עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית S&T של חביי (NO.E2020100001, ו- NO.22372502D), פרויקט כישרונות חדשנות ויזמות ברמה גבוהה של Shijiazhuang (מס '07202203).

הניסויים בבעלי חיים נערכו באישור הוועדה למחקר ואתיקה בבעלי חיים של מכון המחקר הרפואי חביי יילינג (מספר אישור: N2022148). עכברי C57BL/6J זכרים במשקל 18-22 גרם (ראו טבלת חומרים) שוכנו במרכז החדש להערכת תרופות במכון המחקר הרפואי חביי יילינג. הם קיבלו מזון רגיל ומים נקיים ונחשפו לאור מלאכותי במשך 12 שעות ביום. החדרים שמרו על טווח טמפרטורות מבוקר של 20-26 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 40%-70%.
1. ביסוס מודל עכבר היפוקסיה כרונית (איור 1)
<ol><li>לפני תחילת הניסוי, הכינו כלובים של בעלי חיים בלחץ אטמוספרי רגיל וכלובים עם סביבה רציפה דלת חמצן. צור סביבה רציפה דלת חמצן על ידי שימוש במערכת בקרת גז אוטומטית כדי לשטוף את התא בתערובת של חמצן טהור וחנקן. הערה: מערכת זו מתוכנתת לשלוט במתג השסתום האלקטרומגנטי, ובכך להבטיח אספקה מדויקת של גז הן מבחינת זמן והן מבחינת ריכוז.</li>
	<li>חלקו עכברים באופן אקראי לשלוש קבוצות: קבוצת ביקורת (Con), קבוצת מודל (CH) וקבוצת אלקטרו-אקופונקטורה (EA + CH). יש להניח עכברי בקרה ודגם/אלקטרו-דיקור בנפרד בשני הכלובים, עם 10 עכברים בכל כלוב. שמור על מחזור האור של 12 שעות/12 שעות (בהיר/כהה). הערה: לא נגרם טיפול או היפוקסיה בקבוצת הביקורת (Con). קבוצת המודל (CH) מורכבת מעכברים עם היפוקסיה כרונית. קבוצת הדיקור האלקטרו-אקופונקטורי (EA + CH) כוללת עכברים הנגרמים מהיפוקסיה וטופלו בדיקור חשמלי.</li>
	<li>לפיתוח היפוקסיה כרונית, לקבוע את הפרמטרים של תא חמצן נמוך על ידי שימוש במד חמצן דיגיטלי כדי לווסת את קצב זרימת הגז ולשמור על ריכוז חמצן של 10%. הניחו את בעלי החיים בתוך תא דל חמצן בשעה 9:00 בבוקר והוציאו אותם בשעה 17:00, וכתוצאה מכך סך של 8 שעות של חשיפה רצופה לחמצן נמוך ליום במשך 3 חודשים. הערה: בעת הגדרת אספקת גז חנקן כדי להפחית את ריכוז החמצן, מומלץ להמשיך לאט כדי למנוע הכנסה מוגזמת של גז חנקן בבת אחת, כפי שהוא יוביל למוות בעלי חיים.</li>
	<li>הערך את מודל התפקוד הקוגניטיבי הכרוני הנגרם על ידי היפוקסיה באמצעות בדיקה היסטולוגית ומבחנים התנהגותיים: מבחן שדה פתוח15 ומבחן מבוך מים16.</li>
</ol>2. הרדמה (איור 2)
<ol><li>הכינו את מכונת ההרדמה לבעלי חיים קטנים (ראו טבלת חומרים) ואת כרית החימום בטמפרטורה קבועה. הערה: במהלך הרדמה, בעלי חיים רגישים להיפותרמיה, מה שמדגיש את הצורך להשתמש בכרית חימום בטמפרטורה קבועה לבידוד.</li>
	<li>הכניסו את העכבר לקופסת השראת ההרדמה והכניסו במהירות איזופלורן של 2%-2.5% בחמצן (ראו טבלת חומרים) למשך כדקה. הערה: טיפול מקדים קצר טווח זה הוא צעד חיוני כדי להבטיח שעכברים יוכלו לשגשג תחת מינון בריכוז נמוך למשך פרק זמן ממושך.</li>
	<li>ברגע שהרגישות שלהם פחתה, צבטו את בוהן העכבר כדי לבדוק את הרפלקס שלו. לאחר מכן, העבר את העכבר אל כרית חימום הטמפרטורה קבועה (37 ° C).</li>
