אנו אסירי תודה על עזרתו של ד&quot;ר Xinyu לי בהכנת כתב היד. SW נתמכה על ידי קרן הזנק מאוניברסיטת טוליין, המועצה למחקר החדש פרס חוקרו של הנשיא ממרכז UT Southwestern Medical, NIH גרנט EY021862, הפרס פיתוח קריירה מהמחקר למניעת קרן עיוורון, ופרס מואר פוקוס במחקר מקולרי הקשור לגיל ניוון .

הערה: הפרוטוקול הבא ותוצאות נציג להשתמש במעכבי HDAC סח&quot;ה כתרכובת ירושלים. עם זאת, פרוטוקול זה הוא בשום אופן לא מוגבל לשימוש של סאהה, והוא מומלץ כשיטת כללית כדי לבחון את ההשפעה של תרכובות מסיסים בneovascularization קרנית. שינויים קלים יצטרכו להתבצע למידת הדילול כמו גם תדירות ומשך זמן של יישום. בנוסף, תרכובות כי הם בקלות מסיסה במים יוכלו להינתן בהעדר DMSO. הצהרה אתית: יש לבצע את כל הניסויים בבעלי החיים רק בציות לחוק הלאומי ותקנות מוסדיות. פרוטוקול זה אושר לשימוש על ידי אוניברסיטת טוליין מוסדית טיפול בבעלי חיים ועדת שימוש. 1. הכנת החומרים (לפי סדר שימוש) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכי פיסת נייר תאית מסנן (11 מיקרומטר) לתוך 2 עיגולי מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון M 1 של NaOH ידיהמסת 20 גרם של NaOH ב500 מיליליטר H 2 O. מזוקק לאחסן בטמפרטורת חדר. זהירות: פתרונות NaOH הם מאכל ויכולים לגרום לכוויות אלקלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן קוקטייל הרדמה על ידי דילול 10 מיליליטר של 100 מ&quot;ג / מיליליטר קטמין ו2.5 מיליליטר של 20 מ&quot;ג / מיליליטר בxylazine 37.5 מיליליטר של 1x PBS לריכוז סופי של 20 מ&quot;ג / מיליליטר קטמין ו -4 מ&quot;ג / מיליליטר xylazine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון 0.5% מhydrochloride proparacaine (לשיכוך כאבים אקטואליים) על ידי המסת 500 מ&quot;ג hydrochloride proparacaine בשל PBS המסונן 100 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן PBS 1x ידי המסת 8 גרם NaCl, 0.2 גרם של KCl, 1.44 גרם Na 2 HPO 4, ו0.23 גרם לאא 2 PO 4 ב900 מיליליטר של מזוקקי H 2 O. התאם ל7.4-pH. תביא את הפתרון לנפח סופי של 1,000 מיליליטר עם מזוקקי H 2 O וסינון על מנת להבטיח סטריליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרונות מניות 1,000 x של סח&quot;ה ב ~ 100 מ&quot;מ בsulfoxide דימתיל (DMSO) על ידי המסת 26.4 מ&quot;ג סח&quot;ה ב 1 מיליליטר של DMSO. מדולל ל1x (~ 10 מיקרומטר)פתרון ב-PBS המסונן לכל שימוש. אחסן את פתרון המניות ב -20 ° C עד חודש אחד. זהירות: DMSO הוא רעלן וmutagen ידועים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון 4% מparaformaldehyde (PFA) לקיבעון. מתחת למכסת מנוע כימי, לפזר 4 גרם של PFA ב90 מיליליטר של PBS. להביא את התערובת ל65 מעלות צלזיוס ולכייל לpH של 7.4. ברגע שPFA נמס, להביא את הפתרון לנפח סופי של 100 מיליליטר. חנות ב 4 מעלות צלזיוס למשך עד חודש. זהירות: PFA הוא ידוע להיות אלרגניים, מסרטנים, ורעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מאגר חסימת 1x ידי דילול 5 מיליליטר של סרום עז ו500 ul של טריטון X-100 ל94.5 מיליליטר של PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן כביסה חיץ 1x ידי דילול 500 ul של טריטון X-100 ל99.5 מיליליטר של PBS. </li></ol> 2. אלקלי לשרוף טיפול פציעה ומתחם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים חתיכה עגולה של נייר סינון, ~ 2 מ&quot;מ בקוטר, בתמיסה של 1 M NaOH. