אנו מודים שון Pelkowski לסיוע באופטימיזציה של assay התנהגותית. עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות ילד והתפתחות אדם, R01 HD060647 והמכון הלאומי למדעי בריאות הסביבה, F32 ES021342 וR03 ES017755.

1. אוסף של עוברי דג הזברה וגיוס זחלים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחות זכוכית פיירקס עם דשא &quot;מזויף&quot; (עשוי מחוט ירוק) (איור 1) צריכים להיות מוכנסות למכלי עם שחר ועזבו בלמשך שעתיים כדי לאסוף עוברי דג הזברה. מנות הזכוכית המכילות את העוברים צריכים להיות שפך על מסננת כף יד ולשטוף עם מים deionized. את העוברים ואז צריכים להיות מבוגרים במי ביצה. המים הביצה מכילים 60 מ&quot;ג / ליטר של אוקיינוס ​​מיידי במי deionized ו0.25 מ&quot;ג / ל &#39;של מתילן כחול, המשמש כמעכב עובש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם להשערה של הניסוי הבודד, ניתן לטפל בעוברים באופן מיידי או במהלך שלבים מסוימים של פיתוח באמצעות toxicants או תרופות. את toxicants והתרופות בדרך כלל מומסים DMSO (בריכוז X 1,000) וצריכים להיות מדולל נוסף ישירות במדיום המים הביצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך טיפול עוברי וזחל עם תרופות או toxicantים, יכולים להיות שוכנו הזחלים והעוברים בצלחות פטרי עמוקים בצפיפות של כ 50-60 זחלים לכל 50 מ&quot;ל עד ניתוחי ההתנהגות ב7 DPF (פתרון מים ביצה צריך להיות שונה לפחות בכל יום אחר, כדי למנוע התפתחות של פטרייה / חיידק מעוברים מתים). </li></ol> 2. הכנת תבניות לניתוח התנהגות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במיוחד התפתח תבניות פלסטיק שבם נמדד 11.7 ס&quot;מ X 7.6 ס&quot;מ X 5 מ&quot;מימ מותאמים אישית שנבנו בתוך הבית. את התבניות יש צורך ליצור נתיבים באמצעות agarose שהוא שפך לתוך צלחות פלסטיק גם בודדות מThermo Scientific. מדד הצלחות גם אחת 12.4 ס&quot;מ X 8.1 ס&quot;מ X 1.2 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את התבניות מכילות חמישה נתיבים שבו הצדדים הם בזווית של 60 מעלות. הנתיבים בתבניות הם 3.5 מ&quot;מ גבוה עם בסיס של 18 מ&quot;מ בחלקו העליון שהוא הרחב ביותר ואילו הרוחב התחתון הוא 14 מ&quot;מ. יש פער בין 4 מ&quot;מ נתיבים בתבנית (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין את הנתיבים לשפוך 50 מ&quot;ל של agarose נמס (0.8% agarose בdeionizeמים D עם 60 מ&quot;ג / ליטר מיידי אוקיינוס) בצלחת גם יחידה. אז העובש צריך להיות ממוקם באיטיות על גבי agarose הנוזלית כדי לחסל כל היווצרות בועה וניתן להסיר כאשר agarose מתקררת (שלוקח בערך 45 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתיבי agarose צריכים להתבצע לא לפני יום אחד לפני הניסוי התנהגותי הוא להיות לרוץ (כדי למנוע התייבשות agarose) יכולים להיות מאוחסנים הנתיבים בטמפרטורת חדר עם את המכסים על הכלים עד בערך 36 שעות. נתיבי agarose יש להשתמש רק בניסוי אחד ולאחר מכן צריכים להיות מושלך. </li></ol> 3. לכידת תמונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עד 20 זחלים יכולים להיות ממוקמים בכל מסלול של הצלחות. בדרך כלל 5 זחלים לכל נתיב המשמשים כדי להקל על המעקב מדויק ביותר של מהירות השחייה ולהפחית את מספר הזחלים שיש צורך לניסוי. יכולות להיות מלאות בסמטאות במי ביצה עם או בלי תרופות או toxicants בהתאם לניסוי. עם זאת, מסלולים לא צריכים להיות Filled את כל הדרך עד שהם ממוקמים בארונות ההדמיה; זה ימנע הצפה. לעקביות, הזחלים צריכים תקופת התאקלמות של עשר דקות אחרי שהם ממוקמים בתבניות agarose ואת מיקומו על גבי מסך המחשב הנייד. יעילות העברת הזחלים מצלחת פטרי לנתיב agarose תעזור להפחית את לחץ זחלים. זה קל כשהם שוכנו בזחלי טנקים רדודים או צלחות פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את ארונות ההדמיה כוללים מצלמה דיגיטלית Canon משמשת לצילום זמן לשגות ומחשב נייד. המצלמה צריכה להיות ממוקמת בחלקו העליון של הארון וכיוון לעבר לחלקו התחתון של הארון שבו מחשב נייד מסך 15.6 אינץ&#39; צריך להיות ממוקם עם המסך כלפי מעלה (איור 3). ארבע צלחות צריכים להיות ממוקמות ביד ישירות על גבי מסך המחשב הנייד. בשלב זה ניתן עקף את הנתיבים במי ביצה או טיפול כימי, כך שהוא ברמה עם החלק העליון של המסלול (כדי לחסל את הצללים בשולי Lanes בתמונות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצגת PowerPoint משמשת כגירוי מרתיע לזחלים. בכדורים האדומים הנעים בעבר הוצגו בדג הזברה זחלים 6 או 12 צלחות רב גם 15,17,18. PowerPoint הנוכחי מתחיל עם רקע לבן ריק במשך 15 דקות, ואחרי 15 דקות של בר אדום נע במחצית העליונה של הצלחת (איור 4). על מנת למנוע התחממות יתר של הזחלים, עדיף לרכוש מחשב נייד עם מסך טמפרטורה שאינו עולה מעל 28 מעלות צלזיוס כדי למנוע אידוי של הנוזל בתוך נתיבי agarose, זמן ההדמיה המקסימאלי צריך להיות כל הזמן מתחת לשעה אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המצלמה הדיגיטלית צריכה להיות מתוכנת לצילום זמן לשגות, לצלם כל 6 שניות לסכום כולל של 300 תמונות לכל ניסוי. עם זאת, ניתן להתאים את התדירות ואת האורך בהתאם לניסוי והכימות התנהגותית. בכל הפעמים האחרונות הרחבנו ההדמיה הועסקו באמצעות מרווחי זמן בין כל תמונה. Camerניתן להגדיר ברזולוציה נמוכה יותר עבור הדמיה במהירות וידאו (30 פריימים לשנייה). אמנם הרזולוציה הנמוכה מגבילה את ההקלטות לצלחת multiwell אחת, את קלטות הווידאו מתאימות לאירועי שחייה מהירות הדמיה 15. </li></ol> 4. ניתוח תמונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את התמונות יש לפתוח עם ImageJ ולהשתמש בו עם מאקרו שנכתב במיוחד בבית. מאקרו באופן אוטומטי מחלק את ערוצי הצבע, כך שניתן להסיר את הצבע האדום, מחסיר את הרקע, חל סף, ומזהה את הזחלים על ידי ניתוח חלקיקים. מאקרו העדכני ביותר עבור חמישה ניתוח הזחל ליין הוא Zebrafish_macro25k. השתמש בהנחיות במאקרו כדי להגדיר מספר התמונות, צבע שיורד, סף תמונה, וכו &#39; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי כל התמונות מנוהלים באמצעות מאקרו ImageJ, קובץ יוצג תוצאות ויכיל x, y קואורדינטות של הזחלים פרטניים לכל תמונה, יחד עם מספר התמונה ומספר המסלולים. </p&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> קובץ התוצאות צריך להישמר בפורמט אקסל ומסודר על בסיס רקע ריק לעומת רקע שורה מרגשת ולאחר מכן את המספר היטב. תבנית Excel צריכה להיות בשימוש שיש משוואות שנבנו שבקובעו באופן אוטומטי את המיקום של זחלים בבארות, מרחק בין זחלים, מהירות תנועה, ואת סכום של מנוחה. התבנית הנוכחית של Excel ביותר נוצרה במעבדה 25ib Creton, אשר זמינה על פי דרישה. גרפים מראים קבוצות טיפול שונות צריכים להיות מובנים בתוך גיליון Excel יחד עם מבחני t להשוואה בין קבוצות טיפול ובקרה. ניתן לבצע ניתוח סטטיסטי נוסף באמצעות SPSS. </li></ol>