	<li>יש לכוונן את קצב זרימת ההרדמה לריכוז של כ-0.5%. חבר את מכונת ההרדמה לפה ולאף של העכבר. המשך בטיפול אלקטרו-אקופונקטורה תוך הבטחת תחזוקת ההרדמה. הערה: השפעת ההרדמה אושרה כאשר העכברים הפסיקו למצמץ. השפעת ההרדמה יכולה להימשך לפחות 30 דקות.</li>
</ol>3. טיפול אלקטרו-אקופונקטורה
<ol><li>כדי לשפר ביעילות תפקוד קוגניטיבי, בחרו נקודות דיקור ספציפיות, כגון Baihui (GV20), Shenting (GV24) ו-Zusanli דו-צדדי (ST36), בהתבסס על תיאוריית הרפואה הסינית המסורתית והניסיון הקליני (איור 3). יש לבצע טיפול בדיקור חשמלי שבועיים לפני השלמת תהליך הדוגמנות.<ol><li>אתר את נקודת הדיקור GV20 על קו האמצע של המצח, בנקודת האמצע של קו המחבר את קצות האוזניים7. עומק החדרת מחט הדיקור חייב להיות 2 מ"מ.</li>
		<li>אתר את נקודת הדיקור GV24 1.3 מ"מ ישירות מעל נקודת האמצע של עיני העכבר בקו האמצע של המצח17. עומק החדרת מחט הדיקור חייב להיות 2 מ"מ.</li>
		<li>אתר את נקודת הדיקור ST36 בצד החיצוני של מפרק הברך, כ -2 מ"מ מתחת לראש הפיבולה18,19. עומק החדרת מחט הדיקור חייב להיות 3-4 מ"מ.</li>
	</ol></li>
	<li>הכינו מחטי דיקור חד פעמיות (ראו טבלת חומרים) ומכשיר אלקטרו-אקופונקטורה (ראו טבלת חומרים) לצורך ההליך (איור 4).</li>
	<li>הניחו את העכבר במצב נוטה תחת הרדמה קלה עם 0.5% איזופלורן, וודאו שראשיהם וגפיהם משותקים. החזק מחט נירוסטה (קוטר: 0.18 מ"מ; אורך: 7 מ"מ) ביד ימין, באמצעות האגודל, האצבע המורה והאצבע האמצעית.</li>
	<li>בצע דיקור סיני בנקודות דיקור GV20 ו- GV24 לרוחב לעומק 2 מ"מ, הרם את העור על ראש העכבר ביד שמאל. נקב את נקודת הדיקור ST36 אנכית לעומק 3-4 מ"מ על ידי נגיעה בראש הפיבולרי בצד הצדדי של מפרק הברך של העכבר ולחץ על העור עם האגודל השמאלי. הערה: עבור נקודות הדיקור הממוקמות על הראש, מומלץ להכניס את המחטים ברצף של GV24 ואחריו GV20. הזמנה זו מאפשרת נוחות תפעולית. נקודות דיקור הן מיקומים אנטומיים בדידים ולא נקודות נייחות. כתוצאה מכך, סטיות קלות בזווית החדרת המחט אינן משפיעות על היעילות הטיפולית, כפי שניתן לראות בחולים המקבלים טיפול אלקטרו-אקופונקטורה במסגרות קליניות.</li>
	<li>חברו את מכשיר הדיקור האלקטרוני למחטים, כאשר GV20 ו-ST36 השמאלי מחוברים למערכת אלקטרודות אחת ו-GV24 ו-ST36 הימני מחובר לאלקטרודה אחרת (איור 4). בחר את מצב הגל הרציף, עם עוצמת זרם חשמלי של 2 mA ותדר של 2 הרץ20,21. אשר את הטיפול האידיאלי על ידי התבוננות ברעד קל מקומי בנקודות דיקור וסובלנות שקטה על ידי העכבר.<ol><li>בעת חיבור מכשיר הדיקור החשמלי, חבר את הקצה הפרוקסימלי של המחט. זה עוזר למזער את ההשפעה הנגרמת על ידי משקל קו החיבור וכתוצאה מכך משפר את מניעת ניתוק המחט. במידת הצורך, השתמש בסרט הדבקה כדי לאבטח את המחט המוחדרת אופקית ואת קו החיבור.</li>
	</ol></li>
	<li>יש לנהל את הטיפול היומי במשך 30 דקות בכל יום במשך 6 ימים רצופים, עם יום מנוחה אחד בין כל מחזור טיפול.</li>
</ol>4. בדיקת שדה פתוח (איור 5)
הערה: מבחן השדה הפתוח הוא שיטה קונבנציונלית המשמשת להערכת ההתנהגות האוטונומית, התנהגות חקרנית, יכולות קוגניטיביות והתנהגות חרדה של חיות ניסוי בסביבות חדשות ולא מוכרות22. הוא מורכב מתיבת תגובה בשדה פתוח ומכשיר הקלטה.
