המחברים מודים על העזרה הניסיונית בפיתוח שיטת חיסון intralymphatic בעכברים מאיריס ארדמן, ברברה פון בויסט, וג&#39;וליה מריה מרטינז-גומז. תודה גם לMaggy אראס וניקולה Cesarovic ומאפשרות לנו להשתמש בתיאטרון כירורגית שלהם לייצור בסרטון זה.

1. בהרדמה של עכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את חומרי ההרדמה על ידי ערבוב של קטמין (הרדמה דיסוציאטיבית) וxylazine (הרגעה ושיכוך כאבים) שבנאגר מלוח. הריכוזים של קטמין ו xylazine בפתרון הסופי הם 12.5 ו2 מ&quot;ג / מיליליטר, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק חומרי ההרדמה לעכברים על ידי ממשל intraperitoneal באמצעות מזרק עם מחט G 25-30. השתמש 0.1 ml/10 גרם של משקל גוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחת עיניים לעיניים של העכברים על מנת למנוע התייבשות של הקרניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבטיח שהעכבר הוא הרדים מספיק על ידי צובט את הרגל או הבוהן שלה עם המלקחיים. אם העכבר אינו מגיב עם רפלקסים לקורט, המשך לניתוח. אם העכבר מגיב לצביטה עם רפלקסים או התכווצויות שרירים, חכה 1-2 דקות ולחזור על בדיקת הצביטה. אם העכבר עדיין מגיב, להחליף את העכבר עם בעלי חיים חדשים ולחזור על ההליכים מהשלב 1.2 ואילך. </li></ol> 2. אני כירורגיncision של אזור מפשעתי של העכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על הגב שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרטב אזור אחד מפשעתי עם אתנול חיטוי (70%). כדי לספק חיטוי טוב יותר, באזור המפשעה עשוי להיות מגולח כדי להסיר חיטוי לפני פרווה עם אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את רגלו האחורית ולכופף את מפרק הירך כדי לייצר זווית כ 90 ° של מפרק הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים microdissecting מעוקלים, לקחת את העור של העכבר באזור המפשעה שבו מפרק הירך הוא כפוף ולמשוך את העור הרטוב מעט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד מחזיק את העור עם המלקחיים, לחתוך חתך קטן (&lt;5 מ&quot;מ) דרך העור באמצעות מספריים כירורגיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הקצה של המספריים הסגורים לתוך החתך ועוד יותר לפתוח את החתך על ידי פתיחת המספריים כשהוא אוחז אותו בתוך החתך. זה יגרום לעור לקרוע וצריך לייצר בקוטר של פחות מ -10 מ&quot;מ. הערה: מקור אור קר עם מדריכי אור גמישים יכול לשמש כדי לשפר את הנראות. במבוגרעכברים, בעיקר זכרים, זיהוי של הבלוטות לימפה עלול להיות קשה בשל הרבה יותר רקמת שומן באזור המפשעה. </li></ol> 3. הזרקת Intralymphatic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את מזרק (0.5 מיליליטר או פחות) עם מחט מזרק G 28-30; פוע קצר עשוי להיות עדיף לפוע ארוך. לשאוב 10 μl של החיסון להיות מוזרק ולהבטיח שהמזרק הוא חופשי של אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למקם את הצומת לימפה מפשעתי עם עזרה של המלקחיים המעוקלים והקצה של המספריים הסגורים. הבלוטות לימפה תופיע אפרפרות בתוך רקמת השומן לבנבן יותר וניתן לזהות עוד דרך נימים מביא efferent וכניסה וביציאה לימפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשתק את הבלוטות לימפה על ידי מחזיק אותו בין זרועות המלקחיים המעוקלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את המזרק ולהכניס את המחט לתוך הבלוטה לימפה עם השיפוע כלפי מעלה; מוודא השלם שפוע נכנס לימפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את החיסון (10 μl). אם ההנהון לימפהדואר הוא נפיחות (פיצוץ), ההזרקה ניתן להניח מוצלחת. אם המחט אינה ממוקמת עמוק מספיק לבלוטות לימפה, כל החיסון מסוים או עלול לדלוף החוצה ולא להיכנס לימפה. אם המחט מוחדרת עמוקה מדי, החיסון המוזרק ישוחרר תת עורי מתחת לימפה. במקרה של האחרון, לחזור על ההזרקה או להחליף את העכבר עם עכבר מטופל חדש. </li></ol> 4. סגירת החתך על ידי תפירה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח חפיסת תפר כירורגי סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחוז במחט התפר עם בעל מחט בחלק הדיסטלי של גוף המחט. הדק את בעל המחט באמצעות אחיזתו עד שתופס את מחגר הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחוז בעור בצד אחד של החתך באמצעות מלקחיים (בהתאם להעדפותיו של המנתח, שיניים או בלתי שיני מלקחיים או ווי עור עשוי לשמש). הכנס את ca המחט. 2-3 מ&quot;מ מהקצה של החתך, שנכנס מהצד החיצוני של העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוסen האחיזה של העור עם המלקחיים ולהבין את הצד השני של החתך עם המלקחיים. הכנס את ca המחט. 2-3 מ&quot;מ מהקצה של החתך, שנכנס מהפנימי של העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את בעל המחט ולתפוס את קצה מחט עם המלקחיים. משוך את המחט עם לדרוך דרך העור, משאיר את אורך נוח של לדרוך מחוץ לנקודת מחט ההכנסה הראשונה (אם כמה עכברים יטופלו, להשאיר סוף קצר יותר; 5-10 עכברים יכולים להיות מופעלים על עם מחט תפר אחד / לדרוך). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את הקשר המועדף על פי פרוטוקולי מנתח סטנדרטיים. תפר אחד די אם החתך אינו גדול מ10 מ&quot;מ. לחתכים גדולים יותר, להפוך את התפר שני. </li></ol> 5. טיפול שלאחר תפעולי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בכלוב ולכסות עם רקמות כדי להתחמם. כאשר מטפלים עכברים מרובים, למקם אותם קרוב אחד לשני כדי להתחמם. לחלופין, למקם את העכברים על משטח חם עד שהם התעוררועד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לעכברים עד שהם מתעוררים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לעכברים יומיים בכל הקשור לריפוי פצע, כמו גם סימפטומים קליניים אחרים, כגון זיהומים בפצע. הפצע הוא בדרך כלל סגור במידה מספקת בתוך יומיים ורפאו בתוך שבעה ימים של ההליך. </li></ol>

