נשאי תרופות פולימר Cationic יש את היתרונות של יציבות טובה, אימונוגניות נמוכה, הכנה קלה ושינוי. כאן, אנו מציעים שיטה מהירה ופשוטה לסינתזה שלה. שיטת פולמריזציה העברת שרשרת פיצול חיבור הפיך היא שיטה החלה להניב פולימרים בלוק עם משקל מולקולרי מבוקר ומבנה ונושא קבוצות פונקציונליות.
נושאות תרופות אלה יכולות לשאת בו זמנית תרופות שונות כדי להשיג את הטיפול בשיתוף פעולה של סרטן, דלקת, ומחלות אחרות. פולמריזציה IFT היא שיטה קלאסית, ופרוטוקול זה נותן דוגמה של היישום שלה בריפוי גנטי. המפתח להצלחה לסינתזה של פולימר זה הוא לשלוט במדויק בטמפרטורת התגובה.
מומלץ יותר להשתמש באמבט שמן מאשר באמבט מים. כדי להתחיל בהליך זה, יש להשיג בקבוקון עגול עם פקק גומי ומערבב מגנטי שישמש כבקבוק הפולימריזציה. ממיסים 1.87 גרם של ביס-הידרוקסי HEMA במיליליטר אחד של מים מזוקקים בבקבוק הפולימריזציה.
בסקלר חמישה מיליליטר, להמיס 0.03 גרם של CTP ו 0.02 גרם של ACVA ב 0.5 מיליליטר של 1, 4-דיוקסן. מוסיפים את התערובת לבקבוק הפולימריזציה. לאחר מכן, השתמש במלכודת עיבוי כדי להקפיא את הפתרון בבקבוק הפולימריזציה.
לתקן את הבקבוק לתמיכה בברזל, ולהשתמש צינור מעד עם מחט כדי לשאוב ולהזריק חנקן לתוך תערובת התגובה. לאחר מכן, לאטום את בקבוק הפולימריזציה, ולהפשיר את הפתרון בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות. חזור על מחזור ההפשרה של משאבת ההקפאה שלוש פעמים.
לאחר מכן, מניחים את הבקבוק לתוך אמבט שמן ב 70 מעלות צלזיוס ולתת את הפתרון להגיב במשך 24 שעות תחת אווירת החנקן. למחרת, מצננים את בקבוק הפולימריזציה באפס מעלות צלזיוס ופתיחת פקק הגומי כדי לסיים את תגובת הפולימריזציה. לאחר מכן, precool אצטון במקרר ב שלילי 20 מעלות צלזיוס במשך שעתיים, ומערבבים אותו עם פתרון התגובה בבקבוק פולמריזציה ביחס של 50 לאחד.
צנטריפוגה תערובת זו ב 8, 200 פעמים גרם במשך 10 דקות כדי להסיר את האצטון ולאסוף את המשקע. כדי לטהר את פולי ביס-הידרוקסי HEMA מסונתז, להמיס את המשקע שנאסף בשני מיליליטר של מים טהורים. לאחר מכן, מערבבים אותו עם 100 מיליליטר של אצטון צנום מראש ביחס של 1 עד 50.
צנטריפוגה הפתרון ב 8, 200 פעמים g במשך 10 דקות כדי לאסוף את המשקע. חזור על תהליך טיהור זה של המסה, ערבוב, צנטריפוגה של המשקע שלוש פעמים. ראשית, להמיס 0.96 גרם של APMA ו 0.93 גרם של HEMA פולי-הידרוקסי מטוהרים בחמישה מיליליטר של מים מזוקקים בבקבוק 10 מיליליטר.
ממיסים 0.01 גרם של ACVA ב 0.5 מיליליטר של 1, 4-דיוקסן, ומוסיפים את זה APMA ופולי ביס הידרוקסי HEMA פתרון. מעבירים את התערובת לבקבוק פולימריזציה, ומאווררים עם חנקן יבש למשך שעה. לאחר מכן, לשים את בקבוק הפולימריזציה לתוך אמבט שמן ב 70 מעלות צלזיוס, ולתת לו להגיב במשך 24 שעות תחת אווירת החנקן.
