כאן אנו מציגים פרוטוקול כירורגי לארנבים במטרה להעריך את חומרי החלפת העצם במונחים של קיבולות התחדשות עצם. העיקרון הבסיסי של מודל זה ארנב calvarial היא לגדל רקמת עצם חדשה אנכית על החלק קליפת המוח של הגולגולת. מודל זה מאפשר הערכה של חומרי החלפת עצם עבור התחדשות עצם אוראלית ו craniofacial במונחים של תמיכה צמיחת העצם ותמיכה neovascularization.
המודל הוא משמעותי מאוד כדי להעריך את התחדשות העצם כפי שהוא מודד את הצמיחה החוץ רחמית של רקמת עצם חדשה מעל עצם בוגרת. בהשוואה לדגמים מסורתיים, שבהם עצם חדשה מתחדשת כדי למלא פגם שנוצר באופן מלאכותי כדי סוף סוף לחזור לרמה הראשונית שלה. על ידי שימוש צילינדרים גדולים קבוע על גולגולות ארנב, osteoconduction, osteoinduction, osteogenesis, ו vasculargenesis המושרה על ידי החומרים עשוי להיות מוערך על בעלי חיים חיים או הקריבים.
הדגימה של ההליך תהיה לורין מרגר, עמיתת מחקר מהמעבדה שלנו, ואני. לאחר סם את בעלי החיים, מניחים canula תוך וריד לתוך הווריד השולי מהאוזן ולשמור אותו סגור עד צנרור הושלם. מניחים את הארנב במצב נוטה ולשמור על ראשו בהארכה אנכית.
הרדמה של קנה הנשימה באופן מקומי על ידי ריסוס 10% לידוקאין. מחליקים צינור אנדוטראצ'ל בקוטר קטן לתוך קנה הנשימה של הארנב עד שניתן לשמוע זרימת אוויר בצינור. זה יפתח את הגרון להקל על החדרת הצינור הסופי.
לאחר מכן, להכניס מדריך לתוך הצינור כדי לתקן את המיקום של הצינור לתוך קנה הנשימה. הסר את צינור קוטר קטן להחליק את הצינור אנדוטראצ'ל סופי על המדריך. הסר את המדריך ולנפח את הבלון בסוף הצינור endotracheal לאטום ולחסום את המכשיר לתוך קנה הנשימה.
ללא הרף שפע פנטניל כדי לגרום משככי כאבים. שניים עד ארבעה מיליגרם לקילוגרם של פרופופול כדי לגרום הרדמה וארבעה מיליליטר לקילוגרם לשעה של צלצולים אצטט כדי לשמור על תנאים איזובולומטריים. מיד לאוורר את החיה עם 3% sevoflurane בחמצן טהור.
ראשית, מניחים את הארנב על כרית מחוממת שנקבעה ל -39 מעלות צלזיוס על שולחן הניתוחים, ומ מניחים את גשוש הטמפרטורה הרטלית. לגלח את הקרקפת. לשפשף את העור עם 10% יוד פרובידון כדי לחטא את האתר.
לאחר מכן, לעטוף את הארנב עם וילון כירורגי סטרילי לחתוך את אזור גישה של הגולגולת. לחטא את האתר הכירורגי עם 10%providone יוד בפעם השנייה. כדי להתחיל, הרדמה מקומית עם זריקה תת עורית של לידוקאין על הגולגולת.
השתמש באזמל כדי לחסן דרך העור לאורך קו הסגיטל הגולגולתי מן המסלולים אל protuberance העורפי החיצוני, לוודא כי periosteum הוא חרה. השתמש במעלית periosteal כדי לרומם בעדינות את periosteum משני צידי החתך. יש לשטוף את האתר בתמיסת מלח סטרילית.
ראשית, לאתר את התקשורת ותפרים קורונטל על הגולגולת. שים לב שהקווים האנטומיים האלה יוצרים צלב. הצילינדרים יוצבו בכל אחד מהרביעים שהוגדרו על ידי הצלב, ויבטיחו כי קצה הצילינדר אינו מעל התפר.