<ol>
	<li>Gerlai, R., Lahav, M., Guo, S., Rosenthal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drinks+like+a+fish:+zebra+fish+(Danio+rerio)+as+a+behavior+genetic+model+to+study+alcohol+effects.">Drinks like a fish: zebra fish (Danio rerio) as a behavior genetic model to study alcohol effects.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 67, 773-782 (2000).</li><li>Selderslaghs, I. W. T., Hooyberghs, J., De Coen, W., Witters, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+activity+in+zebrafish+embryos:+A+new+method+to+assess+developmental+neurotoxicity.">Locomotor activity in zebrafish embryos: A new method to assess developmental neurotoxicity.</a> Neurotoxicol. Teratol. 32, 460-471 (2010).</li><li>Norton, W., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+zebrafish+as+a+model+organism+for+behavioural+genetics.">Adult zebrafish as a model organism for behavioural genetics.</a> BMC Neuroscience. 11, 90 (2010).</li><li>Levin, E. D., Cerutti, D., Buccafusco, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+15.">Ch. 15.</a> Methods of behavioral analysis in neuroscience. , (2009).</li><li>Kimmel, C., Ballard, W., Kimmel, S., Ullmann, B., Schilling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. , 203-253 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2007).</li><li>Kokel, D., Bryan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+behavior-based+identification+of+neuroactive+small+molecules+in+the+zebrafish.">Rapid behavior-based identification of neuroactive small molecules in the zebrafish.</a> Nat. Chem. Biol. 6, 231-237 (2010).</li><li>Rihel, J., Prober, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Behavioral+Profiling+Links+Drugs+to+Biological+Targets+and+Rest/Wake+Regulation.">Zebrafish Behavioral Profiling Links Drugs to Biological Targets and Rest/Wake Regulation.</a> Science. 327, 348-351 (2010).</li><li>Cachat, J., Stewart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+behavioral+and+endocrine+responses+to+novelty+stress+in+adult+zebrafish.">Measuring behavioral and endocrine responses to novelty stress in adult zebrafish.</a> Nat. Protoc. 5, 1786-1799 (2010).</li><li>Cachat, J., Stewart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Neurophenotyping+of+Adult+Zebrafish+Behavior.">Three-Dimensional Neurophenotyping of Adult Zebrafish Behavior.</a> PLoS ONE. 6, e17597 (2011).</li><li>Sledge, D., Yen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+duration+of+exposure+for+developmental+chlorpyrifos-induced+neurobehavioral+toxicity.">Critical duration of exposure for developmental chlorpyrifos-induced neurobehavioral toxicity.</a> Neurotoxicol. Teratol. 33, 742-751 (2011).</li><li>Stewart, A., Wu, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+modulation+of+anxiety-like+phenotypes+in+adult+zebrafish+behavioral+models.">Pharmacological modulation of anxiety-like phenotypes in adult zebrafish behavioral models.</a> Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 35, 1421-1431 (2011).</li><li>Eddins, D., Cerutti, D., Williams, P., Linney, E., Levin, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+provide+a+sensitive+model+of+persisting+neurobehavioral+effects+of+developmental+chlorpyrifos+exposure:+comparison+with+nicotine+and+pilocarpine+effects+and+relationship+to+dopamine+deficits.">Zebrafish provide a sensitive model of persisting neurobehavioral effects of developmental chlorpyrifos exposure: comparison with nicotine and pilocarpine effects and relationship to dopamine deficits.</a> Neurotoxicol. Teratol. 32, 99-108 (2010).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Dowling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+assay+to+measure+responsiveness+of+zebrafish+to+changes+in+light+intensities.">A behavioral assay to measure responsiveness of zebrafish to changes in light intensities.</a> J. Vis. Exp. (20), e923 (2008).</li><li>Pelkowski, S., Kapoor, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+high-throughput+imaging+system+for+automated+analyses+of+avoidance+behavior+in+zebrafish+larvae.">A novel high-throughput imaging system for automated analyses of avoidance behavior in zebrafish larvae.</a> Behav. Brain Res. 223, 135-144 (2011).</li><li>Richendrfer, H., Pelkowski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+developmental+toxicity+by+automated+analyses+of+behavior+in+zebrafish+larvae.">Assessment of developmental toxicity by automated analyses of behavior in zebrafish larvae.</a> Unpublished observations. , (2012).</li><li>Richendrfer, H., Pelkowski, S., Colwill, R. M., Creton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+edge:+pharmacological+evidence+for+anxiety-related+behavior+in+zebrafish+larvae.">On the edge: pharmacological evidence for anxiety-related behavior in zebrafish larvae.</a> Behav. Brain Res. 228, 99-106 (2012).</li><li>Richendrfer, H. A., Pelkowski, S., Colwill, R., Creton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+sub-chronic+exposure+to+chlorpyrifos+reduces+anxiety-related+behavior+in+zebrafish+larvae.">Developmental sub-chronic exposure to chlorpyrifos reduces anxiety-related behavior in zebrafish larvae.</a> Neurotoxicol. Teratol. , (2012).</li><li>Egan, R. J., Bergner, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+behavioral+and+physiological+phenotypes+of+stress+and+anxiety+in+zebrafish.">Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish.</a> Behav. Brain Res. 205, 38-44 (2009).</li><li>Colwill, R., Creton, R., Kalluef, A., Stewart, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish protocols for neurobehavioral research. 66, (2012).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