<ol><li>כדי לבצע את הבדיקה, הכינו קובייה לבנה בגודל 50 ס"מ × 50 ס"מ × 30 ס"מ, כאשר התחתית מחולקת ל -25 ריבועים שווים בגודל 10 ס"מ × 10 ס"מ.</li>
	<li>הכנס את העכבר לתיבת התגובה בשדה הפתוח לצורך התאקלמות. אפשרו לעכבר לסייר בחדר הבדיקה ולהכיר את הסביבה החדשה במהלך תקופת ההתאקלמות. בצע את בדיקת השדה הפתוח לאחר התאקלמות העכבר לסביבת הניסוי למשך שעה אחת. הערה: זה מבטיח את מזעור החרדה או הלחץ הנגרמים על ידי שינויים בסביבה, ובכך מאפשר תוצאות מדויקות יותר במהלך ההערכות ההתנהגותיות הבאות.</li>
	<li>הנח את העכבר במרכז הקופסה ונטר אותו במשך 10 דקות לאחר שאיפשר לעכבר להסתגל לסביבה למשך 2 דקות.<ol><li>השתמשו במערכת מעקב וידאו (ראו טבלת חומרים) כדי לתעד את מסלול התנועה של העכבר, את המרחק הכולל שעבר, את זמן השהייה באזור המרכזי, את מהירות חציית האזור המרכזי ואת מספר הכניסות לאזור המרכזי במהלך הבחינה.</li>
		<li>בצע את הפעולות הרלוונטיות בהתאם להוראות במדריך המוצר של מערכת מעקב הווידאו. כל עכבר עובר בדיקה אחת ומתחיל לחקור מאותו מיקום בתוך הקופסה.</li>
		<li>לאחר כל בדיקה, נקו את קופסת השדה הפתוח עם 75% אתנול כדי למנוע תוצאות שגויות הנגרמות כתוצאה מהפרעות ריח בעת שימוש בעכבר.</li>
	</ol></li>
</ol>5. מבוך מים (איור 5)
הערה: מבחן מבוך המים משמש לעתים קרובות ככלי הערכה התנהגותית בניסויים המערבים עכברים כדי להעריך את יכולות הלמידה והזיכרון המרחביות שלהם23.
<ol><li>הכינו מיכל מים עגול בקוטר 120 ס"מ ובעומק 30 ס"מ. חלק את הטנק לארבעה רבעים שווים: I, II, III ו- IV. אם משתמשים בעכברים שחורים בניסוי, השתמשו במיכל מים לבנים; עבור עכברים לבנים, השתמש במיכל מים שחורים.</li>
	<li>הניחו וילונות סביב מיכל המים העגול כדי למנוע מהעכבר לראות את החוקרים במהלך הבדיקה.</li>
	<li>מקם סמנים שונים על המשטח העליון של מכל המים כרמזים חזותיים להתמצאות מרחבית. ודא שסמנים אלה נשארים נייחים לאורך כל הניסוי כדי לשמור על עקביות.</li>
	<li>מקמו משטח עגול בקוטר של 10 ס"מ ברביע III של מכל המים כאזור היעד המיועד. ודא שניתן להזיז ולאבטח את הפלטפורמה בקלות בכל מיקום רצוי.</li>
	<li>במהלך הניסוי, להכניס מים לתוך המיכל תוך שמירה על טווח טמפרטורות של 22-24 מעלות צלזיוס.<ol><li>ודא שמפלס המים נשאר באופן עקבי 1 ס"מ מעל פלטפורמת המטרה. כלול ריכוז של 20% של דו תחמוצת טיטניום לא רעיל במים כדי להשיג ניגוד ברור בין העכברים השחורים לבין הרקע הלבן. ניגודיות זו מאפשרת למצלמה להקליט את תנועות העכבר ואת הפרמטרים הרלוונטיים.</li>
	</ol></li>
	<li>בצע מבחן חקר מרחבי רציף בן 5 ימים על ידי מיקום רציף של כל עכבר ברבעים I, II, III ו- IV.<ol><li>מקם את העכבר עם הפנים לקיר. התרחק מהמבוך כדי למנוע מהעכבר להשתמש במיקום הנסיין כנקודת התייחסות. הקלט את הזמן שלוקח לעכבר למצוא את הפלטפורמה.</li>
		<li>אם העכבר לא מצליח לאתר את הפלטפורמה התת ימית תוך 90 שניות, הנחית את העכבר לפלטפורמה וספק תקופת למידה של 30 שניות. בנוסף, רשום את תקופת ההשהיה כ- 90 שניות.</li>
