freperfusion+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Protective effects of catalase on retinal ischemia/reperfusion injury in rats.</a> Exp Eye Res. 93 (5), 599-606 (2011).</li>
<li>He, Y. Y., Hsu, C. Y., Ezrin, A. M., Miller, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethylene+glycol-conjugated+superoxide+dismutase+in+focal+cerebral+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Polyethylene glycol-conjugated superoxide dismutase in focal cerebral ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol. 265 (1 Pt 2), H252-H256 (1993).</li>
<li>Işlekel, S., Işlekel, H., Güner, G., Ozdamar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+superoxide+dismutase%2C+glutathione+peroxidase+and+catalase+activities+in+experimental+cerebral+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Exp+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Alterations in superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase activities in experimental cerebral ischemia-reperfusion.</a> Res Exp Med (Berl). 199 (3), 167-176 (1999).</li>
<li>Li, G., Chen, Y., Saari, J. T., Kang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catalase-overexpressing+transgenic+mouse+heart+is+resistant+to+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Catalase-overexpressing transgenic mouse heart is resistant to ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol. 273 (3 Pt 2), H1090-H1095 (1997).</li>
<li>Nowak, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunotargeting+of+catalase+to+lung+endothelium+via+anti-angiotensin-converting+enzyme+antibodies+attenuates+ischemia-reperfusion+injury+of+the+lung+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Immunotargeting of catalase to lung endothelium via anti-angiotensin-converting enzyme antibodies attenuates ischemia-reperfusion injury of the lung in vivo.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 293 (1), L162-L169 (2007).</li>
<li>Beckman, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superoxide+dismutase+and+catalase+conjugated+to+polyethylene+glycol+increases+endothelial+enzyme+activity+and+oxidant+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Superoxide dismutase and catalase conjugated to polyethylene glycol increases endothelial enzyme activity and oxidant resistance.</a> J Biol Chem. 263 (14), 6884-6892 (1988).</li>
<li>Yabe, Y., Nishikawa, M., Tamada, A., Takakura, Y., Hashida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+and+improved+therapeutic+potential+of+catalase+by+chemical+modification%3A+combination+with+superoxide+dismutase+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery and improved therapeutic potential of catalase by chemical modification: combination with superoxide dismutase derivatives.</a> J Pharmacol Exp Ther. 289 (2), 1176-1184 (1999).</li>
<li>Yabe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+neutrophil-mediated+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury+by+superoxide+dismutase+and+catalase+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Prevention of neutrophil-mediated hepatic ischemia/reperfusion injury by superoxide dismutase and catalase derivatives.</a> J Pharmacol Exp Ther. 298 (3), 894-899 (2001).</li>
<li>Ushitora, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+hepatic+ischemia-reperfusion+injury+by+pre-administration+of+catalase-expressing+adenovirus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Prevention of hepatic ischemia-reperfusion injury by pre-administration of catalase-expressing adenovirus vectors.</a> J Control Release. 142 (3), 431-437 (2010).</li>
<li>Kakizaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effects+of+Short-Term+Subnormothermic+Perfusion+after+Cold+Preservation+on+Liver+Grafts+from+Donors+after+Cardiac+Death%3A+An+Ex+Vivo+Rat+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The Effects of Short-Term Subnormothermic Perfusion after Cold Preservation on Liver Grafts from Donors after Cardiac Death: An Ex Vivo Rat Model.</a> Transplantation. , (2018).</li>
<li>Kumar, R., Chung, W. Y., Dennison, A. R., Garcea, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+Vivo+Porcine+Organ+Perfusion+Models+as+a+Suitable+Platform+for+Translational+Transplant+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Ex Vivo Porcine Organ Perfusion Models as a Suitable Platform for Translational Transplant Research.</a> Artif Organs. , (2017).</li>
<li>Nativ, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+defatting%3A+an+alternative+approach+to+enable+steatotic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Liver defatting: an alternative approach to enable steatotic liver transplantation.</a> Am J Transplant. 12 (12), 3176-3183 (2012).</li>
<li>Yeung, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+adenoviral+vector+gene+delivery+results+in+decreased+vector-associated+inflammation+pre-+and+post-lung+transplantation+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Ex vivo adenoviral vector gene delivery results in decreased vector-associated inflammation pre- and post-lung transplantation in the pig.</a> Mol Ther. 20 (6), 1204-1211 (2012).</li>
<li>Goldaracena, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+Hepatitis+C+Virus+Resistance+After+Pig+Liver+Transplantation-A+Proof+of+Concept+of+Liver+Graft+Modification+Using+Warm+Ex+Vivo+Perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Inducing Hepatitis C Virus Resistance After Pig Liver Transplantation-A Proof of Concept of Liver Graft Modification Using Warm Ex Vivo Perfusion.</a> Am J Transplant. 17 (4), 970-978 (2017).</li>
<li>Van Raemdonck, D., Neyrinck, A., Rega, F., Devos, T., Pirenne, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Machine+perfusion+in+organ+transplantation%3A+a+tool+for+ex+vivo+graft+conditioning+with+mesenchymal+stem+cells%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Machine perfusion in organ transplantation: a tool for ex vivo graft conditioning with mesenchymal stem cells?</a> Curr Opin Organ Transplant. 18 (1), 24-33 (2013).</li>
<li>Pratschke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Results+of+the+TOP+Study%3A+Prospectively+Randomized+Multicenter+Trial+of+an+Ex+Vivo+Tacrolimus+Rinse+Before+Transplantation+in+EDC+Livers%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Direct%22%5BJournal%5D)">Results of the TOP Study: Prospectively Randomized Multicenter Trial of an Ex Vivo Tacrolimus Rinse Before Transplantation in EDC Livers.</a> Transplant Direct. 2 (6), e76(2016).</li>
<li>Pratschke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+TOP-Study+%28tacrolimus+organ+perfusion%29%3A+a+prospective+randomized+multicenter+trial+to+reduce+ischemia+reperfusion+injury+in+transplantation+of+marginal+liver+grafts+with+an+ex+vivo+tacrolimus+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Res%22%5BJournal%5D)">Protocol TOP-Study (tacrolimus organ perfusion): a prospective randomized multicenter trial to reduce ischemia reperfusion injury in transplantation of marginal liver grafts with an ex vivo tacrolimus perfusion.</a> Transplant Res. 2 (1), 3(2013).</li>
<li>Nativ, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+sensitivity+of+macrosteatotic+hepatocytes+to+hypoxia%2Freoxygenation+stress+is+reversed+by+a+novel+defatting+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Elevated sensitivity of macrosteatotic hepatocytes to hypoxia/reoxygenation stress is reversed by a novel defatting protocol.</a> Liver Transpl. 20 (8), 1000-1011 (2014).</li>
<li>Lonze, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+ex+vivo+delivery+of+short+hairpin+RNAs+for+control+of+hepatitis+C+viral+transcript+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">In vitro and ex vivo delivery of short hairpin RNAs for control of hepatitis C viral transcript expression.</a> Arch Surg. 147 (4), 384-387 (2012).</li>
</ol>