<ol>
	<li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+intralymphatic+injection+of+peptide+vaccines+enhances+immunogenicity.">Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity.</a> Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).</li><li>Maloy, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+immunization+enhances+DNA+vaccination.">Intralymphatic immunization enhances DNA vaccination.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 3299-3303 (2001).</li><li>Smith, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+DNA+vaccination+by+sequential+injection+of+lymph+nodes+with+plasmid+vectors+and+peptides.">Enhancing DNA vaccination by sequential injection of lymph nodes with plasmid vectors and peptides.</a> Vaccine. 27, 2603-2615 (2009).</li><li>Kreiter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranodal+vaccination+with+naked+antigen-encoding+RNA+elicits+potent+prophylactic+and+therapeutic+antitumoral+immunity.">Intranodal vaccination with naked antigen-encoding RNA elicits potent prophylactic and therapeutic antitumoral immunity.</a> Cancer Res. 70, 9031-9040 (2010).</li><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+kinetics+determines+immune+reactivity.">Antigen kinetics determines immune reactivity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 5189-5194 (2008).</li><li>Smith, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node-targeted+immunotherapy+mediates+potent+immunity+resulting+in+regression+of+isolated+or+metastatic+human+papillomavirus-transformed+tumors.">Lymph node-targeted immunotherapy mediates potent immunity resulting in regression of isolated or metastatic human papillomavirus-transformed tumors.</a> Clin. Cancer Res. 15, 6167-6176 (2009).</li><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+ligands+as+adjuvants+in+allergen-specific+immunotherapy.">Toll-like receptor ligands as adjuvants in allergen-specific immunotherapy.</a> Clin. Exp. Allergy. 35, 1591-1598 (2005).</li><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+denaturation,+a+simple+method+to+improve+the+immunotherapeutic+potential+of+allergens.">Heat denaturation, a simple method to improve the immunotherapeutic potential of allergens.</a> Eur. J. Immunol. 35, 3591-3598 (2005).</li><li>Martinez-Gomez, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+injections+as+a+new+administration+route+for+allergen-specific+immunotherapy.">Intralymphatic injections as a new administration route for allergen-specific immunotherapy.</a> Int. Arch. Allergy Immunol. 150, 59-65 (2009).</li><li>Martinez-Gomez, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+MHC+class+II+pathway+of+antigen+presentation+enhances+immunogenicity+and+safety+of+allergen+immunotherapy.">Targeting the MHC class II pathway of antigen presentation enhances immunogenicity and safety of allergen immunotherapy.</a> Allergy. 64, 172-178 (2009).</li><li>Mohanan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+routes+affect+the+quality+of+immune+responses:+A+cross-sectional+evaluation+of+particulate+antigen-delivery+systems.">Administration routes affect the quality of immune responses: A cross-sectional evaluation of particulate antigen-delivery systems.</a> J. Control Release. 147, 342-349 (2010).</li><li>Waeckerle-Men, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+targeting+of+BCG+vaccines+amplifies+CD4+and+CD8+T-cell+responses+and+protection+against+Mycobacterium+tuberculosis.">Lymph node targeting of BCG vaccines amplifies CD4 and CD8 T-cell responses and protection against Mycobacterium tuberculosis.</a> Vaccine. 31, 1057-1064 (2013).</li><li>von Beust, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+therapeutic+index+of+CpG+oligodeoxynucleotides+by+intralymphatic+administration.">Improving the therapeutic index of CpG oligodeoxynucleotides by intralymphatic administration.</a> Eur. J. Immunol. 35, 1869-1876 (2005).</li><li>Senti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+immunotherapy+for+cat+allergy+induces+tolerance+after+only+3+injections.">Intralymphatic immunotherapy for cat allergy induces tolerance after only 3 injections.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 129, 1290-1296 (2012).</li><li>Senti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+allergen+administration+renders+specific+immunotherapy+faster+and+safer:+a+randomized+controlled+trial.">Intralymphatic allergen administration renders specific immunotherapy faster and safer: a randomized controlled trial.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 17908-17912 (2008).</li><li>Lesterhuis, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Route+of+administration+modulates+the+induction+of+dendritic+cell+vaccine-induced+antigen-specific+T+cells+in+advanced+melanoma+patients.">Route of administration modulates the induction of dendritic cell vaccine-induced antigen-specific T cells in advanced melanoma patients.</a> Clin. Cancer Res. 17, 5725-5735 (2011).</li><li>Fadul, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+response+in+patients+with+newly+diagnosed+glioblastoma+multiforme+treated+with+intranodal+autologous+tumor+lysate-dendritic+cell+vaccination+after+radiation+chemotherapy.">Immune response in patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccination after radiation chemotherapy.