		<li>אם העכבר מאתר את הפלטפורמה התת-ימית תוך 90 שניות, הניחו לה להישאר על הרציף במשך 10 שניות ללמידה לפני הוצאותיה ממיכל המים.</li>
		<li>יבש את העכבר עם מגבת והחזיר אותו לכלוב שלו.</li>
		<li>סובב את המיקום של כל עכבר בכל רביע כל 20 דקות. תעד את מרחק השחייה, המהירות והזמן שלקח לכל עכבר למצוא את הפלטפורמה (תקופת ההשהיה) באמצעות מערכת מעקב הווידאו (ראה טבלת חומרים), ובצע את הפעולות הרלוונטיות בהתאם להוראות במדריך המוצר.</li>
		<li>הציבו את המשטח 1 ס"מ מעל פני המים ביום הראשון. הניחו את המצע בעומק של 1 ס"מ מתחת לפני המים בימים 2-5.</li>
	</ol></li>
	<li>ביום 6, הסירו את האסדה מרביע המטרה וערכו מבחן חקר מרחבי.<ol><li>מקם את העכבר ברביע I כדי לסייר בחופשיות במשך 90 שניות. המחשב רושם את מסלול השחייה של העכבר, את הזמן שבילה ברביע המטרה ואת מספר הפעמים שהוא חוצה את הרציף. הערה: על מנת למזער טעויות ניסוי הנגרמות על ידי גורמים אנושיים, חשוב לשמור על מיקום נקודת הייחוס קבוע בניסוי מבוך המים. בנוסף, הנסיין צריך לסגת מיד לאחר הנחת העכבר במים. לאחר השלמת הניסוי, יש לייבש את העכברים במגבת ולהחזיר אותם לכלובים שלהם כדי לשמור על חום.</li>
	</ol></li>
</ol>6. צביעת המטוקסילין ואאוזין (איור 6)
הערה: בדיקה היסטולוגית של אזור ההיפוקמפוס מסייעת בהערכת הקמת מודל ההיפוקסיה ובקביעת יעילות הטיפול בדיקור.
<ol><li>לאחר הניסוי ההתנהגותי, מרדימים את העכבר בזריקה תוך-צפקית של 20 מ"ג/ק"ג נתרן פנטוברביטל ומחוררים אותו בתמיסת 10% פרפורמלדהיד (ראו טבלת חומרים) כדי להבטיח זילוח גוף מלא. בודדו את רקמת המוח וטבלו אותה בתמיסת 10% פרפורמלדהיד בטמפרטורת החדר (RT) למשך 3 ימים כדי להשיג קיבוע.</li>
	<li>הניחו את דגימות המוח בקופסת הטבעה. לאחר מכן, לשטוף את דגימות המוח המעובד עם מים זורמים במשך 6 שעות.</li>
	<li>להעסיק מעבד רקמות אוטומטי כדי לייבש את הדגימות באמצעות סדרה של פתרונות אלכוהול עם ריכוזים הולכים וגדלים, כלומר, 60% אתנול במשך 1 שעות, 70% אתנול במשך 1 שעות, 90% אתנול במשך 1 שעות, 95% אתנול במשך 2 שעות, ולבסוף, 100% אתנול במשך 2 שעות.</li>
	<li>לטבול את דגימות הרקמה בקסילן במשך 2 שעות כדי להשיג שקיפות. לאחר מכן, לאחר השלמת תהליך ההתייבשות, להעביר את הדגימות permeabilized שעווה פרפין מחומם ל 60 ° C במשך 3 שעות. לבסוף, להטביע אותם במעבד אוטומטי.</li>
	<li>השתמש בכלי פריסה סיבובי כדי לקבל חתכים של 4 מיקרומטר. לאחר מכן, יש לצבוע את החלקים בהמטוקסילין למשך זמן שנע בין 3-8 דקות, ולאחר מכן להכתים את האאוזין למשך 1-3 דקות.</li>
	<li>מעבירים ברצף את החלקים המוכתמים למיכלים נפרדים של אלכוהול טהור וקסילן. לאחר מכן, אטמו ואבטחו את החלקים המוכתמים עם חניכיים ניטרליות כהכנה לבדיקה פתולוגית תחת מיקרוסקופ אופטי.</li>
	<li>השתמש בסורק שקופיות (ראה רשימת חומרים) כדי לסרוק את הפרוסות. לאחר מכן, השתמש בתוכנת הצפייה כדי לקבל את תוצאות צביעת HE עבור אזור ההיפוקמפוס. השווה את הסדר של נוירונים ואת עיבוי של גרעינים עצביים.</li>
</ol>

