למרות שהיו מחקרים על אובדן שמיעה כתוצאה מרעש, אף אחד מהם לא תיעד את השיטה בפירוט כזה, מה שהופך את זה להליך חשוב. שיטה זו גרמה למעשה לאובדן שמיעה כתוצאה מרעש בעכברים, וצופה בשינויים בפועל בסף השמיעה על ידי ABR. מודל בבעלי חיים של ליקוי שמיעה הנגרם כתוצאה מרעש שימושי עבור מדענים כדי להבין לעומק את המנגנון של אובדן שמיעה הנגרם כתוצאה מרעש, ולאחר מכן לייעל את אסטרטגיות הטיפול המתאימות.
מי שתדגים את ההליך תהיה דיאן-שיו לי, סטודנטית מוכשרת מאוד מהמעבדה שלי. כדי להכין את הכלוב לעכברי הניסוי, השתמשו בכלוב מלכודת חולדות וחתכו ארבע חתיכות של לוחות פלסטיק גלי לגדלים מתאימים, כדי להתאים אותם לכלוב. כדי למנוע מהעכברים לחתוך את רגליהם על ידי רשת הרשת, הניחו שתיים מהחתיכות בחלק התחתון ובצד האחורי, בהתאמה.
מניחים את שני החלקים האחרים בניצב זה לזה, כדי לחלק את החלל בתוך הכלוב לרבעים פתח את תוכנת היישום CLIO. העבר את הסמן לסמל הרמקול ולחץ על TwoSin. הזן ושנה את הערך של תדר 1 עד 1, 000 הרץ, תדר 2 עד 6, 000 הרץ ולחץ על אישור כדי להתחיל להשמיע את הצליל.
תחת הכרטיסיה Leq, שנה את dBV ל- dBSPL. לאחר הגדרת השעה בממשק התוכנה, לחץ על כפתור המשולש הירוק כדי להשמיע את הצליל. מקם מיקרופון מול הרמקול במרחק של 8.5 ס"מ כדי לכייל את רמת הרעש.
כוונן את רמת הרעש ל- SPL-A של 125 דציבלים, ונטר ברציפות במשך שלוש דקות לפחות כדי לוודא שרמת הרעש מיוצבת מספיק. השתמש בגנרטור, אנלייזר ומגבר כדי ליצור ולשלוט ברעש. הכניסו לכלוב ארבעה עכברי C57 שחורים 6J זכרים, אחד לכל רבע, לחשיפה לרעש.
הקצו באופן אקראי את העכברים לכל רבעון במהלך החשיפה לרעש. הניחו מיקרופון בחלק העליון של הכלוב כדי לנטר את רמת הרעש במהלך החשיפה לרעש. הניחו את הכלוב לפני הרמקול בתוך קופסה אטומה לרעש, וודאו שהרמקול ממוקם במרחק של 8.5 סנטימטרים מהכלוב.
חשוף את העכברים לרעש בתדרים של קילוהרץ אחד ושישה קילוהרץ ברציפות במשך שש שעות ביום, במשך חמישה ימים רצופים. מדוד את ספי השמיעה של העכברים ביום השישי וה -13 על ידי מדידת ABR. השתמש במערכת בדיקת ABR מסחרית, שתוכננה במיוחד עבור בעלי חיים קטנים למדידות ABR, ותחזק את בעל החיים בהרדמה כללית.
הניחו אלקטרודות מחט תת-עורית בקוטר 12 מ"מ בקודקוד מאחורי הפינה של האוזן השמאלית, ובחזרה ליד הזנב, כדי למדוד את סף השמיעה. לאחר הנחת הרמקול במרחק של סנטימטר אחד מאוזן שמאל של החיה, הציגו גירויים אקוסטיים באמצעות הרמקול. בחר גל סינוס עבור הגירויים, ו- 10 k עבור קנה המידה של החלון.
סובב את ידית התדר כדי לקבל את התדר הרצוי של הגירויים האקוסטיים. התאם את עוצמת הגירוי על ידי סיבוב ידית AMLP על מחולל הפונקציות. השג את עוצמת הגירוי הרצויה על ידי סיבוב ידית AMLP למתח מתאים המחושב מכיול.
אספו את מדידות ה-ABR תחת סדרה של עוצמות גירוי מ-10 עד 100 דציבלים SPL, עם גודל צעד של 10 דציבלים. סמן את רמת עוצמת הגירוי המינימלית שיכולה ליצור גל V שניתן להבחין בו כסף ABR. הקריבו את העכברים לאחר מדידות ABR, וקצרו את השבלול מהעכברים שעברו המתת חסד.
מיד לאחר קצירת הרקמות, לטבול אותם 10% פורמלין לקיבוע, ולתת להם לנוח לפחות שמונה שעות בארבע מעלות צלזיוס. השתמש ב- EDTA להסתיידות, כמתואר בטקסט. מניחים את השבלול בצלחת פטרי מלאה PBS.
עבור צביעת רקמות, חתכו את האיבר בצורת ספירלה של קורטי, או OC, לשלושה חלקים: הסיבוב הבסיסי, הסיבוב האמצעי והסיבוב האפיקאלי. תחת מיקרוסקופ מנתח בהגדלה של 8x עד 35x, להסיר את המבנים הגרמיים הכוללים scala vestibuli, scala tympani, ו modiolus של שבלול decalcified, ולקבל את הרקמות הרכות, כולל OC. עלייה משמעותית בסף השמיעה נצפתה ב-12 קילוהרץ, 24 קילוהרץ ו-32 קילוהרץ יום לאחר החשיפה לרעש. התאוששות שמיעה חלקית התרחשה שבוע לאחר החשיפה לרעש, אך ספי השמיעה עדיין היו גבוהים ביותר מ-30 דציבלים בכל התדרים בהשוואה לקבוצות הביקורת.
במחקר זה, השמיעה נפגעה יותר בתדרים גבוהים. הבדל משמעותי נצפה בסף השמיעה בין קבוצת הביקורת לבין קבוצת הניסוי ביום השישי וה-13, 12 קילוהרץ ו-32 קילוהרץ. אובדן תאי השערה החיצוניים נצפה באופן עקבי בתמונות המיקרוסקופיות שהתקבלו מעכברי NIHL, בהשוואה לאלה של עכברי הביקורת.
בעוד תאי השערה הפנימיים נותרו שלמים בכל התמונות, תאי השערה החיצוניים בסיבובי הבסיס והאמצע של OC ניזוקו קשות. לעומת זאת, תאי השערה החיצוניים בסיבוב האפי היו כמעט שלמים. השלב החשוב ביותר בפרוטוקול זה כולל חשיפה לרעש, מדידת ABI, קצירת השבלול.
הליך זה יכול להיות מיושם כדי לחקור את ההשפעה של חשיפה לרעש בתדרים שונים על אובדן שמיעה באמצעות סוגים שונים של קול.
