これらの方法は、神経学および眼科の分野における主要な質問に答え、様々なげっ歯類モデルにおける多種多様な網膜症および網膜症状を評価するのに役立ちます。これらの技術の主な利点は、非侵襲的な縦方向の調査を行い、変動性を減らし、実験に必要な動物の数を減らすことです。これらの方法は、病理学的状態を調査するために使用することができる構造および機能の定量的なインビボ調査を可能にする、または新しい治療の潜在的な有用性を評価する。
しかし、特にげっ歯類モデルにおける光コヘレンス断層撮影技術の応用は、主に目の大きさが小さいため、依然として困難です。手順をデモンストレーションするマイケル・ディートリッヒ、私たちの研究室の博士課程の学生です。げっ歯類を麻酔した後、瞳孔拡張のために各目にフェニレフリントロピックアミドを1滴塗布する。
1分後に余分な眼液滴を拭き取ります。目を潤滑して、目を乾燥させ、濁った角膜を作り出さないように、メチルセルロースをベースにした眼球ゲルを潤滑します。次に、鉗子を使用して、カスタムコンタクトレンズを目に置きます。
コントロールパネル画面の右隅にある[スタート]ボタンを押して、取得モードを開始します。次に、左目を画像化し、ホルダーを配置して、げっ歯類の左眼球がカメラに向かっていることを確認します。フィルタレベルをRに設定し、ソフトウェアでブルー反射眼量イメージングおよびB-スキャン集録のBRとOCTを選択します。
次に、カメラ背面のフォーカスノブを使用して、約38のディオプターにフォーカス距離を設定します。そして、OCTスキャンが画面上に表示されるまで、retinaを拡大します。次に、すべての平面の網膜の直交角を持つ瞳孔の真ん中を通るビームパスを確保するために、光ディスクを照らされたフィールドの真ん中に配置する。
そして、ホルダーを回転させることによって水平および垂直の線B-スキャンを水平レベルに調整します。ソフトウェア画面でボリュームスキャンモードを選択し、50の自動リアルタイムトラッキングで高解像度モードで25 Bスキャンに設定します。ボリュームスキャングリッドの中央を光学ディスクの中央に配置し、黒い感度ノブを押して取得を開始し、コントロールパネルで取得します。
取得が完了したら、フィルタレベルをコントロールパネルの[青い蛍光を選択]に設定します。感度ノブで画像の明るさを調整します。感度ノブを押し、蛍光細胞または自己蛍光性の堆積物を画像に取得します。
ボリュームスキャンの分析には、スキャンを右クリックしてOCTデバイスのソフトウェアの自動セグメンテーションを使用します。[セグメンテーション]、[すべてのレイヤ] の順に選択します。目的のスキャンをダブルクリックして、レイヤーの手動補正を実行します。
厚さプロファイルを選択します。[レイヤーセグメンテーションの編集] をクリックします。一度に 1 つのレイヤーを選択します。
そして、必要に応じて、正しい位置にドラッグアンドドロップして赤い点を移動することにより、緑の線を修正します。次に、タブの厚みマップを選択します。1、2、3ミリメートルのETDRSグリッドを選択します。
内部円を光学ディスクの中央に配置します。最後に、対象となる異なるレティナルセクタに対してソフトウェアが提供する厚さ値から、レティナル層の厚さを計算します。ボリューム スキャンから主な厚さの値を計算するには、光ディスクを含む内側の 1 ミリメートル円を除いて、約 25 度の角度をカバーする全体の 1,2,3 ミリメートルの ETDRS グリッドを使用します。
まず、げっ歯類を測定するプラットフォームを選択します。ソフトウェアをダブルクリックして、[事前設定]ウィンドウを開きます。[新しいグループ]を選択し、グループ名、被験者数、種、および株を選択します。
ドロップダウンメニューで可変刺激、周波数、コントラスト感度、速度または向きを選択し、[新しいグループを作成]を押します。チャンバーの上にカメラのフォーカスリングを操作することにより、プラットフォームに焦点を当てます。そして、プラットフォーム上の黒い円の周りに赤い円を揃えてシステムをキャリブレーションします。
次に、げっ歯類をプラットフォーム上に置き、約5分間環境に適応させます。次に、動物が追跡または追跡しない場合は、左矢印をyesまたはnoの四角を選択して測定を開始します。変数刺激の横にある上下矢印をクリックして、刺激のステップサイズを手動で選択します。
最後に、[概要]タブを選択し、[ファイル]、[エクスポート テーブル]、または[グラフ]をクリックして、目的のデータセットをエクスポートします。結果は、内のレチナル層の変性が減少していることを示す。そして、物質1が投与されたとき、臨床EAEスコアはEAEコース中に減衰されます。
さらに、OKRは、120日間の期間にわたって空間周波数閾値試験によって測定された未処理のMOG EAEマウスと比較して、物質1で処理された動物の視力の改善を明らかにする。OCT 測定を行う場合、重要なステップは、厚さの値の品質と再現性を確保するために、すべての面でのレーザー光の直交方向です。OKR技術では、動物の追跡と正常な行動の動きを区別するには、研究者の訓練が必要です。
実験群に対して失明することが重要である。実験的自己免疫性脳脊髄炎の文脈で起こる構造的および機能的損傷のこれらの調査の後、この手順はまた、網膜症、または視神経損傷のモデルを含むがこれらに限定されない視覚系を含む他のモデルにおいて有用であり得る。これらの技術は、神経学および眼科の分野でのインビボ研究への道を開き、臨床試験に容易に移すことができる。