בעוד אנו שיפור assay התנהגותי הרומן שלנו ללא הרף, זה תמיד היה שימושי לזיהוי של הימנעות והתנהגות thigmotaxis בזחלי דג הזברה 15. ניסויים רבים בוצעו כדי לייעל את התוצאות של assay, כגון צבע של גירוי בשימוש, מספר האידיאלי של זחלים לכל נתיב, ואורך של assay התנהגותית. בעבר, השתמשנו בצלחות רב היטב (עם 6 או 12 בארות) 15,17,18. עם זאת, לאחרונה יצרנו את תבנית נתיב הרומן ליצור מרחב שחייה גדול יותר לזחלים ומאפשרים לנו לאסוף מספר גדול יותר של אמצעים התנהגותיים בassay אחת 16 (איור 5). שינויים נוספים כוללים וריאציות של שהעל&quot;ל המוצג PowerPoint (תנועה או אורך שונים של assay) ואת הגודל של הנתיבים בשימוש (יש לנו גם תבניות לסמטאות צרות יותר). נכון לעכשיו, מערכת האוטומטית של תפוקה גבוהה זה היא ייחודית ביכולתו למדוד מגוון רחב של התנהגויות בzebrזחלי afish באותו הזמן, כגון מהירות, הימנעות, קרבה לזחלים אחרים, וthigmotaxis בצלחות רב נתיבים. ניתן להשיג תוצאות במהירות ובמספר גדול של זחלים ניתן לנתח בזמן ההדמיה. המערכת היא גם זולה לבנות ומהירה וקלה להתקנה. מגבלה של שיטה זו היא שלא ניתן להעריך את תנועות 3-D בזחלי דג הזברה. מערכות אוטומטיות העוקבות אחר דג הזברה מבוגר שיש לו את יכולת 3-D וניתן לזהות מגוון רחב יותר של התנהגויות כגון תנועה למעלה או למטה בעמודת המים 10,19. מגבלה נוספת היא שמערכת ההדמיה שלנו כיום אינה מותאמת לניתוחי תפוקה גבוהה במהירות וידאו. ההדמיה מהירות וידאו אפשרית בעת הגדרת המצלמה לרזולוציה נמוכה יותר 15, אבל זה מגביל את הניתוח לצלחת אחת. בשימוש בשיטה חדש שנוצרה &quot;הנתיב&quot;, כמה חלקים של assay צריכים להיות מוצאים להורג באופן מדויק. כאשר מניחים את הזחלים בtהוא נתיבים, זה הוא קריטי כדי לוודא את רמת הנוזל היא מאוד רדודה עד שהצלחות ממוקמות על גבי מסך המחשב הנייד. אם הנתיבים מלאים מדי של נוזל, הזחלים יהיו להימלט אל שולי הצלחת. בנוסף, בעת הכנסת התבנית לתוך agarose, יש להקפיד להוריד את התבנית באיטיות רבה. אם העובש מוכנס במהירות רבה מדי, בועות יהוו בagarose ותזוהינה על ידי מאקרו J התמונה כזחלים נוספים. מומלץ כי אם יש לי נתיבי agarose אפילו כמה בועות, עדיף לעשות חדשות. בעתיד, ברצוננו לייעל את assay ההתנהגות שלנו לנתח התנהגויות אחרות מורכבות כגון למידה בזחלי דג הזברה ולבחון כיצד למידה יכולה להיות מושפעת מחשיפה לרעלים ותרופות בשלבי פיתוח מוקדם. אנחנו עובדים כרגע על מבחני שעשויות להיות שימושית לניתוח התנהגות למידה בה את התוצאות התנהגותיות עשויות להקל על קביעה אילו אזורים במוח הםמושפע toxicants או תרופות מסוימים במהלך פיתוח. מבחני אוטומטיים פותחו למדידת למידת התנהגויות בדג זברת זחלים 20 ומבחנים אלה עשויים להיות amendable להקרנת תפוקה גבוהה על ידי שימוש בתגובת ההימנעות החזקה בצלחות רב נתיבים. אנו מציעים כי התנהגות assay זה יכול לשמש במחקרים עתידיים לבדיקת ההשפעות התפתחותיות של מספר רב של תרופות וtoxicants. מחקרים מסוג זה מספקים שפע של מידע על גורמי סיכון ספציפיים ולתרום לקביעת הנחיות בטיחות ובריאות טובות יותר לנשים בהריון וילדים.