모든 저자 들은 아무 관련 공개 보고서.

이식에 사용할 수 있는 간 이식의 중요 한 부족은 그리고 응답에 기증자 기준 확장된1,2,3,,45되었습니다. 기증자 부족 결과로 NEVLP 평가 기관 기능6,7을 수정 하는 방법으로 도입 되었습니다. 우리는 NEVLP의 쥐 모델을 설계 했습니다. ...

14,578 환자 간 이식 대기자 명단에 있으며 약 7000 이식 당 년1,2수행 됩니다. 이 중요 한 기증자 부족에 대응, 간 기증자에 대 한 기준을 확장 했다; 이 종종 한계 장기 또는 확장된 기준 기증자 하며 기본 이식 부전 및 지연된 이식 함수3의 더 높은 속도와 표준 기준 이식 보다 이식 후 덜 잘 수행할 것으로 예상 된다 4,,56. 그 결과, NEVLP 평가 기관 기능6,7을 수정 하는 방법으로 도입 되었습니다. 우리 NEVLP의 쥐 모델을 설계 하 고이 모델을 사용 하는 그것의 중요 한 잠재적인 응용 프로그램-간 perfusate에 비 발한 분자 첨가제의 테스트 중 하나를 보여 줍니다.
NEVLP (쥐) murine 및 돼지 모델 뿐만 아니라 폐기 인간의 장기6,,89평가 하고있다. NEVLP의 첫 인체 실험의 결과 또한 최근 게시10있다. 저체온증이 기계 관류 명확 하 게 신장 보존을 위한 표준 되고있다, 관류는 간 기계에서 발생 하는 온도 여전히 논란. NEVLP는 저체온증에 비해 많은 제안된 이점 및 subnormothermic 관류. 이들은 감소 보전 부상, 정상 장기의 기능 생리 조건, 장기 성능을 평가 하는 능력 및 기관 수리, 개조, 및 수정7,11를 위한 플랫폼으로의 복원 12,13,14,15,,1617.
연구의 상당수 돼지 NEVLP 모델을 사용 하 여 완료 되었습니다. 때 고려 모델을 사용 하 여 삭제 인간 장기 또는 인간 임상 시험이이 모델은 비교적 비싼 되지 않습니다, 하지만 그들은 우리의 작은 동물 NEVLP 모델에 비해 매우 비쌉니다. 중요 한 구성 요소는 실험 당 비용은 perfusate 이다. 우리는 상대적으로 저렴 한 비용에 perfusate의 300 mL와 4 h 관류를 완료할 수 있습니다. 또한, 쥐를 포함 하 여 작은 동물의 비용 돼지의 비용에 비해 매우 낮습니다.
쥐에서 NEVLP의 다른 모델에 비해 여기 모델 구현에 상대적으로 간단한 이며 광범위 한 응용 프로그램 있다. 관류 회로 그림 1에서 볼 수 있습니다. perfusate perfusate 저수지 (1), 물 외피 컨테이너에서 시작 합니다. Perfusate 롤러 펌프 (2) 저수지에서 가져온 이며 windkessel (3) 그리고 oxygenator (4)에 밀어. oxygenator 최대 가스 교환을 제공 역류 가스 및 perfusate 흐름에 대 한 설정 됩니다. Perfusate 다음 수익금으로 난방 코일 (5) 내부 생리 온도에, 그것을 보장 하기 위해 관류 챔버는 그리고 거기 공기 방울의 관류를 방지 하기 위해 거품 트랩 (6) 사전 (7) 및 후 기관 (8) 수를 perfusate 수 있는 샘플 포트 샘플링. perfusate 다음 문맥 정 맥을 통해 간을 입력합니다. 문맥 정 맥 압력 모니터 데이터 수집 소프트웨어에 있는 값을 차트에 첨부 됩니다. perfusate IVC 정 맥을 통해 간 종료 그리고 압력 이퀄라이저 블록 (9)으로 흐른다. 마지막으로, perfusate는 롤러 펌프를 통해 다시 압력 블록에서 가져온 이며 저수지에 비운. 이 모델 포함 하는 문맥에 지속적인 관류 및 간 동맥 및 투 석 다른 모델에 사용 되는 별도 고 추가 회로 필요, 타악기 흐름 밖으로 나뭇잎 하지만 이전 하지 입증 되었습니다. 필요한9,13.
perfusate에 새로운 치료 분자의 추가 탐험, 우리 효소 카 탈 라 제를 선택 했다. 카 탈 라 제는 생 선생님 폐품 선생님18의 효과 완화 하는 셀 내부 방어 메커니즘의 일부입니다. 카 탈 라 제 식 간 국 소 빈 혈 reperfusion 상해19에서 증가 된다. Catalase의 실험 또한 눈, 뇌, 그리고 폐20,,2122,,2324에 국 소 빈 혈 reperfusion 감소 입증 되었습니다. Pegylation 내 피 세포25에 피 catalase 이해에 원조 하는 catalase를 대상으로 표시 되었습니다. 못-고양이 되어 관리 체계적으로 간 국 소 빈 혈 reperfusion 상해; 감소에 제한 된 효능 그러나, 우리는26,,2728결과 추가 말뚝-고양이 격리 된 장기 관류 회로 개선 이어질 것을 가정 했다. 여기, 우리가 우리의 기본 perfusate 말뚝-고양이 추가 및 그것의 능력을 간 보존 부상 완화.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Perfusate&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8% Albumin</td><td>CLS Behring, King of Prussia, PA</td><td>0053-7680-32</td><td></td></tr><tr><td>Williams Media</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>W1878</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Eli Lilly, Indianapolis, IL</td><td>0002-8215-91</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Fresnius Lab, Lake