למחרת, מצננים את בקבוק הפולימריזציה באפס מעלות צלזיוס ופתיחת פקק הגומי כדי לסיים את פתרון תהליך הפולימריזציה. כדי להתחיל, זרע MCF-7 תאים לתוך בארות של צלחת שש באר בצפיפות של 20, 000 תאים לתוך באר. תרבו את התאים באינקובטור לח ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו-חמצני במשך 12 שעות.
לאחר מכן, החלף את מדיום התרבות במדיום התרבותי הטרי המכיל פולימר קטורי ופוליפלקס פוליפלקס pDNA ביחס שונה של יחסי חנקן לזרחן. תרבות התאים במשך שש שעות, ולאחר מכן להחליף את המדיום עם שני מיליליטר של טרי RPMI 1640 בינוני. המשיכו לטפח במשך 48 שעות.
לאחר מכן, לאסוף את התאים, ולהשתמש ציטומטר זרימה כדי לזהות את הפלואורסצנטיות הירוקה. במחקר זה, קופולימרים בלוק תואם-פונקציונלי מתונין מוכנים באמצעות שיטת העברת שרשרת פיצול תוספת הפיך, ואת היכולת המורכבת DNA פלסמיד של mBG המתקבל ויעילות transfection שלהם נחקר. גודל החלקיק הממוצע ופוטנציאל הזטה של פוליפלקסים mBG/pDNA הם 124 ננומטר ועוד 15.7 מילי-וולט, בהתאמה, ביחס N-to-P של 16.
פיגור אלקטרופורטי מגלה כי pDNA עם יחס N-ל-P של אפס יכול לנוע ללא איפוק בג'ל אגרוז והוא נצפה כמו פס בתמונה ג'ל. כאשר pDNA מורכב עם mBG, התנועה של pDNA מפגרת, ולאחר מכן, הבהירות של הלהקה מצטמצמת. זה מראה כי mBG יכול לחלוטין מורכב pDNA כאשר N כדי P הוא גבוה יותר מארבעה.
הציטוקסיות של הפוליפלקסים mBG/pDNA נמדדת לאחר מכן באמצעות הבדיקה הסטנדרטית של MTT תוצאות אלה מראות כי לפוליפלקסים mBG/pDNA יש ציטוקסיות מאשר לפוליפלקסים PEI/pDNA ביחסי N-ל-P של ארבעה, שמונה, 16 ו-32. כפי שניתן לראות גם, הציטוקקסיות של הפוליפלקסים mBG/pDNA עולה עם יחס N-ל-P מוגבר. זה ציטוטוקסיות מוגברת היא תוצאה של רכיב GPMA טעון חיובית.
יחס ה-N ל-P המשמש בניסוי ההמרה pDNA נבחר בהתאם לתוצאות הציטוקסיקיות. יכולות ההשתנות של mBG1, mBG2 ו- mBG3 מושווות על ידי מדידת עוצמת הפלואורסצנטיות של GFP, והתוצאות הראו כי mBG3 הוא נושא הגנים האופטימלי. חשוב למצות את האוויר מהבקבוקון העגול התחתון ולשמור על טמפרטורת התגובה.
נושאות התרופות הפולימריות המתקבלות יכולות להיות מיושמות על משלוח שותף של תרופות כימותרפיות ותרופות גנים לטיפול סינרגיסטי בסרטן עמיד לתרופות. המנגנון המולקולרי של שילוב של תרופות גנים ותרופות כימותרפיות ניתן לחקור עוד יותר לטיפול בגידולים עמידים לתרופות. אצטון מדורג כנמוך רעילות לרעילות החריפה שלה.
יש להימנע ממפתחות, שאיפה או מגע עם העיניים או העור. הימנע מהסיכון של רותח במהלך הליך החימום.