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם זריקה של 100 מ&quot;ג / קילוגרם קטמין ו5 מ&quot;ג / קילוגרם xylazine, WHich הוא ~ של קוקטייל ההרדמה 100 μl מצעד 1.3 ל25 עכבר גרם. הרדמה צריכה לקחת ~ דקות 1-2 להגדיר פנימה עומק של הרדמה עשוי להיקבע על ידי בעדינות צובט את הבוהן או זנב של החיה, אם ההרדמה היא מספיק לא צריכה להיות שום תגובה. הערה: יש להקפיד על מנת להבטיח את העכבר לא להיכנע להיפותרמיה הנגרמת על הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות הטפטפת, מריחה יחול ירידה של .0.5% hydrochloride proparacaine אל פני השטח של הקרנית לשיכוך כאבים מקומיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים סטריליות, להרים פיסת נייר סינון NaOH ספוג. אם אתה מבחין NaOH העודף נצמד לאו נוטף מנייר הסינון, לחץ לחיצה קצרה על נייר הסינון הספוג בפיסת נייר סינון יבשה כדי לספוג את העודף. מניחים את פיסת נייר סינון NaOH ספוג על הקרנית המרכזית. תשאיר את זה במשך 30 שניות כדי ליצור אלקלי צריבה חריפה של ~ 2 x 2 מ&quot;מ 2 באזור. מיקרוסקופ ניתוחי מועיל בהצבת נייר הסינון כראוי. הערה: רק עין אחת של של העכברhould להיפגע עם האחר משמש כבקרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את נייר הסינון. באמצעות מזרק 10 מיליליטר, בעדינות לשטוף את העין עם 10 מיליליטר של 1x PBS פעמיים כדי לשטוף שיורי M NaOH 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד תחול ירידה של פתרון 1x סח&quot;ה עובד (או שליטה ברכב בהיקף של PBS בדילול DMSO המכיל לא סח&quot;ה) למריחה לקרנית. חזור 3x/day בקשה ל14 ימים. הערה: בתקופה זו משחה אנטיביוטית מקומית אינה מומלצת מכיוון שהוא עלול להפריע להתפתחות של הפגיעה והמסירה של המתחם. השתמש בתמיסה נוזלית לאנטיביוטיקה, כגון 3% פתרון גנטמיצין, במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך ישיר להערכה קלינית (פרוטוקול 3 להלן) או להקריב את העכבר וenucleate העיניים להר שטוח של קרנית (4 פרוטוקול להלן) או פרפין / היסטולוגיה הקפואה קונבנציונלית. </li></ol> 3. הערכה קלינית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע בדיקה יומית של העכברים בצורה עיוורה תחת מיקרוסקופ ניתוחי ולהבקיע גorneal NV מבוסס על אטימות של קרנית, NV, וגודל כלי. השתמש לפחות שני משקיפים ולהקליט את ציון סופי שהוא הממוצע של שתיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון אטימות של קרנית בסולם של 0-4. 0 = ברור לחלוטין; 1 = מעט מעורפלת, קשתית ואישון עין בקלות; 2 = מעט אטומה, קשתית ואישון עדיין לזיהוי; 3 = אטומים, תלמידים כמעט לא מורגש; ו4 = לגמרי אטום ללא מבט של התלמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון NV בסולם של 0-3. 0 = אין neovessels; 1 = neovessels בימבוס הקרנית; 2 = neovessels פורש ימבוס הקרנית ומתקרבת למרכז קרני; 3 = neovessels פורש המרכז קרני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון גודל כלי דם בסולם של 0-3. 