סרטן השד היא מחלה נפוצה וקטלנית עם אסטרטגיות מניעה מוגבלות שמגיעות עם תופעות לוואי שליליות חמורות. כדי לספק שיטה עם תופעות לוואי מופחתות, פיתחנו טכניקה להזרקה תוך דודקטיבית של תמיסה אבלטיבית מבוססת אתנול לעץ צינור החלב של החולדות המאפשרת הדמיה בו-זמנית של in vivo ומניעת סרטן השד. זה מתבסס על עבודה קודמת בעכברים שבה הזרקה ישירות לפתח הפטמה מאפשרת התמקדות בתאי אפיתל של החלב עם נזק מינימלי לרקמות בטחוניות.
גם לעכברים וגם לחולדות יש בלוטות חלב המכילות עץ דוקטלי יחיד שמקורו בפתח הפטמה. חולדות גדולות יותר מעכברים ומאפשרות הזרקה של נפח גדול יותר של אתנול לחקר הצלחת אבלציה כדי להוכיח את מדרגיות המודל. חידוד נוסף לשיטה זו הוא תוספת של תאית אתילית לתמיסה האבלטיבית.
תאית אתילית שימשה בעבר בגישות קליניות אחרות כדי להפחית את התפשטות האתנול הרחק מהאזור שאליו מכוונים. זה נעשה באמצעות אופי התרכובת, מה שגורם לה לג'ל כאשר היא באה במגע עם נוזל ברקמה. ישנם חמישה שלבים מרכזיים המעורבים בשיטה זו של מניעת סרטן שד מאומתת תמונה.
ראשית עלינו להתחיל במינון בעלי חיים עם קרפרופן דרך הפה תוך שימוש בכוסות ג'ל סוכרלוז שהוכנו במעבדה. טיפול אנטי דלקתי ממושך זה נשמר לפני ואחרי פרוצדורלי. לאחר מכן, אנו מסירים את הפרווה מהאזור המקיף את הפטמות כדי להזריק קרם דפילציה כדי להכין את החיה להזרקות.
לאחר מכן מבוצעות הזרקות תוך כדי שימוש בסטריאוסקופ המסייע בהדמיה של פתח הפטמה לצורך החדרת מחט. בעלי חיים נסרקים או מוערכים על ידי microCT או פלואורוסקופיה לאחר ההזרקה כדי לקבוע את הצלחת הזריקות. לאחר מכן ניתן לעבד סריקות microCT כדי ליצור שחזורים תלת-ממדיים של עץ צינור החלב המוזרק לצורך ניתוח נוסף של מילוי מוצלח.
קרפרופן מלאי מדולל תחילה ב- PVS לריכוז הנדרש. ניתן להוסיף צבע מאכל סטרילי לתערובת כדי לאשר טוב יותר ערבוב מלא של התרופה לתוך סוכרלוז של הכוס. לאחר מכן מחממים את הכוסות באמבט מים בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.
ייבוש הכוסות לאחר ההסרה וניקוי מכסה הכוס ב-70% אתנול מפחיתים את הסיכון לזיהום. ניתן להזריק תמיסת קרפרופן ישירות לכוס באמצעות מזרק לחדירת המכסה. במקרה זה, אנחנו צריכים להזריק 500 microliters עבור התוצאה הרצויה.
אטמו את החור עם מדבקה לפני שאתם מנערים את הכוס למשך 15 שניות ואז מערבלים במשך 15 שניות נוספות. ערבוב הומוגני ניתן להעריך על ידי חיפוש גושים של כחול כהה. לאחר מכן ניתן לשמור את הכוסות בקירור עד הצורך.
בעלי חיים צריכים להיות מוכנים יומיים עד שלושה לפני זריקות הם להתרחש. הרדמת החיה באמצעות איזופלורן אינהלציה. מעבירים חולדה מורדמת לחרוט אף על כרית חימום.
יש למרוח חומר סיכה לעיניים על החולדה בעודה ליד חרוט האף ולאחר מכן למקם את החיה על גבה. ניתן למרוח קרם דפילציה על אזור הפטמות שאתם מתכננים להזריק עם אפליקטור עם קצה כותנה. ניתן להשיג התרופפות מהירה יותר של הפרווה על ידי שפשוף המוליך מעלה ומטה על פני עור החיה באזור הרצוי.
חשוב להשאיר את הקרם על החולדה לזמן קצר ככל האפשר כדי למנוע שריפת העור. חולדות רגישות אפילו יותר מעכברים להליך זה. לאחר 10 עד 30 שניות של יישום, להשתמש במים חמים על גזה כדי להסיר לחלוטין את הקרם.
השתמש בשלוש עד ארבע שטיפות כדי להבטיח הסרה מלאה לפני ייבוש העור עם גזה נקייה. אשרו ראות טובה וגישה לפטמות באזורי הסרת הפרווה. חזור על הליך depilatory במידת הצורך.
