פרוטוקול זה מתאר את כל השלבים העיקריים כדי להקים בהצלחה מודל השתלת כליה אורתוטופית פורצ'ין באמצעות זמן שימור איברים של 24 שעות ניטור טלמטרי פרי אופרטיבי. היתרון העיקרי של מודל השתלה אוטומטית גדול זה של בעלי חיים על פני מחקרים לשעבר vivo על מודלים בעלי חיים קטנים הם אנטומי כירורגית ואת הדמיון הפתופיזיולוגי להגדרה הקלינית. הצוות שלנו בבית החולים האוניברסיטאי RWTH Aachen ידגים את הנהלים.
לאחר אישור הרמה המתאימה של סם בחזיר נקבה בוגרת בצום לילה, לעשות חתך של שלושה עד חמישה סנטימטרים במפשעה ול לנתח את עורק הירך בצורה 360 מעלות. השתמש באזמל מספר 11 כדי לבצע טרשת עורקים ולהכניס את חיישן העורקים של מכשיר הטלמטריה. לאחר ביצוע כיס תת עורי באגף השמאלי, מנהרה משדר טלמטריה לתוך האגף ולתקן את המשדר אל fascia השריר עם תפר 3-O פוליפרופילן קשר יחיד.
לאחר מכן, בצע שני חתכים קטנים בצד שמאל ויימין של בית החזה ומנהרה אלקטרודות א.ק.ג אדום ולבן למיקומם המיועד. כאשר האלקטרודות אובטחו, התחל ברישום נתוני הטלמטריה. לאחר רכישת אותות יציבה, סגרו את החתך במפשעה בתפרים וריססו רוטב פילם והניחו על החיה ז'קט פורצ'ין בגודל מתאים.
14 ימים לאחר הניתוח הראשון, לבצע חתך ארבעה עד חמישה סנטימטרים בחורב הצוואר בצד ימין של החיה ההרדמה לנתח את רקמת תת עורית ושרירים כדי לחשוף את וריד הלהטוטן. השתמש מבוא גיליון לקלף משם או שיטת סלדינגר כדי להכניס את קטטר הצוואר. אבטחו את הקטטר בתפר פוליפרופילן 5-0 וסגרו את החתך בשתי שכבות.
לאחר חיטוי כירורגי ועיון סטרילי, לבצע לפרוטומיה בינונית כדי לפתוח את הבטן ולהשתמש מפשק בטן סטנדרטי לחשוף את השדה הכירורגי. פתח את השכבה ההצפית ולהשתמש צריבה מונופולארית, ממטרות דו קוטביות, ומספריים עדין לנתח את הכליה השמאלית ואת השופכה מכל רקמה חסידה. לאחר מכן השתמש תפר פוליגלקטין 3-0 כדי ligate ולחלק את השופכה השמאלית לפחות 10 ס"מ דיסטלי כדי hilum הכליה.
כדי לאחזר את הכליה השתל, להשתמש מלחצי כלי דם כדי לסגור את עורק הכליה ואת וריד קרוב aorta ו vena קאווה. וחותכים את הכלים מעל הצדפות. לאחר מכן לתת את הכליה לצוות השולחן האחורי להכנה נוספת ולהשתמש בתפר פוליפרופילן 5-0 כדי לסגור את הגדם של עורק הכליה ואת וריד הכליה.
מיד לאחר האחזור, השתמש קטטר היקפי תקן 14 מד כדי cannulate עורק הכליה לשטוף את הכליה עם לפחות 500 מיליליטר של פתרון שימור איברים קרים כקרח. לאחר הסומק, לעטוף את השתל בשקיות איברים סטריליים לאחסון בתתבר שימור איברים עם זמן איסכמי קר היעד של 24 שעות בארבע מעלות צלזיוס באמצעות מעגל קירור מבוקר מחשב. שתיים עד חמש דקות לפני הידוק כלי הדם, להזריק דרך הווריד 100 יחידות בינלאומיות לקילוגרם של נטריום הפרין ולאחר מכן להסיר את הכליה הימנית ההפונטרלית כפי שהוכח ולפתוח מחדש את לפרוטומיה החציוני.