0 = אין neovessels; 1 = neovessels לזיהוי תחת מיקרוסקופ הניתוחי; 2 = neovessels לראות בקלות תחת מיקרוסקופ הניתוחי; 3 = neovessels לראות בקלות בלי מיקרוסקופ. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במצלמה דיגיטלית, קחו את תמונות נציג של העין ב7 ימים ו14 ימים. </li></ol> 4.הכתמה קרנית וMounts שטוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את העין enucleated PFA 4% במשך שעה לפחות 1 ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העין ל1X PBS ולהשתמש במלקחיים כדי להסיר את הרקמה עודפת בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מיקרוסקופ ניתוחי, להשתמש במחט (18 מד) או מיקרו סכין כדי לנקב את אזור pericorneal של העין (שים לב: זה צריך לשחרר את הנוזלים מהעין). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מהניקוב נעשה בסעיף 4.3.1 להשתמש במספריים כירורגית לחתוך את החלק הקדמי של העין (קרנית) מהחלק האחורי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הקרנית חזרה לPFA 4% לקיבעון לילה בשעה 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את PFA 4% (זהירות: PFA הוא מסוכן וחייב להיות מסולק בהתאם לתקנות מוסדיות) ולשטוף את הקרנית שלוש פעמים עם 1x PBS להסיר כל PFA שיורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה במאגר 1x חסימה לפחות 2 שעות בטמפרטורת חדר כדי permeabilize הרקמות ולמנוע ספציפי מחייב של הנוגדן הראשוני. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל נוגדן ראשוני בחיץ חסימת 1x, בדילול של פי 100-500. (לדוגמא: עכברוש אנטי עכבר PECAM-1 לאיתור כלי דם ב1:100, ארנב נגד עכבר LYVE-1 לאיתור כלי הלימפה ב1:500, ו / או anti-mouse-F4/80 חולדה לאיתור מקרופאגים ב1:100). דגירה על 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף שש פעמים עם חיץ הכביסה 1x עבור שעה 1 בכל פעם בטמפרטורת חדר כדי להסיר נוגדן ראשוני מאוגד באופן מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משני נוגדנים ב1x חיץ החסימה בדילול של פי 500-1,000. (למשל ניאון 488 ננומטר מתויג העז אנטי עכברוש IgG ב1:800 או ניאון 594 ננומטר מתויג העז נגד הארנב IgG-ב1:800). דגירה על 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף שלוש פעמים עם 1X PBS עבור שעה 1 כל אחד בטמפרטורת חדר כדי להסיר משני נוגדנים מאוגדים באופן מלא. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הקרנית לטרי 1x PBS, ובעזרת מיקרוסקופ ניתוחי, לעשות ארבעה חתכים בזהירות מפריפריה לכיוון אגורהאה. זה צריך לחלק את הקרנית לארבעה רבעים של גודל שווה בערך (צורה וכתוצאה מכך צריכה להיראות ולא כמו פרפר) ולאפשר לו לשכב על שקופיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר עם הרכבה בינונית מתאים לדימות פלואורסצנטי. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, צריכים להיות צילמו דגימות באופן מיידי ותצלומים דיגיטליים שצולמו, אך הוא עשוי להיות מאוחסן במשך מספר שבועות המוגנים מפני אור ב 4 ° C. </li></ol>