Zurich, IL</td><td>C504701</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>G3126</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>H0888</td><td></td></tr><tr><td>THAM</td><td>Hospira, Inc,</td><td>0409-1593-04</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylene Glycol - Catalase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9549 SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Personal Protective Equipment &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical Mask</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Protective Gown</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Gloves</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Liver Procurement&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley Rat</td><td>Harlan Sprague Dawley Inc.</td><td>250 -350 grams</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Microscope</td><td>Leica</td><td>M500-N w/ OHS</td><td></td></tr><tr><td>Charcoal Canisters</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-2001-8</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pressure-Lok Precision Analytical Syringe&amp;nbsp;</td><td>Valco Instruments Co, Inc.</td><td>SOMNO-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Electrosurgical Unit</td><td>Macan</td><td>MV-7A</td><td></td></tr><tr><td>Warming Pad</td><td>Braintree Scientific</td><td>HHP2</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Small Animal Anesthesia System</td><td>Kent Scientific</td><td>SS-MVG-Module</td><td></td></tr><tr><td>PhysioSuite</td><td>Kent Scientific</td><td>PS-MSTAT-RT</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane chamber</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0530LG</td><td></td></tr><tr><td>SurgiVet</td><td>Isotec</td><td>CDS 9000 Tabletop</td><td></td></tr><tr><td>Oxygen</td><td>Praxair</td><td>98015</td><td></td></tr><tr><td>Rib retractors</td><td>Kent Scientific</td><td>INS600240</td><td></td></tr><tr><td>GenieTouch</td><td>Kent Scientific</td><td>GenieTouch</td><td></td></tr><tr><td>Normal Saline</td><td>Baxter</td><td>NDC 0338-0048-04</td><td></td></tr><tr><td>4x4 Non-Woven Sponges</td><td>Criterion</td><td>104-2411</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Q-Tips</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>1009175</td><td></td></tr><tr><td>U-100 27 Gauge Insulin Syringe</td><td>Terumo</td><td>22-272328</td><td></td></tr><tr><td>5mL Syringe</td><td>BD</td><td>REF 309603</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Braided Silk Suture</td><td>Deknatel, Inc.