הפרוטוקול שלנו עוזר לענות על השאלות כיצד פעילות גופנית תומכת בהומאוסטזיס של אורגניזמים. המערכות אפשרו לנו לנתח השפעות מכניות ישירות על המוח מהשלכות מורכבות של פעילויות גופניות כמו הליכה וריצה. כדי להתחיל, לתקן את מד התאוצה על גבי הראש של חולדה באמצעות סרט כירורגי.
לאחר התאוששות מלאה מהרדמה, מניחים את החולדה במכונת ההליכון. התאימו את ההליכון למהירות בינונית של 20 מטר לדקה. השתמש בתוכנת היישום כדי למדוד את גודל התאוצות האנכיות לאורך ציר X, Y ו- Z כאשר החולדה מפעילה את ההליכון.
התאם את הערכים המתקבלים מהתוכנה לגודל בתדירות התאוצה האנכית במערכת PHM. הגדר מראש את משרעת התנודה של הפלטפורמה ואת מהירות הסיבוב של המצלמה בצורת מדחף. לאחר מכן הנח את העכבר במצב נוטה כאשר הראש ממוקם על תנודה ושאר הגוף על פלטפורמות סטטיות.
הפעל את המנוע כדי להתנדנד את הפלטפורמה אנכית ולהחיל PHM על העכבר. במארז הפלסטיק השקוף, הגדר את מצלמת הווידאו בקצב פריימים של 24 FPS כדי להקליט את כל החלל. לאחר מכן, intraperitoneally לתת חמישה hydroxytryptophan לעכבר.
מניחים את העכבר בכלוב השקוף ומתחילים להקליט במשך 30 דקות. סקור את הסרטון המוקלט במהירות של 0.5x וספור את הראש רועד באופן ידני. אחזר את הקריוסקרים של מוח העכבר מתיבת השקופיות.
השאירו את השקופיות על מגבונים נקיים בטמפרטורת החדר עד שהדגימות יתייבשו לחלוטין. השתמש בעט חוסם נוזלים כדי לצייר עיגול סביב הרקמה המוקפדת. לאחר מכן הוסף פתרון TBS-T.
בתחתית המגש, הניחו מגבונים לחים כדי ליצור סביבה לחה לשקופיות. לאחר חלחול עם TBS-T, יש להוסיף סרום 4% חמורים לחסימה ולדגירה בטמפרטורת החדר למשך שעה. שטפו את השקופיות פעם אחת על ידי טבילה ב-TBS-T למשך חמש דקות.
לאחר מכן יש למרוח 100 מיקרוליטרים של נוגדן ראשוני מדולל כראוי ותערובת דביקה על כל שקופית. מכסים את המגש ודוגרים בטמפרטורת החדר למשך הלילה. לאחר הדגירה, יש לשטוף עם TBS-T שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחת.
יש למרוח 100 מיקרוליטרים של מינים מדוללים כראוי התואמים נוגדנים משניים פלואורסצנטיים ולדגירה בטמפרטורת החדר למשך שעה אחת. לאחר מכן יש להשתמש ב-TBS-T שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחת, להרכיב את המגלשות עם מדיום הרכבה ולכסות את השקופיות בתלושי כיסוי. לאחר ההרכבה, צפה בדגימה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
מערכת PHM הותאמה כדי לייצר שיאי האצה אנכית בערך פי 1.0 G שהיו שקולים לאלה של ראשי החולדות במהלך ריצת הליכון. יישום PHM לעכברים החליש באופן משמעותי את תגובת עווית הראש שלהם בהשוואה לעכברי הביקורת המייצגים השפעה מדכאת של PHM על איתות קולטן 5-HT2A בתאי העצב בקליפת המוח הקדם-מצחית. ריצת הליכון ב-PHM שיפרה באופן משמעותי את הפנמת קולטני 5-HT2A ואת תאי העצב בקליפת המוח הקדם-מצחית של העכבר.
כימות של אזורים חיוביים לקולטן 5-HT2A המופנמים והממברנה ביחס לאזור החדש והחיובי אישר תצפית זו. בדיקה חיסונית וכימות של ביטוי c-Fos בתאי עצב חיוביים לקולטן 5-HT2A הראו כי הליכון הפועל ב-PHM הוריד את ה-5-HTP המושרה בביטוי c-Fos. זהו האירוע התאי במורד הזרם של הפעלת קולטן 5-HT2A ונוירוני PFC של עכברים.
התערבות מכנית יכולה להיות מיושמת על חלקי הגוף שאינם הראש כדי לחקור את ההיבטים המכניים של השפעות פעילות גופנית.