שתיים עד חמש דקות לפני הידוק כלי הדם, להזריק דרך הווריד 100 יחידות בינלאומיות לקילוגרם של נטריום הפרין ולאחר מכן להסיר את הכליה הימנית ההפוכים כפי שהוכח. מניחים את הכליה השתל השתמר לתוך השדה הכירורגי וליזום את הממשל של 0.1 כדי 1 מיקרוגרם לקילוגרם לדקה של נוראדרנלין כמו עירוי מתמשך באמצעות לחץ הדם העורקי הממוצע וקצב הלב כדי לפקח על היעילות. עבור anastomosis מקצה לקצה של וריד הכליה, להשתמש 5-0 פוליפרופילן למקם שני תפרים פינתיים לתפור את הקיר האחורי בצורה רציפה.
לאחר השלמת הקיר האחורי, השתמש בקצה אחד של התפר הפינתי הגולגולתי כדי לתפור את הקיר הקדמי בכיוון craniocaudal ולשטוף את הווריד עם יחידה בינלאומית 100 לכל מיליליטר של תמיסת מלח Heparinized. עבור anastomosis מקצה לקצה של עורק הכליה, להשתמש 6-0 תפר פינת גולגולת פוליפרופילן לפני השימוש בטכניקת המצנח לתפור את הקיר האחורי בצורה רציפה כפי שהוכח. תפר את הקיר הקדמי עם הקצה השני של תפר פוליפרופילן 6-0 חמוש כפול לשטוף את העורק עם 100 יחידות בינלאומיות למיליליטר של תמיסת מלח Heparinized.
לאחר השלמת anastomosis, לקשור את שני החוטים בפינה caudal ולפתוח ברצף את מהדקי כלי הדם והעורקים הווריד כדי לאפשר התחדשות של הכליה. לאחר ההתרסה, באופן טויף לנהל חמישה מיליליטר של פפברין לקיר החיצוני של עורק הכליה ולנהל דרך הווריד 250 מיליליטר של 20% גלוקוז פתרון במינון יחיד 80 מיליגרם של Furosemide. לאחר מכן, להעביר קטטר שתן צרפתי ילדים דרך דופן הבטן והעור ולהשתמש קשירה כדי לאבטח את הקטטר לשופך.
סגור את השכבה צפדית על הכליה כדי למנוע נקע של השתל וקינקיות של anastomosis כלי הדם. ולסגור את הבטן בארבע שכבות כפי שהוכח. לבסוף, השתמש אולטרסאונד דופלר צבע כדי להבטיח זלוב עורקי ורטורי נאותה של השתלת הכליה לפני החזרת החיה שיקום מלא למתקן הדיור.
בקבוצה מייצגת זו של חמישה ניסויי השתלת כליה אורתוטופית פורצ'נית, השתלת המשדר ותהליכי ההשתלה האוטומטית הצליחו בכל בעל חיים עם אותות טלמטריה מספיקים שנרשמו במהלך תקופת התצפית. לאחר סגירת הבטן, אולטרסאונד דופלר צבע חשף זלוב עורקי ורידי משביע רצון של הכליה בכל המקרים. ערכי אשלגן וקריאטין בסרום הגיעו לשיאם בימים שלאחר הניתוח 3-4 והראו התאוששות הדרגתית לאחר מכן.
ה- pH בדם נשאר בטווח הנורמלי ותפוקת השתן התאוששה לערכים נורמליים בארבעת הימים הראשונים לאחר הניתוח. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לענות על שאלות שונות על ההשפעות של טכניקות שימור איברים או טיפולים לשעבר vivo או in-vivo במודל בעלי חיים גדול משמעותי קלינית.
