פרוטוקול זה מזהה ארבעה תחומים עיקריים שיעזרו לשפר את המתודולוגיה ולבצע השתלת ריאות אמינה. הראשונה היא טכניקת איזוק הניתנת לשחזור. השני הוא זיהוי מדויק ומשכפל של החלל הבין-קוסטלי הרביעי, סגירה יסודית של הפצע, ולאחר מכן כיצד להתאושש ולקבל דגימות לניתוח.
טכניקות אלה מסייעות לפתח שיטה אמינה להשתלת ריאות כדי לעבוד על מנגנונים מולקולריים ולפתח התערבויות טיפוליות. התחל עם הגדרת המכשיר הכירורגי על ידי הפעלת ציוד ניטור דופק / ריווי חמצן וחימום הלוח ל 42 מעלות צלזיוס. כמו כן, הפעל את מכונת האוורור וההרדמה כדי לחמם מראש את מאייד האיזופלורן.
ממלאים מזרק הרדמה ב-10 מיליליטר איזופלורן נוזלי ומרכיבים את המזרק על מכונת האוורור וההרדמה. לאחר מכן, הפעל את המיקרוסקופ הכירורגי עם גובה ומיקוד מותאמים להעדפות והפעל את המכשיר electrocautery. כמו כן, להכין ולפרוס את הכלים הכירורגיים.
קבע את גודל המד הנכון של קטטר האנגיו שישמש לייצור האזיקים בהתבסס על משקל הגוף של החולדה על ידי התייחסות לטבלה הראשונה. לאחר הכנת האזיקים לעורק הריאה, הסימפונות ווריד הריאה, מניחים את קטטר האנגיו בגודל המתאים על משטח סטרילי מתחת למיקרוסקופ הניתוחי. לאחר מכן, השתמש בלהב כירורגי אחורי מספר 11 כדי לחתוך את קטטר האנגיו לזווית של 90 מעלות כדי ליצור גוף שרוול באורך שני מילימטר עם רוחב וגובה של מילימטר אחד בחלק העליון של גוף השרוול.
לאחר הכנת העטיפה לניתוח, יש לבצע חתך עור בקו האמצע באורך שלושה עד ארבעה סנטימטרים, אמצע הצוואר, עם המספריים, ולנתח בזהירות את הרקמות והשרירים התת עוריים באמצעות מלקחיים. עבור אינטובציה אנדוטרכאלית, להשחיל תפר משי 4-0 סביב קנה הנשימה. לאחר מכן, הכנס 16 מד אנגיו-קטטר לתוך קנה הנשימה וקשר את התפר סביב קנה הנשימה בחוזקה עם קשר כפול, ואחריו קשר יחיד כדי להחזיק את קטטר האנגיו במקומו.
חבר את קטטר האנגיו למכונת ההנשמה כדי לשמור על מישור כירורגי של הרדמה בחולדה עם איזופלורן של 1% עד 2%. השתמש במספריים לביצוע לפרו-סטרנוטומיה, כחתך משולב של קו אמצע וחתך רוחבי. לאחר מכן, להזריק 1, 000 יחידות לק"ג של הפרין עם מזרק אינסולין דרך הווריד נבוב נחות, או IVC, ולאפשר 10 דקות למחזור הדם המערכתי.
בזמן שהריאות מאווררות, חותכים את האוריקים הימני והשמאלי עם מספריים קפיציים לניתוח מיקרו ולאחר מכן מכניסים קטטר אנגיו 18 מד דרך עורק הריאה לכוח הכבידה שוטפים את הריאות עם 20 מיליליטר של תמיסת שימור במזרק התלוי על 28 סנטימטרים של מים, מחובר לצינורות וקטטר אנגיו. נתק את מכונת ההנשמה מהצינור האנדוטרכאלי כדי להתחבר למזרק חמישה מיליליטר מלא בנפח אוויר תקין בהתאם למשקל הגוף. לאחר שעה של איסכמיה חמה, מסירים את גוש הלב-ריאה בעזרת מספריים ומלקחיים אביביים מנתחים במיקרו ומניחים על גזה סטרילית ספוגה ב-PBS קר כקרח על צלחת פטרי סטרילית על קרח.