</a> J. Immunother. 34, 382-389 (2011).</li><li>Eizenberg, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceptance+of+Intanza(R)+9+mug+intradermal+influenza+vaccine+in+routine+clinical+practice+in+Australia+and+Argentina.">Acceptance of Intanza(R) 9 mug intradermal influenza vaccine in routine clinical practice in Australia and Argentina.</a> Adv. Ther. 28, 640-649 (2011).</li><li>Durando, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjuvants+and+alternative+routes+of+administration+towards+the+development+of+the+ideal+influenza+vaccine.">Adjuvants and alternative routes of administration towards the development of the ideal influenza vaccine.</a> Hum. Vaccin. 7, 29-40 (2011).</li><li>Barth, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+trial+of+ex+vivo+CD40L+activation+of+a+dendritic+cell+vaccine+in+colorectal+cancer+patients:+tumor-specific+immune+responses+are+associated+with+improved+survival.">A randomized trial of ex vivo CD40L activation of a dendritic cell vaccine in colorectal cancer patients: tumor-specific immune responses are associated with improved survival.</a> Clin. Cancer Res. 16, 5548-5556 (2010).</li><li>Schwaab, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+immunologic+effects+of+intranodal+autologous+tumor+lysate-dendritic+cell+vaccine+with+Aldesleukin+(Interleukin+2)+and+IFN-{alpha}2a+therapy+in+metastatic+renal+cell+carcinoma+patients.">Clinical and immunologic effects of intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccine with Aldesleukin (Interleukin 2) and IFN-{alpha}2a therapy in metastatic renal cell carcinoma patients.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4986-4992 (2009).</li><li>Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+immunotherapy.">Intralymphatic immunotherapy.</a> Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 9, 537-543 (2009).</li><li>Catron, D. M., Itano, A. A., Pape, K. A., Mueller, D. L., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+the+first+50+hr+of+the+primary+immune+response+to+a+soluble+antigen.">Visualizing the first 50 hr of the primary immune response to a soluble antigen.</a> Immunity. 21, 341-347 (2004).</li><li>Itano, A. A., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+presentation+to+naive+CD4+T+cells+in+the+lymph+node.">Antigen presentation to naive CD4 T cells in the lymph node.</a> Nat. Immunol. 4, 733-739 (2003).</li><li>Johansen, P., Mohanan, D., Martinez-Gomez, J. M., Kundig, T. M., Gander, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lympho-geographical+concepts+in+vaccine+delivery.">Lympho-geographical concepts in vaccine delivery.</a> J. Control Release. 148, 56-62 (2010).</li><li>Johansen, P., von Moos, S., Mohanan, D., Kundig, T. M., Senti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+routes+for+allergen+immunotherapy.">New routes for allergen immunotherapy.</a> Hum. Vacc. Immunother. 8, 1525-1533 (2012).</li><li>Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+immunotherapy:+from+the+rationale+to+human+applications.">Intralymphatic immunotherapy: from the rationale to human applications.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 352, 71-84 (2011).</li><li>Duthie, M. S., Windish, H. P., Fox, C. B., Reed, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+defined+TLR+ligands+as+adjuvants+within+human+vaccines.">Use of defined TLR ligands as adjuvants within human vaccines.</a> Immunol. Rev. 239, 178-196 (2011).</li><li>Ribas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-lymph+node+prime-boost+vaccination+against+Melan+A+and+tyrosinase+for+the+treatment+of+metastatic+melanoma:+results+of+a+phase+1+clinical+trial.">Intra-lymph node prime-boost vaccination against Melan A and tyrosinase for the treatment of metastatic melanoma: results of a phase 1 clinical trial.</a> Clin. Cancer Res. 17, 2987-2996 (2011).</li><li>Bedrosian, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranodal+administration+of+peptide-pulsed+mature+dendritic+cell+vaccines+results+in+superior+CD8++T-cell+function+in+melanoma+patients.">Intranodal administration of peptide-pulsed mature dendritic cell vaccines results in superior CD8+ T-cell function in melanoma patients.</a> J. Clin. Oncol. 21, 3826-3835 (2003).</li><li>Lesimple, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injection+by+various+routes+of+melanoma+antigen-associated+macrophages:+biodistribution+and+clinical+effects.">Injection by various routes of melanoma antigen-associated macrophages: biodistribution and clinical effects.</a> Cancer Immunol. Immunother. 52, 438-444 (2003).</li><li>Brown, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-transduced+dendritic+cells+injected+into+skin+or+lymph+node+prime+potent+simian+immunodeficiency+virus-specific+T+cell+immunity+in+monkeys.">Adenovirus-transduced dendritic cells injected into skin or lymph node prime potent simian immunodeficiency virus-specific T cell immunity in monkeys.</a> J. Immunol. 171, 6875-6882 (2003).</li><li>Fong, L., Brockstedt, D., Benike, C., Wu, L., Engleman, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+injected+via+different+routes+induce+immunity+in+cancer+patients.">Dendritic cells injected via different routes induce immunity in cancer patients.</a> J. Immunol. 166, 4254-4259 (2001).</li></ol>