</td><td>198737LP</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Braided Silk Suture</td><td>Teleflex Medical</td><td>REF 103-S</td><td></td></tr><tr><td>16 gauge Catheters</td><td>BBraun Introcan Safety</td><td>4252586-02</td><td></td></tr><tr><td>14 gauge Catheters</td><td>BBraun Introcan Safety</td><td>4251717-02</td><td></td></tr><tr><td>Bile Duct Cannular Tubing</td><td>Altec</td><td>01-96-1727&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Liver Perfusion Circuit Components &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water Bath Warmer</td><td>Lauda Ecoline Staredition</td><td>E103</td><td></td></tr><tr><td>Data Collection Software</td><td>ADInstruments&amp;nbsp;</td><td>Labchart 7</td><td></td></tr><tr><td>Liver Perfusion Circuit</td><td>Harvard Apparatus</td><td>73-2901</td><td></td></tr><tr><td>Membrane Oxygenator</td><td>Mediac SPA</td><td>M03069</td><td></td></tr><tr><td>Roller Pump</td><td>Ismatec</td><td>ISM827B</td><td></td></tr><tr><td>Gas (95% oxygen and 5% carbon dioxide)</td><td>Praxair</td><td>98015</td><td></td></tr><tr><td>Organ Chamber</td><td>Harvard Apparatus</td><td>ILP-2</td><td></td></tr><tr><td>1.8 mL Arcticle Cryogenic Tube</td><td>USA Scientific</td><td>1418-7410</td><td></td></tr><tr><td>Mucasol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z637181</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Microsurgical Instruments&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Small Scissors</td><td>Roboz</td><td>RS-5610</td><td></td></tr><tr><td>Large Scissors</td><td>S&amp;amp;T</td><td>SAA-15</td><td></td></tr><tr><td>Forceps - Large Angled</td><td>S&amp;amp;T</td><td>JFCL-7</td><td></td></tr><tr><td>Forceps - Small Angled</td><td>S&amp;amp;T</td><td>FRAS-15 RM-8</td><td></td></tr><tr><td>Clip Applier</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5440</td><td></td></tr><tr><td>Scissors - non micro</td><td>FST 14958-11</td><td>14958-11</td><td></td></tr><tr><td>Forceps - Straight Tip</td><td>S&amp;amp;T</td><td>FRS-15 RM8TC</td><td></td></tr><tr><td>Large Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-01</td><td></td></tr><tr><td>Small Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-01</td><td></td></tr><tr><td>Small Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-02</td><td></td></tr><tr><td>Small Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-03</td><td></td></tr><tr><td>Small Mosquito Clamps</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Post-Experiment Analysis &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alanine Aminotransferase (ALT) Activity Colorimetric/Fluorometric Assay Kit</td><td>BioVision</td><td>K752</td><td></td></tr><tr><td>Adenosine Triphosphate (ATP) Colorimetric/Fluorometric Assay Kit</td><td>BioVision</td><td>K354</td><td></td></tr><tr><td>Glutathione Assay Kit</td><td>Cayman Chemical</td><td>703002</td><td></td></tr><tr><td>Lipid Peroxidation (MDA) Assay Kit</td><td>Abcam</td><td>ab118970</td><td></td></tr><tr><td>Caspase-Glo 3/7 Assay Systems</td><td>Promega</td><td>G8090</td><td></td></tr><tr><td>POLARstar OMEGA Microplate Reader</td><td>BMG LABTECH</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

