המטרה הכוללת של שיטה זו היא לגרום בצקת לימפתית משנית עקבית בדיעבד של עכברים מבלי לגרום לתחלואה חמורה. שיטה זו יכולה לשמש כדי לגרום בצקת לימפתית משנית בדיעבד של עכברים. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שהיא פותרת בצקת לימפתית חסרת משמעות שתימשך לפחות שמונה שבועות מבלי לגרום לתחלואה חמורה.
מישהו חדש בהליך עשוי להיאבק בטכניקות המיקרוכירורגיות. לכן אנו ממליצים על אימון מיקרוכירורגי וכמה הליכי תרגול כדי להבטיח תוצאה מוצלחת, אלא גם כדי להכין את החוקר כך שהוא או היא יוכלו לבצע את ההליך בצורה יעילה יותר. הגדר את מקור הקרינה והרס את העכבר כמתואר בפרוטוקול.
מניחים כרית עופרת בעובי 1.5 מ"מ כדי להבטיח שרק האזור שעובר ניתוח מוקרן. הדוגמה המוצגת היא של עכבר לאחר הניתוח כדי להבהיר את האזור. מתן מנה של 10 הקרנה אפורה.
החוקרים חייבים לנקוט אמצעי זהירות בעת עבודה עם קרינה. במהלך ניסוי זה כל ההקרנה בוצעה בחדר מבודד קרינה. ומקור הקרינה נדלק רק כאשר כל אנשי הצוות עזבו את החדר.
לשקול את העכבר לפני הניתוח. בחן עומק הרדמה על ידי מבחן כף רגל או צביטת זנב. לגלח את הרגל שנבחרה להליך.
הגדר את זרימת החמצן ל 0.8 ליטר לדקה. לחבר אותו עם חרוט האף. החל משחה עיניים.
להזריק 0.5 מיליליטר של מלוחים תת עורית, רצוי ב scruff של העכבר כדי למנוע hypovolemia במהלך הניתוח. מניחים את העכבר על הבד הכירורגי במצב על-חושי. מניחים את חרוט האף על האף.
לקבע את הקצה של hindlimbs בעדינות עם קלטת, כדי למנוע את העכבר מפני הסטה במהלך הניתוח. מרימים את העור במלקחי חלקים וחותכים פתח קטן כ-5 מילימטרים קרובים לאפוסה הפופליטית. החלק מספריים חדים לתוך הפתח וגזור לכיוון הברך, כך החתך מסתיים ממש מעל הברך.
הקפד לא לנקב את כלי הדם הבסיסיים, על ידי הרמת העור עם מלקחים בעת חיתוך. להזיז את העכבר למיקום נוטה ולהשלים את החתך ההיקף. לנתח את העור לכמה מילימטרים מעל הזווית.
זכור לשמור על הרקמה לחה עם מלוחים סטריליים במהלך כל ההליך. נסיגת העור של הפצע הפרוקסימלי עם מפשק אלסטי. וודאו שהווריד הסיאטי נראה כפי שמוצג.
להזריק 0.01 מיליליטר פטנט כחול V תת עורית בין בוהן השנייה והשלישית. בעדינות ללחוץ על הכף כמה פעמים כדי להפיץ את V.The הפטנט הכחול ההפצה של V כחול פטנט ניתן לראות דרך המיקרוסקופ. המבנים הדרושים כדי להיות חזותיים הם, כלי הלימפה proximal, PLV, צומת הלימפה popliteal, PLN, כלי הלימפה הדיסטלי הראשון, DLV1, ואת כלי הלימפה דיסטלי השני, DLV2.
הגדל כדי לדמיין את ה- PLV וללקט אותו באמצעות תפר ניילון 10-0. לחץ על הכף כדי להבטיח שאף פטנט כחול לא יעבור קרוב לקשירה. Ligate שני כלי הלימפה דיסטלי כפי שמוצג.