דג הזברה הופכת מודל פופולרי למדעים גנטיים, התפתחותי והתנהגותי 1-4. הם בוקעים מchorions על ידי לאחר הפריה ימים 2-3 (DPF), לפתח באופן מלא על ידי איברים מתפקדים DPF 4-5, ולהציג מספר גדול של התנהגויות של 7 DPF 5,6. זחלי דג הזברה מתאימים בצורה אידיאלית לניתוחי תפוקה גבוהה בגלל הגודל הקטן שלהם 7,8. תוכנה זמינה מסחרי עבור ניתוחים אוטומטיים של התנהגות בדג זברת הזחל ומבוגר 9-14. עם זאת, תוכנה זו יכולה להיות יקרה ויש לו אפשרויות מוגבלות למדידת התנהגויות מורכבות של זחלי דג הזברה בצלחות רב כן. יצרנו מערכת הדמיה תפוקה גבוהה רומן שהיא זול להקמה ויכול לכמת את מספר ההתנהגויות שונות ב7 זחלי דג הזברה DPF 15,16. המערכת מאפשרת לנו לבחון במהירות וביעילות הפרעות התנהגותיות עדינות לאחר חשיפה עוברית למספרתרופות וtoxicants סביבתי 16-18. המערכת נבנתה באמצעות ארונות מעץ, שבית מצלמה דיגיטלית בחלק העליון של הארון. המצלמה פונה כלפי מטה אל החלק התחתון של הארון שבו מחשב נייד ממוקם עם המסך כלפי מעלה 15. זמן לשגות הדמיה משמשת כדי ללכוד את המיקום של הזחלים בסמטאות. זחלים יכולים להיות שוכנו בעד ארבע צלחות רבת או רב גם מסלולים אשר ממוקמות על גבי מסך המחשב הנייד. אנו משתמשים במצגת PowerPoint כגירוי מרתיע כדי שהזחלים להגיב על ידי מתרחק (הימנעות) ושוחה לכיוון הקצה (thigmotaxis) 15,17. את התמונות מיובאות לImageJ הבמשמש מאקרו אוטומטי לפצל את ערוצי הצבע, לחסר רקע, ולהחיל את סף לזהות זחלי פרט. קואורדינטות רשומות לכל זחל בכל תמונה ויכולות להיות מוכנסת לתוך קובץ Excel שבו אנו משתמשים כדי לכמת והימנעות thigmotaהתנהגות xis, דגים למרחק דגים, לשחות במהירות, וסכום של מנוחה 16.

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Reagent&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Instant Ocean</td><td>That Pet Place</td><td>198262</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Fisher</td><td>BP1356-100</td><td></td></tr><tr><td>Methylene Blue</td><td>That Pet Place</td><td>214325</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Equipment&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>One well plates</td><td>Fisher</td><td>12-565-493</td><td></td></tr><tr><td>Digital camera</td><td>Canon</td><td>EOS Rebel T1i</td><td></td></tr><tr><td>Imaging Cabinets</td><td>WoodCraft Towers</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laptops</td><td>Acer Aspire</td><td>Any is good as long as it has a 15.6 in. LCD screen with 1366 x 768 pixel resolution and a brightness of 220 cd/m&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;.</td><td></td></tr><tr><td>Camera Lens</td><td>Canon</td><td>EF-S 55 - 250 mm f/4.0 - 5.6 IS zoom lens</td><td></td></tr><tr><td>Plastic diffuser</td><td>Pendaflex</td><td>52345</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Software&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>PowerPoint 2010</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td>&lt;a href=&quot;http://rsb.info.nih.gov/ij/&quot; target=&quot;_blank&quot;&gt;http://rsb.info.nih.gov/ij/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Excel 2010</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Statistical software</td><td>SPSS 20</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