שיפור קוגניטיבי בעכברי היפוקסיה כרונית עם דיקור סיני

למחברים אין מה לחשוף.

אקופונקטורה, פרקטיקה רפואית לא פרמקולוגית שמקורה בסין לפני למעלה מ -2,000 שנה, כוללת החדרת מחטים דקות לנקודות ספציפיות בגוף הידועות כנקודות דיקור. מאמינים כי נקודות אלה מחוברות על ידי ערוצים או מרידיאנים שדרכם זורמת האנרגיה החיונית של הגוף, או "צ'י",24 . על ידי גירוי נקודות אלה, דיק...

אוכלוסיית העולם מתמודדת כיום עם בעיית הזדקנות קריטית, וכתוצאה מכך עלייה מהירה בשכיחות של הפרעות קוגניטיביות. השכיחות העולמית של ליקוי קוגניטיבי היא כ 53.97 לכל 1000 שנות אדם1. היפוקסיה מוחית כרונית הנגרמת על ידי תפקוד לקוי של כלי הדם או הפרעות במחזור הדם / הנשימה נותרה אחד מגורמי הסיכון העיקריים לדמנציה הקשורה לגיל2. מחקרים קודמים הוכיחו כי היפוקסיה מוחית יכולה להגביר את שקיעת β העמילואיד על ידי שינוי ביטוי BACE13. בנוסף, היפוקסיה נקשרה לחוסר ויסות של תאי גליה ולדלקת עצבית 4,5. למרות ההיקף ההולך וגדל של בעיה זו, תרופות מערביות יעילות למניעת ירידה קוגניטיבית כרונית הנגרמת על ידי היפוקסיה חסרות כיום. רפואה סינית מסורתית לא תרופתית, במיוחד דיקור סיני, משמשת מזה אלפי שנים לטיפול בהפרעות קוגניטיביות והראתה תוצאות מבטיחות בהקלה על מחלות נוירודגנרטיביות 6,7. נקודות הדיקור Baihui, Shenting ו- Zusanli הן נקודות יעילות לטיפול בתפקוד קוגניטיבילקוי 8,9. מחקרים קליניים הוכיחו כי טיפול בדיקור סיני משפר באופן משמעותי את ציוני ההערכה הקוגניטיבית של מונטריאול (MoCA) ובדיקת מצב מיני-מנטלי (MMSE) בחולים עם ליקוי קוגניטיבי וסקולרי ומשפר ביעילות תפקוד קוגניטיבילקוי 8. למרות שמחקרים הראו כי דיקור סיני יכול לשפר באופן משמעותי את יכולת הזיכרון של חולדות עם קשירת עורקים - מודל היפוקסיה מוחית חריפה10, מודל היפוקסיה מוחית חריפה, אין דיווח על ההשפעות של דיקור סיני בכל מודל מכרסם עם הפרעות קוגניטיביות כרוניות הנגרמות על ידי היפוקסיה. היעדר מחקר על המנגנון פגע במידה ניכרת ביישומו הקליני.
מחקרים קודמים הראו כי חשיפת חולדות לסביבה היפוקסית לתקופה של 8 שבועות יכולה להעלות באופן משמעותי את רמות העקה החמצונית והדלקת במוח, וכתוצאה מכך ירידה בתפקוד הזיכרון11. המחקר הנוכחי נועד לחקור את השפעת הדיקור על מודלים של מכרסמים על מנת לקדם את הבנתנו זו. ראוי לציין, עם זאת, כי הרדמה נדרשת בדרך כלל במהלך טיפול דיקור במכרסמים בשל הפוטנציאל לתסיסה במהלך גירוי חוזר. הרדמה ממושכת יכולה להשפיע באופן משמעותי על התפקוד הקוגניטיבי בעכברים, שכן רוב תרופות ההרדמה יכולות לדכא פעילות עצבית ולעכב עיבוד מידע, מה שמוביל לליקויים התנהגותיים12. מספר מחקרים הראו כי מתן 2.5% sevoflurane למשך 6 שעות יכול לפגוע באופן משמעותי בזיכרון מרחבי, יכולת למידה ותשומת לב בעכברים13. יתר על כן, ראיות מצביעות על כך שמינונים גבוהים של הרדמה עלולים לגרום למוות עצבי או נזק עצבי בעכברים14. לכן, חובה לזהות גישה מתאימה כדי למזער את כמות ההרדמה הכוללת בשימוש. במחקר זה אנו מציגים שיטת דיקור יעילה לטיפול בעכברים עם ליקוי קוגניטיבי, יחד עם מבחנים התנהגותיים להערכת יכולות הזיכרון שלהם. חשוב לציין, אנו מציגים טכניקת הרדמה מותאמת לפני הטיפול שיכולה להפחית ביעילות את המינון הכולל של הרדמה הניתנת במהלך הניסוי.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% paraformaldehyde solution</td>
			<td>Bioroyee (Beijing) Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>RL3234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANY-maze</td>
			<td>Science</td>
			<td>&#160;SA201</td>
			<td>Video tracking system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C75BL/6J mice</td>
			<td>BEIJING HFK BIOSCIENCE CO.,LTD</td>
			<td>No.110322220103041767</td>
			<td>Gender: Male,&#160; Weight: 18&#8211;22 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroacupuncture device</td>
			<td>Great Wall</td>
			<td>KWD-808 I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hwato acupuncture&#160; needle</td>
			<td>Suzhou Medical Appliance Factory</td>
			<td>2655519&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co.,Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoZoomer Digital Pathology</td>
			<td>Hamamatsu Photonics K. K</td>
			<td>C9600-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal anesthesia machine</td>
			<td>RWD</td>
			<td>YL-LE-A106</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acupuncture treatment in a mouse model of chronic hypoxia-induced cognitive dysfunction