TMK נקרא על שמו כממציא פטנטים העוסקים בטיפול החיסוני intralymphatic באדם. TMK היה יועץ מדעי וקיבל הוצאות נסיעה מImVisioN GmbH, Cytos ביוטכנולוגיה, חברת MannKind, ויש לי XBiotech ארה&quot;ב בע&quot;מ PJ שום עניין סכסוך לחשוף.

חיסונים וטיפול חיסוני Intralymphatic הוכחו כמתאימים לגירוי של שני תגובות נוגדנים ותגובות תאי T. כפי שמודגם במאמר וידאו זה, הליך intralymphatic של חיסון הוא שיטה מהירה וקלה להמרצת תגובה חיסונית חזקה בעכברים. מנתח מיומן יכול לבצע את ההליך ב3-4 דקות. המפגש יכול גם להיות משותף בין שני מנ...

חיסונים בדרך כלל מוזרקים מתחת לעור או לשריר לגירוי של מערכת החיסונית. ההצלחה של הליך זה דורשת ניקוז יעיל של חיסון לבלוטות הלימפה שבו תאי המציגים אנטיגנים יכולים לקיים אינטראקציה עם לימפוציטים לדור של T-ותגובות B-cell. בנוסף, הכוח והסוג של תגובה החיסונית המושרית תלוי גם בצפיפות או התדירות של אינטראקציות כאלה, כמו גם את המיקרו עצמו, במיוחד את התוכן של ציטוקינים. כחלק קטן בלבד של חיסון המוזרק לרקמה היקפית מגיע לבלוטות לימפה, חיסונים של עכברים ובני אדם על ידי הזרקה ישירה של החיסון לבלוטות הלימפה, האתר היו תגובה חיסונית נוצרות, כבר בוצע. באדם, ההליך מונחה על ידי אולטרסאונד, הליך משמש גם לניהול סוכני הדמיה להדמיה ואבחון במערכת הלימפה. בעכברים, ההליך הוא פולשני. כאן, incisio קטן (5-10 מ&quot;מ)n מורכב באזור המפשעה של חיות הרדים 1, הבלוטות לימפה היא מקומית ומשותק עם מלקחיים, ונפח של 10-20 μl של החיסון מוזרק תחת שליטה חזותית; 10 μl משמש לזריקות הראשונות ובעכברים צעירים עם בלוטות לימפה קטנות, בעוד שניתן להזריק 20 μl לבלוטות הלימפה של מבוגר או עכברים כבר דרוכים, שיש לי בלוטות לימפה גדולות יותר. החתך יכול להיות סגור עם תפר אחד באמצעות תפרים כירורגית. לפי שיטה זו, עכברים שחוסנו עם פלסמיד דנ&quot;א 2,3, RNA שליח 4, פפטיד 1,3,5,6, חלבון 7-10, חלקיקי 11, חיידקי 12 כמו גם אדג&#39;ובנטים 7,13, ושיפור חזק של חיסון תגובות נגד כל הסוג של חיסונים כבר נצפו. שיטת intralymphatic של החיסון מתאימה במיוחד במקרים בהם חיסון קונבנציונלי מייצר חסינות בלתי מספיקה או שבו הסכום של חיסון זמין הוא מוגבל או very יקר. באדם, בשיטת intralymphatic של חיסון הוחל חולי אלרגיה 14,15 או לחולים עם הסרטן 16-21. למרות שהרעיון הנוכחי הוא ששיטת intralymphatic היא יותר פולשניים יותר מאשר בשיטות אחרות, כגון זריקות זריקות תוך שרירית ותת עורית, לתפיסת הכאב היא לא גבוהה יותר מאשר לאחר ניקור ורידי 15. צפוי כי חיסון intralymphatic יהפוך חלופי או משלימים לשיטות אחרות של חיסונים מניעתי וטיפוליים במיוחד. מאמר זה מתאר בפרטים כיצד ההליך של חיסון intralymphatic מבוצע בעכברים. כל ההליכים שתוארו, אושרו על ידי וטרינרית סוכנות Cantonal ציריך ומבוצעים על פי הנחיות פדרליות שוויצריים והנחיות על ההגנה על בעלי החיים המשמשים למטרות מדעיות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="653">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">Ketamine (Ketasol-100)</td>
			<td style="width:135px;">Graeub AG, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Anesthetics</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:233px;">Xylazine (Rompun)</td>
			<td style="width:135px;">Bayer, Germany</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Anesthetics</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Viscotears Eye-Gel</td>
			<td style="width:135px;">Novartis, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>To keep eyes from drying out during anesthesia.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">BD Micro-Fine 0.5 ml</td>
			<td style="width:135px;">BD Medical, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>29 G Insulin syringes with permanently attached needles</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">6-0 Dermalon Monofilament nylon</td>
			<td style="width:135px;">Covidien, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For sutures (0.7 metric, 18G, 45 cm, Blue)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">Curved forceps, 4.5 inch</td>
			<td style="width:135px;">Polymed, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For incision and holding of lymph node</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">Straight surgical scissors, 4.5 inch</td>
			<td style="width:135px;">Polymed, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For incision</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">Needle holder, 5.5 inch</td>
			<td style="width:135px;">Polymed, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>To close incision with suture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:233px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intralymphatic immunotherapy and vaccination in mice

