מודלים ניסיוניים של תרומת איברים מחקים בדרך כלל מצבים בודדים של פגיעה ברקמה הקשורה לתהליך המוות ו / או אירועים הקשורים לשימור והשתלת האיבר. מודלים אלה שימושיים מאוד בפיתוח טיפולים המבקשים להגדיל את מספר התרומות, וכתוצאה מכך להקטין את רשימת השקלול של מקבלי התרומות. בהתאם לכך, חשוב לפתח מודלים שונים, כגון אלה הגורמים למוות מוחי ומוות במחזור הדם.
מאז אירועים אלה קשורים לתהליכים מזיקים שונים הפוגעים בפונקציונליות של האיברים שנתרמו והרקמות. הרדמה והכנה טרום ניתוחית. הניחו את החולדה בתא סגור עם איזופלורן 5% למשך דקה עד ארבע דקות.
ודא הרדמה נכונה על ידי בדיקת רפלקס צביטת הבוהן. בהיעדר תגובות רפלקס, לבצע אינטובציה orotracheal, 14 מד אנגיוקאת בעזרת laryngoscope ילדים. עם מאוורר מכני שהותאם בעבר ונפח גאות ושפל של 10 מיליליטר לקילוגרם, 90 מחזורים לדקה ו-PEEP 3.0 ס"מ H2O, חברו את קטטר קנה הנשימה למכונת ההנשמה והתאימו את ריכוז חומר ההרדמה ל-2% הסר פרווה מאזורי העניין, הראש, הצוואר, החזה והבטן.
לאחר מכן, באמצעות גזה, לנקות את השדה הכירורגי ואת הזנב של החיה עם פתרון אלכוהולי של Chlorhexidine digluconate, 2% הליך חיטוי חזר על עצמו שלוש פעמים. חתכו את קצה הזנב של החיה, הניחו את האגודל והאצבע המורה על בסיס הזנב, ואז לחצו והחליקו אותם הרחק מהבסיס. לאסוף דגימת דם היקפית, 20 מיקרוליטר דרך הזנב עבור ספירת לויקוציטים הכוללת. טרכאוסטומיה.
בצע דיסקציה אורכית של קנה הנשימה הצווארי, החל מהשליש האמצעי של הצוואר לחריץ העל-החזה. חתך של כ-1.5 ס"מ. לאחר חתך העור והרקמה התת עורית, לנתח את שרירי צוואר הרחם עד קנה הנשימה נחשף.
מניחים את ליגטורת המשי 2.0 מתחת לקנה הנשימה. באמצעות מספריים מיקרו, קנה הנשימה הוא השליש העליון של קנה הנשימה כדי להשיג אוורור אחיד. חותכים אופקית את קנה הנשימה בין שתי טבעות סחוס כדי להתאים לקוטר של צינורית מתכת, 3.5 סנטימטרים.
הכנס את צינור האוורור ותקן אותו עם ליגטורות מוכנות. חבר את צינור האוורור למערכת האוורור של בעלי חיים קטנים. אווררו את החולדה עם נפח גאות של 10 מיליליטר לקילוגרם, קצב של 70 מחזורים לדקה, ו-PEEP של 3 סנטימטרים H2O.
צנתור עורק הירך וורידים. אז, לחשוף את משולש הירך דרך חתך קטן, כ 1.5 ס"מ באזור המפשעה. לזהות ולבודד את כלי הירך.
עבור הליך זה, השתמש במיקרוסקופ סטריאו פי 3.2 הגדלה. הניחו שתי ליגטורות משי 4.0 מתחת לכלי הדם, הווריד או העורק, האחת בנפרד והשנייה בסמיכות. סוגרים את הליגטורה הדיסטלית ביותר ומניחים קשר מותאם מראש ברצועה הפרוקסימלית ומושכים.
הכנס את הקטטר דרך חתך קטן מוכן בכלי הדם. קבע את הצינורית כדי למנוע נקע. חבר את צנתר העורק למתמר לחץ ולמערכת ניטור סימנים חיונית כדי לרשום את ה- MAP.
המתמר צריך להיות ממוקם בגובה הלב של החיה. חבר את צנתר הקשתות למתמר לחץ ולמערכת ניטור סימנים חיונית לרישום ה- MAP. המתמר צריך להיות ממוקם בגובה הלב של החיה.
מניחים את קטטר המזרק 3 מיליליטר לתוך הווריד, במטרה הידרציה ו exsanguination בעת הצורך. השראת הלם דימומי. דרך ציר ורידי ועם מזרק heparinized, להסיר כמויות קטנות של דם עד ערכי MAP של כ 50 מ"מ כספית הם הגיעו.