הטיפול בהפרעות עצבים מרכזיות מציב באופן עקבי אתגרים משמעותיים בפני התחום הרפואי. דיקור סיני, פרקטיקה לא תרופתית ששורשיה ברפואה הסינית המסורתית, כרוך בהחדרת מחטים עדינות לנקודות מדויקות בגוף ומשמש בדרך כלל לניהול מצבים מגוונים. לאחרונה, דיקור סיני התגלה כהתערבות טיפולית מבטיחה למגוון מחלות נוירולוגיות, כולל חרדה והפרעות נשימה. עם זאת, הפוטנציאל של דיקור סיני בטיפול בתפקוד קוגניטיבי לקוי הנגרם על ידי היפוקסיה כרונית עדיין לא נחקר. מאמר זה מציג פרוטוקול מקיף לביסוס מודל עכברי של ליקוי קוגניטיבי כרוני הנגרם כתוצאה מהיפוקסיה, מתן הרדמה קלה, ביצוע טיפול בדיקור סיני והערכת שינויים התנהגותיים ויכולות זיכרון באמצעות מבחני שדה פתוח ומבוכי מים. פרוטוקול שלב אחר שלב מספק הוראות מפורטות על איתור ומיקום מדויק של נקודות דיקור ומחטים לשיפור קוגניטיבי. על ידי שימוש בפרוטוקול זה, חוקרים יכולים לערוך מחקרים שיטתיים כדי להעריך ביסודיות את הפוטנציאל הטיפולי של דיקור סיני לבעיות קוגניטיביות.