<ol>
	<li>Pascolini, D., Mariotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+visual+impairment.">Global estimates of visual impairment.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2010).</li><li>Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Blindness:+A+Global+Perspective.">Corneal Blindness: A Global Perspective.</a> Bull. World Health Org. 79 (3), 214-221 (2003).</li><li>Gupta, D., Illingworth, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatments+for+corneal+neovascularization:+a+review.">Treatments for corneal neovascularization: a review.</a> Cornea. 30 (8), 927-938 (2011).</li><li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consensus+statement+on+indications+for+anti-angiogenic+therapy+in+the+management+of+corneal+diseases+associated+with+neovascularisation:+outcome+of+an+expert+roundtable.">Consensus statement on indications for anti-angiogenic therapy in the management of corneal diseases associated with neovascularisation: outcome of an expert roundtable.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (1), 3-9 (2012).</li><li>Delmonte, D., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+Physiology+of+the+Cornea.">Anatomy and Physiology of the Cornea.</a> J. Cataract Refract. Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li><li>Cursiefen, C., Seitz, B., Dana, M. R., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+lymphangiogenesis+in+the+cornea.+Pathogenesis,+clinical+implications+and+treatment+options.">Angiogenesis and lymphangiogenesis in the cornea. Pathogenesis, clinical implications and treatment options.</a> Der Ophthalmologe. 100 (4), 292-229 (2003).</li><li>Chang, J., Gabison, E., Kato, T., Azar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Neovascularization.">Corneal Neovascularization.</a> Curr. Opin Ophthalmol. 12 (4), 242-249 (2001).</li><li>Ambati, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Avascularity+is+due+to+Soluble+VEGF+Receptor-1.">Corneal Avascularity is due to Soluble VEGF Receptor-1.</a> Nature. 443 (7114), 993-997 (2006).</li><li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-A+Stimulates+Lymphangiogenesis+and+Hemangiogenesis+in+Inflammatory+Neovascularization+via+Macrophage+Recruitment.">VEGF-A Stimulates Lymphangiogenesis and Hemangiogenesis in Inflammatory Neovascularization via Macrophage Recruitment.</a> J. Clin. Invest. 113 (7), 1040-1050 (2004).</li><li>Jiri, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paper+Strips+and+Rings+as+Simple+Tools+for+Standardization+of+Experimental+Eye+Injuries.">Paper Strips and Rings as Simple Tools for Standardization of Experimental Eye Injuries.</a> Ophthal. Res. 1975 (7), 363-367 (2009).</li><li>Ormerod, L., Abelson, M., Kenyon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+Models+of+Corneal+Injury+Using+Alkali-Immersed+Filter+Discs+Invest.">Standard Models of Corneal Injury Using Alkali-Immersed Filter Discs Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 30 (10), 2148-2153 (1989).</li><li>Saika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+effects+of+adenoviral+gene+transfer+of+bone+morphogenic+protein-7+on+a+corneal+alkali+injury+model+in+mice.">Therapeutic effects of adenoviral gene transfer of bone morphogenic protein-7 on a corneal alkali injury model in mice.</a> Lab. Invest. 85 (4), 474-486 (2005).</li><li>Ferrari, G., Bignami, F., Giacomini, C., Franchini, S., Rama, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+topical+infliximab+in+a+mouse+model+of+ocular+surface+scarring.">Safety and efficacy of topical infliximab in a mouse model of ocular surface scarring.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (3), 1680-1688 (2013).</li><li>Sosne, G., Christopherson, P., Barrett, R., Fridman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymosin-beta4+modulates+corneal+matrix+metalloproteinase+levels+and+polymorphonuclear+cell+infiltration+after+alkali+injury.Invest.">Thymosin-beta4 modulates corneal matrix metalloproteinase levels and polymorphonuclear cell infiltration after alkali injury.Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 46 (7), 2388-2395 (2005).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Multiple+Pathogenic+Pathways+by+Histone+Deacetylase+Inhibitor+SAHA+in+a+Corneal+Alkali-Burn+Injury+Model.">Inhibition of Multiple Pathogenic Pathways by Histone Deacetylase Inhibitor SAHA in a Corneal Alkali-Burn Injury Model.</a> Mol. Pharm. 10 (1), 307-318 (2013).</li><li>Yoeruek, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety,+penetration+and+efficacy+of+topically+applied+bevacizumab:+evaluation+of+eyedrops+in+corneal+neovascularization+after+chemical+burn.">Safety, penetration and efficacy of topically applied bevacizumab: evaluation of eyedrops in corneal neovascularization after chemical burn.</a> Acta Ophthalmol. 86 (3), 322-328 (2008).</li><li>Bucher, F., Parthasarathy, A., Bergua, A., Onderka, J., Regenfu&#223;, B., Cursiefen, C., Bock, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+Ranibizumab+inhibits+inflammatory+corneal+hem-+and+lymphangiogenesis.">Topical Ranibizumab inhibits inflammatory corneal hem- and lymphangiogenesis.</a> Acta Ophthalmol. , (2012).</li><li>Hajrasouliha, A., Sadrai, Z., Chauhan, S., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=b-FGF+induces+corneal+blood+and+lymphatic+vessel+growth+in+a+spatially+distinct+pattern.">b-FGF induces corneal blood and lymphatic vessel growth in a spatially distinct pattern.</a> Cornea. 31 (7), 804-809 (2012).</li><li>Rogers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+albino+mutation+of+tyrosinase+alters+ocular+angiogenic+responsiveness.">The albino mutation of tyrosinase alters ocular angiogenic responsiveness.</a> Angiogenesis. 16 (3), 639-646 (2013).</li><li>Connor, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse:+a+model+of+vessel+loss,+vessel+regrowth+and+pathological.">Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological.</a> Nat. Protoc. 4 (11), 1565-1573 (2009).</li></ol>

