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Reconstitution Of &#946;-catenin Degradation In <em>Xenopus</em> Egg Extract

Xenopus laevis egg extract is a well-characterized, robust system for studying the biochemistry of diverse cellular processes. Xenopus egg extract has ...

Vanderbilt University Medical Center

p63, a homolog of the tumor suppressor p53, is critical for the development and maintenance of complex epithelia. The developmentally regulated p63 isoform, DeltaNp63, can act as a transcriptional repressor, but the link between the transcriptional functions of p63 and its biological roles is unclear. Based on our initial finding that the mesoderm-inducing factor activin A is suppressed by DeltaNp63 in human keratinocytes, we investigated the role of DeltaNp63 in regulating mesoderm induction during early Xenopus laevis development. We find that down-regulation of DeltaNp63 by morpholino injection in the early Xenopus embryo potentiates mesoderm formation whereas ectopic expression of DeltaNp63 inhibits mesoderm formation. Furthermore, we show that mesodermal induction after down-regulation of DeltaNp63 is dependent on p53. We propose that a key function for p63 in defining a squamous epithelial phenotype is to actively suppress mesodermal cell fates during early development. Collectively, we show that there is a distinct requirement for different p53 family members during the development of both mesodermal and ectodermal tissues. These findings have implications for the role of p63 and p53 in both development and tumorigenesis of human epithelia.

DeltaNp63 antagonizes p53 to regulate mesoderm induction in Xenopus laevis.

Spectrins are major proteins in the cytoskeletal network of most cells. In Drosophila, beta(Heavy)-Spectrin encoded by the karst gene functions together with Crb during photoreceptor morphogenesis. However, the roles of two other Spectrins (alpha- and beta-Spectrins) in developing photoreceptor cells have not been studied. Here, we analyzed the effects of spectrin mutations on developing eyes to determine their roles in photoreceptor morphogenesis. We found that the Spectrins are dispensable for retinal differentiation in eye imaginal discs during larval stage. However, photoreceptors deficient in alpha- or beta-Spectrin display dramatic apical membrane expansions including Crb and show morphogenesis defects during pupal eye development, suggesting that alpha- and beta-Spectrins are specifically required for photoreceptor polarity during pupal eye development. Karst localizes apically, whereas beta-Spectrin is preferentially distributed in the basolateral region. We show that overexpression of beta-Spectrin causes a strong shrinkage of apical membrane domains, and loss of beta-Spectrin causes an expansion of apical domains, implying an antagonistic relationship between beta-Spectrin and Karst. These results indicate that Spectrins are required for controlling photoreceptor morphogenesis through the modulations of cell membrane domains.

Membrane domain modulation by Spectrins in Drosophila photoreceptor morphogenesis.

&#x7ECF;&#x5178; wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x98CE;&#x6F6E;&#x8868;&#x660E;&#x8981;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5404;&#x79CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x6700;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x764C;&#x75C7;&#x3002;&#x5C4F;&#x5E55;&#x5DF2;&#x6267;&#x884C;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x4F7F;&#x7528;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x8FD9;&#x6761;&#x6B65;&#x9053;&#x6216;&#x4E0E;&#x7EAF;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x66FE;&#x5236;&#x8BA2;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#xFF0C;&#x627C;&#x8981;&#x91CD;&#x8FF0;&#x7ECF;&#x5178; wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x751F;&#x5316;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;LRP6&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x7C7B;&#x751F;&#x5316;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; Wnt hiv &#x611F;&#x67D3;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x53CD;&#x5BF9;&#x65F6;&#x5C1A;&#x8C03;&#x8282; Wnt &#x901A;&#x8DEF; (&beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x548C; Axin) &#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x878D;&#x5408;&#x4E86; &beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x548C; Axin &#x7684;&#x8424;&#x706B;&#x866B;&#x548C;&#x6D77;&#x80BE;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#xFF0C;&#x548C;&#x8BC1;&#x660E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5176;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x4E00;&#x6837;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x53CC;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x8BFB;&#x51FA;&#xFF0C;&#x9002;&#x5E94;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x63D0;&#x53D6;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7B5B;&#x9009;&#x3002;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C4F;&#x5E55;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E86;&#x53CD;&#x6620;&#x7504;&#x522B;&#x7684;&#x5E93;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5E03;&#x66F2;&#x7EBF;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; Wnt &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5370;&#x8BC1;&#x4E86;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x5584;&#x610F;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x80DA;&#x80CE; Wnt &#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5176;&#x4ED6;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4E0D;&#x5BB9;&#x5BF9;&#x6291;&#x5236;&#x5242;/&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x7684;&#x7B5B;&#x67E5;&#x3002;