חיסונים בדרך כלל מוזרקים מתחת לעור או לשריר לגירוי של תגובות חיסון. ההצלחה של זה דורשת ניקוז יעיל של חיסון לבלוטות הלימפה שבו תאי המציגים אנטיגנים יכולים לקיים אינטראקציה עם לימפוציטים לדור של התגובות החיסונית רצתה. הכוח והסוג של תגובה החיסונית המושרית תלוי גם בצפיפות או התדירות של אינטראקציות, כמו גם את המיקרו, במיוחד התוכן של ציטוקינים. כמו שרק שבריר זעיר של חיסונים מוזרקים שולי מגיע לבלוטות הלימפה, חיסונים של עכברים ובני אדם שבוצעו על ידי הזרקה ישירה של חיסון לבלוטות לימפה מפשעתי, כלומר הזרקת intralymphatic. באדם, ההליך מונחה על ידי אולטרסאונד. בעכברים, חתך קטן (5-10 מ&quot;מ) הוא עשה באזור המפשעה של חיות מורדמות, הבלוטות לימפה היא מקומיות ומשותקת עם מלקחיים, ונפח של 10-20 μl של החיסון מוזרק תחת שליטה חזותית.החתך נסגר עם תפר אחד באמצעות תפרים כירורגית. עכברים שחוסנו עם פלסמיד דנ&quot;א, רנ&quot;א, פפטיד, חלבון, חלקיקים, חיידקים, כמו גם אדג&#39;ובנטים, ושיפור חזק של תגובות חיסוניים נגד כל הסוג של חיסונים נצפה. שיטת intralymphatic של החיסון מתאימה במיוחד במצבים שבם חיסון קונבנציונלי מייצר חסינות בלתי מספיקה או שבו הסכום של חיסון זמין מוגבל.

ההליך של זריקות intralymphatic בעכברים, למרות האופי כירורגית, הוא ישר קדימה ומהיר יחסית. אדם מאומן יכול לבצע את ההליך ב3-4 דקות. החתך שנסגר עם תפר אחד בדרך כלל מרפא בתוך יומיים (איור 1) חיסון או חיסון Intralymphatic שבוצע עם ה-mRNA, ה-DNA פלסמי...

Watch this Scientific Journal Video about Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice at JoVE.com

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

חיסון המניעה והטיפולי לעתים קרובות לא מצליח לעורר תגובה חיסונית חזקה בשל ניקוז שבוע של החיסון לבלוטות הלימפה ומעורבות עניות וכתוצאה מכך של תאים חיסוניים. על ידי הזרקה ישירה של חיסון לבלוטות הלימפה, הזרקת intralymphatic כביכול, יעילות חיסון ניתן לשפר מאוד וניתן להפחית מינוני חיסון.

Intralymphatic חיסוני וחיסון בעכברים

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

intralymphatic-immunotherapy-and-vaccination-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

22.9K Views.  University Hospital Zurich.  חיסון המניעה והטיפולי לעתים קרובות לא מצליח לעורר תגובה חיסונית חזקה בשל ניקוז שבוע של החיסון לבלוטות הלימפה ומעורבות עניות וכתוצאה מכך של תאים חיסוניים. על ידי הזרקה ישירה של חיסון לבלוטות הלימפה, הזרקת intralymphatic כביכול, יעילות חיסון ניתן ?...