הניחו את החולדה בכלוב התאוששות נקי על כרית חימום כדי להתאושש מההרדמה. תנו קרפרופן אחת לחולדות מוכנות בכלוב הביתי שלהן לאחר ההחלמה. תתחילו בהרדמת החיה באמצעות הרדמה איזופלורן נדיפה ותהעבירו את החולדה לחרוט אף לאחר שהיא הושריתה במלואה.
יש ליישם חומר סיכה לעיניים לפני הנחת החיה על גבה להזרקות. זה יכול להיות מועיל להדביק את הרגליים ליד הפטמות כי יהיה מוזרק אבל אין צורך. לאחר שהכנתם את המזרק עם הנפח הרצוי של תמיסת ההזרקה, הכינו את הפטמה על ידי הסרת כל עור מת נראה לעין באמצעות מלקחיים עדינים במידת האפשר.
תחום הדאגה הנפוץ ביותר הוא פתיחת הפטמה עצמה. לחולדות יש לעתים קרובות תקע הבולט מהפתח. הסרת תקע זה יכולה לסייע בשימורים טובים יותר.
כאשר השיקוע של המחט נראה לעין, הכנס את המחט לקצה הפטמה בעזרת מלקחיים עדינים. הקפידו ללכת בדרך של פתח הפטמה. פטמות חולדה נוטות להיות בעלות שומן רב יותר סביב הפתח, מה שמקל על החדירה לתוך השומן הזה ומאמין בטעות שהשגת קנולציה עקב התקדמות המחט.
ברגע שיקוע המחט מוקף במלואו על ידי הפטמה להתחיל לאט להזריק את התמיסה לאט. הקצב הרצוי הוא כ 100 microliters לדקה בחולדות. הימנע הזרקה מהר יותר מזה כדי למנוע נזק אפשרי לעץ ductal.
לאחר הזרקה מלאה, יש להמתין 30 שניות לפני הוצאת המחט מהפטמה בסיוע המלקחיים. זה יקטין את הסבירות לדליפה מהפטמה. אם מתרחשת דליפה, השתמש בגזה לחה או במגבון אתנול כדי לנקות את התמיסה.
ניגודיות ופתרון שנשפך עלולים לעוות תמונות שנרכשו. כאן אנו רואים סרטון מוגדל של רצף ההזרקות שהוצג זה עתה. שימו לב שנשימתה של החיה מקשה על שמירת הפטמה במישור מוקד יחיד.
זה יכול להקשות על ההזרקה מכיוון שהפטמה לא נשארת במקום קבוע. בעיה זו מחריפה על ידי קרבה לבית הצלעות ולשלושת זוגות הבלוטות העליונים. התקע בפתח הפטמה הוסר כעת לצורך שיכרון טוב יותר.
כעת ניתן לכוון את המחט כלפי מעלה כדי להתקדם לתוך הפטמה בעזרת המלקחיים. לאחר החדרת השיקוע במלואו, ניתן להתחיל בהזרקה. אם תסתכלי היטב לצד שמאל של הפטמה תבחיני בעלייה בגוון הכחול שבו תמיסת ההזרקה נראית מעט מתפשטת דרך עץ הצינור.
זה הרבה פחות נראה בחולדה בגלל עור עבה יותר. כאן ניתן לראות את הסרת המחט 30 שניות לאחר סיום ההזרקה ואת התמיסה המתקבלת נשפכת מהפטמה. התמיסה הנוספת מנוקה, מה שמאפשר הערכה של האזור שבו אנו לא רואים טראומה לפטמה או דומיננטיות של האזור, מה שמצביע על הזרקת פד שומן.
אם מזריקים פתרון המכיל אתנול, יש לנקוט בזהירות כדי למנוע שיכרון אלכוהול. זה דורש לדעת כמה אתנול ניתן להזריק בפגישה אחת וניהול IP פתרון המכיל סוכרוז במהלך ההליך כדי לנטרל את ההשפעות. לאחר ההזרקה, ניתן לשחזר בעלי חיים בכלוב נקי על כרית חימום או להעבירם למיקרו-CT לצורך הדמיה של הצלחת ההזרקה.
לאחר העברת החיה המוזרקת למכשיר microCT, המשך במתן איזופלוראן כדי לשמור על הרדמה במהלך ההדמיה. הגודל המוגדל של החולדה דורש מניפולציית מיקום נוספת כדי להשיג תמונה טובה. יישור עמוד השדרה לפני הקשת הרגליים ליד האתר כדי להצטלם מסייע ביצירת תמונות עקביות.
הצמדת רגליים במצב מורחב יכולה למנוע מעצמות להפוך לנקודת המוקד של התמונה. מצאנו גם כי הדבקה על פני הבטן של החולדה יכולה לסייע בהפחתת הנשימה של הבלוטות התחתונות. מספר פרמטרים סריקה מקובלים להדמיה של הטיפול ductal.
עם זאת, יש לקחת בחשבון תמיד את מינון הקרינה בעת בחירת פרמטרים. מינון הקרינה הנובע מסריקות אלה לא אמור לחרוג ממגבלות הקרינה עבור זן נתון של חולדות. ניתוח פלואורוסקופי, במקום רכישת תמונה, יכול להפחית במידה ניכרת את נטל הקרינה הכולל.
