דירוג דיסקינזיות המושרות על-ידי L-DOPA במודל החולדות 6-הידרוקסידופמין של מחלת פרקינסון הוא כלי פרה-קליני חשוב לזיהוי התערבויות אנטי-דיסקינטיות יעילות. מודל זה הוא פשוט יחסית, מציג עלות נמוכה, ויש לו קווי דמיון למה שקורה במרפאה. ההליך יודגם על ידי דנילו ליאנדרו ריביירו, דוקטורנט במעבדה.
התחל את הניסוי עם חולדות זכרים Sprague-Dawley, במשקל 200 עד 250 גרם. אכלסו שניים עד שלושה בעלי חיים בכל כלוב בתנאי המעבדה הסטנדרטיים עם מזון ומים זמינים ad libitum. לפני הניתוח, לתת את מעכב טרנספורטר נוראדרנלין, imipramine, לחולדה intraperitoneally.
לאחר אישור ההרדמה על ידי חוסר תגובה לצביטת הבוהן, מקם את החולדה במצב נוטה במנגנון הסטריאוטקסי על גבי כרית החימום. לאחר מיקום החולדה, השתמשו באזמל כדי לבצע חתך באורך סנטימטר אחד באזור שבו תתרחש המיקרו-הזרקה. לאחר מכן, נקו את אזור הגולגולת עם צמר גפן וודאו שהברגמה והלמבדה חשופות.
קח את צרור המוח הקדמי המדיאלי, או MFB, קואורדינטות סטריאוטקסיות מברגמה ב 4.3 מילימטרים קדמיים, 1.6 מילימטרים לרוחב לצד ימין, ו 8.3 מילימטרים גחון מהדורומטר. כאשר הקואורדינטות נקבעות, לנהל את 6-hydroxydopamine, או 6-OHDA, באופן חד צדדי בקצב של 0.4 microliters לדקה MFB ימין, עם מזרק זכוכית המילטון 50 מיקרוליטר. בתום הניתוח תופרים את חתך הקרקפת ומייבשים מחדש את בעל החיים בתמיסת מלח חמה, סטרילית, 0.9% תת עורית, במינון של 10 מיליליטר לקילוגרם.
הסר את החיה מהמסגרת הסטריאוטקסית והנח אותה בכלוב התאוששות חם, תוך ניטור עד להחזרת ההכרה. בארבעה שבועות לאחר הנגע, למדוד את היעילות של הנגע הדופמינרגי באמצעות מבחן צעד, על ידי הערכת akinesia של forelimb contralateral לנגע. חולדות המציגות שלושה או פחות שלבי הסתגלות עם הפורלימב הנגדי צריכות להיכלל במחקר כחולדות בעלות 6 נגעים חמורים של OHDA.
ארבעה שבועות לאחר נגעי 6-OHDA, להתחיל את הטיפול הכרוני ביום שני ולרשום תנועות לא רצוניות חריגות ביום רביעי. לשם כך, הניחו את החולדה בתוך גליל שקוף בקוטר 20 ס"מ ובגובה 40 ס"מ, ותנו לה להתאקלם למשך 15 דקות לפחות. ודאו שהרצפה מכוסה בחומר המצעים והמראות ממוקמות מאחורי הצילינדר כדי לצפות בבעל החיים מכל הזוויות האפשריות.
מקם מצלמת וידאו ברזולוציה גבוהה כדי לאפשר צפייה בתנועות לא רצוניות ציריות, גפיים ואורולינגואליות חריגות. המראות מאחורי הצילינדר יאפשרו מעקב אחר תנועות לא רצוניות חריגות בזווית של 360 מעלות. ניתן למקם את המצלמה מעט מתחת למישור בזווית של 15 מעלות מבעלי חיים כדי לצפות בתנועות לא רצוניות חריגות.
כאשר המיקום נקבע, הצמידו את המצלמה ישירות לספסל. לאחר בעל החיים הוא התאקלם במשך 15 דקות, להסיר את החיה מן הגליל ולנהל חמישה מיליגרם לכל קילוגרם של L-דופמין מוכן טרי או L-DOPA בשילוב עם 12.5 מיליגרם לק"ג של benserazide, תת עורית. החזירו את החיה לצילינדר והפעילו טיימר כדי לעקוב אחר תנועות לא רצוניות חריגות.
השתמש במצלמת וידאו כדי לתעד את התנועות הלא רצוניות החריגות במשך 180 דקות לאחר ההזרקה, במרווחים של 30 דקות, כדי לבצע ניקוד לא מקוון. לאחר שש תקופות התצפית, יש לתת את הציונים על פני תקופות של דקה עד שתיים ולסווג אותם כציריים, גפיים או אורולינגואליים. הקפידו לא לכלול התנהגויות נורמליות.
הטיפול עם L-DOPA ו benserazide צריך להימשך במשך שלושה שבועות, פעם ביום, מיום שני עד שישי. בניתוח קורס הזמן המייצג, מוצגים הציונים שהוחלו על תנועות לא רצוניות לא תקינות ציריות, גפיים ואורולינגואליות חריגות במשך שלושה שבועות של מתן L-DOPA כרוני. צוין כי דיסקינזיות המושרות על ידי L-DOPA, מינון שיא, מתרחשות בין 30 ל -90 דקות, עם ירידה הדרגתית לאחר 120 דקות לאחר ההזרקה.
בנוסף, סכום התנועות הלא רצוניות הציריות, הגפיים והאורולינגואליות החריגות הוצג על אנשים, תוך ציון ימים ושבוע במשך שלושה שבועות של מתן L-DOPA כרוני. פרוטוקול התנועות הלא רצוניות החריגות הוא בדרך כלל לחקירת כלים טיפוליים חדשים עם פוטנציאל תרגום אנטי-דיסקינטי.
