Katyonik polimer ilaç taşıyıcıları iyi stabilite, düşük immünojenite ve kolay hazırlık ve modifikasyon avantajlarına sahiptir. Burada, sentezi için hızlı ve basit bir yöntem sunuyoruz. Geri dönüşümlü ek parçalama zinciri transfer polimerizasyon yöntemi kontrollü moleküler ağırlık ve yapı ve fonksiyonel gruplar taşıyan blok polimerler verim için geçerli bir yöntemdir.
Bu ilaç taşıyıcıları aynı anda kanser, inflamasyon ve diğer hastalıkların işbirliği tedavi elde etmek için farklı ilaçlar taşıyabilir. IFT polimerizasyonu klasik bir yöntemdir ve bu protokol gen terapisinde uygulanmasına bir örnek vermektedir. Bu polimerin sentezinde başarının anahtarı reaksiyon sıcaklığını tam olarak kontrol etmektir.
Bir su banyosu daha bir yağ banyosu kullanmak için daha tavsiye edilir. Bu prosedüre başlamak için, polimerizasyon şişesi olarak kullanılmak üzere bir kauçuk durdurucu ve manyetik karıştırıcı ile yuvarlak alt şişe elde edin. Polimerizasyon şişesinde bir mililitre distile suda 1,87 gram bis-hidroksi HEMA çözün.
Beş mililitrelik bir kabın içinde, 0.03 gram CTP ve 0.02 gram ACVA'yı 0,5 mililitre 1, 4-dioksan olarak çözün. Polimerizasyon şişesine bu karışımı ekleyin. Daha sonra, polimerizasyon şişesinde çözelti dondurmak için bir yoğuşma tuzağı kullanın.
Şişeyi demir desteğine sabitleyin ve vakumlamak ve reaksiyon karışımına azot enjekte etmek için iğneyle tökezleyen bir kanal kullanın. Daha sonra polimerizasyon şişesini kapatın ve çözeltiyi oda sıcaklığında 30 dakika eritin. Bu donma pompası çözülme döngüsünü üç kez tekrarlayın.
Bundan sonra, 70 santigrat derece bir yağ banyosu içine şişe yerleştirin ve çözelti azot atmosferi altında 24 saat boyunca tepki sağlar. Ertesi gün, polimerizasyon şişesini sıfır santigrat derecede soğutun ve polimerizasyon reaksiyonunu sonlandırmak için kauçuk durdurucuyu açın. Daha sonra, iki saat boyunca negatif 20 santigrat derecede bir buzdolabında precool aseton, ve 50'ye bir oranında polimerizasyon şişesinde reaksiyon çözeltisi ile karıştırın.
Santrifüj bu karışımı 8, 200 kez g 10 dakika asetonu kaldırmak ve çökelti toplamak için. Sentezlenen poli bis-hidroksi HEMA'yı arındırmak için toplanan çökeltiyi iki mililitre saf suda çözün. Daha sonra, 1-50 oranında önceden soğutulmuş aseton 100 mililitre ile karıştırın.
Çökelti toplamak için 10 dakika boyunca 8, 200 kez g çözeltisantrik. Çökeltme işlemini üç kez eritme, karıştırma ve santrifüj işlemini tekrarlayın. İlk olarak, 10 mililitrelik bir kabın içinde beş mililitre distile suda 0,96 gram APMA ve 0,93 gram saflaştırılmış poli bis-hidroksi HEMA'yı çözün.
0,01 gram ACVA'yı 0,5 mililitre 1, 4-dioksan olarak çözün ve bunu APMA ve poli bis-hidroksi HEMA çözeltisine ekleyin. Bu karışımı bir polimerizasyon şişesine aktarın ve kuru nitrojenle bir saat havalandırın. Sonra polimerizasyon şişesini 70 santigrat derecede bir yağ banyosuna koyun ve azot atmosferinin altında 24 saat boyunca tepki göstermesine izin verin.
Ertesi gün, polimerizasyon şişesini sıfır santigrat derecede soğutun ve polimerizasyon prosesi çözümemesini sonlandırmak için kauçuk durdurucuyu açın. Başlamak için, tohum MCF-7 hücreleri iyi başına 20, 000 hücre yoğunluğunda altı iyi plaka kuyularına. 37 derecede nemlendirilmiş bir kuluçka makinesindeki hücreleri 12 saat boyunca %5 karbondioksitle kültüre sittirin.
Bundan sonra kültür ortamını, azot-fosfor oranlarının farklı oranda katyonik polimer ve pDNA polipleksler içeren taze kültür ortamı ile değiştirin. Kültür hücreleri altı saat, ve sonra taze RPMI 1640 orta iki mililitre ile orta değiştirin. 48 saat boyunca kültür emzme devam edin.
Sonra, hücreleri toplamak ve yeşil floresan algılamak için bir akış sitometre kullanın. Bu çalışmada metiyonin fonksiyonelleştirilmiş biyouyumlu blok kopolimerler geri dönüşümlü ek parçalama zinciri transferi yöntemi ile hazırlanır ve elde edilen mBG'nin plazmid DNA karmaşıklaştırma yeteneği ve transfeksiyon etkinliği araştırılmıştır. MBG/pDNA polikseksilerinin ortalama partikül büyüklüğü ve zeta potansiyeli 16 N-p oranında sırasıyla 124 nanometre ve artı 15.7 milivoltdur.
Elektroforetik gerilik, N-p oranı sıfır olan pDNA'nın agarose jelde dizginleme olmadan hareket edebildiği ve jel görüntüleyicide bir şerit olarak gözlendiğini ortaya koymaktadır. PDNA mBG ile karmaşıklandığında, pDNA hareketi gerizekalı ve daha sonra bandın parlaklığı azalır. Bu, N'den P'ye dörtten yüksek olduğunda mBG'nin pDNA'yı tamamen karmaşıklatadığını gösterir.
MBG/pDNA polikseksilerinin sitotoksisitesi standart MTT testi kullanılarak ölçülür Bu sonuçlar mBG/pDNA polikseslerinin dört, sekiz, 16 ve 32'lik N--P oranlarında PEI/pDNA polikseksilerden daha sitotoksite olduğunu göstermektedir. Görüldüğü gibi mBG/pDNA polikseksilerin sitotoksisitesi artmış N-p oranı ile artar. Bu artmış sitotoksisite pozitif yüklü GPMA bileşeninin bir sonucudur.
PDNA transfeksiyon deneyinde kullanılan N-P oranı sitotoksisite sonuçlarına göre seçilir. MBG1, mBG2 ve mBG3 transfeksiyon yetenekleri GFP floresan yoğunluğu ölçülerek karşılaştırılır ve sonuçlar mBG3'ün optimal gen taşıyıcısı olduğunu göstermiştir. Silt yuvarlak alt şişeden havayı tüketmek ve reaksiyon sıcaklığını korumak önemlidir.
Elde edilen polimer ilaç taşıyıcıları sinerjik ilaç dirençli kanser tedavisinde kemoterapi ilaçları ve gen ilaçların ın ortak teslim uygulanabilir. Gen ilaçları ve kemoterapötik ilaçların kombinasyonunun moleküler mekanizması ilaca dirençli tümörlerin tedavisinde daha fazla araştırılabilir. Aseton akut toksisitesi için düşük toksik olarak derecelendirilmiştir.
Anahtarlar, teneffüs veya göz veya deri ile temas kaçınılmalıdır. Isıtma işlemi sırasında haşlanma riskine karşı kaçının.
