הפרוטוקול שלנו מספק תהליך ברור לחקר ההשפעות הנוירו-התנהגותיות של החומרים והמזהמים המעניינים את זחלי הזברה ולחשיפת הנוירוטוקסיות הפוטנציאלית של סוכנים אלה. הטכניקה יכולה להתבצע באמצעות בדיקות תפוקה גבוהה של נוירו-התנהגותים במודל הזברה-דג. שיטה זו יכולה להיות מיושמת כדי להעריך את ההשפעות הנוירו-התנהגותיות של מזהמים כדי להדגים נוירוטוקסיות פוטנציאלית עלינו בני האדם, שכן לגנום זברה-דג יש חומולוגיה גבוהה עם בני אדם, כך שהוא יכול לספק אינדיקציות לניהול כימי ולבעיות בריאות הציבור הנגרמות על ידי מזהמים.
כמו זברהfish יש את היתרון של הקרנת תפוקה גבוהה, שיטה זו מספקת תובנה הן פיתוח של תרופות פסיכוטרופיות ומחקר טוקסיקולוגיה סביבתית. אל תהיה מאוים על לימוד הניסוי הראשון. אם תעקוב אחר הפרוטוקול, תהיה לך תוצאה מוצלחת.
לפחות שעתיים לפני ביצוע ניסוי, להגדיר את טמפרטורת החדר ל 28 מעלות צלזיוס ולהוסיף 800 microliters של פתרון חשיפה לכל באר של מיקרופלסטיק 48 היטב. לאחר מכן, השתמש פיפט מיליליטר אחד עם קצה שונה להעביר זחל אחד ב 200 microliters של פתרון חשיפה לכל באר של microplate כהכנה לניסוי זווית קטר נתיב. כדי להכין מיקרופלסטיק של שש בארות לניסויי התנהגות חברתית, הוסיפו ארבעה מיליליטר של פתרון חשיפה לכל באר של ששת המיקרו-מפלסים היטב והעברת שני זחלים ב-200 מיקרוליטר של פתרון חשיפה לכל באר.
לפני תחילת הבדיקה, פתח את תוכנת ניטור תפוקה גבוהה ובחר את מודול זוויות הנתיב סיבובי מעקב. העבר את המיקרופלסטיק 48 באר לפלטפורמת ההקלטה ולמשוך את העטיפה. לחץ על קובץ והפיק פרוטוקול כדי להתחיל ליצור פרוטוקול חדש והזן 48 למיקום ספירת המיקומים.
לחץ על פרמטרים, פרמטרי פרוטוקול ושעה, הגדר את משך הניסוי לשעה ו- 10 דקות ואת תקופת השילוב ל- 60 שניות. באמצעות כלי הצורה האליפטית, צייר עיגול סביב החלק השמאלי העליון היטב. בחר את העיגול ולחץ על העתק, סימון ימני עליון, הדבקה ובחירה.
השתמש בעכבר כדי לגרור את העיגול המועתק היטב הימני העליון ולחץ על העתק, סימון ימני עליון, הדבקה ובחירה שוב. לאחר מכן, גרור היטב את העיגול המועתק לתחתית הימנית ולחץ על בנה ונקה סימונים. המערכת תצייר באופן אוטומטי עיגול מעל כל באר אחרת של הצלחת.
לאחר מכן, לחץ על צייר קנה מידה וצייר קו כיול על המסך. הזינו את אורך השורה, קבעו את היחידה ולחצו על 'החל על קבוצה'. הגדר את צבע החיה לשחור והגדר את סף הגילוי ל- 16 עד 18 כדי לאפשר זיהוי של בעלי החיים, הגדר את המהירות הלא פעילה למהירות קטנה ל- 0.5 ס"מ לשנייה ואת המהירות הקטנה עד הגדולה ל- 2.5 ס"מ לשנייה.
הגדר את מחלקות זווית הנתיב ממינוס 180 פלוס 180 כמצוין. כדי להגדיר את תנאי האור, לחץ על פרמטרים, נהיגה קלה, שימוש באחת מ- 3 שיטות מפעילות להלן וגירויים משופרים כדי להגדיר את תנאי האור. לחץ על Edge והגדר תקופה כהה של 10 דקות, ואחריה שלושה מחזורים של תקופות אור וכהה לסירוגין של 10 דקות.
לאחר מכן, שמור את הפרוטוקול. כאשר כל הפרמטרים נקבעו, כבה את התאורה בחדר הבדיקה, ואפשר לזחלים להתאקלם במערכת במשך 10 דקות. בתום תקופת ההתאקלמות, לחץ על ניסוי וביצוע וצור את התיקיה שבה יש לשמור את הקבצים הניסיוניים.
לאחר מכן, הזן את שם התוצאה ולחץ על רקע ו התחל. בסוף הניסוי, לחץ על ניסוי ועצור. לאחר מכן החזירו את המיקרופלסטיק בן 48 הבאר בחזרה לאנקובטור האור לניסויים הבאים.
מכיוון שכל קבוצה יכולה לכלול 16 בעלי חיים, המערכת יכולה לשמש לביצוע בדיקות תפוקה גבוהות של הקטר וזווית הנתיב בתנאי טיפול שונים במיקרופלסטיק יחיד של 48 באר. הפעילות החברתית של הזחלים יכולה להיבדק באמצעות צלחות שש בארות. בניסוי מייצג זה, קבוצת הריכוז הגבוהה ביותר של BDE-47 הפגינה היפואקטיביות בולטת במהלך התקופה האפלה, בעוד שלא נצפו שינויים עקב חשיפה ל- BDE-47 במהלך תקופות האור.
יתר על כן, קבוצת הריכוז הגבוהה של 6-הידרוקסי-BDE-47 ביצעה פחות פניות שגרתיות וממוצעות בחמישה ימים לאחר ההפריה. עם זאת, פניות מגיבות יותר נגרמו בקבוצות החשיפה 6-methoxy-BDE47. הפעילות החברתית של דג הזברה עוררה על ידי פרפין-70 כלור ופרפין-52b עם שרשרת קצרה, בעוד הפרפין-52a הכלור בשרשרת הארוכה קיצר את משך המגע של הזחלים.
חשוב לוודא שלזחלים שהועברו לבדיקה צריכה להיות יכולת שחייה נורמלית וללא מומים. משתנים אחרים, כגון העדפת צבע, העדפה בהירה כהה, כל החושך, תנועות הזנב של זברה, ניתן לכלול כדי לענות על שאלות נוספות על רעילות neurobehavioral של מזהמים סביבתיים. פתרונות החשיפה BDE-47 הם נוירוטוקסיים ויש להם פוטנציאל הפרעה אנדוקריני, כדי להיות בטוח כדי למנוע מגע ישיר עם העור.
