ניתוח דיגיטלי של מעטפת חיסונית של חלבון ZW10 אינטראקציה רקמות ריאות האדם

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בפתולוגית ואת האימונוהיסטוכימיה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי מהר מספיק וזה מייצר מדיה דיגיטלית באיכות גבוהה. התחילו בתיקון דגימת רקמת קונג ב-3 על 3 ס"מ ב-4% פרפורמלדהיד למשך 24 שעות בטמפרטורת החדר.

למחרת, לייבש את הרקמה טבילות אתנול עולה בטמפרטורת החדר, ואחריו שלושה טבילות ב 100% קסילן במשך 20 דקות לכל טיפול. לאחר טבילת הקסילן האחרונה, מניחים את הרקמה בפרפין צלזיוס של 63 מעלות למשך 30 דקות, ולאחר מכן טבילה שנייה של 45 דקות בפרפין טרי של 63 מעלות צלזיוס, ואז משנים את הפרפין פעם נוספת עבור דגירה של שעה אחת אחרונה. כאשר הפרפין התקרר, השתמש במיקרוטום סיבובי כדי לרכוש חמישה חלקים בעובי מיקרומטר של דגימת הרקמה המוטמעת בפרפין, ולוכד את החלקים על 20 שקופיות מצופות מיקרוגרם למיליליטר.

עבור dewaxing, למקם את המגלשות בתנור 65 מעלות צלזיוס במשך שעתיים, ואחריו טבילה ב dimethylbenzene במשך 15 דקות השרייה 100% קסילן במשך 15 דקות, ולאחר מכן rehydrating את המגלשות בסדרה טבילה אתנול יורד. לתיקון אנטיגן, מניחים את השקופיות בתיבה לתיקון אנטיגן ומוסיפים 300 מיליליטר של נוזל תיקון חומצת לימון לקופסה. מחממים את התיבה במיקרוגל בה הספק גבוה במשך שתי דקות, ואחריו חימום בה הספק נמוך כדי לקיים רותחים במשך שש דקות.

כאשר השקופיות התקררו לטמפרטורת החדר, לשטוף את דגימות הרקמה עם שלוש חמש דקות 0.01 PBS טוחן שוטף בשייקר סיבובי בטמפרטורת החדר. כדי לחסל את peroxidase אנדוגני, דגירה את המגלשות עם 3% מי חמצן במים מזוקקים כפול במשך 30 דקות בתיבה רטובה בטמפרטורת החדר. בסוף הדגירה, לשטוף את השקופיות כפי שהוכח ולחבר כל כריכה לא ספציפית על כל קטע עם 100 microliters של 10% סרום עזים במשך 39 דקות ב 37 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן, סמן את הרקמות עם 100 מיקרוליטרים של נוגדן אנטי ZWINT לכל שקופית בארבע מעלות צלזיוס בן לילה, ואחריו שלוש שטיפות ב- PBS טוחן 0.01. לאחר הכביסה האחרונה, הדגירה את המגלשות עם נוגדן משני מתאים במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, ואחריו שלוש 0.01 שטיפות PBS טוחן. לאחר הכביסה האחרונה, מוסיפים את המגלשות ל-300 מיקרוליטרים של DAB טרי למשך 10 דקות, ולאחר מכן שטיפה של 10 שניות עם מי ברז בטמפרטורת החדר.

דלפקים מכתימים את הרקמות בתתווית הכתמת המטוקסילין במשך שתי דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן שוטפים במי ברז במשך 15 דקות, ואז מייבשים שוב את הרקמה בטבילות אתנול עולות, ואחריהן שני טבילות של 15 דקות בקסילן בטמפרטורת החדר. לאחר טבילת האתנול האחרונה של 100%, הר את החלקים עם 15 מיקרוליטרים של 5% קסילן בתסנת חניכיים נייטרלית וכסה כל דגימת רקמה בזכוכית כיסוי. לסריקה אוטומטית של כל השקופיות של המקטעים, תחילה אפשר לשקופיות להתייבש בטמפרטורת החדר למשך 12 שעות כדי לייבש את דגימות הרקמה.

לאחר מכן, בסורק השקופיות כולו האוטומטי, בחר ברייטפילד באופן ידני והזן את ממשק הסריקה הידני. תקן את שם השקופיות ובחר נתיב אחסון עבור התמונות. קבעו את אזור הסריקה ובחרו בדוגמאות הסריקה בעזרת האפשרות 'הגדרת סף על-ידי המשתמש'.

הסף הוא כ-50 עם ערך הרחבה של 200 מיקרומטרים באזור הסריקה. קבעו את ערך מוקד הסריקה ובחרו 'מיקוד אוטומטי' ו'שכבה אחת', ולאחר מכן טען את השקופיות בתחנת העבודה והתחל את הסריקה האוטומטית. לאחר סריקת כל השקופיות, שמור את התמונות לניתוח מאוחר יותר.

כדי לנתח את התמונות של חלקי רקמת הריאה, פתח את התוכנה לניתוח תמונה היסטופתולוגי ובחר מחשב מקומי כדי לפתוח את הקובץ עם נתוני הסריקה. בחרו ברמת הזום המתאימה ולהשתמש ב'החלף מצב התאמת צבע' כדי להגדיר את הצבע לניגודיות האופטימלית, ולאחר מכן הקיפו ותנו שם לאזורי העניין בכל תמונה. לאחר מכן, תחת תוספים, בחר QC. בונה התרחישים יצץ.

בחר 'כיוונון צפיפות' והתאם את סרגל הזיהוי. התאם את רמות הניקוד עד שעוצמת הכתם של האזורים בעיגול דומה לזו של התמונות המקוריות, ואחסן את המודל ותן לו שם כקובץ חדש, ולאחר מכן החל את המודל על שקופיות אחרות ובחר ביאור נבחר כדי לאפשר לתוכנה לחשב באופן אוטומטי את ציון ה- APE עבור אזורי העניין בכל תמונה. סריקה דיגיטלית שקופיות שלמות של חלקי רקמת ריאה של גידול ורקמות שאינן גידול סמוכות של דגימות סרטן ריאות תאים שאינם קטנים מייצרת תמונות דיגיטליות באיכות גבוהה.

ציוני APE המחושבים מסוגים אלה של דגימות סרטן ריאות הם בדרך כלל גבוהים משמעותית מאלה שנקבעו עבור רקמות שאינן סרטן סמוכות. בנוסף, רמות ביטוי ZWINT בסעיפים רקמת קרצינומה של תאים קשקשיים נקבעים לעתים קרובות להיות גבוה באופן משמעותי מאלה שנמדדו דגימות רקמת abnocarcinoma. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להתכונן עם איכות גבוהה של הגידול או אזורי הגידול במהלך ביצוע סריקה פתולוגית.

בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות של המיקרוסקופיה על מנת לענות על שאלות נוספות. לא השיטה או השיטה השונה לסריקה פתולוגית. לאחר טכניקה זו סלל את הדרך לחוקרים בתחום הסריקה הפתולוגית לחקור אבחון דיגיטלי מטרת המחקר.

אל תשכח כי עבודה עם paraformaldehyde יכול להיות מסוכן מאוד אמצעי זהירות כגון מסכות תמיד יש לנקוט בעת ביצוע הליך זה.