The global population is currently facing a critical aging problem, resulting in a rapid increase in the prevalence of cognitive disorders. The worldwide incidence of cognitive impairment is approximately 53.97 per 1000 person-years1. Chronic cerebral hypoxia caused by vascular dysfunction or circulatory/respiratory disorders remains one of the major risk factors for age-related dementia2. Previous studies have demonstrated that cerebral hypoxia can increase amyloid-&#946; deposition by modifying BACE1 expression3. Additionally, hypoxia has been associated with glial-cell dysregulation and neuroinflammation4,5. Despite the growing magnitude of this issue, effective Western medicines for preventing chronic hypoxia-induced cognitive decline are currently lacking. Non-pharmacological traditional Chinese medicine, particularly acupuncture, has been used for thousands of years to treat cognitive disorders and has shown promising results in alleviating neurodegenerative diseases6,7. The Baihui, Shenting, and Zusanli acupoints are effective points for treating cognitive dysfunction8,9. Clinical studies have demonstrated that electro-acupuncture therapy significantly improves the Montreal Cognitive Assessment (MoCA) and Mini-Mental State Examination (MMSE) scores in patients with vascular cognitive impairment and effectively ameliorates cognitive dysfunction8. Although studies have suggested that acupuncture can significantly enhance the memory ability of rats with arterial ligation-an acute cerebral hypoxia models10, an acute cerebral hypoxia model, there is no report on the effects of acupuncture in any rodent model with chronic hypoxia-induced cognitive disorders. The lack of research into the mechanism has considerably impeded its clinical application. 
Previous research has demonstrated that subjecting rats to a hypoxic environment for a period of 8 weeks can significantly elevate levels of oxidative stress and inflammation in the brain, resulting in a decline in memory function11. The present study aims to investigate the impact of acupuncture on rodent models in order to further our understanding. It is worth noting, however, that anesthesia is typically required during acupuncture treatment in rodents due to the potential for agitation during repeated stimulation. Prolonged anesthesia can significantly impact cognitive function in mice, as most anesthetic drugs can suppress neural activity and impede information processing, leading to behavioral deficits12. Several studies have shown that administering 2.5% sevoflurane for a duration of 6 h can notably impair spatial memory, learning ability, and attention in mice13. Furthermore, evidence suggests that high doses of anesthesia may result in neuronal death or nerve damage in mice14. Therefore, it is imperative to identify a suitable approach to minimize the overall amount of anesthesia used. In this study, we introduce an effective acupuncture method for treating mice with cognitive impairment, along with behavioral tests to assess their memory abilities. Importantly, we present a modified pre-treatment anesthesia technique that can effectively reduce the total dosage of anesthesia administered during the experiment.

מחבר זרקור: שיפור פרוטוקולי הרדמה למחקר דיקור עכבר משופר

טיפול בדיקור סיני במודל עכברי של תפקוד קוגניטיבי לקוי כרוני כתוצאה מהיפוקסיה

Selecting the right anesthesia protocol is crucial for conducting mouse acupuncture. Due to potential cognitive impairment associated with prolonged anesthesia, it represents an essential initial challenge, demanding careful consideration to minimize cognitive function risks in mice during the procedure. In this study, we propose an improved protocol that helps to minimize functional and behavioral abnormalities caused by excessive anesthesia dosing, and enhances the accuracy of the experiments.In the future, our laboratory aims to study the underlying mechanisms of acupuncture despite its observable therapeutic effects on behavior and pathology. Our research will focus on unraveling acupuncture to gain a deeper understanding of its mechanisms.

אפיון מסלולי תנועה של עכברים בניסוי השדה הפתוח מפת המסלול מגלה כי עכברים בקבוצה הנורמלית מפגינים נטייה עמוקה לחקור בסביבות לא מוכרות. מסלולי הפעילות שלהם מרוכזים בעיקר בפינות תוך כיסוי כל השדה הפתוח (פאנל שמאלי). לעומת זאת, קבוצת מודל ההיפוקסיה ארוכת הטווח של עכברים מפגינה רצון...

Watch this Scientific Journal Video about Acupuncture Treatment in a Mouse Model of Chronic Hypoxia-Induced Cognitive Dysfunction at JoVE.com

כאן, אנו מתארים פרוטוקול ליישום טיפול בהרדמה קלה ודיקור סיני על מודל עכבר היפוקסיה כרונית וביצוע בדיקות התנהגותיות כדי להעריך את השינויים הקוגנטיבים לאחר הטיפול.

The treatment of central nervous disorders has consistently posed significant challenges to the medical field. Acupuncture, a non-pharmacological practice ...