Video: Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into mouse tail veins and colonize in the lungs, thereby, resembling the last steps of tumor cell spontaneous metastasis: survival in the circulation, extravasation and colonization in the distal organs. From a therapeutic point of view, the experimental metastasis model is the simplest and ideal model since the target of therapies is often the end point of metastasis: established metastatic tumor in the distal organ. In this model, tumor cells are injected i.v into mouse tail veins and allowed to colonize and grow in the lungs. Tumor-specific CTLs are then injected i.v into the metastases-bearing mouse. The number and size of the lung metastases can be controlled by the number of tumor cells to be injected and the time of tumor growth. Therefore, various stages of metastasis, from minimal metastasis to extensive metastasis, can be modeled. Lung metastases are analyzed by inflation with ink, thus allowing easier visual observation and quantification.

An experimental lung metastasis and CTL immunotherapy mouse model for analysis of tumor cells-T cell interaction in vivo.

גרורה ניסויית חיסוני CTL המאמצת העברת דגם עכבר

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Protocol for Recombinant RBD-based SARS Vaccines: Protein Preparation, Animal Vaccination and Neutralization Detection

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide variety of pathogens 1-3. Since the mammalian cell system is capable of post-translational modification, thus forming properly folded and glycosylated proteins, recombinant proteins expressed in mammalian cells have shown the greatest potential to maintain high antigenicity and immunogenicity 4-6.
Although no new cases of SARS have been reported since 2004, future outbreaks are a constant threat; therefore, the development of vaccines against SARS-CoV is a prudent preventive step and should be carried out. The RBD of SARS-CoV S protein plays important roles in receptor binding and induction of specific neutralizing antibodies against virus infection 7-9. Therefore, in this protocol, we describe novel methods for developing a RBD-based subunit vaccine against SARS. Briefly, the recombinant RBD protein (rRBD) was expressed in culture supernatant of mammalian 293T cells to obtain a correctly folded protein with proper conformation and high immunogenicity 6. The transfection of the recombinant plasmid encoding RBD to the cells was then performed using a calcium phosphate transfection method 6,10 with some modifications. Compared with the lipid transfection method 11,12, this modified calcium phosphate transfection method is cheaper, easier to handle, and has the potential to reach high efficacy once a transfection complex with suitable size and shape is formed 13,14. Finally, a SARS pseudovirus neutralization assay was introduced in the protocol and used to detect the neutralizing activity of sera of mice vaccinated with rRBD protein. This assay is relatively safe, does not involve an infectious SARS-CoV, and can be performed without the requirement of a biosafety-3 laboratory 15.
The protocol described here can also be used to design and study recombinant subunit vaccines against other viruses with class I fusion proteins, for example, HIV, respiratory syncytial virus (RSV), Ebola virus, influenza virus, as well as Nipah and Handra viruses. In addition, the methods for generating a pseudovirus and subsequently establishing a pseudovirus neutralization assay can be applied to all these viruses.

This protocol describes a general procedure for studying recombinant receptor-binding domain (RBD)-based subunit vaccines against SARS. It includes methods for transfection and expression of RBD protein in 293T cells, immunization of mice with RBD and detection of neutralization activity of mouse sera using an established SARS pseudovirus neutralization assay.

פרוטוקול רקומביננטי מזוכך מבוססי חיסונים הסארס: הכנת חלבון, חיסון בעלי חיים איתור נטרול

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide ...

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be established. The method described below, prepared in accordance with Good Manufacturing Process (GMP) guidelines, is an optimization of the most common ex vivo preparation method for generating large numbers of DCs for clinical studies 2.
Our method utilizes the synthetic TLR 3 agonist Polyinosinic-Polycytidylic Acid-poly-L-lysine Carboxymethylcellulose (Poly-ICLC) to stimulate the DCs. Our previous study established that Poly-ICLC is the most potent individual maturation stimulus for human DCs as assessed by an upregulation of CD83 and CD86, induction of interleukin-12 (IL-12), tumor necrosis factor (TNF), interferon gamma-induced protein 10 (IP-10), interleukmin 1 (IL-1), and type I interferons (IFN), and minimal interleukin 10 (IL-10) production.
DCs are differentiated from frozen peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) obtained by leukapheresis. PBMCs are isolated by Ficoll gradient centrifugation and frozen in aliquots. On Day 1, PBMCs are thawed and plated onto tissue culture flasks to select for monocytes which adhere to the plastic surface after 1-2 hr incubation at 37 &deg;C in the tissue culture incubator. After incubation, the lymphocytes are washed off and the adherent monocytes are cultured for 5 days in the presence of interleukin-4 (IL-4) and granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) to differentiate to immature DCs. On Day 6, immature DCs are pulsed with the keyhole limpet hemocyanin (KLH) protein which serves as a control for the quality of the vaccine and may boost the immunogenicity of the vaccine 3. The DCs are stimulated to mature, loaded with peptide antigens, and incubated overnight. On Day 7, the cells are washed, and frozen in 1 ml aliquots containing 4 - 20 x 106 cells using a controlled-rate freezer. Lot release testing for the batches of DCs is performed and must meet minimum specifications before they are injected into patients.