a small animal model of ex vivo normothermic liver perfusion

간 이식의 중요 한 부족, 이식에 사용할 수 있는 이며 응답에서 기증자 기준을 확대 했습니다. 그 결과, normothermic 비보 전 간 관류 (NEVLP)를 평가 하 고 장기의 기능을 수정 하는 방법으로 도입 되었습니다. NEVLP에는 저체온증에 비해 많은 이점이 있다 고 보존 부상, 정상 장기의 기능 생리 조건 평가 기관 성능, 그리고 오르간 수리에 대 한 플랫폼으로의 복원 감소 subnormothermic 관류 등 리 모델링, 그리고 수정. Murine 및 돼지 NEVLP 모델 설명 되었습니다. 우리는 NEVLP의 쥐 모델을 설명 하 고이 모델을 사용 하 여 중요 한 응용 프로그램 중 하나를 보여-치료 분자 간 perfusate에 추가 사용 하 여. 카 탈 라 제 생 반응성 산소 종 (선생님) 폐품 이며 눈, 뇌, 그리고 폐에 국 소 빈 혈 reperfusion 감소 입증 되었습니다. Pegylation은 endothelium에 catalase를 대상으로 표시 되었습니다. 여기, 우리는 기본 perfusate pegylated catalase (못-고양이) 추가 간 보존 상해를 완화 하는 기능을 시연 했다. 우리의 설치류 NEVLP 모델의 장점은 큰 동물 모델에 비해 비싼 아니에요입니다. 이 연구의 한계는 그것은 현재 간 이식 후 관류는 포함 하지 않습니다. 따라서, 확실 하 게 예측 후 장기 이식의 함수를 만들 수 없습니다. 그러나, 쥐 간 이식 모델은 잘 설립 하 고 확실히이 모델과 함께에서 사용 될 수 있습니다. 결론적으로, 우리는 저렴, 간단 하 고, 쉽게 복제 가능한 NEVLP 모델을 쥐를 사용 하 여 설명 했다. 이 모델의 응용 프로그램 테스트 소설 perfusates 및 perfusate 첨가제, 테스트 기관 평가 위한 소프트웨어 및 장기를 복구 하도록 설계 된 실험을 포함할 수 있습니다.