יש המחברים אין לחשוף.

הפרוטוקול המובא כאן תוצאות ברמות שחזור של hemangiogenesis, lymphangiogenesis, ודלקת, מה שהופך את מערכת אידיאלית ללמוד שלושת התהליכים הללו (קשורים). בעוד ששיטה זו מייצרת NV קרנית מרכזי, מספר שיטות שפותחו כדי לגרום NV יותר מכוון, כלומר תפירה של הקרנית 17 ומושתלות צמיחת פקטור המבטא כד...

עיוורון של קרנית הוא הסיבה הרביעית הנפוצה ביותר של עיוורון, אחראית לכ -4% מכל מקרי 1. neovascularization קרנית (NV) משחק תפקיד משמעותי בהרבה של מחלות אלו, כוללים קרנית herpetic (הסיבה זיהומית המובילה לעיוורון בעולם המערבי) וגרענתי (הסיבה המובילה לעיוורון בעולם זיהומיות) 2. טיפולים שוטפים כוללים סטרואידים, תרופות נוגדות דלקת לא סטרואידיות (NSAIDs), טיפולים אנטי VEGF, וציקלוספורין, כמו גם טכניקות כירורגיות קונבנציונליות או לייזר 3. עם זאת, האופי קשה מתיש של פתולוגיות NV מבוסס הקרנית, המחסור במתקנים כירורגית מסוגלים לטפל NV בקרנית, וחוסר אפשרות תרופתית חזק ביצוע הוביל שולחן עגול מומחה האחרון למסקנה כי, למרות הטיפולים הקיימים, הצורך הרפואי המהותי שהוצג על ידי פתולוגיות אלה נותר ללא מענה 4. הקרנית האנושיתמורכב 5 שכבות, 3 שכבות סלולריות (אפיתל, סטרומה ואנדותל) וממשק 2 (קרום באומן וקרום Descemet). הוא מתפקד כמחסום מכאני ופני שטח שבירה לעין. הטבע השקוף שלה הוא התוצאה של איזון עדין של מרכיביו, והוא חלק בלתי נפרד מהתפקוד הנכון שלה 5. בדרך כלל avascular, הקרנית מקבלת דם מmicrovessels רץ לאורך הקצה החיצוני שלה, אשר מוזנים מהריסים ועורקי עיניים. קרנית NV מתרחש כאשר גירוי מקדם אנגיוגנזה של הכלים האלה מאפשר להם לצמוח לכיוון המרכז של הקרנית ובכך להגביל את הראייה 6. אנגיוגנזה בקרנית כוללת hemangiogenesis וlymphangiogenesis, אשר תוצאת ingrowth של כלי דם וכלי הלימפה מארקייד כלי דם limbal לכיוון המרכז של הקרנית. זה מוביל להתמוטטות של &quot;זכות angiogenic&quot; קרנית, גידול באטימות וסיסטיק קרנית, שיבוש לה קרניyers, ובצקת 7. הגורמים המדויקים של NV בקרנית הם רבים, החל מתגובה למחלה זיהומית כגון גרענת למצב כימי שגרם גרמו לתרופות מסורתיות, כימיקלים תעשייתיים, או חומרי לחימה כימיים אפילו. המנגנונים המולקולריים של תהליך זה אינם, עדיין, מאופיין במלואו; עם זאת, כמה שחקני מפתח זוהו. בתנאים רגילים הקרנית בעל &quot;זכות angiogenic&quot; ייחודית ומתוחזק על ידי מערך יתיר של גורמים אנטי angiogenic (כגון VEGF-R1 מסיס) 8. עם זאת, בתגובה לגירוי חיצוני (כגון פציעה), יהיה גברת ביטוי מקומית של גורמים פרו angiogenic (למשל VEGF-A). טיפים זה האיזון של גורמים פרו ואנטי angiogenic שבבסיס זכות angiogenic של הקרנית, ומוביל לhemangiogenesis, lymphangeogenesis, ודלקת, ולכן גורם לפתולוגיה בקרנית ואפילו עיוורון 9. &lt;כיתת p = &quot;jove_content&quot;&gt; בהתחשב בצורך הרפואי קיים לפתולוגיה המתישה מאוד, יש בו עניין לשדה יש ​​מודל חיה אמין של NV בקרנית. כאן אנו מציגים מודל כזה: פציעת אלקלי כווייה מבוקרת. מודלים עין פציעה שונים המבוססים על שימוש בטבעות נייר סינון שימשו מאז 1970s 10. ב1989, קבוצה של רופאי עיניים בית הספר לרפואה של הרווארד מאופיין מודל סטנדרטי של פציעת אלקלי כווייה בקרנית מרכזית בארנב המבוסס על השריית פיסת נייר סינון עגול עם נתרן הידרוקסידי (NaOH) וליישם אותו לקרנית בטווח מסוים של ריכוזים 11. מאז, טכניקה זו הותאמה לשימוש ב12-14 העכבר. לאחרונה, המעבדה וואנג חקרה את ההשפעות הטיפוליות של deacetylase היסטון (HDAC) מעכב סח&quot;ה בפתוגנזה של NV בקרנית תוך שימוש במודל עכבר של קרנית אלקלי לשרוף פציעה 15. המתודולוגיה של מודל עכבר קרנית אלקלי לשרוף פציעה שהוצג כאן נבנתהבעיקר על עבודתו המוקדמת של שני עיתונים אחרים 14,16.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="598">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL Syringe</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">306575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">25 Guage Needle</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">305916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-F4/80 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">AbD Serotech</td>