The most commonly used method for generating large numbers of autologous dendritic cells (DCs) for use in tumor immunotherapy is described. The method uses IL-4 and GM-CSF to differentiate DCs from monocytes. The immature DCs are stimulated to mature and then loaded with antigens before they are injected back into the patient.

הכנת תאים דנדריטים גידול Antigen טעון בוגרים לחיסוניים

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat because of increased worldwide exchanges and human populations penetrating more and more natural ecosystems. A good example of such an emerging situation is chikungunya virus epidemics of 2005-2006 in the Indian Ocean. Recent progresses in our understanding of cellular pathways controlling viral replication suggest that compounds targeting host cell functions, rather than the virus itself, could inhibit a large panel of RNA viruses. Some broad-spectrum antiviral compounds have been identified with host target-oriented assays. However, measuring the inhibition of viral replication in cell cultures using reduction of cytopathic effects as a readout still represents a paramount screening strategy. Such functional screens have been greatly improved by the development of recombinant viruses expressing reporter enzymes capable of bioluminescence such as luciferase. In the present report, we detail a high-throughput screening pipeline, which combines recombinant measles and chikungunya viruses with cellular viability assays, to identify compounds with a broad-spectrum antiviral profile.

In vitro assays to measure virus replication have been greatly improved by the development of recombinant RNA viruses expressing luciferase or other enzymes capable of bioluminescence. Here we detail a high-throughput screening pipeline that combines such recombinant strains of measles and chikungunya viruses to isolate broad-spectrum antivirals from chemical libraries.

הקרנת תפוקה גבוהה לספקטרום רחב כימיים מעכבי RNA וירוסים

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo to express chimeric antigen receptors specific for glioma antigens (CAR T cells). The expansion and function of adoptively transferred CAR T cells can be potentiated by the lymphodepletive and tumoricidal effects of standard of care chemotherapy and radiotherapy. We describe a method for generating CAR T cells targeting EGFRvIII, a glioma-specific antigen, and evaluating their efficacy when combined with a murine model of glioblastoma standard of care. T cells are engineered by transduction with a retroviral vector containing the anti-EGFRvIII CAR gene. Tumor-bearing animals are subjected to host conditioning by a course of temozolomide and whole brain irradiation at dose regimens designed to model clinical standard of care. CAR T cells are then delivered intravenously to primed hosts. This method can be used to evaluate the antitumor efficacy of CAR T cells in the context of standard of care.

The lymphodepletive and immunomodulatory effects of chemotherapy and radiation standard of care can be leveraged to enhance the antitumor efficacy of T cell immunotherapy. We outline a method for generating EGFRvIII-specific chimeric antigen receptor (CAR) T cells and administering them in the context of glioblastoma standard of care.

דור של תאי T CAR למאמצת תרפיה בהקשר של גליובלסטומה טיפול סטנדרטי

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol specifically intended to measure antigen-specific killing without an infection. This protocol is designed and describes methods to overcome these limitations by allowing for the detection of antigen-specific killing of a target cell by CD8+ T cells in vivo. This is accomplished by merging a vaccination model with a traditional CFSE-labeled target killing assay. This combination allows the researcher to assess the antigen-specific CTL potential directly and quickly as the assay is not dependent upon tumor growth or infection. In addition, the readout is based on flow cytometry and so should be readily accessible to most researchers. The major limitation of the study is identifying the timeline in vivo that is appropriate to the hypothesis being tested. Variations in antigen strength and mutations in the T cells that may result in differential cytolytic function need to be carefully assessed to determine the optimal time for cell harvest and assessment. The appropriate concentration of peptide for vaccination has been optimized for hgp10025-33 and OVA257-264, but further validation would be needed for other peptides that may be more appropriate to a given study. Overall, this protocol allows a quick assessment of killing function in vivo and can be adapted to any given antigen.

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

The goal of this protocol is to allow for detection of in vivo antigen-specific killing of a target cell in a murine model.

אין ויוו Assay גילוי של הפונקציה Cytolytic תא T אנטיגן ספציפי באמצעות מודל החיסון

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the antibody needs to distinguish between highly related structures (e.g., a normal protein and a mutated version thereof). The current way of generating such discriminative mAbs involves extensive screening of multiple Ab-producing B cells, which is both costly and time consuming. We propose here a rapid and cost-effective method for the generation of discriminative, fully human mAbs starting from human blood circulating B lymphocytes. The originality of this strategy is due to the selection of specific antigen binding B cells combined with the counter-selection of all other cells, using readily available Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC). Once specific B cells are isolated, cDNA (complementary deoxyribonucleic acid) sequences coding for the corresponding mAb are obtained using single cell Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) technology and subsequently expressed in human cells. Within as little as 1 month, it is possible to produce milligrams of highly discriminative human mAbs directed against virtually any desired antigen naturally detected by the B cell repertoire.

We describe a method for the production of human antibodies specific for an antigen of interest, starting from rare B cells circulating in human blood. Generation of these natural antibodies is efficient and rapid, and the antibodies obtained can discriminate between highly related antigens.