그룹 당 3 개의 쥐의 샘플 크기 사용 되었다. ALT는 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 및 관류의 240 분에서 측정 했다. 우리가 사용 하는 학생의 t-기본 perfusate 및 기본 perfusate 플러스 각 시간 지점에서 못 고양이 그룹 사이 결과 비교 하는 테스트. 기본 perfusate 및 기본 perfusate 플러스 말뚝-고양이 그룹을 비교, 거기에서는 훨씬 적은 (p < 0.05) 기본 perfusate 플러스 150, 180, 21...

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A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Ex Vivo Normothermic 간 관류의 작은 동물 모델

상당한 간 기증자 부족 이며 간 기증자에 대 한 기준을 확대 했습니다. Normothermic ex vivo 간 관류 (NEVLP)를 평가 하 고 장기의 기능을 수정 개발 되었습니다. 이 연구 NEVLP의 쥐 모델을 보여 줍니다 고 간 보존 부상 완화 pegylated catalase의 능력을 테스트 합니다.

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

13.3K 조회수.  Ohio State University Wexner Medical Center. 상당한 간 기증자 부족 이며 간 기증자에 대 한 기준을 확대 했습니다. Normothermic ex vivo 간 관류 (NEVLP)를 평가 하 고 장기의 기능을 수정 개발 되었습니다. 이 연구 NEVLP의 쥐 모델을 보여 줍니다 고 간 보존 부상 완화 pegylated catalase의 능력을 테스트 합니다.

비디오: A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an extended perfusion period is challenging. We have added the kidney to our previous ex vivo perfused liver experiment model to reproduce a more accurate physiological state for prolonged experiments without using live animals. Five intact livers and kidneys were retrieved post-mortem from sacrificed pigs on different days and perfused for a minimum of 6 hr. Hourly arterial blood gases were obtained to analyze pH, lactate, glucose and renal parameters. The primary endpoint was to investigate the effect of adding one kidney to the model on the acid base balance, glucose, and electrolyte levels. The result of this liver-kidney experiment was compared to the results of five previous liver only perfusion models. In summary, with the addition of one kidney to the ex vivo liver circuit, hyperglycemia and metabolic acidosis were improved. In addition this model reproduces the physiological and metabolic responses of the liver sufficiently accurately to obviate the need for the use of live animals. The ex vivo liver-kidney perfusion model can be used as an alternative method in organ specific studies. It provides a disconnection from numerous systemic influences and allows specific and accurate adjustments of arterial and venous pressures and flow.

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Study of the animal organ physiology can be achieved by performing an experimental ex vivo perfusion system. The addition of a porcine kidney, as a homeostatic organ to our previously developed ex vivo liver perfusion model can be a principal step to achieve a better physiological environment.

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

연구

의학

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

Subnormothermic의 기술<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 간 스토리지, 평가를위한 관류 및 한계 간 이식의 수리

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming increasingly common. Ex vivo liver perfusions allow for a comprehensive analysis of liver metabolism using nuclear magnetic resonance (NMR), in nutritional conditions that can be rigorously controlled. As in silico simulations remain a primarily theoretical means of assessing hormone actions and the effects of pharmaceutical intervention, the perfused liver remains one of the most valuable test beds for understanding hepatic metabolism. As these studies guide basic insights into hepatic physiology, results must be accurate and reproducible. The greatest factor in the reproducibility of ex vivo hepatic perfusion is the quality of surgery. Therefore, we have introduced an organized and streamlined method to perform ex vivo mouse liver perfusions in the context of in situ NMR experiments. We also describe a unique application and discuss common issues encountered in these studies. The overall purpose is to provide an uncomplicated guide to a technique we have refined over several years that we deem the golden standard for obtaining reproducible results in hepatic resections and perfusions in the context of in situ NMR experiments. The distance to the center of the field for the magnet as well as the inaccessibility of the tissue to intervention during the NMR experiment makes our methods novel.