			<td>MCA497RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-LYVE-1 (rabbit anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab14917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Anti-PECAM-1 (rat anti-mouse)</td>
			<td style="width:96px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:119px;">553370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa488 (goat anti-rat)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Anti-IgG Alexa594 (goat anti-rabbit)</td>
			<td style="width:96px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Camera</td>
			<td style="width:96px;">Tucsen</td>
			<td style="width:119px;">TCC 5.0 ICE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Coverslips</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-548-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D4540-1L</td>
			<td>Caution: Mutagenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Blunt), Iris</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">15915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps (Sharp), Dumont #4</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">500340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td>RXKETAMINE</td>
			<td>Controlled substance, proper license required for use.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light Source for Microscope</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">LED-14M-YA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope (Stereo 7X-45X)</td>
			<td style="width:96px;">AmScope</td>
			<td style="width:119px;">SM-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mounting Medium, Vectashield</td>
			<td style="width:96px;">Vector</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S271-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S397-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S318-1</td>
			<td>Caution: Corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:96px;"></td>
			<td style="width:119px;">P6148-500G</td>
			<td>Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Proparacaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4554-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scissors (5mm blade), Vanas</td>
			<td style="width:96px;">WPI</td>
			<td align="right" style="width:119px;">14003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:96px;">MPBio</td>
			<td align="right" style="width:119px;">92939249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microscope Slides</td>
			<td style="width:96px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:96px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8787-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Whatman Grade 1 Filter Paper</td>
			<td style="width:96px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-6508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine Solution</td>
			<td style="width:96px;">MedVet</td>
			<td style="width:119px;">RXANASED-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an alkali-burn injury model of corneal neovascularization in the mouse