לפיכך, הקמת הלם דימומי. הערה, aliquots של דם יש לקחת במרווחים של 10 דקות. שמור על לחץ יציב על כ 50 מ"מ של כספית לתקופה של 360 דקות.
לשם כך, להסיר או להוסיף aliquots של דם אם הלחץ עולה או יורד בהתאמה. שים מקור חום בקרבת מקום כדי למנוע היפותרמיה. בסוף הפרוטוקול, יש לקצור את בלוק הריאתי בקיבולת ריאה כוללת לאיסוף, ולהקפיא במהירות הבזק בחנקן נוזלי או להניח בתמיסת קיבוע למחקרים נוספים.
זירוז מוות במחזור הדם. כדי לגרום למוות במחזור הדם, לנהל 150 מיליגרם לכל קילוגרם של נתרן thiopental דרך קו ורידי. לאחר מכן, כבה את מערכת האוורור.
שים לב לירידה ההדרגתית ב- MAP. החיה צריכה להישאר איסכמיה חמה בטמפרטורת החדר במשך 180 דקות. בסוף הפרוטוקול, חברו מחדש את הריאות למכונת ההנשמה המכנית, וקצרו את הבלוק הריאתי בקיבולת ריאתית כוללת לאיסוף.
או להקפיא הבזק בחנקן נוזלי, או להניח בתמיסת קיבוע למחקרים נוספים. השראת מוות מוחי. הניחו את החולדה במצב נוטה.
הסר את העור מהגולגולת באמצעות מספריים כירורגיים. קדח קידוח בקוטר 1 מילימטר, 2.8 מ"מ קדמי, 10 מ"מ גחוני ו-1.5 מ"מ רוחבי לתפר הסגיטלי. הכניסו את כל צנתר הבלון לחלל הגולגולת, וודאו שהבלון ממולא מראש במי מלח, 500 מיקרוליטר.
בעזרת מזרק, במהירות לנפח את הצנתר. אשר מוות מוחי על ידי התבוננות בגובה פתאומי של MAP. רפלקס קושינג, היעדר רפלקסים, מידריאזיס דו צדדי ודום נשימה.
לאחר האישור, יש להפסיק את ההרדמה ולהשאיר את בעל החיים על הנשמה מכנית למשך 360 דקות. הניחו מקור חום בקרבת מקום כדי למנוע היפותרמיה. בסוף הפרוטוקול יש לקצור את הבלוק הריאתי בקיבולת ריאתית כוללת לאיסוף. תוצאות.
לאחר החדרת קטטר, קבוצת המוות המוחי חוותה עלייה פתאומית ברמות לחץ הדם. שיא יתר לחץ דם הוא אירוע מוזר הקשור ללחץ תוך גולגולתי מוגבר, והוא יכול להיחשב עדות ראשונה להקמת מוות מוחי. לחץ שיא זה לווה בירידה מהירה ב- MAP.
לחץ דם נמוך נמשך כ -50 דקות, ולאחר מכן, רמות MAP חזרו לערכים קרובים לאלה בנקודת ההתחלה. שלא כמו בקבוצת המוות המוחי, הירידה ב-MAP בקבוצת ההלם הדימומי קשורה לנסיגה של אליציטוטים בדם ב-10 הדקות הראשונות של הניסוי. הלם היפו-וולמי נשמר במשך 360 דקות.
שש שעות לאחר תחילת ההלם הדימומי, בעלי חיים הפגינו עמידות מוגברת לרקמת הריאה, ואחריה היענות מופחתת למערכת הנשימה. כדי להעריך את השינויים בבצקת ריאות נבדק יחס משקל רטוב ליבש. בהקשר זה, מוות מוחי הראה בצקת גדולה יותר בהשוואה לקבוצת ההלם הדימום והמוות במחזור הדם.
לבסוף, קבוצת הלם דימומי הייתה קשורה למספר כולל מוגבר של לויקוציטים מערכתיים בהשוואה לערכי הבסיס, וביחס לקבוצת המוות המוחי. זה לווה ברמות ביטוי גבוהות יותר של IL1 בטא בקבוצת המוות המוחי ובקבוצת ההלם הדימומי מאשר במוות במחזור הדם. קבוצת ההלם הדימומי הראתה גם רמות גבוהות יותר של TNF אלפא בהשוואה לקבוצת מוות מוחי וקבוצת מוות במחזור הדם.
המודלים של תורמי איברים המתוארים כאן הם כלים פוטנציאליים בחקר השינויים הקשורים למתודולוגיות שונות של קצירת שתלים, ויכולים לספק אמצעים שבאמצעותם ניתן להשיג הבנה מלאה של ההשפעה של איכות איברים אלה על התוצאות לאחר ההשתלה. בהתחשב ביכולת השחזור והאמינות של המתודולוגיות המוצגות כאן.