דור שמסווגת נוגדנים חד-שבטיים אנושי מתאי B אנטיגן ספציפי נדיר במחזור הדם

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce efficient therapies have been proposed over the last decade. Among the promising candidates for designing novel therapeutic strategies, cellular immunotherapies have been targeted to eliminate highly invasive and chemo-radioresistant tumor cells, likely involved in a rapid and fatal relapse of this cancer. Thus, administration(s) of allogeneic GBM-reactive immune cell effectors, such as human V&#978;9V&#948;2 T lymphocytes, in the vicinity of the tumor would represents a unique opportunity to deliver efficient and highly concentrated therapeutic agents directly into the site of brain malignancies. Here, we present a protocol for the preparation and the stereotaxic administration of allogeneic human lymphocytes in immunodeficient mice carrying orthotopic human primary brain tumors. This study provides a preclinical proof-of-concept for both the feasibility and the antitumor efficacy of these cellular immunotherapies that rely on stereotactic injections of allogeneic human lymphocytes within intrabrain tumor beds.

Here, we present a protocol for the preparation and the stereotaxic administration of allogeneic human lymphocytes in immunodeficient mice carrying orthotopic human primary brain tumors. This study provides a proof-of-concept for both the feasibility and the antitumor efficacy of intrabrain-delivered cellular immunotherapies.

העברת סטיאוטטי המאמצת של תאים חיסוניים ציטוטוקסיות במודלים מאתר של האדם Orthotopic גליובלסטומה Xenografts

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...

Optimized Interferon-gamma ELISpot Assay to Measure T Cell Responses in the Guinea Pig Model after Vaccination

The guinea pig has played a pivotal role as a relevant small animal model in the development of vaccines for infectious diseases such as tuberculosis, influenza, diphtheria, and viral hemorrhagic fevers. We have demonstrated that plasmid-DNA (pDNA) vaccine delivery into the skin elicits robust humoral responses in the guinea pig. However, the use of this animal to model immune responses was somewhat limited in the past due to the lack of available reagents and protocols to study T cell responses. T cells play a pivotal role in both immunoprophylactic and immunotherapeutic mechanisms. Understanding T cell responses is crucial for the development of infectious disease and oncology vaccines and accommodating delivery devices. Here we describe an interferon-gamma (IFN-&#947;) enzyme-linked immunospot (ELISpot) assay for guinea pig peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). The assay enables researchers to characterize vaccine-specific T-cell responses in this important rodent model. The ability to assay cells isolated from the peripheral blood provides the opportunity to track immunogenicity in individual animals.

The development of the interferon-gamma ELISpot assay for guinea pig PBMCs allows the characterization of T-cell responses in this highly relevant model for studying infectious diseases. We have applied the assay to measure T cell responses associated with intradermal delivery of DNA vaccines.

אופטימיזציה אינטרפרון-גמא ELISpot Assay מידה תגובות תא T במודל שפן לאחר החיסון

The guinea pig has played a pivotal role as a relevant small animal model in the development of vaccines for infectious diseases such as tuberculosis, ...

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases reported annually. The control of RABV circulation in wildlife reservoirs is typically accomplished by a strategy of oral rabies vaccination (ORV). Currently no wildlife ORV program exists in Puerto Rico. Research into oral rabies vaccines and various bait types for mongooses has been conducted with promising results. Monitoring the success of ORV relies on estimating bait uptake by target species, which typically involves evaluating a change in RABV neutralizing antibodies (RVNA) post vaccination. This strategy may be difficult to interpret in areas with an active wildlife ORV program or in areas where RABV is enzootic and background levels of RVNA are present in reservoir species. In such situations, a biomarker incorporated with the vaccine or the bait matrix may be useful. We offered 16 captive mongooses placebo ORV baits containing ethyl-iophenoxic acid (et-IPA) in concentrations of 0.4% and 1% inside the bait and 0.14% in the external bait matrix. We also offered 12 captive mongooses ORV baits containing methyl-iophenoxic acid (me-IPA) in concentrations of 0.035%, 0.07% and 0.14% in the external bait matrix. We collected a serum sample prior to bait offering and then weekly for up to eight weeks post offering. We extracted Iophenoxic acids from sera into acetonitrile and quantified using liquid chromatography/mass spectrometry. We analyzed sera for et-IPA or me-IPA by liquid chromatography-mass spectrometry. We found adequate marking ability for at least eight and four weeks for et- and me-IPA, respectively. Both IPA derivatives could be suitable for field evaluation of ORV bait uptake in mongooses. Due to the longevity of the marker in mongoose sera, care must be taken to not confound results by using the same IPA derivative during consecutive evaluations.

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

We offered captive mongooses placebo oral rabies vaccine baits with ethyl or methyl iophenoxic acid as a biomarker and verified bait uptake using a novel liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method.

ניתוח של חומצה והידרוקסימית מקבילים בנמייה הודית קטנה (הרבלס) סרה לשימוש בתור חיסון בעל פה כלבת מרקר ביולוגי

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...