מוארך ומקוטב האמלובלסט מפריש אמלוגנין בתרבית. זהו גם הפרוטוקול הראשון לגידול תאי אמלובלסט במיקרו-כבידה. צמיחת האמלובלסטים בתרבות הייתה אחד האתגרים הגדולים בתחום האמייל.
ומבחינתנו, זה שימוש במודל הביוריאקטור הזה, זו הפעם הראשונה שאנחנו משיגים את סימן ההיכר הזה בחקר האמייל. מודל זה יכול לשמש להבנת הביולוגיה של תאי אמלובלסט. מודל זה יודגם על ידי ד"ר מיראלי פנדיה.
התחילו בהנחת הרקמה שנאספה מעכברים לאחר הלידה במשך שישה ימים מתחת למיקרוסקופ הדיסקציה ולולאות צוואר הרחם המנותחות. הגדר ביוריאקטור על ידי חיבור השסתומים הסטריליים ליציאות המזרק. הוסף את שני התאים, לולאת צוואר הרחם ואת מוך השן, יחד עם פיגום מצופה לביוריאקטור ומלא את כלי הביוריאקטור ב-10 מיליליטר של מדיית SFM קרטינוציטים בתוספת גורמי גדילה וחלבוני מטריצה חוץ-תאיים.
סגור והדק את מכסה יציאת המילוי של כלי הביוריאקטור, ולאחר מכן פתח את השסתומים הסטריליים. השתמש בשני מזרקים סטריליים של שלושה מיליליטר לשינוי מדיה. לשם כך, מלאו מזרק אחד במדיום הטרי והשאירו את המזרק השני ריק.
פתח את שני שסתומי המזרק ותמרן בעדינות את הבועות לכיוון יציאת המזרק הריקה. לאחר שהמדיום הטרי מהמזרק המלא מוזרק בזהירות לתוך כלי השיט, הסר את כל הבועות דרך יציאת המזרק הריקה. סגור את יציאות המזרק עם כובעים.
חבר כל כלי לבסיס המסובב. הפעל את הכוח והגדר את המהירות ל -10.1 סיבובים לדקה. כוונן את המהירות כדי לוודא שהפיגומים נמצאים במתלה ואינם נוגעים בדופן כלי השיט.
להחלפת מדיה כל 24 שעות, הניחו את כלי הדם זקופים כדי להבטיח שהתאים ישקעו בתחתית. פתח את יציאות המזרק כדי לחבר את המזרקים הסטריליים ליציאות. שאפו 75% מהמדיום המדולדל בתזונה והזריקו את המדיום הטרי דרך הנמל השני כפי שהוכח קודם לכן.
המאקרוגרפים של פיגומי גרפן ופיגום קולגן מוצגים כאן. לפיגום הגרפן היה מערך מקביל של הבלטות פני השטח, ואילו פיגומי הקולגן הציגו את המבנה הנקבובי. מנדיבל עכבר שלד נותח והחלק הדיסטלי ביותר של חותך העכבר התחתון נחשף.
המיקום המדויק של לולאת צוואר הרחם שנכרתה מתוחם בחותך העכבר לאחר הלידה במשך שישה ימים, בעוד שאזור דומה במנדיבל עכבר שלד בוגר מסופק כהפניה. ההמימנדבילים הורכבו משלוש טוחנות מנדיבולריות וחתך שגדל ללא הרף, בעוד שנישת תאי הלולאה הצווארית הכילה אוכלוסיית תאים מגוונת הדרושה ליצירת אמייל. ההתמיינות המוצלחת של תאי לולאת צוואר הרחם במיקרו-סביבה מותאמת הביאה להיווצרות אמלובלסטים עם מאפיין אופייני של תאים מקוטבים עם הגרעין בקצה אחד ותהליכים תאיים ארוכים בקצה השני.
תרבית התאים במדיה בלבד ללא גורמי גדילה וציפוי פיגומים הביאה לתאי לולאה צווארית שהפרישו חלבוני אמייל מרכזיים, אך לא התארכו או התקרבו. קבוצת הפיגומים המצופים גלנין הדגימה שיעור התפשטות גבוה משמעותית בהשוואה לקבוצת הביקורת שהכילה פיגומים לא מצופים. מקטעי רקמת הריאה שנקטפו מעכברי E15 גודלו בהצלחה במשך 10 ימים בסביבת מיקרו-כבידה תלת-ממדית בביוריאקטור.
התוספת של אינטרלוקין-6 למדיום התרבית גרמה לשינויים הקשורים לדלקת במורפולוגיה של הנאדיות, בדומה לאלה שנראו ב-vivo. בהקדמה סיפרתי לכם כמה קשה היה לצוות האמייל להמציא מודל של תרבית תאים אמלובלסט. כעת התמודדנו עם אתגר זה באמצעות הליך חדשני ביותר המתמקד בשני היבטים: פיגומי קולגן ספוגי וגם שימוש במטריצה כדי להבדיל בין תאי האמלובלסט.
יחד, שני החידושים הללו הביאו לקיטוב ולצמיחה של תאים דמויי אמלובלסט בתרבית תלת-ממדית. התאים התלת-ממדיים האלה בתרבית הם מודל נפלא להבנת הביולוגיה של האמלובלסט. וכדי להבין את הביולוגיה הזו, אנו יכולים להשתמש במגוון טכניקות, כולל מיקרוסקופיית אלקטרונים, פרוטאומיקה וגנומיקה.
אמלובלסטים הם תאים פנטסטיים. כן, יש להם את היכולת להפריש אמייל שן פריזמטי. כעת, מודל ביוריאקטור זה מציב אותנו בעמדה להבין כיצד אמלובלסטים מפרישים מטריצה ומפרישים מינרלים אפטיטים כדי לגדל אמייל שן פריזמטי.
