רוב הצמחים בטבע מחוברים ככל הנראה על ידי פטריות מאכלסות שורשים סימביוטיות הנקראות פטריות mycorrhizal. שיטה זו בוחנת במפורש כיצד רשתות mycorrhizal נפוצות משפיעות על אינטראקציות בין צמחים ועל ההשלכות האקולוגיות הבאות. בשיטה זו, אנו יכולים לבחון במפורש את תפקידן של רשתות mycorrhizal נפוצות תוך מתן אפשרות לכל הצמחים להתיישב על ידי פטריות, בניגוד למעט פטריות, וכתוצאה מכך צמחים הגדלים בצורה גרועה.
כדי להתחיל לשנות מכולות שתיל צינורי מסחרי עם פלסטיק גמיש, להשתמש בלחץ מקדחה ולהחזיק את המיכל על גדר על העיתונות מקדחה, ויש לי עצירה עם נדוניה קצרה שמתאימה בתוך המיכל כדי לעזור להחזיק אותו במקום תוך קידוח. לאחר מכן, לקדוח שני חורים, אחד מעל השני, בצידי המיכל, כך החורים הם על סנטימטר אחד זה מזה. חותכים את פיסת הפלסטיק הדקה שנותרה בין החורים כדי ליצור פתח מוארך אחד, ברוחב של כשני ס"מ ובאורך של חמישה סנטימטרים.
חזור על חיתוך פתחים מוארכים אלה בצד הנגדי של המיכל. כדי לכסות את החריצים עם רשת ניילון, לחתוך 40 רשת נקבוביות מיקרומטר לתוך כמה שיותר 9.5 ס"מ על ידי חתיכות 8.5 ס"מ כמו שיש מכולות. לאחר מכן, באמצעות דבק חם תעשייתי בעוצמה גבוהה, להדק את רשת ניילון חיצונית על המכולות כדי לכסות את שני הפתחים, עם חפיפה קלה בבד.
החל דבק חם סביב הפתחים על המיכל, ולאורך הקצוות הארוכים על רשת ניילון, ולגלגל את המיכל על רשת ניילון, קרום הידרופובי, בעת שימוש, כדי למנוע שריפת האצבעות. הוסיפו שכבת דבק לאורך קצה הבד שבו חופפים קצוות רשת שינוי, ולחץ על הקצה על קרטון כלשהו כדי לאטום אותו בחוזקה. לאחר שהדבק התקרר, השתמשו בקלטת גמישה כדי לחבר את הקצוות העליונים והתחתונים של הבד למיכל, כדי למנוע קצוות רופפים וקריעה.
באמצעות אותה קלטת, לכסות את החורים הקטנים בצידי הקצה החרוטי של כל מיכל כדי למנוע צמיחת שורש מתוך המיכל לתוך שאר הסיר. מניחים שיש זכוכית בתחתית כל מיכל כדי למנוע אובדן קרקע תוך מתן ניקוז, ולאחר מכן להרכיב סירים כמתואר בכתב היד. השתמש במיכלים מוצקים ולא משופצים לטיפול בקרה שאינו כרוך בפוטנציאל להיווצר CMN בין צמחים.
מוסיפים לאדמה פטריית AM, על ידי ערבוב אחיד של 1.2 חתיכות שורש קצוצות באורך 1.2 ס"מ ביסודיות עם האדמה. בחר אדמה רצויה מעורבב עם חול סיליקה עקר או חרוזי זכוכית כדי להקטין את הריכוז של חומרים מזינים מינרליים זמינים לצמחים. מקם את המכולות המלאות בקצף שנקדח בעבר בסירים.
כדי להפוך תערובת חול סיליקה עניים של ניקוז נאות, לערבב חול בגודל חלקיקים בינוני עם חול בגודל חלקיקים קטנים במיקסר מלט. מלאו את החלל הבין-מערכתי בתערובת זו באמצעות משפך כדי לסייע במילוי חללים קטנים. לאחר מכן, טיפול מקדים להשתלה, או מה שנקרא צמחי אחות, של המינים הרצויים לתוך כל מיכל לקיים פטריות AM, אשר יתפשטו בין המכולות ולהקים רשתות mycorrhizal נפוצות.
לגדל את הצמחים במשך חודשיים עד שלושה בערך 24 מעלות צלזיוס בחממה כדי לאפשר הקמת CMN. לתפור צמחים ניסיוניים על ידי זריעה לתוך מכולות. המתן עד שכל המכולות יבטו שתילים לפני הסרת צמחי האחות הקדם-טיפול, על ידי גזירת הצילומים שלהם.
כדי להקים טיפולי CMN, להשאיר כמה מיכלים לא זזו למשך הניסוי. כדי לנתק פיזית את ההיפה המשתרעת בין המכולות ששונו, סובב חלק מהמכלים מדי שבוע, הקפד לעשות זאת באמצעות סיבוב מלא אחד, כדי למנוע שינוי מכוון של אינטראקציות מעל פני הקרקע. מיד לאחר הסיבוב, בכבדות להשקות את כל הסירים כדי לחדש את המגע בין המצע ביניים ואת הצדדים של מיכלים.