automated high-throughput behavioral analyses in zebrafish larvae

יצרנו מערכת הדמיה תפוקה גבוהה חדשנית לניתוח התנהגות בזחלי דג הזברה 7 ימים בת בצלחות רב נתיבים. מערכת זו מודדת התנהגויות ספונטניות והתגובה לגירוי מרתיע, אשר מוצגת לזחלים באמצעות מצגת PowerPoint. את התמונות שתועדו מנותחות עם מאקרו ImageJ, אשר באופן אוטומטי מחלק את ערוצי הצבע, מחסיר את הרקע, וחל סף לזהות מיקום זחלים בודד בסמטאות. אז אנחנו יכולים לייבא את הקואורדינטות לגיליון Excel לכמת מהירות השחייה, העדפה לקצה או בצד של הנתיב, התנהגות מנוחה, thigmotaxis, מרחק בין זחלים, והתנהגות הימנעות. שינויים קלים בהתנהגות מזוהים בקלות באמצעות המערכת שלנו, מה שהופך אותו לשימושי עבור ניתוחים התנהגותיות לאחר חשיפה לרעלים או תרופות סביבתיים.

במבחנים הקודמים שלנו, תוך שימוש בגירוי מרתיע הכדור המקפץ, זחלי סוג בר שהמטופל מגיבים לכדור לנוע על ידי שהלך לשחות ב( התנהגות ההימנעות) וגם לכיוון הקצוות (התנהגות thigmotaxis) 15 כן. מאוחר יותר אנו מאשרים כי התנהגות thigmotaxis בassay זה היא מדד של התנהגות הקשורה לחרדה בזחלי דג הזברה 17. היו הבדלים משמעותיים בתנועת הזחלים הרחק מכדור וההעדפה לקצה בהשוואה לרקע הלבן הריק. התנהגויות אלו גם אושרו בבדיקה החדשה שלנו באמצעות הסרגל האדום המרגש והם אפילו יותר חזקים 16. יתר על כן, כעת אנו יכולים לדגום מספר גדול יותר של התנהגויות בassay בודד כולל מהירות השחייה, מנוחה, העדפה לסוף או בצד של הבאר, ומרחק בין דגים (איור 5). זחלי בקרה גדלו במי ביצה מראים העדפה מוגברת להיות למטה בצלחת ועל קצה השבילחרה שהם מוצגים עם גירוי מרתיע (נע פס אדום). תוצאות דומות מתקבלות כאשר זחלים גדלים במי ביצה המכילים 1 מיקרוגרם / מיליליטר DMSO, ממס המשמש בדרך כלל להמסת תרופות וtoxicants שונים כ1,000 פתרונות מניות X. נציג תוצאות מוצגות באיור 5 בזחלי מטופלים עם ביצת מים וDMSO (כקבוצת ביקורת) וריכוזים שונים של חומרי הדברה organophosphate הנפוצים במזונות שאינם אורגניים. התוצאות המוצגות הן דגימה מניסוי אחד. עם זאת, כאשר חזרו, התוצאות מצביעות על כך שמהירות השחייה והתנהגות thigmotaxis משתנה על ידי ריכוזים נמוכים של חומרי ההדברה organophosphate, המחקים את הרמות בצריכת מזון אנושית 18. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig1.jpg" /> איור 1. מגשי אוסף. מנות פיירקס זכוכית משמשים לאיסוף דוארmbryos מהטנקים הדגים הבוגרים. מכסים מצלחות פיירקס נחתכו ונוסף עם רשתות פלסטיק וחוט ירוק שנתפרו על גבי הרשתות בפלסטיק. זה יוצר אווירה פורה לדג הזברה המבוגר על ידי חיקוי הסביבה הטבעית. <img alt="איור 2" fo:content-width="/files/ftp_upload/50622/50622fig2highres.jpg" fo:width="6in" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig2.jpg" /> איור 2. תבנית פלסטיק ונתיבי agarose. א) העובש מוצג בצד השמאל. 0.8% agarose הוא שפך לתוך צלחת אחת היטב; העובש מוכנס לאט ולאחר מכן הוסר כאשר agarose מתקררת ב &#39;) את הצלחת על ימין מראה את הנתיבים שנוצרו בagarose ידי תבנית הפלסטיק.. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig3.jpg" /> איור 3. ארונות הדמיה. ארונות הדמיה היו specially שנבנה במעבדה שלנו ומשמש לניתוחים התנהגותיים תפוקה גבוהה. מצלמה 15 מגה פיקסל דיגיטלית הייתה מחוברת לחלקו העליון של הארון פונה כלפי מטה על מנת לאסוף תמונות זמן לשגות של הזחלים בצלחות multilane ממוקמות על גבי המסך של מחשב נייד. בין הצלחות והמסך יש מפזר פלסטיק שמשמש למניעת דפוסי moiré בתמונות שנאספו. <img alt="איור 4" fo:content-width="/files/ftp_upload/50622/50622fig4highres.jpg" fo:width="4.5in" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig4.jpg" /> איור 4. רקע ריק וגירוי מרתיע-PowerPoint. זוהי PowerPoint הנוכחי המשמש כדי לעורר שינויים התנהגותיים בזחלי דג הזברה. הוא מספק בדלים התנהגותיים בין חזקים) רקע ריק ו-B) בר האדום המרגש. <img alt="איור 5" fo:content-width="/files/ftp_upload/50622/50622fig5highres.jpg" fo:width="5.5in" src="/files/ftp_upload/50622/50622fig5.jpg" /> איור 5. התנהגויות לכמת בassay התפוקה גבוהה. דוגמה להתנהגויות שהם לכמת מassay ההתנהגות שלנו בתוך גיליון Excel שאנו משתמשים עבור x, y קואורדינטות של הזחלים. את הסורגים הלבנים מראים מידע מזחלים שנחשפו לרקע ריק ואת הקווים האדומים מראים מידע מהזחלים נחשפו לבר המרגש האדום ב- PowerPoint. הגרפים מראים את המדידות שניתן להשיג מניתוח התנהגות) אחוז הזחלים למטה בנתיב &#39;, ב&#39;) אחוז הזחלים בסוף השביל, C) אחוז הזחלים בקצה השביל, ד) מרחק בין דגים (מ&quot;מ), E) לשחות מהירות של אחוז שאר זחלי הזחלים (מ&quot;מ / דקה), F). בגרפים מוצגים, הנתונים הוא מtreatmאף אוזן גרון של זחלים עם DMSO שליטה וכמה ריכוזים של חומרי הדברה החל .001-0.1 מיקרומטר (רמות הנפוצות בתזונת האדם). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50622/50622fig5large.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae at JoVE.com

