שיטה זו מאפשרת הפרדה של מיני חלבונים דו-קיום, כולל קונפורמיסטים או וריאנטים שונים ואפיון מקוון של הבדלי מבנה הסדר הגבוה שלהם כדי להשלים במדידת CEMS אחת. הוא משתמש באפקט האלקטרופורטי כדי לספק סביבה של כמעט 100% עבור תגובות HDX והפרדה אורתוגונלית של מיני החלבון הדו-קיום במהלך HDX לניתוח טרשת נפוצה מלמעלה למטה. התחל עם תנאים מוקדמים של אלקטרופורזה נימית, חילופי דיטריום מימן או הגדרת CE HDX.
באמצעות ultrasonication בתערובת של 50% מתנול, 49% מים ו 1% חומצה פורמית, לנקות את הזרימה באמצעות ממשק CE-MS מיקרוביאלי לפחות 30 דקות בטמפרטורת החדר. הר את הנימים המותאמים של HPC על אלקטרופרזיס נימי או מכשיר CE. לשטוף את הנימים עם פתרון אלקטרוליטים ברקע או BGE במשך 10 דקות באמצעות סמפלר אוטומטי ולהשאיר אותו מלא עם BGE.
השתמש באורך מתאים של צינורות נימי סיליקה מותכים ללא שינוי כמו צינורות עירוי לפתרון צירוף. השתמש איחוד ושרוול מתאים כדי לחבר את צינורות מכפיל למזרק זכוכית הדוק גז עם טמפרטורת קהה ולשטוף את הצינורות עם פתרון מכפיל במשך 10 דקות לפחות באמצעות משאבת עירוי. הכנס את השקעים של צינורות CE-MS מקודדים של HPC שנטענו עם הפתרונות המתאימים לממשק CE-MS המנוקה.
לקדם את המזרק עם משאבות עירוי כך פתרון צירוף מגיע לקצה הממשק. הר את ממשק CE-MS המורכב על מקור יינון תרסיס ננו אלקטרונים דיור של ספקטרומטר מסה. החל מתח ריסוס של 3-5 קילו-וולט על ממשק CE-MS.
החדירו את פתרון הצירוף למשאבת האינפוזיה בקצב זרימה הנע בין 0.1-10 מיקרוליטרים לדקה והבטיחו תרסיס אלקטרו יציב בקצה ממשק CE-MS. מקם את בקבוקון המדגם המכיל את BGE ואת המדגם האוטומטי, אשר ישמש מאוחר יותר כדי לרכוש אלקטרופרוגרמה ריקה ספקטרום מסה ריקה. להעריך את נפח ההזרקה באמצעות הקשר בין נפח הזרקה ופרמטרים הזרקה.
ולהזריק את הפתרון לדוגמה באמצעות סמפלר אוטומטי בשני PSI למשך זמן מתאים. התחל את הפרדת CE על ידי החלת מתח אלקטרופורטי של 20 קילו-וולט בלחץ עירוי הנע בין 0-2 PSI ולרכוש את האלקטרופרוגרמה. בינתיים, לרכוש את נתוני MS במצב כרומטוגרפי שבו הגרף הנוכחי יון נרכש כפונקציה של זמן וסריקות MS המתאימות אינן משולבות באופן אוטומטי לספקטרום יחיד.
שמור את האלקטרופרוגרמה הריקה ואת ספקטרום המסה כהפניות. הניחו את הבקבוקונים לדוגמה המכילים את הריכוזים הרצויים של פתרונות דגימת החלבון בסמפלר האוטומטי ורכשו את האלקטרופרוגרמה ואת הספקטרום MS1 של מיני החלבון המופרדים אלקטרופורטית ודיאוטריום. בצע מדידות Ms.measurements דו-מושביות עבור מינים של עניין, או לאחר רכישת ספקטרום MS1 בתוך אותה ריצה או בריצה נפרדת עוקבת.
לאחר כל מדידה, לשטוף את הנימים עם BGE בלחץ של 20 PSI במשך 10 דקות לפחות. נקו את ממשק CEMS ואת כל הצינורות לאחסון עם השלמת הניסויים. השג ערכת נתונים של דגימת נקודת הקצה HDX עם MS במצב עירוי ישיר.
לחץ עירוי נמוך הביא להפרדה טובה יותר של פסגות CE, אך הוביל לעלייה הן בזמן ההגירה והן במשך הניסוי. זמן תגובה ארוך יותר של HDX הביא לרמה גבוהה יותר של הסתה של ניתוחי החלבון. השונות A ו- B של אימונוגלובולין בטא או בטא IG, אשר נבדלים על ידי רק שתי שאריות חומצת אמינו ברצף שלהם, הולידה שתי פסגות מופרדות כראוי אלקטרופרוגרמה נגזרת EIC.
הדיאוטריום הדיפרנציאלי שכותרתו שונות הביאה לחלוקת מסה ברורה של יונים. מספר נמוך יותר בשפע יחסי של יוני Z מאשר יוני C נצפתה עקב הצמדה dysofied ייחודי באישור של בטא IG המגבילים את יעילות הפיצול בין CS 82 ו CS 176. רוב יוני השברים המיוצרים מביתא IGA, ובטא IGB מציגים מידה דומה של ספיגת דיטריום.
עם זאת, המקטעים הגדולים יותר המכסים את אתרי וריאציית הרצף מביתא IGA הופחתו במידה רבה יותר באופן משמעותי מאשר בטא IGB. ה- pH של BGE מותאם על פי הנקודה האיזואלקטרית של המדגם כדי למנוע הצטברות חלבון ולהקל על ההפרדה תוך שמירה על המתחם.
