המחת של Flypub מודדת התנהגויות לא מנופחות תחת השפעת אלכוהול. ובכך להקל על המחקר המקניסטי של הפרעת שימוש באלכוהול. אלכוהול הוא אחד הסמים הזמינים ביותר בשימוש נרחב בעולם.
המנגנון הנוירוביולוגי שבבסיס הפרעת השימוש באלכוהול, לעומת זאת, מובן באופן לא שלם. זבוב הפירות, Drosophila melanogaster, שימש בהרחבה לחקר ההשפעות של אתנול על אופוריה, תנועה, disinhibition, ו sedation. הוא משמש גם כדי ללמוד את השינויים הארוכים והתמשך שלה בהתנהגות רלוונטי התמכרות כגון סובלנות, רגישות, ואתנול מחפש.
מחקרים רבים ב Drosophila ומודלים אחרים של בעלי חיים להתמקד לוקומוטור הפעלת ההשפעות של אתנול. ההשפעה המובהק של אתנול היא ביטול חיים התנהגותי. עם זאת, המחקר שלו הוא די מיוצג.
כדי לטפל בבעיה מרכזית זו, פיתחנו את המחתר Flypub כדי למדוד התנהגות חסרת מעצורים תחת השפעת אתנול. כדי להרכיב את תא Flypub, לקחת בקבוק עגול לחתוך את החלק התחתון של סימן 25 מיליליטר עם סכין גילוח. צור חור בסימן 50 מיליליטר באמצעות ברזל הלחמה חם.
זוהי נקודת הגישה שבה יוצגו זבובים. מניחים רשת עגולה בקוטר 54 מילימטרים בסימן 75 מיליליטר, ומאבטחים אותה באמצעות דבק חם. מקם יריעת פלסטיק שקופה בקוטר 70 מילימטרים בקצה התחתון הפתוח, ואבטח אותה באמצעות דבק חם.
כדי להבטיח כי סיבוב הפלסטיק מחובר היטב לתחתית, לחץ למטה באמצעות משקולות. לאסוף זבובים זכר לתוך קבוצה של 33. מניחים אותם בצד של בקבוקון מזון.
מניחים אותם באינקובטור של 25 מעלות צלזיוס עם לפחות 50% לחות יחסית ואור של 12 שעות, מחזור כהה של 12 שעות במשך יומיים לפני החשיפה לאתנול. הכן את תחנת המרשם Flypub על-ידי הדלקת אורות, מחשב ומצלמה להקלטת וידאו. הכינו שישה פאבים לסט ניסויים.
תייג אותם במספרים 1 עד 6. בעדינות להכניס את הזבובים לתוך הפאב באמצעות משפך קטן. סגור את הפאב באמצעות קלטת.
להתאקלם את הזבובים במשך 10 דקות. במהלך ההתאקלמות, התאימו את מוקד המצלמה והקליטו את חמש הדקות האחרונות של ההתאקלמות. במהלך ההתאקלמות להכין רפידות כותנה למשלוח אתנול.
חותכים כרית כותנה לארבעה רבעים שווים ולאחר מכן לקצץ את הפינות כדי להפוך אותו להתאים לתוך צלחת פטרי. מוסיפים כרית כותנה לצלחת פטרי. מוסיפים מיליליטר אחד של 95% אתנול ל כרית הכותנה.
הקפד פתרון אתנול להיות מופץ באופן שווה על כל האזור של כרית. מכסים במהירות צלחת פטרי עם מגבוני מעבדה. מניחים בזהירות אתנול המכיל צלחת פטרי מתחת לכל פאב.
יישר את הפאבים על הבמה. התחל בהקלטה ולהתחיל בו-זמנית שעון זמן. הקלט עד שטסים יפסיקו לחזר או לזוז.
הסר את האתנול המכיל צלחת פטרי כאשר מעל 90% מהזבובים הם מרומם. מעבירים בעדינות את הזבובים הרותמים בחזרה לבקבוקוני מזון. שים אותם בחזרה לתוך החממה.
חזור על השלבים הקודמים כל 24 שעות במשך שישה ימים רצופים. פתח את הווידאו באמצעות נגן מדיה. ואז ציון מספר הזכרים העוסקים בפעילויות חיזור כל 10 שניות.
פעילויות החיזור שיש להבקיע כוללות: הארכת כנף חד צדדית, שרשרת חיזור, מעגל חיזור, כיפוף בטן והתהוות. מוצגות הקלטות מייצגות של אופן הפעולה של fly. במהלך ההתאקלמות שבה הזכרים אינם מראים פעילות רבה.
במהלך החשיפה הראשונה שבה גברים מפגינים חיזור ספורדי. ובמהלך החשיפה השישית שבה גברים מציגים חיזור פעילות. הזן את מספר הזכרים המציגים חיזור בבלוק זמן עשר שני.
השתמש במספר המרבי של זכרי חיזור לשלוש חסימות רצופות של 10 שניות כנקודת נתונים מייצגת. הממוצע של 10 נקודות נתונים רצופות בעלות הערך הגבוה ביותר מייצג את אחוז החיזור הבין-עורי לכל פאב. סוג הבר קנטון-S התערוכה גדל בהדרגה פעילויות של חיזור disinhibited על חשיפה אתנול חוזר ונשנה.
זה מייצג רגישות התנהגותית לאפקט disinhibition של אתנול. בדקנו את תפקיד התמנון ברגישות על ידי בדיקת הזבובים שחסרים בהם טיראמין בטא-הידרוקסילאז, T beta H, ובכך חסרים תמנון. כמו קנטון-S, המוטנטים T beta H הראו תגובות הסלים לחשיפה אתנול חוזר, אבל ברמה מופחתת.
כאשר השווינו את T beta H וקנטון-S, ראינו כי זכרי המוטנטים T beta H התבונו חיזור פחות מנוכר מאשר זכרי קנטון-S בכל חשיפה המציינת כי תמנון עשוי להיות חשוב לרגישות. עכשיו אתה יכול להגדיר, לנהל, ולנתח התנהגויות הנגרמות על ידי אתנול באמצעות בדיקה Flypub. נקודות המפתח שיש לזכור כוללות, אחד, הרכבה נכונה של הפאב.
שתיים, מסירת אתנול עקבית, ושלוש, ציון התנהגותי מדויק ובלתי משוחד. ל-Flypub יש יתרונות רבים. זה פשוט, זול להגדיר, וקל ללמוד.
כמו כן, קבוצות מרובות של זבובים ניתן לתחקר בו זמנית, להקל על מחקר זה כדי לזהות את ההשפעות של מניפולציות גנטיות או ניסיוניות. ההערכה Flypub הוא מאוד מושך לניסויים בכל הרמות כולל יסודי דרך התיכון, סטודנטים לתואר ראשון ושני, פוסט דוק ופקולטה. לסיכום, מישן Flypub יאפשר לך לזהות שחקנים מולקולריים, מסלולים תאיים, מעגלי מוח, וגורמי סיכון התורמים להפרעת שימוש באלכוהול.
