פרוטוקול זה מציג בפירוט את הלוקליזציה, ההפרדה וקיבוע הטבעת השרירית של העורקים הכליליים של חולדה. מתן שיטה חדשה למנגנונים, חקירה וטיפול במחלות לב וכלי דם שונות. המערכת מתאימה להקלטה היציבה של השינויים הדינמיים של מתח העורקים במבחנה, וקוטר מ-60 מיקרומטרים ל-10 מילימטרים.
אנו מציעים כי טירונים צריכים להבין תחילה במדויק את המיקום האנטומי של כל כלי ויכולים להתחיל עם כלי קצת יותר גדול כגון עורק החזה והעורק המזנטרי. לאחר ניתוק והסרת הלב, התחילו בניקוז שאריות הדם מכל חדרי הלב על ידי לחיצה קלה עם מלקחיים מפלסטיק רפואי. מקם במהירות את הלב המעובד מראש בצלחת פטרי המכילה 95% חמצן ו-5% תמיסת מלח פיזיולוגי רווי פחמן דו-חמצני בארבע מעלות צלזיוס, בעלת ערך pH של 7.40.
כדי לזהות במדויק את המיקום האנטומי של העורקים הכליליים, להתאים את היציבה של הלב המבודד תחת מיקרוסקופ האור על פי הדיאגרמה הסכמטית. חותכים את חללי החדר השמאלי והימני לאורך המחיצה הבין-חדרית משורש עורק הריאה באמצעות מספריים כירורגיים ופינצטה. כדי לנתק את העורקים הכליליים השמאליים והימניים מרקמת שריר הלב, יש לנתח את החדר הימני תחת מיקרוסקופ אנטומי אופטי כדי לחשוף ביסודיות את ענף העורק הכלילי הימני.
לאחר מכן זהה את המיקום של העורק הכלילי השמאלי על ידי סיבוב רקמת הלב 45 מעלות בכיוון השעון. לאחר הסרת רקמת שריר הלב הדביקה שמסביב, יש להבחין במפורש בעורקים הכליליים הפועמים משמאל ומימין. הפרד את העורקים הכליליים באמצע באופן מיידי וטבול לחלוטין בתמיסת מלח פיזיולוגית בארבע מעלות צלזיוס.
רכשו טבעת עורקית של כשני מילימטרים על ידי חיתוך אנכי של העורק המנותק עם מספריים אנטומיים כדי לתעד את מתח כלי הדם תחת גירויים שונים. מכינים שני חוטי נירוסטה של שני סנטימטרים ו משרים מראש בתמיסת מלח פיזיולוגית של ארבע מעלות צלזיוס רוויה ב-95% חמצן ו-5% פחמן דו-חמצני. מעבירים את שני החוטים במקביל דרך הטבעת העורקית יחד עם כיוון הכלי תחת מיקרוסקופ אנטומי אופטי ועם חוטים באורך שווה החשופים בשני קצות חלל כלי הדם.
קבעו את הטבעת העורקית עם חוט הפלדה מלפנים ומאחור באמבטיה של מיקרוגרף החוטים המלא בתמיסת מלח פיזיולוגית מבעבעת עם 95% חמצן ו-5% פחמן דו חמצני. סובב את ידית הבורג האופקית לקבלת מרווח קדמי ואחורי מתאים כך ששני החוטים יהיו אופקיים וטבעת העורקים תהיה במצב טבעי של רגיעה. לאחר התקנת אמבט ה- DMT במנגנון התרמוסטטי, פתח את תוכנת רכישת הנתונים כדי להבטיח שאות הנתיב המתאים נרשם.
הגדר את הפרמטרים. השג את המתח ההתחלתי האופטימלי של טבעת העורקים על ידי הפעלת מתח סביר לאורך קוטר הכלי. בשלב זה, הגדר את ערך המתח הווסקולרי המוצג לאפס.
לאחר מכן, יש למרוח גירוי דופק של שלושה מילי ניוטון על טבעת העורקים על ידי סיבוב הציר הספירלי של האמבטיה. לחץ על לוח ה-LCD כדי להגדיר אותו לאפס מילי ניוטון ולתחזק אותו למשך שעה אחת. לאחר דגירה של שעה אחת במאגר תמיסת מלח פיזיולוגי רווי חמצן בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס pH 7.40, קבע את ערך המתח לאפס מילי ניוטון שוב בלוח בקרת המתח של מיקרוגרף החוטים.
לבצע את הפעילות התכווצות של טבעת העורק הכלילי עם טכניקת מיוגרפיה חוט לאמת בשלוש פעולות נפרדות על ידי גירוי עם 60 millimolar של תמיסת יון אשלגן במשך 10 דקות כל אחד. לאחר כל גירוי, שטפו את האמבטיה בתמיסת המלח הפיזיולוגית רוויית החמצן עד שהטון הווסקולרי יחזור למצבו ההתחלתי. הוסיפו 0.3 מיקרומולר U46619 לרחצה והתבוננו במשך 10 דקות.
הוסיפו אפיגנין מיקרומולרי אחד והתבוננו בהשפעות כלי הדם. כאשר ההתרחבות מגיעה למישור, הוסיפו את הריכוז הבא. הוסיפו אפיגנין מיקרומולרי אחד לתמיסת טרום כיווץ אשלגן 60 מילמולרית כדי לבחון את השפעת כלי הדם.
כאשר ההתרחבות מגיעה למישור, הוסיפו את הריכוז הבא. מוסיפים 28 יונים אשלגן מילימולריים לטבעת כלי הדם במנוחה. כאשר ההתכווצות מגיעה למישור, מוסיפים את הריכוז הבא.
הוסף 0.01 מיקרומולר U46619 לטבעת כלי הדם במנוחה. כאשר ההתכווצות מגיעה למישור, מוסיפים את הריכוז הבא. לאחר שהופעל מתח ראשוני של שלושה מילי ניוטון על טבעת העורקים, המתח שלה עלה על יותר משני מילי ניוטון על ידי הפעלת ריכוז 60 מילימולרי של יונים אשלגן במקביל שלוש פעמים.
כך ההליכים לעיל הביאו לטבעת כלילית מבודדת עם פעילות פיזיולוגית מצוינת. ריכוז מצטבר של יוני אשלגן, או U46619 נוספו לאמבטיה של DMT620M, וכתוצאה מכך נוצרה עלייה תלוית ריכוז בטונוס כלי הדם במבחנה. הריכוז הבא של יון אשלגן או U46619 נוסף כאשר אפקט vasoconstriction הגיע למישור.
עבור טבעות כליליות מבודדות המכווצות על ידי יון אשלגן ו- U46619, תרופת הבדיקה אפיגנין גרמה להרחבת כלי דם באופן תלוי ריכוז באופן מפתיע. הלב מנותח לאורך מחיצת החדר משורש עורק הריאה, חושף ומפריד בין שני מילימטרים של טבעת שרירים כליליים. לאחר הליך זה, אנו יכולים לרשום מתח וסקולרי במיקרו-ווסלים ברשתית, בתפקוד הכליות, בעורק הכליות ובעורק המוח האמצעי.
דינמיקת אזור מ-60 מיקרומטר ל-10 מילימטרים.