לאחר ביצוע כל הסריקות או ההערכות, ניתן להחזיר את בעל החיים לכלוב התאוששות נקי על כרית חימום. יש לעקוב אחר בעל החיים עד להחלמה מלאה ולהחזרתו לכלוב הביתי. יש לספק כוסות קרפרופן עד שבעה ימים לפחות לאחר ההזרקה.
התוכנה במכשיר המיקרוCT בו אנו משתמשים מאפשרת יצירת עיבודים מהירים להערכת הצלחת ההזרקה ללא ניתוח פורמלי. תכונה זו כוללת מחוון ניגודיות פשוט המאפשר אות סביר להפחתת רעש. הפגם העיקרי בעיבודים אלה הוא שהתמונה כולה חייבת להיות מקובעת בו-זמנית.
זה מאפשר לאותות בהירים שברור שאינם חלק מעץ הצינור, כגון ברזל בתזונה, להישאר בתמונה. במקרים מסוימים, האות האמיתי כפי שנראה כאן הוא עמום כמו רקע וניתן בקלות לספות אותו אל מחוץ לתמונה. עיבודים פורמליים טובים יותר יכולים להתבצע באמצעות תוכנת ניתוח מתוחכמת יותר המאפשרת פילוח של תחום העניין.
עדיף לפלח את כרית שומן החלב לעיבוד תמונה נוסף על מנת לקבל את העיבוד הטוב ביותר של עץ הצינור המוזרק. הגבול הכהה של כרית שומן החלב עשוי להיות מתוחם לאורך כל העובי המלא של החיה על מנת להשיג פילוח זה. מספיק להתחקות אחר כל פרוסה שלישית ולהפיץ את האובייקט כדי ללכוד את כל הצינור בחוויה שלנו.
בשלב זה, ניתן לסף את העיבוד באמצעות זעם נתון כדי להציג רק את הניגודיות הכלולה בתוך כרית שומן החלב. זה צריך לכלול את הפתרון בתוך עץ הצינור, כמו גם כל דליפה בסביבה הקרובה. פתרונות תחמוצת טנטלום מוצגים בדרך כלל בטווח של 300 עד 3000 HU. ניתוח נוסף יכול להיווצר לאחר שיצרת שחזור של עץ הצינור.
אם אין צורך בהדמיה אורכית, ניתן לרכוש תמונות ברזולוציה גבוהה יותר הלוכדות טוב יותר את הארכיטקטורה המורכבת של העץ הדוקטלי. הבדלים בין בעלי חיים יכולים להפוך את ההזרקה פחות או יותר קשה. איננו יכולים לדבר עם זן לשונות הזן, שכן כיום אנו עובדים אך ורק עם חולדות ספראג דאולי.
לחלק מבעלי החיים יהיו פטמות עם פרופיל נמוך, כמו זה שמוצג כאן, מה שמקשה על מניפולציה והשגת קנולציה מוצלחת. לאחרות יהיו פטמות עם פרופיל גבוה יותר, כמו זו המוצגת כאן, שיהיו מקובלות יותר על קנולציה. פטמה משומרת בהצלחה מתוארת כאן.
קושי בשיכרון עלול לגרום לטראומה לפטמה כפי שמוצג כאן. רכישת תמונות microCT מיד לאחר ההזרקה יכולה ליידע טוב יותר את החוקרים על הצלחת ההזרקה, כמו גם לסייע בזיהוי תכונות מילוי של פתרונות מסוימים. כאן אנו רואים היבטים שונים של בלוטות הבטן של אותה חולדה מוזרקת עם אותו נפח של תמיסה אבלטיבית המכילה 70% אתנול עם ניגודיות המסופקת על ידי 100 מילימולר תחמוצת טנטלום.
התמיסה ששימשה בבלוטה העליונה המוצגת הכילה גם 1% תאית אתילית. אנו רואים מבנים דמויי קיר בקצות הענפים הצינוריים. אלה הם ניצני קצה מסוף מלאים בתמיסה ולא נשפכים.
בשורה התחתונה, אנו רואים קצוות צינוריים פחות מוגדרים המעידים על בריחת התמיסה מעץ הצינורות. זאת, יחד עם נזק אגבי מוגבל יותר בבדיקה היסטולוגית. נראה להצביע על שמירה טובה יותר של תמיסות המכילות תאית אתילית לעץ ductal.
שיטה זו מספקת צעד לקראת מדרגיות של שיטה פחות פולשנית למניעת סרטן השד כדי להציע חלופה לכריתת שד מניעתית. אבלציה אפיתליאלית מוצלחת במודל מכרסם גדול יותר הודגמה עם תופעות לוואי מינימליות לבעל החיים. תוספת של תאית אתילית לתמיסה האבלטיבית מאפשרת שמירה טובה יותר של התמיסה לאזור ההזרקה, מה שמביא לנזק אגבי מופחת.
השימוש החדשני בפתרונות שהוכחו קלינית ויכולת נוספת לדמיין את הצלחת המסירה עם שיטות הדמיה נפוצות מאפשר תרגום מוכן למרפאה.
