מחלות לב וכלי דם היא הגורם העיקרי למוות ברחבי העולם. מודלים עכבר הם כלים שימושיים לחקר מחלה זו ואת הפרוטוקול שלנו ניתן להשתמש כדי לכמת טרשת עורקים בעכברים. באמצעות פרוטוקול זה, גודל הנגע ניתן למדוד בשלושה מיקומי כלי דם.
שורש העורק, קשת העורק העורקי ועורק הברכיוצפלי. כימות טרשת עורקים בעכברים יכול להיות משימה מייגעת. סיפקנו צעדים מפורטים שאנו מקווים שיכולים להאיץ את התהליך.
חלק מצעדים אלה קשה לתאר בכתב. אנו מקווים כי וידאו זה יעזור לך בהשגת ניתוח גודל נגע טרשת יותרת התריס חזק. לאחר קצירת לב העכבר על פי פרוטוקולים סטנדרטיים, מניחים את הלב על מיטת פקק, צד הגחוני מתחת למיקרוסקופ ניתוח ולהשתמש במחט כדי לתקן את הלב לתערם דרך הבייפקס.
מחזיקים את בסיס הלב במטלפים אנטומיים, משתמשים באזמל המוחזק בזווית של 20 מעלות במישור הסגיטלי, וב-20 מעלות במישור ההפוך, כדי לחתוך את שני שליש מהלב. להטמיע את שורש האאורטיק ואת הבסיס של הלב תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית, או OCT, בעדינות לסחוט את הלב עם המלקחיים כדי למלא את שורש האאורטיק עם תרכובת ולהסיר את כל בועות האוויר. מעבירים את הדגימה לתחתית קריומאולד מלא OCT עם שורש האורטי בניצב אל פני השטח התחתונים ולהקפיא את המתחם על קרח יבש.
לאחר מכן לאחסן את דגימת הרקמה בשקית מקפיא במינוס 80 מעלות צלזיוס עד קריוסקציה. כדי להכין מיטת הצמדה לניתוח פנים en, קפל קטע של סרט שעווה פרפין שמונה פעמים כדי להפוך משטח שטוח 25 על 25 מ"מ לעטוף סרט בידוד חשמלי שחור סביב הסרט כדי להפוך רקע כהה עבור aorta. מקם תווית בצד האחורי של מיטת ההצמידים ולהשתמש בעיפרון הפניה כדי להקליט את מספר הזיהוי של העכבר.
מעבירים את קשת העורקים למיטת ההצמיד ומוסיפים טיפה של PBS לרקמה. באמצעות מיקרוסקופ סטריאו, לנקות את העורקים מן רקמת השומן periadventitial הנותרים ולהשתמש מספריים Vannas ו מדפים Dumont לקלף בעדינות את כל רקמת השומן שמסביב מבלי לתפעל או לפגוע בעצם העורקים. לאחר מכן, הציגו את המספריים של ואנה לתוך לומן העורק כדי לחשוף את המשטח האטימלי.
התחילו לחתוך את העקמומיות החיצונית של הקשת העולה בכיוון הדיסטלי, ממשיכים לחתוך את הענפים, כולל העורק הברכיוצפלי וחוסכים את החלק הגבי של אזור בית החזה היורד. כדי להציג את המשטח האטימלי, חותכים את העקמומיות הפחותה ומקפלים את העורקים. באמצעות מחזיק מחט Micro Castroviejo, לאבטח את הקשת הפתוחה למיטת ההצמיד עם הקצה הקהה של סיכות חרקים minuten מבלי למתוח את הדגימה, בעדינות לכופף את הסיכות מן הדגימה כמו הרקמה מוחזקת במקום.
לאחר מכן אחסן את הקשת המוצמדת עם הפנים כלפי מטה בצלחת פטרי של PBS בארבע מעלות צלזיוס. עבור סודאן הרביעי הכתמת, לשטוף את הדגימה במשך חמש דקות בצלחת פטרי של 70% אתנול עם הקשת פונה כלפי מטה, לפני העברת הדגימה לצלחת של סודן הרביעי עובד פתרון במשך שבע דקות. בסוף הדגירה, שטפו את הדגימה בשתי שטיפות של שלוש דקות באתנול של 80% כדי להכתים את המשטח האטימלי הרגיל, ואחריו שטיפה סופית ב- PBS לפני החזרת הרקמה לצלחת פטרי המקורית שלה.
לאחר מכן לרכוש מיקרוגרפים תחת מיקרוסקופ סטריאו מחובר למצלמה דיגיטלית בהגדלה 10X, קבלת תמונות של הקשת מוצמד שקוע PBS, באמצעות משקולות מתכת קטנות להחזיק את מיטת הצמדה לתחתית צלחת פטרי. כדי להשיג קריוסקופים של שורש האאורטיק המוטבע, הגדר את טמפרטורת ההקפאה למינוס 20 מעלות צלזיוס ואת עובי החלק ל -10 מיקרומטר. הר את בלוק OCT המכיל את שורש האב העורקים על מחזיק הדגימה עם רקמת החדר פונה כלפי חוץ.
אבטח את המיקום עם עוד כמה OCT במידת הצורך. שורש האאורטיק צריך להיות ממוקם כעת בניצב ללהב הסכין. לאסוף את קטעי הבקרה הראשוניים המכילים רקמת שריר הלב על שקופיות מיקרוסקופ רגיל, בדיקת ההתקדמות דרך הרקמה כל 200 מיקרומטר תחת מיקרוסקופ אור.
כאשר מופיעה סף האאורטיק הראשון, הטה את הדגימה לכיוון סף הנקודה אפס כדי ליישר את מישור המקטע עם שני ההקשה האחרים וספיר כל קטע מיקרומטר שנחתך מנקודה אפס ואילך. התחילו לאסוף מקטעים לניתוח מ-90 מיקרומטר ואילך בהתאם לשקופית המתוכננת, עד שהושגו 800 מיקרומטר מנקודת האפס. חישוב שבר הנגע של שטח כלי השיט הכולל של שורש בית הדם הופך את הנתונים לפחות רגישים להבדלי זווית אפשריים במהלך ההקטעה.
בנוסף, זה יכול להיות המחשה כדי לחשב את האזור מתחת לעקומה או את גודל ההנעה atheroto לכל עכבר ולהציג את הנתונים בעלילת נקודה כדי להמחיש עוד יותר וריאציות בודדות בתוך קבוצות. הצטברות שומנים נגע ניתן לכמת על ידי צבע סף שמן אדום O אזורים חיוביים של אזור ההיתוך הכולל. העורקים הכליליים מימין ומשמאל בדרך כלל לסטות מן העורקים סביב 250 מיקרומטר מן סינוס העורקים אשר לעתים קרובות עולה בקנה אחד עם גדלי הנגע הבולטים ביותר.
הסרת הרקע הכהה בתמונות מייצגות של קשתות אאורטיק הפנים en יכול לשפר את התצוגה החזותית. גודל ההיתוך מופץ בדרך כלל בקבוצות, ומאפשר ניתוח סטטיסטי באמצעות מבחן t של סטודנט בין קבוצות. אנו ממליצים להתאמן עם חומר בדיקה כלשהו עד שתשיג כישורים מספיקים לעיבוד הדגימות הניסיוניות שלך.
אם גודל הנגע שונה בין קבוצות, אתה צריך לקבוע את המנגנון, כמו ניתוח הרכב נגע הוא בדרך כלל הצעד הבא להמשיך.
