שיטות אלה יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הנוירולוגיה ורופאתלמולוגיה, ולעזור להעריך מגוון גדול של רטינופתיות וביטויים ברשתית במודלים שונים של מכרסמים. היתרון העיקרי של טכניקות אלה הוא שניתן לבצע חקירות אורך לא פולשניות, להפחית את השונות ולצמצם את מספר בעלי החיים הדרושים לניסויים. שיטות אלה מאפשרות חקירה כמותית של vivo של מבנה ותפקוד אשר ניתן להשתמש בהם כדי לחקור את התנאים הפתולוגיים, או להעריך את התועלת הפוטנציאלית של טיפולים חדשניים.
עם זאת, במיוחד היישום של טכנולוגיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית במודלים מכרסמים הוא עדיין מאתגר, בעיקר בגלל גודל העין הקטנה. הדגמת ההליכים תהיה מייקל דיטריך, דוקטורנט מהמעבדה שלנו. לאחר הרדמה המכרסם, להחיל טיפה אחת של פנילפירין טרופיקמיד על כל עין עבור תדלוח אישונים.
לנגב את כל טיפת עיניים עודף רטוב אחרי דקה אחת. ולשמן את העיניים methylcellulose מבוסס ג'ל עיניים כדי למנוע ייבוש העין ויצירת קרנית עגמומי. לאחר מכן השתמש במדפים כדי למקם עדשת מגע מותאמת אישית על העין.
לחץ על לחצן התחל בפינה השמאלית של צג לוח הבקרה כדי להפעיל את מצב הרכישה. לאחר מכן, כדי לדמיין את העין השמאלית, מקם את המחזיק כדי להבטיח כי נורת העין השמאלית של המכרסם פונה למצלמה. הגדר את רמת המסנן ל- R ובחר BR ו- OCT עבור הדמיית fundus של השתקפויות כחולות ורכישת סריקת B בתוכנה.
לאחר מכן, הגדר את מרחק המיקוד לכ- 38 דיוטרס, באמצעות ידית המיקוד בגב המצלמה. והגדל את הרשתית, עד שסריקת OCT תהיה גלויה על המסך. לאחר מכן, כדי להבטיח נתיב קרן דרך אמצע האישון, עם זווית אורתוגונלית של הרשתית בכל המישורים, מקם את הדיסק האופטי באמצע השדה המואר.
ולהתאים את הקו האופקי והאנכי B-סריקות לרמה אופקית על ידי סיבוב המחזיק. במסך התוכנה בחר את מצב סריקת העוצמה והגדר אותו ל- 25 סריקות B במצב רזולוציה גבוהה ב- 50 מעקב אוטומטי בזמן אמת. מרכז את מרכז רשת סריקת אמצעי האחסון בדיסק האופטי והתחל ברכישה על-ידי לחיצה על ידית הרגישות השחורה ולאחר מכן רכוש בלוח הבקרה.
לאחר השלמת הרכישה, הגדר את רמת המסנן ל- A.Select Blue Autofluorescence בלוח הבקרה. ולהתאים את בהירות התמונה עם ידית הרגישות. לחץ על ידית הרגישות ולאחר מכן רכוש לתאי פלואורסצנט תמונה או מרבצי שפעת אוטומטית.
לניתוח סריקות עוצמת הקול, השתמש בפילוח האוטומטי של התוכנה של התקן OCT על-ידי לחיצה באמצעות לחצן העכבר הימני על הסריקה. ובחר פילוח ולאחר מכן את כל השכבות. בצע תיקון ידני של השכבות על ידי לחיצה כפולה על הסריקה הרצויה.
בחר פרופיל עובי. ולחצו על 'עריכת פילוח שכבות'. בחרו שכבה אחת בכל פעם.
ואם יש צורך לתקן את הקו הירוק על ידי הזזת הנקודות האדומות על ידי גרירה ושחרור למיקום הנכון. לאחר מכן בחר את הכרטיסיה מפת עובי. בחר את רשת ETDRS 1, 2, 3 מילימטר.
מרכז את העיגול הפנימי בדיסק האופטי. לבסוף, לחשב את העובי של שכבות רשתית מתוך ערכי העובי המסופקים על ידי התוכנה עבור מגזרי הרשתית השונים של עניין. כדי לחשב את ערכי העובי העיקריים מסריקות עוצמה, השתמש בכל רשת ETDRS של 1, 2, 3, מילימטר המכסה זווית של כ- 25 מעלות, למעט העיגול הפנימי המילימטר המכיל את הדיסק האופטי.
התחל בבחירת פלטפורמה למדידת המכרסמים. פתח את החלון קביעות מוגדרות מראש על-ידי לחיצה כפולה על התוכנה. בחר קבוצה חדשה ובחר את שם הקבוצה, מספר הנבדקים, המינים והזנים.
בחר גירוי משתנה, תדר מרחבי, רגישות לניגודיות, מהירות או כיוון בתפריט הנפתח ולחץ על צור קבוצה חדשה. התמקד בפלטפורמה על ידי מניפולציה טבעת המיקוד של המצלמה על גבי התא. וכיול המערכת על ידי יישור העיגול האדום סביב העיגול השחור על הרציף.
לאחר מכן, מניחים את המכרסם על הפלטפורמה ולתת לו להסתגל לסביבה במשך כחמש דקות. לאחר מכן התחל את המדידה על-ידי בחירת החץ השמאלי עבור כן או הריבוע עבור לא, אם החיה עוקבת אחר או אינה עוקבת אחר בהתאמה. בחר באופן ידני את גודל הצעד של הגירוי על ידי לחיצה על החצים למעלה ולמטה ליד הגירוי המשתנה.
לבסוף, בחר בכרטיסיה סיכום ולחץ על הקובץ, ייצוא טבלה או גרף כדי לייצא את ערכת הנתונים הרצויה. התוצאות מצביעות על כך שהניוון של שכבות הרשתית הפנימית מצטמצם. וציון קליני EAE הוא התמתה במהלך קורס EAE כאשר חומר 1 היה מנוהל.
יתר על כן, OKR מגלה חדות ראייה משופרת של בעלי חיים שטופלו בחומר 1 בהשוואה לעכברי MOG EAE לא מטופלים הנמדדים על ידי בדיקות סף תדר מרחבי על פני תקופה של 120 ימים. בעת ביצוע מדידות OCT, צעד קריטי הוא הכיוון האורתוגונאלי של קרן הלייזר בכל המישורים ביחס לרשתית כדי להבטיח את האיכות וההתרבות של ערכי העובי. עבור טכניקת OKR, הבחנה בין מעקב ותנועות התנהגותיות נורמליות של החיה, דורשת הכשרה מסוימת של החוקר.
חשוב להיות עיוור עבור קבוצת הניסוי. בעקבות חקירות אלה של נזק מבני ותפקודי המתרחשים בהקשר של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית, ההליך עשוי גם להיות מועיל במודלים אחרים המערבים את מערכת הראייה, כולל אך לא מוגבל למודלים של רטינופתיות, או פגיעה עצבית אופטית. טכניקות אלה לסלול את הדרך למחקר in vivo בתחומי נוירולוגיה ורופאתלמולוגיה והם ניתנים להעברה בקלות לניסויים קליניים.