בתנאים רגילים, הקרנית היא avascular, והשקיפות הזאת היא חיונית לשמירה על חדות ראייה טובה. Neovascularization (NV) של הקרנית, אשר יכול להיגרם על ידי טראומה, keratoplasty או מחלות זיהומיות, מפרק את &#39;זכות angiogenic&#39; מה שנקרא של הקרנית ומהווה את הבסיס של פתולוגיות חזותיות מרובות שאף עלול להוביל לעיוורון. למרות שיש כמה אפשרויות טיפול זמינות, הצורך הרפואי המהותי שהוצג על ידי פתולוגיות neovascular קרנית נותר לא מסופק. על מנת לפתח טיפולים בטוחים, יעילים, וממוקד, נדרש מודל אמין של NV בקרנית והתערבות תרופתית. כאן, אנו מתארים מודל neovascularization קרנית פציעת אלקלי כווייה בעכבר. פרוטוקול זה מספק שיטה ליישום של פציעת אלקלי כווייה מבוקרת לקרנית, המנהלה של מתחם תרופתי של ריבית, ויזואליזציה של התוצאה. שיטה זו יכולה להוכיח instrumenטל לחקר המנגנונים וההזדמנויות להתערבות בNV בקרנית והפרעות neovascular אחרות.

לאחר פציעת אלקלי צריבה, NV הקרנית מתרחש באופן צפוי, תלוי זמן. איור 1 מדגים את ההבדל הבולט הן בneovascularization ואטימות של קרנית בין בעלי חיים שלא טופלו (איור 1 א) ושל בעלי חיים שטופלו במעכבי HDAC סח&quot;ה (איור 1 ב ) בנקודת הזמן של 7 ימים. <p class="jove_content" style=";...

Watch this Scientific Journal Video about An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse at JoVE.com

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Neovascularization (NV) של הקרנית יכול לסבך פתולוגיות חזותיות מרובות. ניצול מודל פציעה מבוקרת, אלקלי צריבה, רמת כימות של NV בקרנית יכולה להיות מיוצרת למחקר מכניסטית של NV והערכה של קרנית של טיפולי פוטנציאל להפרעות neovascular.

פגיעה דגם אלקלי לשרוף של הקרנית neovascularization בעכבר

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

an-alkali-burn-injury-model-of-corneal-neovascularization-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

16.4K Views.  Tulane University.  Neovascularization (NV) של הקרנית יכול לסבך פתולוגיות חזותיות מרובות. ניצול מודל פציעה מבוקרת, אלקלי צריבה, רמת כימות של NV בקרנית יכולה להיות מיוצרת למחקר מכניסטית של NV והערכה של קרנית של טיפולי פוטנציאל להפרעות neovascular. 

Video: An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable during renal transplantation. Experimental models that accurately and reproducibly recapitulate renal IRI are crucial in dissecting the pathophysiology of AKI and the development of novel therapeutic agents. Presented here is a mouse model of renal IRI that results in reproducible AKI. This is achieved by a midline laparotomy approach for the surgery with one incision allowing both a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia of the left kidney. By careful monitoring of the clamp position and body temperature during the period of ischaemia this model achieves reproducible functional and structural injury. Mice sacrificed 24 hr&#160;following surgery demonstrate loss of renal function with elevation of the serum or plasma creatinine level as well as structural kidney damage with acute tubular necrosis evident. Renal function improves and the acute tissue injury resolves during the course of 7 days following renal IRI such that this model may be used to study renal regeneration. This model of renal IRI has been utilized to study the molecular and cellular pathophysiology of AKI as well as analysis of the subsequent renal regeneration.

