התקנה של ספקטרומטריה של מסת פלזמה (CE-ICP-MS) לכמת את מיני ברזל רדוקס (Fe(II), Fe(III)

תוצאות ברזל מוגזמות ברזל חינם redox פעיל שני פלוס שיכול לגרום להשפעות הרסניות בתוך התא, כגון מתח חמצוני ומוות של תאים על ידי חמצון השומנים המכונה פרופטוזיס. מדידות כמותיות של ברזל ברזלי ו ferric הוא המפתח לתובנה קרובה יותר לתהליכים מזיקים אלה. טכניקת CE-ICP-Ms זו מספקת הן:ניתוח מהיר והן מגבלות כימות נמוכות, ששניהם נחוצים לכמת מינים של ברזל-redox.

התחל על ידי בחירת nebulizer עם נפח שאפתן עצמי נמוך והכנת החלקים המתאימים כדי לטעון את הממשק תוצרת בית. חבר שני מחברים נקביים תלת-כיוון עם מחבר לואר חרוט זכר על-ידי חיבור הקצה השמאלי של סרגל הלוטרה התחתון תלת-כיוון למחבר הזכרי והמחבר הזכר לחיבור האמצעי של הלוטרה העליונה. לאחר מכן, לשים צינור סנטימטר אחד מעל חוט הפלטינה ולהשתמש צינור סיליקון סנטימטר אחד כדי לחבר את הצינור הראשון ואת הזרבובית של מחבר luer זכר.

תקן את ההרכבה לחיבור האמצעי של מחבר הלוטרה התחתון בשלושה כיוון על-ידי סיבוב בורג. לדחוף צינור סנטימטר אחד מעל השקע של נימי CE ולמקם בשמונה עד תשעה סנטימטרים מהסוף, ולאחר מכן לחבר אותו לזרבובית של מחבר luer זכר עם צינור סיליקון. שים את כל ההרכבה דרך הסרס של מחבר T תלת-כיוון העליון ותקן את מחבר הלוטר הגברי ואת הקצה השמאלי של מחבר הלוטרה תלת-כיוון הנשי על-ידי סיבוב בורג.

לאחר מכן תקן את צינור הסיליקון באורך 25 ס"מ בזרבובית של מחבר לואר זכר ותקן את כל ההרכבה בתחתית הרף ממחבר הפיתוי התחתון. לדחוף בחוזקה את צינור הסיליקון אחד סנטימטר, חמישה מילימטרים על קצה nebulizer. בעוד מחבר חרוט לודר הזכר השני מחובר לחלק הבולט של הצינור.

הזז את חלק הממשק עם נימי CE בולט אל הקונוס הגברי ב nebulizer, ולאחר מכן בזהירות להכניס את נימי דרך הקונוס הגברי ואת החלק הרחב יותר של נימי nebulizer. במידת הצורך, להתאים את אורך נימי בולט על ידי unscrewing את luer זכר שמאלי, הזזת luer עם צינורות מחוברים לתוך המיקום הנדרש והתקנה מחדש של זה. מחברי הלוטרה הנקבה העליונה צריכים להתאים בחוזקה לקוטרה הגברית.

בסיום ההתקנה, המשך בהתקנה עם ICP-Ms. עקומות כיול נוצרו עבור ברזל שלוש וברזל שני מינים redox. גבולות הגילוי היו 3.1 מיקרוגרם לליטר עבור ברזל 2 ו 3.2 מיקרוגרם לליטר עבור ברזל שלוש ליניאריות הוכח עד 150 מיקרוגרם לליטר.

הניתוח של SH-SY5Y Cell Lysate הראה נדידה מעט איטית יותר עבור מינים redox ברזל בשל מוליכות גבוהה במקצת. הריכוזים הנמדדים של ברזל 3 וברזל 2 היו 330 מיקרוגרם לליטר ו-84 מיקרוגרם לליטר, בהתאמה. וכתוצאה מכך יחס ברזל 2-3 של 0.25.

השלב החשוב ביותר של פרוטוקול זה הוא החדרה זהירה של נימי CE בולט באמצעות ממשק רכוב המיקום המתאים שלה הקשורים נימי nebulizer. השיטות המוצגות כאן עשויות להפוך לכלי מבטיח להעמיק את התובנה לתהליכים מולקולריים תלויי ברזל. מחקרים שתוכננו בקפידה נדרשים כדי לאמת אם ברזל שני פלוס, ברזל שלוש פלוס כימות יכול לשמש סמן ביולוגי פוטנציאלי כדי לאתר רקמות בסיכון לנזק קטלני מתווך ברזל בהקשר של מחלות ניווניות וסרטן.