בחירת פרוטוקול ההרדמה הנכון היא קריטית לביצוע דיקור עכברי. בשל ליקוי קוגנטיבי פוטנציאלי הקשור להרדמה ממושכת, הוא מהווה אתגר ראשוני חיוני, הדורש שיקול דעת זהיר כדי למזער את סיכוני התפקוד הקוגניטיבי בעכברים במהלך ההליך. במחקר זה, אנו מציעים פרוטוקול משופר המסייע למזער הפרעות תפקודיות והתנהגותיות הנגרמות על ידי מינון הרדמה מוגזם, ומשפר את הדיוק של הניסויים.בעתיד, המעבדה שלנו שואפת לחקור את המנגנונים הבסיסיים של דיקור סיני למרות ההשפעות הטיפוליות הנצפות על התנהגות ופתולוגיה. המחקר שלנו יתמקד בחשיפת דיקור סיני כדי להשיג הבנה עמוקה יותר של מנגנוניו.

acupuncture-treatment-mouse-model-chronic-hypoxia-induced-cognitive

Research

JoVE Journal

Behavior

Acupuncture Treatment in a Mouse Model of Chronic Hypoxia-Induced Cognitive Dysfunction

767 Views.  Heilongjiang University of Chinese Medicine. בחירת פרוטוקול ההרדמה הנכון היא קריטית לביצוע דיקור עכברי. בשל ליקוי קוגנטיבי פוטנציאלי הקשור להרדמה ממושכת, הוא מהווה אתגר ראשוני חיוני, הדורש שיקול דעת זהיר כדי למזער את סיכוני התפקוד הקוגניטיבי בעכברים במהלך ההליך. במחקר זה, אנו מציעים פרוטוקול משופר המסייע למזער הפרעו...

Video: מחבר זרקור: שיפור פרוטוקולי הרדמה למחקר דיקור עכבר משופר

The treatment of central nervous disorders has consistently posed significant challenges to the medical field. Acupuncture, a non-pharmacological practice rooted in traditional Chinese medicine, entails the insertion of fine needles into precise points on the body and is commonly employed for the management of diverse conditions. Recently, acupuncture has emerged as a promising therapeutic intervention for a range of neurological diseases, including anxiety and respiratory disorders. However, the potential of acupuncture in treating cognitive dysfunction induced by chronic hypoxia has not yet been explored. This paper presents a comprehensive protocol for establishing a mouse model of chronic hypoxia-induced cognitive impairment, administering mild anesthesia, performing acupuncture treatment, and assessing behavioral changes and memory abilities using open field tests and water mazes. The step-by-step protocol provides detailed instructions on accurately locating and positioning acupoints and needles for cognitive improvement. By employing this protocol, researchers can conduct systematic studies to thoroughly evaluate the therapeutic potential of acupuncture for cognitive dysfunction.

Here, we describe a protocol for implementing mild anesthesia and acupuncture treatment on a chronic hypoxia mouse model and conducting behavioral tests to assess the cognitive alterations post-treatment.

Electroacupuncture in a Chronic Hypoxia-Induced Cognitive Dysfunction Mouse Model

To begin, place an anesthetized mouse with chronic hypoxia-induced cognitive dysfunction on a heating pad set at 37 degrees Celsius. Then, connect the anesthesia machine to the mouth and nose of the mouse. For electroacupuncture, locate the GV20 acupoint on the midline of the forehead between the line connecting the ear tips.Next, locate the GV24 acupoint 1.3 millimeters directly above the midpoint of the eyes. Then find the ST36 acupoint on the outside of the knee joint about two millimeters below the fibula head. Prepare disposable acupuncture needles and an electroacupuncture device for the procedure.Now place the mouse in the prone position. With the right thumb, index finger and middle finger, hold a stainless steel needle. Puncture the points GV20 and GV24 transversely at a depth of two millimeters.Then, puncture the ST36 acupoint vertically to a depth of three to four millimeters. Connect the proximal end of the needles at GV20 and the left ST36 to one electrode set. Connect the proximal end of the needles at GV24 and the right ST36 to another electrode set.Select the Continuous Wave mode on the electroacupuncture device and set the electric current intensity to two milliamperes and the frequency to two hertz. Confirm the ideal treatment by observing local mild tremors at the acupoints. Use adhesive tape to secure the horizontally inserted needle and the connection line.Administer the treatment for 30 minutes each day for six consecutive days. Electroacupuncture appear to improve the exploratory activity of hypoxia-induced mice. The treated mice also displayed a more organized behavior.