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

המעבדה שלנו פיתחה מערכת שהיא שימושית לצורך זיהוי של כמה התנהגויות שונות בזחלי דג הזברה 7 ימים בת הדמיה אוטומטית תפוקה גבוהה רומן. המערכת יכולה לשמש לאיתור שינויים עדינים בהתנהגות לאחר הזחלים שנחשפו לרעלים או תרופות סביבתיים.

ניתוח התנהגות תפוקה גבוהה אוטומטי בזחלי דג הזברה

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

automated-high-throughput-behavioral-analyses-in-zebrafish-larvae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

15.2K Views.  Brown University. המעבדה שלנו פיתחה מערכת שהיא שימושית לצורך זיהוי של כמה התנהגויות שונות בזחלי דג הזברה 7 ימים בת הדמיה אוטומטית תפוקה גבוהה רומן. המערכת יכולה לשמש לאיתור שינויים עדינים בהתנהגות לאחר הזחלים שנחשפו לרעלים או תרופות סביבתיים.

Video: Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

A 3-dimensional (3D)-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related research fields. Thanks to its unique features, including large fecundity, embryo translucency, rapid and simultaneous development, etc., zebrafish embryos are often used for large scale toxicity assessment of chemicals and drug/compound screening. A typical screening procedure involves adult zebrafish spawning, embryos selection, and arraying the embryos into multi-well plates. From there, embryos are subjected to exposure and the toxicity of chemical, or the effectiveness of the drugs/compounds can be evaluated relatively quickly based on phenotypic observations. Among these processes, embryos arraying is one of the most time-consuming and labor-intensive steps that limits the throughput level. In this protocol, we present an innovative approach that makes use of a 3D-printed arraying template coupled with vacuum manipulation to speed up this laborious step. The protocol herein describes the overall design of the arraying template, a detailed experimental setup and step-by-step procedure, followed by representative results. When implemented, this approach should prove beneficial in a variety of research applications using zebrafish embryos as testing subjects.

A 3-dimensional 3D-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

Here, we present a protocol to design and fabricate a zebrafish embryo arraying template, followed by a detailed procedure on the use of such template for high throughput zebrafish embryo arraying into a 96-well plate.

תלת-ממדי (3D)-להדפיס תבנית עבור תפוקה גבוהה דג זברה העובר סידור במערך

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related ...

Environment

A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities 

The optokinetic reflex (OKR) is a basic visual reflex exhibited by most vertebrates and plays an important role in stabilizing the eye relative to the visual scene. However, the OKR requires that an animal detect moving stripes and it is possible that fish that fail to exhibit an OKR may not be completely blind. One zebrafish mutant, the no optokinetic response c (nrc) has no OKR under any light conditions tested and was reported to be completely blind. Previously, we have shown that OFF-ganglion cell activity can be recorded in these mutants. To determine whether mutant fish with no OKR such as the nrc mutant can detect simple light increments and decrements we developed the visual motor behavioral assay (VMR). In this assay, single zebrafish larvae are placed in each well of a 96-well plate allowing the simultaneous monitoring of larvae using an automated video-tracking system. The locomotor responses of each larva to 30 minutes light ON and 30 minutes light OFF were recorded and quantified. WT fish have a brief spike of motor activity upon lights ON, known as the startle response, followed by return to lower-than baseline activity, called a freeze. WT fish also sharply increase their locomotor activity immediately following lights OFF and only gradually (over several minutes) return to baseline locomotor activity. The nrc mutants respond similarly to light OFF as WT fish, but exhibit a slight reduction in their average activity as compared to WT fish. Motor activity in response to light ON in nrc mutants is delayed and sluggish. There is a slow rise time of the nrc mutant response to light ON as compared to WT light ON response. The results indicate that nrc fish are not completely blind. Because teleosts can detect light through non-retinal tissues, we confirmed that the immediate behavioral responses to light-intensity changes require intact eyes by using the chokh (chk) mutants, which completely lack eyes from the earliest stages of development. In our VMR assay, the chk mutants exhibit no startle response to either light ON or OFF, showing that the lateral eyes mediate this behavior. The VMR assay described here complements the well-established OKR assay, which does not test the ability of zebrafish larvae to respond to changes in light intensities. Additionally, the automation of the VMR assay lends itself to high-throughput screening for defects in light-intensity driven visual responses.