לחץ על הכף מספר פעמים שוב כדי לוודא כי שום V כחול פטנט עובר קרוב לקשירה. בדוגמה זו, ניתן לראות כי אחד מכלי הלימפה מתפרץ עקב הקשירה המעכבת את זרימת הלימפה. הסר את צומת הלימפה popliteal, צומת הלימפה יש משטח חלק דמוי פנינה והוא נצבע על ידי V כחול פטנט בניגוד לרקמת השומן שמסביב.
לפני הסרת כרית השומן inguinal, לצרוב את הכלי הזה כפי שמוצג. ואז להסיר את כרית השומן בחתיכה אחת. ודא כי אין דימום פעיל.
זוהי דוגמה של צומת לימפה inguinal ממוקם. צומת הלימפה הממוקם כרית השומן inguinal הוא לעתים רחוקות בצבע על ידי V כחול פטנט יכול להיות קשה להבדיל מן השומן. הסרת כרית השומן בחתיכה אחת היא הדרך הטובה ביותר להבטיח כי צומת הלימפה הוסר.
תפר את קצות העור עד fascia השריר, עם תפר ניילון 6-0 באמצעות מטח ומחזיק מחט, משאיר פער של שניים עד שלושה מילימטרים, כדי להגביל את זרימת הלימפה שטחית. זוהי דוגמה לתפרים המוגמרים, באפוסה הפופליטית, בצד הצדדי של הבד האחורי, מעל הברך, ובצוד המדיאלי של האחורי. לנהל משככי כאבים ולשקול את העכבר לאחר הניתוח, ולאחר מכן למקם אותו ארון מחומם להחלמה.
חזור על ההליך להקרנה לפני הניתוח. גרף זה מראה את נפח hindlimb הממוצע המשולב של שלושה מחקרים נפרדים בשמונת השבועות שלאחר הניתוח. 31 עכברים נכללו בסך הכל.
ציר ה-x מייצג שבועות לאחר הניתוח. ציר ה- y מייצג נפח אחורי במילימטרים מעוקבים. סרגלי החצים מייצגים את סטיית התקן.
יש לצפות כי הנפיחות מהניתוח ואת בצקת הלימפה המושרה יקטן במהלך ארבעת השבועות הראשונים. לאחר ארבעת השבועות הראשונים אנו רואים מצב יציב יחסית של בצקת לימפתית. נפח השליטה hindlimb עולה במהלך שמונת השבועות, ובכך בקפדנות אומר את ההבדל בנפח בין hindlimb בצקת הלימפה ואת hindlimb שליטה, זה היה בלתי צפוי.
הגורם הוא העריך להיות כי העכברים השתמשו hindlimb לא מופעל שלהם יותר מאשר hindlimb המופעל בשבועות שלאחר הניתוח. זה יכול להוביל היפרטרופיה של hindlimb שליטה ואולי להסביר את הגידול בנפח. לנתונים פרטניים על שלושת המחקרים שנכללו אנא קראו את הפרוטוקול.
טבלה זו מציגה את מבחן ההשוואה המרובים של Sidak למדידות הנפח המשולבות של שלושת המחקרים הכלולים. ערך P מחושב מראה כי יש הבדל מובהק סטטיסטית בין hindlimbs עם בצקת לימפתית המושרה ואת השליטה hindlimbs, במהלך כל שמונת השבועות של מעקב. לניתוח סטטיסטי פרטני על שלושת הפרויקטים הכלולים אנא קרא את הפרוטוקול.
שיטה זו גורמת בצקת לימפתית מובהקת סטטיסטית, נמשך לפחות שמונה שבועות. ההליך יכול לשמש כדי ללמוד את פטריות של בצקת הלימפה כדי לחקור אפשרויות טיפול חדשני. לאחר צפייה בסרטון זה, היית צריך להשיג הבנה של איך לגרום בצקת לימפתית משנית בדיעבד של עכברים, באמצעות שילוב של מיקרוכירורגיה הקרנה לפני ואחרי הניתוח.
לאחר השליטה, ניתן לבצע את ההליך הכירורגי תוך 45 דקות.
