פרוטוקול הזרקה תוך גולגולתי זה הוא משמעותי משום שהוא מאפשר זריקות מדויקות, ניטור מיום ליום ומדידת נפח גידול מדויקת למחקר יעיל יותר של מנגנונים של גרורות במוח. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת ניטור סדרתי של גידול בין-cranial הגידול. הדגמת ההליך תהיה ג'ונתן ספיר, עמית מחקר בוגר ממעבדת Sizemore, ואנה ברטאס, מדענית מחקר הדמיה מאוניברסיטת אוהיו משאב משותף להדמיית בעלי חיים קטנים.
לפני תחילת ההליך, סובב את מנעול הבמה על המקדחה כדי לאפשר הכנסת מתאם סיביות של מקדחה ומקדחה סטרילית של מילימטר אחד לתוך התרגיל והדק ידנית את מנעולי הסיביות כדי לנעול את המקדחה. חבר את המקדחה למסגרת הסטראוטקטית והגדר את קצב מסירת המזרק הדיגיטלי ל- 0.4 מיקרוליטר לדקה, עם יעד של שני מיקרוליטרים. לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס הדוושה, מניחים את העכבר הרדמה על המסגרת ולהשתמש בקצה הקהה של מולך קצה כותנה כדי למקם את השיניים באבוס של סרגל הפה.
לחץ על פס האוזן השמאלית כנגד התותש המדילי של האוזן השמאלית כדי לייצב את הגולגולת ולהשתמש בבורג על המסגרת הסטראוטקטית כדי לנעול את הגולגולת למקומה. ואז לאבטח את הצד השני של הגולגולת עם האוזן הימנית באותו אופן. כדי להפוך את החלון calvarial, לנקות את הקרקפת עם שלושה פתרון בטדין לסירוגין רציף ו 70% קרצוף אתנול ולהשתמש אזמל סטרילי לעשות חתך שלושה מילימטר דרך העור לאורך ההיבט החציוני המרכזי של הגולגולת בעקבות קו התפר sagittal.
לזהות ולכוון את מעט הקידוח הסטרילי בניצב אל bregma, הקפד לאפס את קנה המידה vernier דיגיטלי לאפס ולהזיז את קצת מקדחה שני מילימטרים משני מילימטרים משניים לתפר sagittal ו מילימטר אחד לפני התפר התפור. להזיז את העור מן התרגיל באמצעות המהירות הגבוהה ביותר לשים לב ציוני דרך, בזהירות לקדוח חור, בערך 0.5 מילימטרים עמוק, דרך calvaria, קירור אתר הקידוח עם טיפות של מלוחים סטריליים לפי הצורך. לאחר חלון calvarial נעשה, בזהירות להעלות את המקדחה ולהסיר את התרגיל מן המסגרת הסטראוטקטית.
להזרקת תאים סרטניים, חבר את יחידת המזרק האוטומטית למנגנונים הסטריאוטקטיים וטען את ששת עד שמונה המיקרוליטרים של התאים המתווסכים ביסודיות ב- DPBS למזרק המילטון סטרילי. לטעון את המזרק על המזרק ולוותר על נפח קטן של פתרון על וילון סטרילי חד פעמי כדי להפוך את המחט להזרקה. השתמש במוליך קצה כותנה כדי לנגב את המזרק עם 70% אתנול וליישר את קצה המחט למרכז החלון הגולגולתי עד שהוא כמעט נוגע המוח הגדול חשוף.
אפס את סולם vernier דיגיטלי לאפס לאט להכניס את המחט לתוך עומק של שלושה מילימטר לתוך המוח. השאירו את המחט במוח לפחות 60 שניות לפני בחירת לרוץ על מסך המזרק כדי להתחיל את משלוח התא לאתר ההזרקה. כאשר כל התאים נמסרו, לאפשר את המחט לנוח במוח לפחות שלוש דקות כדי לאפשר parenchyma המוח להסתגל לזריקה לפני נסיגת המחט מהמוח בקצב של 0.75 מילימטרים לדקה.
עבור דימות תהודה מגנטית של נטל הגידול, 10 עד 20 דקות לפני הדמיה בנקודת הזמן הניסיונית המתאימה, לנהל 100 microliters לכל 20 גרם של משקל גוף מבוסס סוכני ניגודיות gadolinium לעכבר על ידי הזרקה תוך-לידתית סטנדרטית. הרדמה של העכבר לאחר ההזרקה והצב את העכבר הרדמה על מחזיק מחומם. מניחים את המחזיק לתוך מגנט 9.4 T מצויד סליל משטח המוח של העכבר ולקבל תמונה לוקלייזר.
לאחר מכן תדמיין את מוח העכבר באמצעות רצף נדיר משוקלל T2 ופרסם ניגודיות מבוססת gadolinium T1 רצף נדיר משוקלל. כדי למדוד את נפח הגידול הכולל, פתח את קובץ הנתונים MRI של עניין ImageJ ולהשתמש בכלי בחירות יד חופשית לצייר מתאר סביב הגידול. לאחר מכן פתחו את הכרטיסיה 'ניתוח' ובחרו מידה כדי להשיג את האזור של האזור שנבחר.
כאשר כל הגידול המכיל פרוסות עבור עכבר בודד בנקודת זמן ספציפית זו הוערך, לייצא את הערכים לתוך תוכנית ניתוח נתונים מתאימה. כאן, סקירה מייצגת של כימות נפח הגידול עבור עכבר יחיד ביום 7 ויום 10 פוסט מורין הזרקת תא גידול חלבי ניתן לראות. ההערכה של 30 פרוסות לסריקה גילתה כי לניתוח זה, ביום שבע לאחר ההזרקה, חמש פרוסות הציגו נטל גידול.
בעוד שביום 10, תשע פרוסות הציגו נטל גידול. אזור הגידול בכל תמונה נמדד לאחר מכן כפי שהודגם, מה שאיפשר מעקב אחר השינוי בנפח הגידול לאורך זמן. כל קו תא וכל מודל עכבר נמען הוא ייחודי ולכן דורש אופטימיזציה של מספר התאים שהוזרקו ולוח הזמנים של ה- MRI כדי להבטיח דיוק דימות.
בעקבות הליך זה, המוח יכול להיות שנקטפו עבור כל הבדיקה במורד הזרם, כולל בידוד תא יחיד או ניתוח היסטופתולוגי.