&#x8BC6;&#x522B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375; Wnt &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x3002;

Misregulation of the Wnt pathway has been shown to be responsible for a variety of human diseases, most notably cancers. Screens for inhibitors of this pathway have been performed almost exclusively using cultured mammalian cells or with purified proteins. We have previously developed a biochemical assay using Xenopus egg extracts to recapitulate key cytoplasmic events in the Wnt pathway. Using this biochemical system, we show that a recombinant form of the Wnt coreceptor, LRP6, regulates the stability of two key components of the Wnt pathway (Î²-catenin and Axin) in opposing fashion. We have now fused Î²-catenin and Axin to firefly and Renilla luciferase, respectively, and demonstrate that the fusion proteins behave similarly as their wild-type counterparts. Using this dual luciferase readout, we adapted the Xenopus extracts system for high-throughput screening. Results from these screens demonstrate signal distribution curves that reflect the complexity of the library screened. Of several compounds identified as cytoplasmic modulators of the Wnt pathway, one was further validated as a bona fide inhibitor of the Wnt pathway in cultured mammalian cells and Xenopus embryos. We show that other embryonic pathways may be amendable to screening for inhibitors/modulators in Xenopus egg extracts.

A biochemical screen for identification of small-molecule regulators of the Wnt pathway using Xenopus egg extracts.

Dysfonctionnement de la signalisation Wnt s&#39;est av&eacute;r&eacute; &ecirc;tre responsable d&#39;une vari&eacute;t&eacute; de maladies humaines, notamment les cancers. Les &eacute;crans des inhibiteurs de cette voie ont &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;es en utilisant presque exclusivement des cellules de mammif&egrave;res, ou avec des prot&eacute;ines purifi&eacute;es. Nous avons d&eacute;j&agrave; d&eacute;velopp&eacute; un dosage biochimique utilisant des extraits d&#39;oeufs de Xenopus pour r&eacute;capituler les principaux &eacute;v&eacute;nements cytoplasmiques dans la voie de signalisation Wnt. Gr&acirc;ce &agrave; ce syst&egrave;me biochimique, nous montrons qu&#39;une forme recombinante de le cor&eacute;cepteur Wnt, LRP6, r&eacute;glemente la stabilit&eacute; de deux &eacute;l&eacute;ments cl&eacute;s de la signalisation Wnt (&beta;-cat&eacute;nine et Axin) pour s&#39;opposer au mode. Nous ont maintenant fusionn&eacute;e &beta;-cat&eacute;nine et Axin &agrave; firefly et Renilla lucif&eacute;rase, respectivement et d&eacute;montrer que les prot&eacute;ines de fusion se comportent de la m&ecirc;me fa&ccedil;on que leurs homologues de type sauvage. &Agrave; l&#39;aide de cette indication de la lucif&eacute;rase double, nous avons adapt&eacute; le syst&egrave;me extraits de Xenopus pour le criblage &agrave; haut d&eacute;bit. Les r&eacute;sultats de ces &eacute;crans montrent les courbes de distribution de signal qui refl&egrave;tent la complexit&eacute; de la biblioth&egrave;que projet&eacute;e. De nombreux compos&eacute;s identifi&eacute;s en tant que modulateurs cytoplasmiques de la voie Wnt, un a &eacute;t&eacute; valid&eacute; davantage comme un inhibiteur de la bonne foi de la voie Wnt dans des cellules de mammif&egrave;res et d&#39;embryons de Xenopus. Nous montrons que les autres voies embryonnaires peuvent &ecirc;tre amendables de d&eacute;pistage des inhibiteurs/modulateurs en extraits d&#39;oeufs de Xenopus.

Un &eacute;cran biochimique pour l&#39;identification de petites mol&eacute;cules responsables de la r&eacute;glementation de la signalisation Wnt utilisant des oeufs de Xenopus extraits.