מניחים את הצילינדר הראשון ברביע השמאלי העליון הנחת המכשיר שטוח ככל האפשר. תקן את מיקום הצילינדר בלחץ יד חזק ובורג במיקרו בורג עד שתורגש התנגדות. ודא כי ראש הבורג הוא ריקון עם לשונית הצילינדר.
תקן את הכרטיסייה השנייה של הצילינדר באותו אופן כדי לאבטח את הצילינדר בחוזקה על הגולגולת. ודא כי הצילינדר קבוע הרמטית עד העצם. ואז לחזור על כל ההליך הזה כדי לאבטח גליל על כל אחד משלושת הרבעים האחרים.
כדי להתחיל, לקדוח חור intermedullary תחת השקיה מלוחים עם בר עגול על העצם על מרכז האזור מוגבל על ידי הצילינדר. ודא כי הדימום מופיע. לאחר מכן, לקדוח שני חורים intermedullary נוספים לאורך הציר עובר דרך שני ברגים כרטיסיות בקצוות הפנימיים של הצילינדר.
לאורך הציר הניצב, לקדוח שני חורים intermedullary נוספים בקצוות הפנימיים של הצילינדר. חזור על תהליך קידוח זה עבור שלושת הצילינדרים האחרים. לאחר מכן, למלא את הצילינדר הראשון עד שוליים עם דגימת החומר.
סגור את הצילינדר על ידי התאמת הכובע. חזור על תהליך מילוי זה עבור שלושת הצילינדרים האחרים. סגור את העור מעל הצילינדרים עם תפר לסירוגין שאינו resorbable ולהחיל רוטב ריסוס על הפצע.
לאחר מכן, לעצור את אספקת משככי כאבים והרדמה ולבדוק התאוששות של נשימה אוטונומית. ברגע שהחיה התאוששה נשימה אוטונומית, לעצור את האוורור. לשמור על החיה תחת חמצן טהור לפני התעוררות מוחלטת.
להזריק buprenophine הידרוכלוריד תת עורית. חזור על הזריקה כל שש שעות במשך שלושה ימים כמו משכך כאבים כירורגי פוסט. אפשרו לחיה להתעורר לחלוטין לפני העברתה לדיור הרגיל שלה עם מים והאכלה מלאה.
המודל המתואר בסרטון זה מוקדש להערכת אוסטאוקונדוקציה, אוסטאונדוקציה, אוסטאוגנזה וניאו-סקולריזציה בתחליפי עצמות. לאחר השלמת הניתוח, צמיחת העצם עשויה להיות מנוטרת בנקודות זמן שונות באמצעות טומוגרפיה עצם על בעלי חיים חיים. ניתוח נוסף מחייב הקרבת בעלי החיים.
לאחר המתת חסד, דגימות חתונות ואת הצילינדרים מוסרים בזהירות. ביופסיות קבועות לאחר מכן עם פתרון של 4% פורמלדהיד ב- PBS. לאחר מכן, מיקרוטומוגרפיה עשויה להיות בשימוש כדי להעריך את צמיחת העצם.
דגימות עשויות גם להיות מעובדות עבור כתמים היסטולוגיים. ניתוח היסטומורפי וכתמים ספציפיים אפשריים לאחר מכן להשלים את הניתוח באופן ספציפי יותר. מכיוון שפרוטוקול זה הוא שיטה כירורגית, כל השלבים הם קריטיים ויש לפעול כראוי.
חשוב להיות מאומן לניסויים בבעלי חיים, במיוחד בטיפול בארנבים ובהרדמתם. מלבד השיטות המתוארות, ניתן לנתח תאים באופן ספציפי יותר באמצעות ציטומטריית זרימה. אבולוציה של חומר, התבגרות רקמת עצם ומכניקה עשויים להיות מוערכים גם באמצעות כניסת ננו, למשל.
בעזרת מודל זה בוצעו הערכות רבות. כמו למשל, עבור כלובי טיטניום או קרמיקה, ממברנות GBM, גורמים אוסטאוגניים, תת-תתי-קיום שזה עתה נולד או מנגנון הניאו-סקולריזציה במהלך תהליך התחדשות העצם.