השריית כל הסירים במים לאחר ניתוק רשתות mycorrhizal נפוצות היא קריטית כדי ליצור מחדש את הקשר בין המיכל לבין המצע interstitial, ובכך למנוע aeration לא מכוון של המכולות. להפרות צמחים שכנים עם 0.5% חנקן 15 מועשר אשלגן חנקתי, אמוניום כלורי. להפרות את האדם היעד עם חנקן 14 דשן של ריכוז שווה.
אקראי מחדש את עמדות הסירים במהלך הניסוי, לפחות מדי חודש. למדוד צמיחה שבועית על ידי מדידת אורך העלה הארוך ביותר, כדי לפקח על כאשר הצמיחה מתחילה להאט, הקפדה על קציר לפני הצמחים להיות כבול שורש. כדי לקצור, גזור את כל רקמת הקרקע, והצב צמחים בודדים במעטפות המסופות בטיפול, בסיר ובמיקום שלהם.
לאחר מכן יבש מעל הקרקע רקמות ב 60 מעלות צלזיוס בתנור ייבוש אוויר כפוי, למשקל מתמיד, ולאחר מכן למדוד את המשקל היבש של כל רקמת צמח. אפשר לאדמה להתייבש יומיים עד שלושה ימים לפני הסרת המכולות, וקצירת השורשים. לאחר הקציר, יש לצחצח בעדינות כמה שיותר אדמה ממערכות השורש.
לשטוף את השורשים על מסנב עם 250 מיקרון נקבוביות גודל, כדי למנוע אובדן שורש. לאחר מתן אפשרות לשורשים להתייבש באוויר, שוקלים את כל מערכת השורשים. גזור את מערכת השורש באופן אקראי והצב את השברים ב- 50%אתנול.
שקלו מחדש את מערכת השורשים הנותרת, ואחסנו אותה במעטפת נייר מסומנת לייבוש ב-60 מעלות צלזיוס להערכת משקל יבש. כאשר גדל אנדרופוגון gerardii ויטמן בניסוי צמח היעד, ניתוק או מניעת CMNs פחתה משקל יבש מעל הקרקע של היעד, מה שמרמז כי CMNs שלם קידם את צמיחת הצמח. צמחים עם CMNs מנותקים וללא CMNs הגיבו באופן דומה לטיפולים שלהם.
תחרות, שבה צמיחתו של אדם אחד מדכאת את צמיחתו של אדם סמוך אחר, זוהתה בטיפול CMN שלם, אך לא בטיפולי CMN מנותקים או ללא CMN. השוואות יסודיות של ריכוזי רקמת עלים מזינים מינרליים שונים, לעומת ריכוזים בגודל צמחי בלבד של מנגן, היו קשורים באופן חיובי עם צמח היעד מעל משקולות יבשות, על פני כל הטיפולים. רקמת צמח היעד הוערכה עבור חנקן 15 ברקמות עלה לעומת גודל הצמח, לאחר הוספת תווית חנקן 15 רק למכלים של השכנים.
צמחי יעד עם CMNs שלמים היו ריכוזי חנקן 15 גבוהים יותר, בהשוואה לשני הטיפולים האחרים. CMNs שלם היה חיובי מאוד, שיפוע שונה באופן משמעותי של כמות חנקן, מזה של טיפול CMNs מנותק, מה שמרמז כי צמחים גדולים השיגו יותר חנקן מ CMNs להגיע לתוך מיכלים שכנים, מאשר אנשים יעד קטן. בניסוי שדה באמצעות ליבות מסובבים עשויים צינור PVC, mycelium חוץ-גולגולתי מעבר צינורות הייתה השפעה מועטה על הצמיחה של soapberry במהלך הניסוי 13 חודשים.
עם זאת, ניתוק זה על ידי סיבוב של צינורות מופחת חנקן עלים, זרחן, ריכוזי נחושת, הוכח באופן משמעותי על ידי הצמחים כלורוטיקה. לסובב את המכולות באותו כיוון כי הבד מודבק על כל מיכל, כדי למנוע קריעת הבד, ולסובב 360 מעלות כדי להפחית את השינויים מעל הקרקע לצמחים. הליך זה יכול לשמש בתחום עם צינורות PVC שונה מלא באדמה סטרילית כדי לבחון את התפקיד של מיסליום חוץ-גולגולתי בקולוניזציה השורש, והשפעתו על ספיגת חומרים מזינים.
טכניקה זו מאפשרת השוואה של צמחים עם רשתות mycorrhizal נפוצות, לצמחים mycorrhizal שאינם מחוברים על ידי רשתות, במקום לצמחים קטנים ללא mycorrhizas, כפי שנעשה לרוב.