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

The protocol describes a straightforward method of resectioning an intact mouse liver for metabolic studies through portal vein perfusion.

Ex Vivo 마우스의 포털 정맥을 통한 간 관류

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

생화학

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

고립의 방법<em&gt; 전의 VIVO</em쥐 모델에서&gt; 폐 관류 : 쥐 EVLP 프로그램 개발에서 교훈을

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing modified cannulas and techniques adapted from conventional commercial ex vivo perfusion equipment. The system was utilized to evaluate the preservation outcomes following 12 h of perfusion. C57BL/6J mice served as liver donors, and the livers were explanted by cannulating the portal vein (PV) and bile duct (BD), and subsequently flushing the organ with warm (37 &#176;C) heparinized saline. Then, the explanted livers were transferred to the perfusion chamber and subjected to normothermic oxygenated machine perfusion (NEVLP). Inlet and outlet perfusate samples were collected at 3 h intervals for perfusate analysis. Upon completion of the perfusion, liver samples were obtained for histological analysis, with morphological integrity assessed using modified Suzuki-Score through Hematoxylin-Eosin (HE) staining. The optimization experiments yielded the following findings: (1) mice weighing over 30 g were deemed more suitable for the experiment due to the larger size of their bile duct (BD). (2) a 2 Fr (outer diameter = 0.66 mm) polyurethane cannula was better suited for cannulating the portal vein (PV) when compared to a polypropylene cannula. This was attributed to the polyurethane material&#39;s enhanced grip, resulting in reduced catheter slippage during the transfer from the body to the organ chamber. (3) for cannulation of the bile duct (BD), a 1 Fr (outer diameter = 0.33 mm) polyurethane cannula was found to be more effective compared to the polypropylene UT - 03 (outer diameter = 0.30 mm) cannula. With this optimized protocol, mouse livers were successfully preserved for a duration of 12 h without significant impact on the histological structure. Hematoxylin-Eosin (HE) staining revealed a well-preserved morphological architecture of the liver, characterized by predominantly viable hepatocytes with clearly visible nuclei and mild dilation of hepatic sinusoids.

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

A normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) system was created for mouse livers. This system requires experience in microsurgery but allows for reproducible perfusion results. The ability to utilize mouse livers facilitates the investigation of molecular pathways to identify novel perfusate additives and enables the execution of experiments focused on organ repair.

마우스의 Normothermic Ex Vivo 간 기계 관류

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing ...

공학

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

기증자의 간을의 현지 외 정상 체온 기계 관류

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Large-Animal Model of Donation after Circulatory Death and Normothermic Regional Perfusion for Cardiac Assessment

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ donor pool. However, the DCD process is associated with the risk of cardiac tissue injury due to the inevitable period of warm ischemia. Normothermic regional perfusion (NRP) allows for an in situ organ assessment, allowing the procurement of hearts determined to be viable. Here, we describe a clinically relevant large-animal model of DCD followed by NRP. Circulatory death is established in anesthetized pigs by stopping mechanical ventilation. After a preset warm ischemia period, an extracorporeal membrane oxygenator (ECMO) is used for a NRP period lasting at least 30 min. During this reperfusion period, the model allows the collection of various myocardial biopsies and blood samples for initial cardiac evaluation. Once NRP is weaned, biochemical, hemodynamic, and echocardiographic assessments of cardiac function and metabolism can be performed before organ procurement. This protocol closely simulates the clinical scenario previously described for DCD and NRP in heart transplantation and has the potential to facilitate studies aimed at decreasing ischemia-reperfusion injury and enhance cardiac functional preservation and recovery.

The protocol describes a large-animal (porcine) model of donation after circulatory death, followed by thoracoabdominal normothermic regional perfusion that closely simulates the clinical scenario in heart transplantation, and has the potential to facilitate therapeutic studies and strategies.

순환기 사망 후 기증의 대형 동물 모델 및 심장 평가를 위한 정상 국소 관류

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ ...