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

חוט השדרה עכבר בילוד דגם פגיעה דחיסה

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

A Mouse Model of Single and Repetitive Mild Traumatic Brain Injury

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal neurological deficits and even amnesia. Athletes participating in contact sports are at high risk of exposure to large number of mTBIs. In terms of the level of injury in a sporting athlete, a mTBI is defined as a mild injury that does not cause gross pathological changes, but does cause short-term neurological deficits that are spontaneously resolved. Despite previous attempts to model mTBI in mice and rats, many have reported gross adverse effects including skull fractures, intracerebral bleeding, axonal injury and neuronal cell death. Herein, we describe our highly reproducible animal model of mTBI that reproduces clinically relevant symptoms. This model uses a custom made pneumatic impactor device to deliver a closed-head trauma. This impact is made under precise velocity and deformation parameters, creating a reliable and reproducible model to examine the mechanisms that contribute to effects of single or repetitive concussive mTBI.

Athletes absorb several hundred mild traumatic brain injuries (mTBI)/concussions every year; however, the consequence of these on the brain is poorly understood. Therefore, an animal model of single and repetitive mTBI that consistently replicates clinically relevant symptoms provides the means to advance the study of mTBI and concussion.

דגם עכבר של פגיעה בודדת וחזרה קלה של פגיעה מוחית טראומטית

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to injury. In fact, the most common type of eye injury found in clinic is a corneal abrasion. Here, we utilize an ocular burr to induce an abrasion resulting in removal of the corneal epithelium in vivo on anesthetized mice. This method allows for targeted and reproducible epithelial disruption, leaving other areas intact. In addition, we describe the visualization of the abraded epithelium with fluorescein staining and provide concrete advice on how to visualize the abraded cornea. Then, we follow the timeline of wound healing 0, 18, and 72 h after abrasion, until the wound is re-epithelialized. The epithelial abrasion model of corneal injury is ideal for studies on epithelial cell proliferation, migration and re-epithelialization of the corneal layers. However, this method is not optimal to study stromal activation during wound healing, because the ocular burr does not penetrate to the stromal cell layers. This method is also suitable for clinical applications, for example, pre-clinical test of drug effectiveness.

This protocol describes a method to inflict an abrasion to the ocular surface of the mouse, and to follow the wound healing process thereafter. The protocol takes advantage of an ocular burr to partially remove the surface epithelium of the eye in anaesthetized mice.

אפיתל שחיקה הקרנית עם עינית Burr כמודל עבור קרנית ריפוי פצעים

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

A Novel Approach to Monitoring Graft Neovascularization in the Human Gingiva

Laser speckle contrast imaging (LSCI) is a novel method for measuring superficial blood perfusion over large areas. Since it is non-invasive and avoids direct contact with the measured area, it is suitable for monitoring blood flow changes during wound healing in human patients. Vestibuloplasty is periodontal surgery to the oral vestibule, aiming to restore vestibular depth with simultaneous enlargement of the keratinized gingiva. In this special clinical case, a split thickness flap was elevated at the first upper premolar and a xenogenic collagen matrix was adapted to the resulting recipient bed. LSCI was used to monitor the re- and neovascularization of the graft and the surrounding mucosa for one year. A protocol is introduced for the correct adjustment of microcirculation measurement in the oral mucosa, highlighting difficulties and possible failures.
The clinical case study presented demonstrated that &#8212; following the appropriate protocol &#8212; LSCI is a suitable and reliable method for following up microcirculation in a healing wound in the human oral mucosa and gives useful information on graft integration.

This study introduces a protocol for measuring microcirculation in human oral mucosa by laser speckle contrast imaging. The monitoring of wound healing after vestibuloplasty combined with a xenogenic collagen graft is presented on a clinical case.

הגישה של הרומן ניטור שתל כורוידאלית ב Gingiva אנושי

Laser speckle contrast imaging (LSCI) is a novel method for measuring superficial blood perfusion over large areas. Since it is non-invasive and avoids ...

Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the established technique for a modified blood circuit reconstruction in a heterotopic abdominal heart transplantation model is presented. This method uses the intrathoracic inferior vena cava (IIVC) instead of the pulmonary artery of the donor heart for the anastomosis to the inferior vena cava of the recipient. It is facilitating and improving success rates for abdominal heart transplantation in mice.

A novel technique for blood circuit reconstruction in a heterotopic abdominal mouse heart transplantation model is demonstrated.

שחזור מעגל הדם במודל השתלת לב של עכבר בטן

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the ...