פרוטוקול זה מסייע לבסס מודלים של ATC ו- HNSCC PDX המשקפים טוב יותר את הטרוגניות הגידול, את המגוון המולקולרי ומנבאים תוצאות קליניות. הטכניקה פשוטה לתפעול, בעלת אחוזי הצלחה גבוהים, ויכולה להתאים גם לדגמי PDX אחרים. ניתן להרחיב טכניקה זו לכיוון הקרנת רגישות לתרופות אנטי סרטניות כדי להנחות את הטיפול המותאם אישית בחולה סרטן.
אדם שמעולם לא ביצע טכניקה זו עלול להיתקל בקשיים מסוימים ומומלץ לשים לב לכל פרט של התוכנית. לאחר קבלת דגימות גידול ATC ו- HNSCC בצינור צנטריפוגה 50 מ"מ המכיל תמיסת HTK סטרילית, יש לחטא אותם עם 75% אלכוהול. השתמשו במלקחיים אופתלמיים מעוקרים כדי להעביר את רקמת הגידול לצלוחית פטרי בגודל שישה סנטימטרים מלאה במי מלח, וחתכו אותם לחתיכות קטנות באמצעות להב.
לאחר מכן, מעבירים את החתיכות לצלחת פטרי חדשה בקוטר שישה ס"מ המכילה את המלח ועוטפים אותה בסרט איטום. הניחו את הכלי העטוף בקופסת קרח, נשאו אותו לחדר בעלי החיים נטול הפתוגנים בעזרת מספריים, מלקחיים ומחטי חיסון. לאחר הרדמת העכבר, הסירו את השיער בבית החזה הצידי הימני וחיטאו את האזור ב-75% אלכוהול.
השתמש במספריים כדי לבצע חתך של שני מילימטר באמצע בית החזה הצדדי הימני. בעזרת מלקחיים, לוקחים את הרקמה מצלחת הפטרי ומניחים אותה במחט הטרוקאר. החזק את העכבר והדק את העור באתר הניקוב.
הכנס את הטרוקאר עם חתיכת הגידול לתוך החתך לחלל התת עורי, ולאחר מכן עבור לחלק האחורי של הכתף ודחוף את ליבת הטרוקאר. כדי לשמור את הרקמה הנותרת באמצעות גזה סטרילית, להסיר מלוחים מפני השטח של הגידול, להבטיח שהוא לא רטוב מדי. שים ארבע עד שש חתיכות רקמה בצינור הקפאה של שני מיליליטר והוסף מיליליטר אחד של תמיסת שימור קריוגני לתוך הצינור.
לאחר מכן, הניחו את הצינור בקופסת קירור הדרגתית והקפיאו אותו במינוס 80 מעלות צלזיוס למשך הלילה. לבסוף, להעביר אותו לחנקן נוזלי. להחייאת גידולים מודל PDX, השתמש בקליפרים של ורנייה כדי למדוד את אורך ורוחב הגידול התת עורי פעם בשבוע.
חשב את נפח הגידול וצייר את עקומת צמיחת הגידול. לאחר מכן, באמצעות מספריים, לחתוך את עור העכבר המתת חסד סביב הגידול. הסר את הגידול עם מלקחיים ומניחים אותו בצלחת פטרי.
לבצע את השתלת הגידול עד הדור החמישי של עכברים, כפי שהודגם בעבר. בחר את רקמת הגידול של עכבר מדגם ATC PDX מדור P5. חותכים אותו לשתיים עד ארבע חתיכות מילימטר מעוקב.
יש לחסן חתיכות אלה באופן תת-עורי כפי שהודגם בעבר, בגב הימני של עכבר BALB/c עירום, בן ארבעה עד שישה שבועות. כאשר הגידול גדל 50 עד 150 מילימטרים מעוקבים, לחלק את העכברים לשלוש קבוצות. לאחר מתן לנווטיניב, ציספלטין ובקרה פעמיים בשבוע, יש למדוד את משקל הגוף של העכבר.
כמו כן, למדוד את נפח הגידול. ניתוח המתאם הראה כי שיעור ההצלחה של בניית מודל ATC PDX לא היה תלוי בגיל, מין, קוטר הגידול, דרגת הגידול והתמיינות. שיעור לקיחת הגידול בבניית מודל HNSCC PDX הראה כי מידת הבידול הייתה קשורה לשיעור הצלחת המודל, בעוד ששאר הפרמטרים לא השפיעו על שיעור לקיחת הגידול.
עקומות הגידול עבור כל מודל PDX המחישו כי דגימות ATC הועברו ביציבות לדור P3, בעוד ששני מקרים של דגימות HNSCC לא הצליחו ליצור גידולים לאחר שעברו לדור P1. קצב צמיחת הגידול של דור P0 ברוב דגמי PDX היה איטי יחסית מאשר במעברים המאוחרים יותר, ככל הנראה בשל הסתגלות המיקרו-סביבה של העכבר. בדיקה היסטופתולוגית הראתה כי גידולי PDX שומרים על המאפיינים המורפולוגיים של הגידולים הראשוניים.
הטיפול בלנווטיניב עיכב באופן משמעותי את צמיחת הגידול והראה משקל גידול נמוך יותר במודל ATC PDX בהשוואה לקבוצת הביקורת. בנוסף, עכברים שטופלו בלנווטיניב לא הראו שינויים ניכרים במשקלם הכולל. מינון מופרז של ציספלטין גרם לרעילות משמעותית, כפי שמעידה ירידה במשקל ואפילו מוות.
גידולים טריים יש לשטוף מספר פעמים עם מלוחים רגילים לפני לחתוך לחתיכות. ערבוב על ידי דגימות גידול ביופסיה עם וחיסונן יגרום ככל הנראה להיווצרות גידול. מודל זה יכול לשמש למחקר ביולוגיה של גידולים, סינון תרופות, טיפול מותאם אישית.
