Общая цель этого метода состоит в том, чтобы вызвать последовательную вторичную лимфедему в задней части мышей, не вызывая тяжелой заболеваемости. Этот метод может быть использован для индуцирования вторичной лимфедемы в задней части мышей. Основным преимуществом этого метода является то, что он разрешает незначительные лимфедемы продолжительностью не менее восьми недель, не вызывая тяжелой заболеваемости.
Кто-то новый к процедуре может бороться с микрохирургическими методами. Поэтому мы рекомендуем микрохирургическое обучение и несколько практических процедур для обеспечения успешного результата, а также подготовить исследователя, чтобы он или она могли выполнять процедуру более эффективно. Настройка источника излучения и обезболить мышь, как описано в протоколе.
Поместите 1,5 миллиметра толщиной свинца площадку для обеспечения того, чтобы только область, которая проходит операцию получает облучение. Показанный пример — послеоперационная мышь для уточнения области. Администрирование дозы 10 серого облучения.
Исследователя должны принять меры предосторожности работая с радиацией. В ходе этого эксперимента все облучение проводилось в радиационно-изолированном помещении. И источник радиации был включен только тогда, когда весь персонал покинул помещение.
Взвесь мышь перед операцией. Изучите анестетической глубины лапой или хвостом щепотку теста. Бритье ноги выбрали для процедуры.
Установите поток кислорода до 0,8 литра в минуту. Соедините его с конусом носа. Нанесите офтальмологическую мазь.
Введать 0,5 миллилитров солевого подкожно, предпочтительно в потертости мыши, чтобы предотвратить гиповолемию во время операции. Поместите мышь на хирургическую ткань в положении лежа. Поместите нос конуса над мордой.
Зафиксировать конец задних конечностей осторожно лентой, чтобы предотвратить сдвиг мыши во время операции. Поднимите кожу с гладкими типсами и клип небольшое отверстие примерно пять миллиметров проксимальных к popliteal fossa. Сдвиньте острые ножницы в отверстие и клип к колену, так что разрез заканчивается чуть выше колена.
Убедитесь в том, чтобы не проколоть основные сосуды, подняв кожу миппами во время отсечения. Перемести мышь в положение, подверженное расположению, и завершите окружной разрез. Рассекают кожу на пару миллиметров выше угла.
Не забудьте сохранить ткань влажной стерильным солевым раствором в течение всей процедуры. Убирать кожу проксимальной раны с помощью эластичного ретрактора. И убедитесь, что седалищная вена видна, как показано на видео.
Ввините 0,01 миллилитров Patent Blue V подкожно между вторым и третьим ногой. Аккуратно нажмите лапу пару раз, чтобы распространить патент Blue V.Распределение патента Blue V можно увидеть через микроскоп. Структуры, необходимые для визуализации являются, проксимальный лимфатический сосуд, PLV, popliteal лимфатический узел, PLN, первый дистальный лимфатический сосуд, DLV1, и второй дистальный лимфатический сосуд, DLV2.
Увеличьте, чтобы визуализировать PLV и ligate его с помощью 10-0 нейлоновый шов. Нажмите лапу, чтобы убедиться, что не патентный синий проходит проксималь к лигатуре. Ligate двух дистальных лимфатических сосудов, как показано на.
Нажмите лапу несколько раз еще раз, чтобы убедиться, что ни один патент Blue V проходит проксимальной лигатуры. В этом примере видно, что один из лимфатических сосудов лопается из-за лигатуры, препятствуя лимфотеку. Удалите поплитальный лимфатический узел, лимфатический узел имеет гладкую жемчужную поверхность и окрашен патентом Blue V в отличие от окружающих жировой ткани.
Перед удалением паховой жировой прокладки, прижигать этот сосуд, как показано на показано. Затем удалите жировую прокладку в один кусок. Убедитесь, что нет активного кровотечения.
Это пример расположенного пахового лимфатического узла. Лимфатический узел, расположенный в паховой жировой площадке, редко окрашен патентом Blue V и может быть трудно отличить от жира. Удаление жира площадку в один кусок является лучшим способом для обеспечения того, чтобы лимфатический узел был удален.
Шов кожи края до мышечной фасции, с 6-0 нейлонового шва с использованием миппов и держателя иглы, оставляя зазор от двух до трех миллиметров, чтобы ограничить поверхностный поток лимфы. Это пример готовых швов, в popliteal fossa, боковой стороне заднего конечности, выше колена, и медиальной стороне заднего лапы. Администрирование анальгезии и взвесить мышь после операции, а затем поместить его в шкаф нагревается для восстановления.
Повторите процедуру предоперардного облучения. На этом графике показан комбинированный средний объем хиндлимба из трех отдельных исследований в течение восьми недель после операции. Всего в него был включен 31 мыша.
X-ось представляет недели после операции. Y-ось представляет объем задней части в кубических миллиметрах. Стрелки представляют собой стандартное отклонение.
Следует ожидать, что опухоль после операции и индуцированной лимфедемы будет уменьшаться в течение первых четырех недель. После первых четырех недель мы видим относительно стабильное состояние лимфедемы. Объем контроля задняя часть увеличивается в течение восьми недель, таким образом строго говоря, разница в объеме между лимфедема хиндлимб и контроль задняя, это было неожиданно.
Причина предположила, что мыши использовали свои неоперированные хиндлимб больше, чем прооперированный задний в течение нескольких недель после операции. Это может привести к гипертрофии задней части управления и, возможно, объяснить увеличение объема. Для отдельных цифр по трем исследованиям включены, пожалуйста, прочитайте протокол.
В этой таблице показан многократный сравнительный тест Сидака для комбинированных измерений объема трех включенных исследований. Рассчитанное P-значение показывает, что существует статистически значимая разница между задними конечностями с индуцированной лимфедемой и контрольными задними конечностями, в течение всех восьми недель последующей деятельности. Для индивидуального статистического анализа по трем включенным проектам, пожалуйста, прочитайте протокол.
Этот метод вызывает статистически значимые лимфедемы, продолжительностью не менее восьми недель. Процедура может быть использована для изучения петроциальности лимфедемы и исследования новых вариантов лечения. После просмотра этого видео, вы должны были получить понимание того, как вызвать вторичные лимфедемы в задней части мышей, используя сочетание микрохирургии и до и послеоперационного облучения.
После освоения хирургическая процедура может быть выполнена за 45 минут.
