מודל שחיקה אפיתליאלית לחקר ריפוי פצעי הקרנית

פרוטוקול זה משמעותי משום שהוא מודל מצוין לחקר דלקת הקרנית ותרומתה לריפוי פצעים בתנאים נורמליים ופתולוגיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יוצרת פצע אפיתל מדויק וניתן לשחזור מבלי לפרוץ את קרום המרתף. מודל זה של פציעת הקרנית הוא פשוט ומהיר לביצוע.

מי שידגים את ההליך יהיה הנסיך אקווה, דוקטורנט מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, להכין תמיסת 1% פלואורסציין על ידי המסת 10 מיליגרם של מלח נתרן פלואורסציין במיליליטר אחד של מלח סטרילי או PBS. לאחר מכן, להרדמה, להכין 10 מיליליטרים של קוקטייל קטמין-קסילאזין על ידי ערבוב שני מיליליטרים של קטמין, מיליליטר אחד של קסילאזין, ושבעה מיליליטרים של PBS סטרילי.

לאחר הרדמה של עכבר מסוג C57 שחור מסוג 6 פראי בן 8 עד 12 שבועות, הערך את עומק ההרדמה על ידי הערכת רפלקס הדוושה לאחר צביטה בבוהן. כדי ליצור את פצע הקרנית האפיתליאלי, מניחים את העכבר המרומם תחת מיקרוסקופ דיסקציה. פצעו את עין ימין או שמאל בלבד ושמרו על עקביות כשהעין נפצעת בעת מעבר מעכבר לעכבר.

שמור על העין פתוחה לרווחה על ידי החזקת העפעפיים עם האגודל והאצבע המורה. לאחר מכן, באמצעות טרפין סטרילי בקוטר שני מילימטרים, תוחמים את מרכז הקרנית ומסובבים בעדינות את הטרפין כדי ליצור רושם על אפיתל הקרנית. אין להפעיל לחץ מוגזם, שכן זה יכול לגרום לניקוב הקרנית.

לאחר מכן, כשהוא אוחז במועדון הגולף הסטרילי הבוטה בזווית של כ-45 מעלות מפני השטח של הקרנית, מפרק את האפיתל על ידי גירוד זהיר ומתמשך בתוך האזור המסומן באמצעות ה-spud. אין להפעיל כוח מופרז ולשמור על הידרציה באמצעות PBS סטרילי במידת הצורך. לניטור סגירת הפצע ואפיתליזציה מחדש, פיפטה 1 עד 1.5 מיקרוליטרים של תמיסת פלואורסציין של 1% על פני השטח הפצועים ומצלמת את הקרנית באמצעות מיקרוסקופ דיגיטלי עם מקור אור כחול.

דמיינו את הקרנית הפצועה בזמנים מסוימים לאחר הפציעה. צלם תמונות בדקה הראשונה של תוספת תמיסת פלואורסצין כדי למנוע התפשטות של התמיסה לאפיתל שמסביב, מה שעלול להוביל להערכת יתר של גודל הפצע. לאחר מכן, באמצעות תוכנת ניתוח תמונה, עקבו אחר אזור הפצע וביטאו את אזור הפצע בכל נקודת זמן כאחוז מאזור הפצע המקורי בשעות האפס.

מיקרוגרף אלקטרונים של תמסורת של פצע הקרנית מדגים כי קרום מרתף האפיתל נשאר שלם גם לאחר הפציעה. בעכברים מסוג בר בני 8 עד 12 שבועות, סגירת הפצע הושלמה 24 שעות לאחר הפציעה. תגובה דלקתית לפציעה מאופיינת בהדמיית תאים בלימבוס.

מוצג כאן כלי הדם הלימביים של קרנית לא מעוותת עם נויטרופילים חוץ-וסקולריים, ושל קרנית פצועה עם טסיות דם ראוותניות וניוטרופילים 30 שעות לאחר שחיקה. כדי לשחזר בהצלחה פרוטוקול זה, יש להשתמש באותו זן בכל טווח של עכבר, וליצור את גודל ועומק הפצע כמתואר.