Flypub 분석은 알코올의 영향으로 억제된 행동을 측정합니다. 따라서 알코올 사용 장애의 기계론적 연구를 촉진합니다. 알코올은 세계에서 가장 쉽게 사용할 수 있고 널리 학대 약물 중 하나입니다.
그러나 알코올 사용 장애의 기본 신경 생물학적 메커니즘은 불완전하게 이해됩니다. 과일 파리, 드로소필라 멜라노가스터, 행복감에 에탄올의 효과를 연구하는 데 광범위하게 사용되었습니다, 운동, 억제, 및 퇴적. 그것은 또한 관용 등 중독에 관련 된 행동에 그것의 길고 지속적인 변화를 연구 하는 데 사용 됩니다., 감도, 그리고 에탄올 추구.
Drosophila 및 그밖 동물 모형에 있는 많은 연구 결과는 에탄올의 운동 활성화 효력에 집중합니다. 에탄올의 뚜렷한 효과는 행동 억제입니다. 그러나, 그것은 연구 보다는 과소 대표.
이 주요 문제를 해결하기 위해, 우리는 에탄올의 영향으로 억제 된 행동을 측정하기 위해 Flypub 분석기를 개발했습니다. Flypub 챔버를 조립하려면 둥근 병을 가지고 면도날로 25 밀리리터 마크의 하단 부분을 잘라냅니다. 뜨거운 납땜 철을 사용하여 50 밀리리터 마크에 구멍을 만듭니다.
이것은 파리가 도입 될 액세스 포인트입니다. 75 밀리리터 마크에 직경 54밀리미터의 둥근 메쉬를 놓고 뜨거운 접착제를 사용하여 고정합니다. 투명 플라스틱 시트의 직경 70mm를 오픈 하단 엔드에 배치하고 뜨거운 접착제를 사용하여 고정하십시오.
플라스틱 라운드가 바닥에 단단히 부착되도록하려면 가중치를 사용하여 압력을 가하십시오. 33의 그룹으로 남성 파리를 수집합니다. 음식 유리병의 측면에 배치합니다.
25도 의 섭씨 인큐베이터에 상대 습도가 50 % 이상이고 12 시간 빛, 에탄올 노출 2 일 전에 12 시간 어두운 주기에 놓습니다. 비디오 녹화를 위해 조명, 컴퓨터 및 카메라를 켜서 Flypub 분석 스테이션을 준비합니다. 실험 세트를 위해 6개의 펍을 준비합니다.
숫자1에서 6까지 레이블을 지정합니다. 작은 깔때기를 사용하여 파리를 술집에 부드럽게 소개합니다. 테이프를 사용하여 술집을 닫습니다.
10 분 동안 파리를 적응. 적응 하는 동안 카메라 포커스를 조정 하 고 적응의 마지막 5 분을 기록 합니다. 적응 하는 동안 에탄올 배달을 위한 면 패드를 준비 합니다.
면 패드를 4개의 동일한 사분면으로 자른 다음 모서리를 다듬어 페트리 접시에 맞습니다. 페트리 접시에 면 패드를 추가합니다. 면 패드에 95%에탄올 1밀리리터를 넣습니다.
에탄올 용액이 패드의 전체 영역에 균등하게 분배되어야 합니다. 실험실 물티슈로 페트리 접시를 빠르게 덮습니다. 각 펍 아래에 페트리 접시가 들어 있는 에탄올을 조심스럽게 놓습니다.
무대에서 술집을 정렬합니다. 녹음을 시작하고 타이머를 동시에 시작합니다. 파리가 구애를 멈추거나 움직일 때까지 기록합니다.
파리의 90% 이상이 진정되면 페트리 접시가 들어 있는 에탄올을 제거합니다. 진정된 파리를 음식 유리병으로 부드럽게 옮기십시오. 인큐베이터에 다시 넣습니다.
6일 연속으로 24시간마다 이전 단계를 반복합니다. 미디어 플레이어를 사용하여 비디오를 엽니다. 그런 다음 10 초마다 구애 활동에 종사하는 남성의 수를 점수.
점수구애 활동은 다음과 같습니다 : 일방적 인 날개 확장, 구애 체인, 구애 원, 복부 굽힘 및 장착. 플라이 동작의 대표적인 기록입니다. 남성이 많은 활동을 보여주지 않는 적응 하는 동안.
남성이 산발적인 구애를 보이는 첫 번째 노출 시. 그리고 남성이 활동 구애를 표시하는 여섯 번째 노출 중. 10초 블록에 구애를 표시하는 남성의 수를 입력합니다.
3회 연속 10초 블록으로 남성 구애의 최대 수를 대표 데이터 포인트로 활용하십시오. 값이 가장 높은 10개의 연속 데이터 포인트의 평균은 펍당 남성 간 구애의 비율을 나타냅니다. 야생형 캔톤-S는 반복된 에탄올 노출 시 억제되지 않은 구애의 활동이 점진적으로 증가하고 있습니다.
이는 에탄올의 억제 효과에 대한 행동 감도를 나타낸다. 우리는 티라민 베타 -하이드록실라아제, T 베타 H가 부족한 파리를 테스트하여 감질에서 문어민의 역할을 조사하여 따라서 문어민결에 결핍. 캔톤-S와 마찬가지로 T 베타 H 돌연변이는 반복된 에탄올 노출에 대한 반응이 확대되었지만 감소된 수준으로 나타났습니다.
우리가 T 베타 H와 캔톤-S를 비교했을 때, 우리는 T 베타 H 돌연변이 수컷이 문토파민이 감도에 중요할 수 있다는 것을 나타내는 각 노출에 있는 캔톤-S 남성 보다는 더 적은 억제구애를 표시한다는 것을 관찰했습니다. 이제 Flypub 분석을 사용하여 에탄올에 의해 유도된 동작을 설정, 수행 및 분석할 수 있습니다. 염두에 두어야 할 핵심 포인트는 술집의 적절한 조립을 포함합니다.
2개의 일관된 에탄올 전달, 세 가지, 정확하고 편견없는 행동 점수. 플라이펍 분석에는 많은 장점이 있습니다. 그것은 간단하고 저렴하며 배우기 쉽습니다.
또한, 파리의 다중 그룹은 동시에 분석될 수 있으며, 이 연구를 용이하게 하여 유전적 또는 실험적 조작의 효과를 식별할 수 있습니다. Flypub 분석체는 고등학교, 학부 및 대학원생, 포스트 문서 및 교수진을 포함하여 모든 수준의 실험자들에게 매우 끌리고 있습니다. 요약하자면, Flypub 분석은 분자 플레이어, 세포 경로, 뇌 회로 및 알코올 사용 장애에 기여하는 위험 요소를 식별 할 수 있습니다.
