מודל עכברוש אוסטאוסרקומה סנגנית אורתוטופית עם קטיעה כדי לשלוט בקצב גרורות

השתלת תאי אוסטאוסרקומה בתוך מיקרו-וירוס השוקה מקדמת גרורות ריאות. מודל זה יכול גם להיות שימושי לחקר המנגנונים של גרורות ריאות או טיפולים חדשניים בסרטן הדורשים מערכת חיסונית שלמה. לאחר הגידול הוקם, קטיעה יש צורך לשלוט בקצב גרורות במחקרי הישרדות לטווח ארוך.

אנו משתמשים בזריקות הצוואר כדי לאפשר הדמיה של משלוח סמים תוך ורידי. הזרקת וריד הצוואר שימושית עבור מודלים רבים אחרים מחלה שעבורם משלוח סמים מדויק נדרש. השתמשנו בשיטה זו כדי לספק חלקיקים ולירגנות radiolabeled להדמיה in-vivo.

אנו ממליצים למשתמשים חדשים לתרגל הסרת איבר מחמש עד 10 חולדות מורדמות לפני ניסיון ניסוי לשלוט במכניקה של קטיעה בגפיים ללא איבוד דם. לאחר אישור חוסר תגובה לרפלקס הפין, אבטחו את החולדה המורדמת ב- nosecone על כרית חום נמוכה בתנוחת החום. הסר את השיער על רגל ימין, עד הבטן התחתונה הגחון והגב.

השתמש גזה או ספריי כדי לחטא את האזור הכירורגי עם 70% אתנול וחיטוי מדולל מתאים ולהחיל משחה על העיניים של החיה. באמצעות תנועה דמוית מקדחה כדי להפוך את פתח, להכניס מחט 22 מד מסומן 10 מילימטרים מן הקצה 10 מילימטרים לתוך diaphysis של השוקה באמצע הרמה tibial, הרחבת המחט דרך המטפיזיס לתוך הדיאפיזה. לאחר הסרת המחט, מערבבים בעדינות את ההשעיה של תאי הגידול של עניין כדי להשיג השעיית תא הומוגני, לטעון 7.5 x 10 עד הרביעי של התאים ב 20 microliters של PBS לתוך מזרק המילטון.

סמנו את מזרק המילטון עם תאים 10 מילימטרים מקצה המחט והכניסו את המחט לסימן 10 מ"מ לתוך החור שנעשה על ידי מחט 22 מד. לאחר מכן לפרוק בעדינות את כל נפח התאים לתוך חלל מח העצם, ולהניח את החולדה לתוך כלוב על כרית חימום עם ניטור עד recumbency מלא. עבור ניהול דוקסורובicin תוך ורידי, לאחר אישור הרדמה, להשתמש בניתוח זהיר כדי לדמיין את וריד הצוואר ימין או שמאל, ולהכניס את המחט לתוך רקמת השריר overlying.

כוון את המחט לכיוון הראש לתוך לומן וריד הצוואר, כפי שהוא דמיין את הצוואר הצווארי האחורי לשריר החזה, ולמשוך נפח קטן של דם לתוך קצה המחט כדי לאשר החדרה מדויקת. כאשר המחט היא במקום, לאט להזריק 100 עד 150 microliters של שני מיליגרם לכל קילוגרם דוקסורוביצין מעל דקה אחת. הפתרון צריך להיות גלוי בתוך הווריד במהלך המסירה.

כאשר כל הפתרון נמסר, השתמש גזה סטרילית כדי להפעיל לחץ עדין על הווריד, ולהשתמש שלושה עד ארבעה קליפים פצע כדי לסגור את החתך. לאחר אישור הפחתת השעה, הסר את השיער ברגל ימין, עד לגחון ולבטן התחתונה של גב, והניח את החולדה בתנוחת העל-אדמה על כרית חימום. לשפשף את העור מאמצע העגל רק מעל מפרק הירך של הבטן התחתונה הימנית כפי שהוכח ולהחיל משחה על העיניים של החיה.

באמצעות כפפות ומכשירים סטריליים, למשוך את הרגל דרך פתח האוורור של וילון כירורגי סטרילי ולעשות חתך עורי היקף רק פרוקסימלי לחנק. Deglove את האיבר האחורי כדי לחשוף את העורק הירך ואת הווריד על פני השטח הגחון-מנדל של הגפה האחורית, ולהשתמש 4-0 תפרים נספגים כדי להתדיין על כלי הדם ברמה של אמצע הירך ו transect distally. מהדקים את הווריד בצורה לא ברורה כדי להפחית דליפה במהלך ניתוח שרירים ולהשתמש בניתוח קהה כדי לחטוף את מפרק הירך עם סיבוב חיצוני לרוחב.

אתר ופרק את ראש עצם הירך מן acetabulum, ולהסיר את כל הרקמה הנותרת, שמירה על הרגל מחוברת לגוף. לנהל בלוק התזה אל acetabulum ועצב sciatic עם כשישה מיליגרם לכל קילוגרם של ropivacaine, ולהשתמש פשוט מופרע 4-0 ספיגה כדי לסגור את השרירים מעל acetabulum. לאחר מכן להשתמש מהדקי פצע להציב חמישה עד 10 מילימטרים כדי לסגור את קצוות העור.

הדמיית רנטגן למעקב אחר הגידול מאפשרת אישור לפלישה לגידול בעצמות וניתן לבצעה על גפיים שנקטעו לאחרונה או קבועות בפורמלין. הדמיית רנטגן מאפשרת גם הערכה של המורפולוגיה הרדיוגרפית של הריאות עם ובלי גרורות, ומספקת שיטה מהירה וקלה לקביעת הצורך בהמתת חסד כדי למנוע מקרי מוות ספונטניים מיותרים. בחולדה osteosarcoma, הן מורפולוגיה גידול אוסטאוליטי אוסטאובלסטי יכול להיות מאושר על ידי היסטופתולוגיה של הגפה קטועה.

שים לב כי עצם קליפת המוח נעדרת בדוגמה זו וכי העצם הסמוכה הוחלפה או מועשרת על ידי עצם ארוגה חדשה המכווונים בניצב לפיר הקיים של קליפת המוח. איים של אוסטואידים לא בוגרים ניתן לזהות גם בתוך הגידול. בתמונות אלה, מורפולוגיה מיקרוסקופית של גרורות ריאות מייצגות, חלקם עם עצם מינרלית ותסחיף כלי דם גידול ניתן לראות.

חיסון של גידולי אוסטאוסרקומה ראשוניים יכול לחשוף חדירה של הגידולים על ידי אוכלוסיות תאי החיסון, כגון מקרופאגים חיוביים CD68 או תאי T חיוביים CD3. סופג מערבי של חלבון תאי הגידול lysates יכול לשמש כדי לקבוע את הביטוי של קינאז חלבון, קולטני קינאז חלבון, וחלבונים אחרים אינטראקציה עם מסלולים אלה. עבור השתלת טיבי, לאחר החור tibial הראשון נעשה, להמשיך להחזיק את הרגל ביד הלא דומיננטית שלך באותה זווית כדי לשמור על העור ואת חורי העצם בשורה כדי להפוך את החדרת מחט המילטון קל יותר.

להזרקת וריד הצוואר, הכנס את המחט לתוך השריר, אך אל תכוון את המחט יותר מדי כדי למנוע החמצת הווריד. לכריתה, תרגלו קודם את הפירוק של חולדות מורדמות.