יש לקצץ בזהירות את אזור הריאה השמאלית בעזרת מספריים קפיציים של Vannas-Tubingen ולרכוש את וריד הריאה השמאלי, עורק הריאה והסימפונות. השתמש hemostat יתוש לתפוס את הכרטיסייה שרוול. לאחר מכן, יש לקחת את הקצה הדיסטלי של וריד הריאה, עורק הריאה או הסימפונות דרך גוף השרוול המתאים ולאוורר את הרקמה הנוספת סביב השרוול לפני שתשיגו 8-0 תפר ניילון.
לאחר שתסיים, השתמש במספריים קפיציים Vannas-Tubingen כדי לחתוך את הרקמה הנוספת ואת השרוול סביב גוף השרוול. כדי להכין את החולדה המקבלת, ציירו קו על החזה של החולדה מהחריץ העל-סטרנלי לתהליך הקסיפואיד. באמצע קו זה, ציירו קו לאורך הצד השמאלי של החזה המודד מחצית מהמדידה מהחריץ העל-סטרנלי לתהליך הקסיפואיד.
באמצעות כבל הסיב האופטי המחובר לאור LED מערכת האינטובציה האנדוטרכאלית, דמיינו ובצעו אינטובציה למושתל באמצעות צנתר אנגיו-צנתר בעל 16 מד. לאחר שליפת הריאות, הניחו גזה סטרילית סביב הריאה השמאלית תוך כדי החזקתה עם מהדק בולדוג דיפנבאך והפעילו מהדק יסרגיל על אזור הריאה השמאלית קרוב ככל האפשר. כאשר החולדה מוכנה, המשך לאנסטומוזה של ורידים ריאתיים על ידי הנחת תפר ניילון 7-0 סביב וריד הריאה של הנמען.
חותכים את וריד הריאה של המקבל באמצעות מספריים קפיציים Vannas-Tubingen על ידי חיתוך רוחבי של הוורידים המגזריים העליונים והתחתונים באופן מרוחק ככל האפשר, ושוטפים את הדם עם 0.2 מיליליטר של יחידה בינלאומית אחת למיליליטר מלח הפרין באמצעות מזרק אינסולין. הניחו את הריאה התורמת עטופה בגזה קרה, רטובה וסטרילית לתוך חלל בית החזה, והכניסו את וריד הריאתי האזוק של התורם לווריד הריאתי של המקבל לפני הבטחת האנסטומוזה עם תפר ניילון 7-0 שנקבע מראש. עבור אנסטומוזה של הסימפונות או הסימפונות, יש להניח תפר ניילון 7-0 סביב הסימפונות של המקבל לפני חיתוך הסימפונות של המקבל על ידי חיתוך רוחבי של דרכי הנשימה הסגמנטאליות העליונות והתחתונות בצורה דיסטלית ככל האפשר.
לאחר החדרת הסימפונות האזוקים של התורם לסימפונות של הנתרם, אבטחו את האנסטומוזה באמצעות תפר ניילון 7-0 שהוצב מראש. לאחר מכן, לבצע את אנסטומוזה עורק ריאתי כפי שתואר קודם לכן. כדי לאפשר עירוי ואוורור של הריאה התורם המושתל, יש להסיר את מהדק Yasargil על הילום, ולאחר מכן לסגור את חתך בית החזה עם תפר ניילון 6-0.
יש לאסוף את נוזל ה-BAL מהריאות המקוריות או המושתלות לפי הצורך. יחס המשקל הרטוב ליבש של האונות חושב כדי למדוד את בצקת הריאות. האונה המושתלת הראתה עלייה משמעותית ביחס המשקל הרטוב ליבש בהשוואה לאונה הטבעית של התורם או הנמען, מה שמעיד על כך שאין בצקת ריאות.
לדעתנו, שני השלבים הקריטיים של הליך זה הם אחד, להשתמש במדויק בציוני דרך אנטומיים כדי לזהות את החלל הבין-קוסטלי הרביעי, ולאחר מכן שניים, לבחור ולהשתמש כראוי באזיקים כדי לקבל טכניקת אזיק הניתנת לשחזור. מודל השתלת ריאות של חולדות שהוא גם ניתן לשחזור וגם עקבי הוא בסיס לחקירות מולקולריות של עירוי איסכמיה והשתלות בכלל.