A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities

We developed the Visual-Motor Response to quantitate the motor output of larval zebrafish in response to light increments and decrements. We also examined zebrafish vision mutants, including the no optokinetic response (nrc) mutants, which were thought to be completely blind when tested by another vision assay, the optokinetic reflex.

Assay ההתנהגות כדי למדוד את התגובה של דג הזברה לשינויים לעוצמות אור

The optokinetic reflex (OKR) is a basic visual reflex exhibited by most vertebrates and plays an important role in stabilizing the eye relative to the ...

Biology

Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae

Recent years more and more environmental pollutants have been proved neurotoxic, especially at the early development stages of organisms. Zebrafish larvae are a preeminent model for the neurobehavioral study of environmental pollutants. Here, a detailed experimental protocol is provided for the evaluation of the neurotoxicity of environmental pollutants using zebrafish larvae, including the collection of the embryos, the exposure process, neurobehavioral indicators, the test process, and data analysis. Also, the culture environment, exposure process, and experimental conditions are discussed to ensure the success of the assay. The protocol has been used in the development of psychopathic drugs, research on environmental neurotoxic pollutants, and can be optimized to make corresponding studies or be helpful for mechanistic studies. The protocol demonstrates a clear operation process for studying neurobehavioral effects on zebrafish larvae and can reveal the effects of various neurotoxic substances or pollutants.

A detailed experimental protocol is presented in this paper for the evaluation of neurobehavioral toxicity of environmental pollutants using a zebrafish larvae model, including the exposure process and tests for neurobehavioral indicators.

לימוד השפעות נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים על הזחלים של דגי הזאב

Recent years more and more environmental pollutants have been proved neurotoxic, especially at the early development stages of organisms. Zebrafish larvae ...

Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of stress-related diseases and psychiatric disorders, yet further studies into the genetic and neuronal regulation of stress are still required to develop better therapeutics. The zebrafish provides a powerful genetic model to investigate the neural underpinnings of stress, as there exists a large collection of mutant and transgenic lines. Moreover, pharmacology can easily be applied to zebrafish, as most drugs can be added directly to water. We describe here the use of the 'novel tank test' as a method to study innate stress responses in zebrafish, and demonstrate how potential anxiolytic drugs can be validated using the assay. The method can easily be coupled with zebrafish lines harboring genetic mutations, or those in which transgenic approaches for manipulating precise neural circuits are used. The assay can also be used in other fish models. Together, the described protocol should facilitate the adoption of this simple assay to other laboratories.

This manuscript describes a simple method to measure stress behaviorally in adult zebrafish. The approach takes advantage of the innate tendency that zebrafish prefer the bottom half of a tank when in a stressful state. We also describe methods for coupling the assay with pharmacology.

גישות התנהגותיות לחקר הלחץ הטבוע בדג זברה

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

Behavior

Development of automated imaging and analysis for zebrafish chemical screens. 

We demonstrate the application of image-based high-content screening (HCS) methodology to identify small molecules that can modulate the FGF/RAS/MAPK pathway in zebrafish embryos. The zebrafish embryo is an ideal system for in vivo high-content chemical screens. The 1-day old embryo is approximately 1mm in diameter and can be easily arrayed into 96-well plates, a standard format for high throughput screening. During the first day of development, embryos are transparent with most of the major organs present, thus enabling visualization of tissue formation during embryogenesis. The complete automation of zebrafish chemical screens is still a challenge, however, particularly in the development of automated image acquisition and analysis. We previously generated a transgenic reporter line that expresses green fluorescent protein (GFP) under the control of FGF activity and demonstrated their utility in chemical screens 1. To establish methodology for high throughput whole organism screens, we developed a system for automated imaging and analysis of zebrafish embryos at 24-48 hours post fertilization (hpf) in 96-well plates 2. In this video we highlight the procedures for arraying transgenic embryos into multiwell plates at 24hpf and the addition of a small molecule (BCI) that hyperactivates FGF signaling 3. The plates are incubated for 6 hours followed by the addition of tricaine to anesthetize larvae prior to automated imaging on a Molecular Devices ImageXpress Ultra laser scanning confocal HCS reader. Images are processed by Definiens Developer software using a Cognition Network Technology algorithm that we developed to detect and quantify expression of GFP in the heads of transgenic embryos. In this example we highlight the ability of the algorithm to measure dose-dependent effects of BCI on GFP reporter gene expression in treated embryos.

Development of automated imaging and analysis for zebrafish chemical screens.

We report the development of a system for automated imaging and analysis of zebrafish transgenic embryos in multiwell plates. This demonstrates the ability to measure dose dependent effects of a small molecule, BCI, on Fibroblast Growth Factor reporter gene expression and provide technology for establishing high-throughput zebrafish chemical screens.

פיתוח הדמיה ניתוח אוטומטיות עבור מסכי דג הזברה כימיים.

We demonstrate the application of image-based high-content screening (HCS) methodology to identify small molecules that can modulate the FGF/RAS/MAPK ...

Boldness, Aggression, and Shoaling Assays for Zebrafish Behavioral Syndromes

A behavioral syndrome exists when specific behaviors interact under different contexts. Zebrafish have been test subjects in recent studies and it is important to standardize protocols to ensure proper analyses and interpretations. In our previous studies, we have measured boldness by monitoring a series of behaviors (time near surface, latency in transitions, number of transitions, and darts) in a 1.5 L trapezoidal tank. Likewise, we quantified aggression by observing bites, lateral displays, darts, and time near an inclined mirror in a rectangular 19 L tank. By dividing a 76 L tank into thirds, we also examined shoaling preferences. The shoaling assay is a highly customizable assay and can be tailored for specific hypotheses. However, protocols for this assay also must be standardized, yet flexible enough for customization. In previous studies, end chambers were either empty, contained 5 or 10 zebrafish, or 5 pearl danios (D. albolineatus). In the following manuscript, we present a detailed protocol and representative data that accompany successful applications of the protocol, which will allow for replication of behavioral syndrome experiments.