Rat Model of Normothermic Ex-Situ Perfused Heterotopic Heart Transplantation

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the number of heart failure patients waiting for transplantation is still increasing. The normothermic ex situ preservation technique has been established as a comparable method to the conventional static cold storage technique. The main advantage of this technique is that donor hearts can be preserved for up to 12 h in a physiologic condition. Moreover, this technique allows resuscitation of the donor hearts after circulatory death and applies required pharmacologic interventions to improve donor function after implantation. Numerous animal models have been established to improve normothermic ex situ preservation techniques and eliminate preservation-related complications. Although large animal models are easy to handle compared to small animal models, it is costly and challenging. We present a rat model of normothermic ex situ donor heart preservation followed by heterotopic abdominal transplantation. This model is relatively cheap and can be accomplished by a single experimenter.

Here, we present an assessment protocol of a heterotopically implanted heart after normothermic ex situ preservation in the rat model.

Normothermic Ex-Situ 관류 이종 심장 이식의 쥐 모델

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the ...

<meta charset="utf8"></head><body>Porcine Ex Situ Isolated Liver Perfusion Model의 개발 및 검증

Porcine Normothermic Isolated Liver Perfusion

Porcine models of liver ex situ normothermic machine perfusion (NMP) are increasingly being used in transplant research. Contrary to rodents, porcine livers are anatomically and physiologically close to humans, with similar organ size and bile composition. NMP preserves the liver graft at near-to-physiological conditions by recirculating a warm, oxygenated, and nutrient-enriched red blood cell-based perfusate through the liver vasculature. NMP can be used to study ischemia-reperfusion injury, preserve a liver ex situ before transplantation, assess the liver's function prior to implantation, and provide a platform for organ repair and regeneration. Alternatively, NMP with a whole blood-based perfusate can be used to mimic transplantation. Nevertheless, this model is labor-intensive, technically challenging, and carries a high financial cost.
In this porcine NMP model, we use warm ischemic damaged livers (corresponding to donation after circulatory death). First, general anesthesia with mechanical ventilation is initiated, followed by the induction of warm ischemia by clamping the thoracic aorta for 60 min. Cannulas inserted in the abdominal aorta and portal vein allow flush-out of the liver with cold preservation solution. The flushed-out blood is washed with a cell saver to obtain concentrated red blood cells. Following hepatectomy, cannulas are inserted in the portal vein, hepatic artery, and infra-hepatic vena cava and connected to a closed perfusion circuit primed with a plasma expander and red blood cells. A hollow fiber oxygenator is included in the circuit and coupled to a heat exchanger to maintain a pO2 of 70-100 mmHg at 38 &#176;C. NMP is achieved by a continuous flow directly through the artery and via a venous reservoir through the portal vein. Flows, pressures, and blood gas values are continuously monitored. To evaluate the liver injury, perfusate and tissue are sampled at predefined time points; bile is collected via a cannula in the common bile duct.

<meta charset="utf8"></head><body>Porcine Normothermic 격리 간 관류

The porcine model of liver normothermic machine perfusion (NMP), described here, can be successfully used to study NMP as a preservation strategy, a tool for viability assessment, and a platform for organ repair. It holds a high translational value, however it is technically challenging and labor-intensive.

Porcine Normothermic 격리 간 관류

Porcine models of liver ex situ normothermic machine perfusion (NMP) are increasingly being used in transplant research. Contrary to rodents, porcine ...

Ex Vivo Normothermic 간 관류의 작은 동물 모델

요약

더 많은 비디오 탐색

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Subnormothermic의 기술

Ex Vivo 마우스의 포털 정맥을 통한 간 관류

고립의 방법

마우스의 Normothermic Ex Vivo 간 기계 관류

기증자의 간을의 현지 외 정상 체온 기계 관류

순환기 사망 후 기증의 대형 동물 모델 및 심장 평가를 위한 정상 국소 관류

Normothermic Ex-Situ 관류 이종 심장 이식의 쥐 모델

Porcine Normothermic 격리 간 관류

Porcine Normothermic 격리 간 관류