Misregulation des Wnt-Signalweges hat sich f&uuml;r eine Vielzahl von Krankheiten beim Menschen, vor allem Krebserkrankungen verantwortlich gezeigt. Bildschirme f&uuml;r Inhibitoren von diesem Weg fast ausschlie&szlig;lich mit kultivierte S&auml;ugetierzellen durchgef&uuml;hrt wurden oder mit gereinigten Proteinen. Wir haben zuvor eine biochemische Assay mit Xenopus-Ei-Extrakte zu zytoplasmatischen Schl&uuml;sselereignisse der Wnt-Signalweg rekapitulieren entwickelt. Mit diesem biochemische System, wir zeigen, dass eine rekombinante Form des Wnt-Coreceptor, regelt LRP6, die Stabilit&auml;t der beiden Hauptkomponenten des Wnt-Signalweges (&beta;-Catenin und Axin) gegen Mode. Wir haben jetzt verschmolzen &beta;-Catenin und Axin, Firefly und Renilla-Luciferase, beziehungsweise, und zeigen, dass die Fusionsproteine &auml;hnlich wie ihre Wildtyp-Gegenst&uuml;cke zu Verhalten. Mit diesem dual Luciferase-auslesen, wir das Xenopus Extrakte System f&uuml;r High-Throughput-Screening angepasst. Ergebnisse aus diesen Bildschirmen zeigen Signal-Verteilung-Kurven, die die Komplexit&auml;t der Bibliothek geschirmt widerspiegeln. Mehrere Verbindungen identifiziert als zytoplasmatischen Modulatoren des Wnt-Signalweges war man weiter als ein bona-fide-Inhibitor des Wnt-Signalweges in kultivierten S&auml;ugetierzellen und Xenopus Embryonen validiert. Wir zeigen, dass andere embryonale Wege &auml;nderungsf&auml;hig Sicherheitskontrollen Inhibitoren/Modulatoren in Extrakten von Xenopus-Ei zu sein k&ouml;nnen.

Ein biochemischer Bildschirm f&uuml;r die Identifizierung des klein-Molek&uuml;l Regulatoren des Wnt-Signalweges mit Xenopus Ei extrahiert.

Misregolazione del pathway Wnt ha dimostrato di essere responsabile per una variet&agrave; di malattie umane, in particolare tumori. Schermi per gli inibitori di questo percorso sono stati effettuati quasi esclusivamente utilizzando cellule di mammifero coltivate o con proteine purificate. In precedenza abbiamo sviluppato un&#39;analisi biochimica con estratti di uovo di Xenopus per riassumere gli eventi chiave citoplasmatici nel pathway Wnt. Utilizzando questo sistema biochimico, che ci mostrano una forma ricombinante del coreceptor Wnt, LRP6, regola la stabilit&agrave; delle due componenti chiave della via di Wnt (&beta;-catenina e Axin) opponendosi a moda. Ci sono ora fuse &beta;-catenina e Axin alla firefly e Renilla luciferasi, rispettivamente e dimostrano che le proteine di fusione si comportano allo stesso modo come le loro controparti del selvaggio-tipo. Utilizzando questa lettura dual luciferasi, abbiamo adattato il sistema di estratti di Xenopus per high-throughput screening. Risultati da questi schermi dimostrano le curve di distribuzione segnale che riflettono la complessit&agrave; della libreria proiettata. Di diversi composti identificati come modulatori citoplasmatiche del pathway Wnt, uno &egrave; stato ulteriormente convalidato come un inibitore della Wnt in cellule di mammifero coltivate ed embrioni di Xenopus bona fide. Mostriamo che altre vie embrionali possono essere modificabili a screening per inibitori/modulatori negli estratti di uovo di Xenopus.

Estrae un schermo biochimico per l&#39;identificazione dei regolatori della piccolo-molecola del pathway Wnt usando uova di Xenopus.

Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E; misregulation &#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3092;&#x8CA0;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5C02;&#x3089;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6D44;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x30AD;&#x30FC;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306F; wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; Wnt &#x30B3;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; LRP6&#x3001;&#x8ABF;&#x7BC0; Wnt &#x7D4C;&#x8DEF; (&beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068; Axin) &#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x53CD;&#x5BFE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4ECA; &beta;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068; Axin &#x30DB;&#x30BF;&#x30EB;&#x3068; Renilla &#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x878D;&#x5408;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; &#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x51FA;&#x3057;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x62BD;&#x51FA;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x9069;&#x5FDC;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x304B;&#x3089;&#x7D50;&#x679C;&#x4E0A;&#x6620;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x66F2;&#x7DDA;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x771F;&#x6B63;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ED6;&#x80DA;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x4E0D;&#x9069;&#x6CD5;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;/&#x5909;&#x8ABF;&#x5668;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x3067;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF; &#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;wnt &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Wnt &#xACBD;&#xB85C; misregulation &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;, &#xD2B9;&#xD788; &#xC554;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xAC70;&#xC758; &#xB3C5;&#xC810;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589; &#xB41C; &#xB610;&#xB294; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD654;&#xBA74;. Xenopus &#xB2EC;&#xAC40; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD0A4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; Wnt &#xACBD;&#xB85C; &#xC815;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Wnt coreceptor&#xC758; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC774; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; LRP6, &#xD328;&#xC158;&#xC5D0; &#xBC18;&#xB300;&#xC5D0;&#xC11C; Wnt &#xACBD;&#xB85C; (&beta;-catenin &#xBC0F; Axin)&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xC694; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC735;&#xD569; &beta;-catenin &#xBC0F; Axin &#xBC18;&#xB527;&#xBD88;&#xACFC; Renilla &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C;&#xB97C; &#xAC01;&#xAC01; &#xACE0; &#xC735;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB300;&#xC751;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD558; &#xAC8C; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xAC80;&#xC5F4; Xenopus &#xCD94;&#xCD9C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC801;&#xC751;&#xC774; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xD310;&#xB3C5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC774; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0C1;&#xC601; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xD3EC; &#xACE1;&#xC120;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Wnt &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xD558;&#xB098; &#xB354; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xBC30;&#xC591;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC544; Xenopus Wnt &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xAC80;&#xC99D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC30;&#xC544; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;/&#xBCC0;&#xC870;&#xAE30; Xenopus &#xB2EC;&#xAC40; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xB97C; amendable &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Xenopus &#xACC4;&#xB780;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Wnt &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0;&#xC744; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Misregulation de la v&iacute;a de Wnt ha demostrado ser responsable de una variedad de enfermedades humanas, especialmente los c&aacute;nceres. Pantallas para inhibidores de esta v&iacute;a se han realizado casi exclusivamente con cultivos de c&eacute;lulas mam&iacute;feros o con las prote&iacute;nas purificadas. Previamente hemos desarrollado un an&aacute;lisis bioqu&iacute;mico utilizando extractos de huevos de Xenopus recapitular eventos clave citopl&aacute;smicas en la v&iacute;a de Wnt. Usando este sistema bioqu&iacute;mico, mostramos una forma recombinante de los correceptores Wnt, LRP6, regula la estabilidad de dos componentes claves de la v&iacute;a de Wnt (&beta;-catenina y Axin) en moda de oposici&oacute;n. Nos han ahora fusionado &beta;-catenina y Axin luci&eacute;rnaga y Renilla luciferasa, respectivamente y demostrar que las prote&iacute;nas de fusi&oacute;n se comportan semejantemente como sus hom&oacute;logos de tipo salvaje. Con esta lectura dual luciferasa, adaptamos el sistema de extractos de Xenopus para detecci&oacute;n de alto rendimiento. Los resultados de estas pantallas demuestran las curvas de distribuci&oacute;n de la se&ntilde;al que reflejan la complejidad de la biblioteca proyectada. De varios compuestos identificados como moduladores citopl&aacute;smicos de la v&iacute;a de Wnt, uno m&aacute;s fue validado como un inhibidor de la buena fe de la v&iacute;a de Wnt en c&eacute;lulas cultivadas de mam&iacute;feras y embriones de Xenopus. Mostramos que otras v&iacute;as embrionarias pueden ser enmendados para detecci&oacute;n de inhibidores/moduladores en Xenopus huevo extractos.

Extractos de una pantalla bioqu&iacute;mica para la identificaci&oacute;n de mol&eacute;culas peque&ntilde;as de reguladores de la v&iacute;a de Wnt usando huevos de Xenopus.

The canonical Wnt/β-catenin pathway is an ancient and evolutionarily conserved signaling pathway that is required for the proper development of all metazoans, from the basal demosponge Amphimedon queenslandica to humans. Misregulation of Wnt signaling is implicated in many human diseases, making this pathway an intense area of research in industry as well as academia. In this review, we explore our current understanding of the molecular steps involved in the transduction of a Wnt signal. We will focus on how the critical Wnt pathway component, β-catenin, is in a "futile cycle" of constant synthesis and degradation and how this cycle is disrupted upon pathway activation. We describe the role of the Wnt pathway in major human cancers and in the control of stem cell self-renewal in the developing organism and in adults. Finally, we describe well-accepted criteria that have been proposed as evidence for the involvement of a molecule in regulating the canonical Wnt pathway.

Tony W. Chen

Department of Cell and Developmental Biology and Program in Developmental Biology

Vanderbilt University Medical Center

Reconstitution Of β-catenin Degradation In Xenopus Egg Extract

Tony W. Chen

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Cell and Developmental Biology and Program in Developmental Biology

Vanderbilt University Medical Center

Reconstitution Of β-catenin Degradation In Xenopus Egg Extract

Department of Cell and Developmental Biology and Program in Developmental Biology