This manuscript describes the setup, implementation, and analysis of boldness, aggression, and shoaling in zebrafish and testing for the presence of a behavioral syndrome. A standardized approach for behavioral quantification will allow for easier comparison across studies. Modifications to this protocol are possible as each assay can be run individually.

תעוזה, תוקפנות, ואת מבחני Shoaling עבור תסמונות התנהגותיות דג הזברה

A behavioral syndrome exists when specific behaviors interact under different contexts. Zebrafish have been test subjects in recent studies and it is ...

Medicine

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research have uncovered a large spectrum of genes implicated in various forms of epilepsy, highlighting the heterogeneous nature of this disorder. Appropriate animal models are essential for investigating the pathological mechanisms triggered by genetic mutations implicated in epilepsy and for developing specialized, targeted therapies. In recent years, zebrafish has emerged as a valuable vertebrate organism for modeling epilepsies, with the use of both genetic manipulation and exposure to known epileptogenic drugs, such as pentylenetetrazole (PTZ), to identify novel anti-epileptic therapeutics. Deleterious mutations in the mTOR regulator DEPDC5 have been associated with various forms of focal epilepsies and knock-down of the zebrafish orthologue causes hyperactivity associated with spontaneous seizure-like episodes, as well as enhanced electrographic activity and characteristic turn wheel swimming. Here, we described the method involved in generating the DEPDC5 loss-of-function model and illustrate the protocol for assessing motor activity at 28 and 48 h post fertilization (hpf), as well as a method for recording field activity in the zebrafish optic tectum. An illustration of the effect of the epileptogenic drug PTZ on neuronal activity over time is also provided.

Here, we present a protocol for the development and the characterization of a zebrafish model of epilepsy resulting from the transient inhibition of the DEPDC5 gene.

ניתוח התנהגותי ופיזיולוגי במודל דגי זברה של אפילפסיה

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

High-throughput Measurement of Gut Transit Time Using Larval Zebrafish

Zebrafish are used as alternative model organisms for drug safety testing. The gastrointestinal (GI) tract of zebrafish has genetic, neuronal, and pharmacological similarities to that of the mammals. GI intolerance during clinical testing of drug candidates is common and may pose a serious threat to human health. Testing for GI toxicity in preclinical mammalian models can be expensive in terms of time, test compound, and labor. The high-throughput method presented here may be used to predict GI safety issues. Compared to mammalian models, this method allows for more expedient assessment of test compound effects on GI transit while using low quantities of compound. In this method, larval zebrafish (7 days post fertilization) are fed food containing a fluorescent label. After feeding, each larval fish is placed into a well of a 96-conical-bottom-well plate and dosed with test compound (dissolved in water) or the vehicle. As gut transit occurs, fecal matter accumulates on the bottom of the wells, and the rate at which this happens is monitored by measuring fluorescence from the bottom of the well repeatedly over time using a plate spectrophotometer. The fluorescence from larvae in a given treatment group are averaged and these values are graphed along with standard error, for each measurement time, yielding a curve representing average transit of food over time. Effects on gut transit time are identified by comparing the area under the curve for each treatment group to that of the vehicle-treated group. This method detected changes in zebrafish GI transit time induced by drugs with known clinical GI effects; it can be employed to interrogate dozens of treatments for GI effects per day. As such, safer compounds can be quickly prioritized for mammalian testing, which expedites discovery and proffers 3Rs advancement.

The goal of this protocol is to measure the transit time of fluorescently labeled food through the gut of larval zebrafish in a high throughput fashion.

מדידת תפוקה גבוהה הבטן מעבר הזמן באמצעות זחל דג זברה

Zebrafish are used as alternative model organisms for drug safety testing. The gastrointestinal (GI) tract of zebrafish has genetic, neuronal, and ...

Photomotor Response Assay: A Method to Measure the Behavioral Response of Larval Zebrafish to a Sudden Change in Lighting Condition

Source: Steele, W. B., et al. <a href="https://www.jove.com/v/57938/" target="_blank">Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine</a>.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2018).
This video describes the photomotor response assay of zebrafish and fathead minnow larvae using an automated tracking software. The protocol measures the behavioral response of the larval fish following a sudden change in lighting condition.

בדיקת תגובה פוטומוטורית: שיטה למדידת התגובה ההתנהגותית של דגי זברה זחלים לשינוי פתאומי במצב התאורה

Source: Steele, W. B., et al. Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Danio rerio (zebrafish)

Larva

Zebrafish Avoidance and Thigmotaxis Assay: A High-Throughput Method to Examine Larval Behavior in Response to Aversive Visual Stimulus

Source: Richendrfer, H., et al. <a href="https://www.jove.com/v/50622/" target="_blank">Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae</a>. &#160;J. Vis. Exp.&#160;(2013)
The video describes the avoidance and thigmotaxis assay of zebrafish larvae. The video examines the behavior of zebrafish larvae in response to visual aversive stimulus.

הימנעות מדגי זברה ובדיקת תיגמוטקסיס: שיטה בעלת תפוקה גבוהה לבחינת התנהגות הזחלים בתגובה לגירוי חזותי מרתיע

Source: Richendrfer, H., et al. Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae. &#160;J. Vis. Exp.&#160;(2013)
The video describes the ...