שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בפתופיזיולוגיה של טרשת עורקים מוקדמת בעכברים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא היעילות, המהירות שבה אלדוסטרון גורם להתפתחות של לוחות טרשת עורקים בצמיחה הבוגרת. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שקשה ללמוד כמה שלבים טכניים באמצעות הוראת טקסט בלבד.
הפגנת ההליך תהיה קתרינה מאמי, מדענית צוות מהמעבדה שלי. לובש כפפות כירורגיות, לחבר את צינור מילוי משאבת מיני מזרק מיליליטר אחד לטעון את הצינור עם 125 microliters של אלדוסטרון או פתרון הרכב. הכנס את צינור המילוי דרך החור בחלק העליון של משאבת המיני עד שהוא לא יכול להתקדם ולאט לאט למלא את המשאבה עם פתרון אלדוסטרון.
להפסיק למלא את המשאבה כאשר חרוז של נוזל עולה מתוך גוף המשאבה בזהירות להסיר את צינור המילוי. הכנס את ווסת הזרימה לגוף של משאבת המיני, דואג כי הרגולטור הוא זרע בחוזקה נגד גוף המשאבה וראש המשאבה המלאה במזימה המכילה תמיסת מלח סטרילית ב 37 מעלות צלזיוס, עד 24 שעות לפני ההשתלה. כדי להשתיל את המשאבות, השתמש בתער כדי להסיר את השיער מהאתר הכירורגי ולחטא את העור החשוף עם 70% אלכוהול isopropyl ספוג, חומר כרית לא ארוגים.
לאחר מכן, לעשות חתך 0.8 כדי סנטימטר אחד דרך העור, אבל לא את הרקמות הבסיסיות ולהשתמש מדפים כדי לפתוח את החתך. באמצעות trocar ביד השנייה, להפיץ את העור כדי ליצור כיס עבור המשאבה מן החתך לכיוון השכם ולהכניס את המשאבה לתוך החתך, עם הראש של הרגולטור מכוון לכיוון החלק הקדמי של העכבר, בעדינות דוחף את המשאבה לחלוטין לתוך הכיס, כך שיש מספיק עור כדי לסגור את הפצע ללא מתח או מתיחה. לאחר הכנסת המשאבה, תפרו את החתך בחוט ניתוח ולהשתמש במצלה נקייה כדי למרוח משחת יוד אקטואלית של 10%.
לאחר מכן לאפשר לעכבר להתאושש על שלב התחממות עם ניטור עד חקירה מלאה. בנקודת הקצה הניסיונית המתאימה, לבלבל את העכבר דרך החדר השמאלי באמצעות זלוף הכבידה עם 10 עד 15 מיליליטר של DPBS קר קרח, ואחריו 40 עד 50 מיליליטר של 10% של גיבוש חיץ ניטרלי. לאחר 10 עד 20 דקות, מניחים את העכבר תחת סטריאו-מיקרוסקופ ולהשתמש מלקחיים ומספריים כדי להסיר את רקמת שומן periaortic ו pericardial עודף.
החזק את הלב הקבוע במלקבעים וגזור בניצב לגישה לקשת בית ההיתוך, קרוב ככל האפשר ללב, מבלי לגרום נזק. לאחר שהלב הופרד מאולם האבות, השתמש באזמל כדי לחתוך רוחבי לאורך קו ישר, להצטרף לנקודות התחתונות של אטריום ימין ושמאל ולמלא את החלק העליון של הלב הפתוח עם תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית. מניחים את הרקמה המותקפת בתבנית פלסטיק בצורת קריו עם ציר העורקים המוצב בניצב לבסיס התבנית המלבנית ומכסים את הרקמה ב- OCT טרי.
תאורה אחורית את התבנית כדי להבטיח כי הרקמה מכוונת כראוי, ולאחר מכן בזהירות למקם את התבנית על צלחת מתכת על קרח יבש, עוטף את התבנית כולה עם רדיד כסף עבור אחסון מינוס 80 מעלות צלזיוס כאשר OCT הופך לבן. כאשר ההקפאה מגיעה למינוס 20 מעלות צלזיוס, הר את בלוק הלב הקפוא על מחזיק הדגימה כאשר חדר החדר פונה כלפי חוץ והכנס את מחזיק הדגימה לראש הכיוון של הדגימה. התאימו את הכיוון של מחזיק הדגימה כדי לחתוך את הבלוק עם שורש האאורטיק הניצב ללהב וחותכים את הבלוק עד להגעת שורש האאורטיק.
לאסוף קטעים טוריים על שקופיות זכוכית, ניטור פרופיל שורש אבי העורקים האנטומי, עד כל שלושת שסתומי אבי העורקים מופיעים. ואז לאסוף שישה עד שמונה, 10 חלקים עבים מיקרומטר או עד אחד משלושת השסתומים נעלם או כבר לא שלם. עבור כתמי שומן O ניטרליים בצבע אדום שמן, תקן את החלקים ב-70 מיליליטר של 37% פורמלדהיד למשך חמש דקות, ולאחר מכן שטיפה יסודית במי ברז.
לאחר שתיים עד שלוש דקות, למחוק את מי גישה ולהכתים את החלקים ב 70 מיליליטר של 0.3% שמן אדום O במשך 10 דקות. בסוף הדגירה, לשטוף את המגלשות במי ברז במשך 10 דקות ולהכתים את התאים במשך דקה אחת ב 70 מיליליטר של hematoxylin של מאייר, ואחריו לשטוף מים דקה אחת ברקת דקה אחת ב 70 מיליליטר של 0.5% ליתיום קרבונט. לאחר מכן לשטוף את התאים במים במשך דקה אחת אחרונה ולהרים את החלקים עם מדיום הרכבה מים להדמיה על ידי מיקרוסקופיה אור.
לאחר ארבעה שבועות של טיפול, עכברי נוקאאוט אפוליפופרוטאין-E הציגו עלייה משמעותית בתומרת השומנים, בהשוואה לבעלי חיים מסוג בקרה-בר. יתר על כן, טיפול אלדוסטרון מגביר את התוכן המקרופאג בבעלי חיים נוקאאוט כפי שמעידים על ידי מכתים mack-3 ומצביע על רובד טרשת עורקים מודלק יותר בבעלי חיים אלה בהשוואה לעכברים מטופלים ברכב. עם זאת, טיפול אלדוסטרון אינו משנה את תוכן הקולגן של לוחות טרשת עורקים.
בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי שיטה זו מאומתת רק עבור עכברים אפוליפופרוטאין אשר נוטים באופן טבעי לפתח טרשת עורקים כאשר מוזן צבע טרשת עורקים. לכן, זה לא יכול להיות מיושם על מודלים שונים של בעלי חיים. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו אינפרא-מכתים כדי לאפיין טרשת עורקים באזורים אחרים של עורקים ולכומת את סך הנטל טרשת עורקים.
לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום טרשת עורקים לחקור מנגנון מוקדם של טרשת עורקים, כגון דלקת וחוסר מתפקד אנדותל. אל תשכח כי עבודה עם תרכובות נדיפות כגון isophane ופורמלין יכול להיות מסוכן מאוד, כי אמצעי זהירות, כגון לבישת מסכת פנים מעבדת בטיחות תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.
