המחקר שלנו ממנף את מודל דג הזברה כדי לחקור הפרעות דם אנושיות, תוך התמקדות בזיהוי סמנים ביולוגיים חדשים, מטרות טיפוליות וטיפולים במצבים כמו לוקמיה. על ידי ניצול היתרונות הייחודיים של דג הזברה, אנו שואפים לחקור את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס מחלות המטולוגיות ולפתח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות לשיפור תוצאות המטופלים. הזרקה תוך ורידית לדגי זברה בוגרים היא מאתגרת בשל גודלם הקטן וכלי הדם המורכבים שלהם.
פיתחנו שיטת הזרקת IV אופטימלית לאספקה מדויקת ויעילה של חומרים או תאים לדג זברה בוגר. בהשוואה להזרקה התוך-לבבית והרטרו-אורביטלית, שיטת הווריד שאנו מציגים כאן הביאה להישרדות טובה יותר של דגים והשתלת תאים טובה יותר. שיטה זו הופכת את דג הזברה הבוגר לשמיש יותר למחקרים שאינם מועדים.
תוך התגברות על מגבלות מסוימות של מודלים חדשים, טכניקת הווריד המשופרת מגבירה את הדיוק של מודלים של מחלות ובדיקות תרופות, ועוזרת לקדם טיפולים חדשים. כדי להתחיל, הניחו את דג הזברה הטרנסגני mpo:EGFP שעבר המתת חסד על שולחן ניתוח. נתח את דג הזברה כדי לבודד את מח הכליה.
לאחר מכן העבירו את מח הכליה לתוך צינור מיקרו צנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר המכיל מדיום השעיית תאים. פיפטה את התרחיף כדי לפרק את תאי מח הכליה. סנן את מתלה התאים דרך מסננת תאי ניילון בגודל 40 מיקרומטר.
לאחר מכן צנטריפוגה של התאים ב-500G למשך שמונה דקות והשליכו את הסופרנטנט, לפני שתשו מחדש את הגלולה ב-500 מיקרוליטר של מדיום תרחיף תאים. באמצעות מונה תאים אוטומטי ספרו את התאים עם כמות של 10 מיקרוליטר. שטפו היטב את מזרק המילטון שלוש עד ארבע פעמים עם אתנול 75%.
לאחר מכן שטפו את המזרק שלוש עד ארבע פעמים במים טהורים במיוחד כדי להבטיח שכל שאריות האתנול יוסרו. לאחר מתן הרדמה לדג הזברה, אשר את עומק ההרדמה על ידי תנועה מופחתת ואובדן תגובות רפלקס. מקם את הצד הגבי של הדג כלפי מעלה כשהראש מופנה שמאלה על נייר טישו לח ונקי כדי לייצב להזרקה.
אחוז בחוזקה במזרק המילטון וזווית את המחט בכ-45 מעלות לווריד הזנב. עבור דג הזברה של קספר, כוון לחלק גלוי של הכלי דרך הגוף השקוף. הכנס בעדינות את המחט לכלי ומתן שני מיקרוליטר של תאי מח כליה שלמים שבודדו מדגי זברה טרנסגניים mpo:EGFP.
לאחר ההזרקה, הפעל לחץ עדין על מקום ההזרקה עם צמר גפן למשך 10 שניות כדי לשלוט בדימום. התבונן בדג הזברה המוזרק תחת מיקרוסקופ כדי לאשר אותות GFP בתוך הכלי. הניחו לדג הזברה המוזרק להתאושש במי דגים מעוקרים טריים למשך 10 דקות.
לאחר מכן העבירו את הדג למיכל סטטי. שיטת ההזרקה התוך ורידית הניבה את שיעור ההצלחה הגבוה ביותר עם אותות GFP הנראים ב-41 מתוך 43 דגים. בעוד שבשיטת הרטרו-אורביטל זוהה GFP רק בשלושה מתוך 37 דגים והשיטה התוך-לבבית הראתה הצלחה ב-11 מתוך 40 דגים.
שיטת ההזרקה התוך ורידית הביאה לשיעורי הישרדות טובים יותר בדגים שהוזרקו, במיוחד עם מינוני תאים גבוהים יותר בהשוואה לשיטות הרטרו-אורביטליות והתוך-לבביות. אותות GFP זוהו כבר ביום השלישי לאחר ההשתלה בדגים שהוזרקו תוך ורידי, בעוד ששיטות רטרו-אורביטליות ותוך לבביות הראו הופעת אות GFP מאוחרת. ביום ה-17, דגים שהוזרקו תוך ורידי הציגו את אותות ה-GFP הבולטים ביותר במח הכליה.
ציטומטריית זרימה של מח הכליה הראתה כ-18% תאים חיוביים ל-GFP בדגים שהוזרקו תוך ורידי עם שלוש פעמים 10 בחזקת חמישה תאים בהתאמה לרמות GFP במח הכליה של התורם. לעומת זאת, שיטות תוך-לבביות ורטרו-אורביטליות הראו תאים חיוביים של 5% ו-2% GFP בהתאמה.
