パーキンソン病の6-ヒドロキシドーパミンラットモデルにおけるL-DOPA誘発性ジスキネジアの評価は、効果的な抗運動障害介入を特定するための重要な前臨床ツールです。このモデルは比較的単純で、低コストであり、診療所で起こることと類似しています。この手順は、研究室の博士課程の学生であるダニーロ・レアンドロ・リベイロによってデモンストレーションされます。
体重200〜250グラムのSprague-Dawley雄ラットで実験を開始します。ケージごとに2〜3匹の動物を標準的な実験室条件下で飼育し、食物と水を自由に利用できます。手術の前に、ノルエピネフリントランスポーター阻害剤であるイミプラミンをラット腹腔内に投与します。
つま先のつまみに対する反応の欠如によって麻酔を確認した後、ラットを加熱パッドの上の定位固定装置内の腹臥位に配置する。ラットを配置したら、メスを使用して、マイクロインジェクションが行われる領域に1センチの長さの切開を行います。次に、綿棒で頭蓋骨の領域をきれいにし、ブレグマとラムダが露出していることを確認します。
内側前脳束(MFB)の脳定位固定座標を、前方4.3ミリメートル、右側1.6ミリメートルの横方向、およびデュロメーターから腹側8.3ミリメートルのブレグマから取得します。座標が決まったら、50マイクロリットルのハミルトンガラス製シリンジで、6-ヒドロキシドーパミンまたは6-OHDAを右MFBに毎分0.4マイクロリットルの速度で一方的に投与します。手術の終わりに、頭皮切開部を縫合し、1キログラム当たり10ミリリットルの用量で、温かい滅菌済みの0.9%生理食塩水で動物を皮下再水和する。
動物を定位固定装置フレームから取り出し、意識が回復するまで監視しながら、暖かい回復ケージに入れます。病変後4週間で、病変の反対側の前肢の無動を評価することにより、ステッピングテストを使用してドーパミン作動性病変の有効性を測定します。対側前肢で3つ以下の調整ステップを示すラットは、推定される重度の6-OHDA病変ラットとして研究に含める必要があります。.
6-OHDA病変の4週間後、月曜日に慢性治療を開始し、水曜日に異常な不随意運動を記録します。これを行うには、ラットを直径20センチ、高さ40センチの透明な円柱の中に置き、少なくとも15分間順応させます。床が寝具で覆われ、鏡がシリンダーの後ろに配置されていることを確認して、あらゆる角度から動物を観察します。
高解像度ビデオカメラを配置して、軸方向、手足、および口腔の異常な不随意運動を表示できるようにします。シリンダーの後ろのミラーは、360度の角度で異常な不随意運動を追跡することができます。カメラは、動物から15度の角度で平面の少し下に配置して、口腔の異常な不随意運動を観察することができます。
位置が決まったら、カメラを直接ベンチに固定します。動物が15分間順応したら、動物をシリンダーから取り出し、1キログラムあたり5ミリグラムの新しく調製されたL-ドーパミンまたはL-ドーパを1キログラムあたり12.5ミリグラムのベンセラジドと組み合わせて皮下投与する。動物をシリンダーに戻し、タイマーを開始して異常な不随意運動を追跡します。
ビデオカメラを使用して、注射後180分間、30分間隔で異常な不随意運動を記録し、オフラインスコアリングを実行します。6つの観察期間の後、スコアは1〜2分のエポックにわたって与えられ、軸方向、四肢、または口腔言語に分類される必要があります。通常の動作を含めないようにしてください。
L-DOPAとベンセラジドによる治療は、月曜日から金曜日まで、1日1回、3週間継続する必要があります。代表的な経時変化分析では、慢性L-DOPA投与の3週間にわたって軸、四肢、および口腔の異常な不随意運動に適用されたスコアが示されています。L-DOPA誘発のピーク用量ジスキネジアは30〜90分の間に発生し、注射後120分後に徐々に減少することが注目されました。.
さらに、軸方向、四肢、および口腔の異常な不随意運動の合計が、慢性L-DOPA投与の3週間にわたって個人、スコアリング日、および毎週提示されました。異常な不随意運動プロトコルは通常、抗運動異常の翻訳能を持つ新しい治療ツールの調査のためのものです。
