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Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

Electron crystallography has evolved as a method that can be used either alternatively or in combination with three-dimensional crystallization and X-ray ...

Georgia Institute of Technology

&#x96C4;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x9009;&#x62E9;&#x662F;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x4EE3;&#x7406;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x96C4;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x96C4;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4E0D;&#x654F;&#x611F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x679C;&#x80F6;&#x3001; &#x690D;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x90FD;&#x80FD;&#x591F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x96C4;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53CD;&#x5E94; (LNCaP) &#x548C;&#x96C4;&#x6FC0;&#x7D20;&#x72EC;&#x7ACB; (LNCaP C4-2&#xFF09; &#x4EBA;&#x7C7B;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x5546;&#x4E1A;&#x4E0A;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x5206;&#x7EA7;&#x7684;&#x679C;&#x80F6;&#x7C89; (&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x51CB;&#x4EA1; (&#x7EA6; 40-fold &#x4EE5;&#x4E0A;&#x975E;&#x6CBB;&#x7597;&#x7EC6;&#x80DE;) &#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A; Apoptosense &#x6D4B;&#x5B9A;&#x548C;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x548C;&#x5176;&#x57FA;&#x677F;&#xFF0C;poly(ADP-ribose) &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6240;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x67D1;&#x6A58;&#x679C;&#x80F6; (CP) &#x548C; ph &#x503C;&#x4FEE;&#x6539; CP&#xFF0C;PectaSol&#xFF0C;&#x5DF2;&#x5F88;&#x5C11;&#x6216;&#x6CA1;&#x6709;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x7CD6;&#x57FA;&#x6B8B;&#x7559;&#x6210;&#x5206;&#x548C;&#x8054;&#x52A8;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x679C;&#x80F6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x6E29;&#x548C;&#x7684;&#x57FA;&#x5904;&#x7406;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53BB;&#x9664;&#x916F;&#x8054;&#x7CFB;&#x6BC1;&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F; homogalacturonan (HG) &#x4F4E;&#x805A;&#x7CD6;&#x3002;&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E0E;&#x916F;&#x9176;&#x5931;&#x6D3B;&#x8981;&#x5220;&#x9664; galacturonosyl carboxymethylesters &#x548C;/&#x6216; endopolygalacturonase &#x5728; nonmethylesterified &#x6C5E;&#x9020;&#x6210;&#x6CA1;&#x6709;&#x91CD;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x7275;&#x8FDE; carboxymethylester &#x4EE5;&#x5916;&#x7684;&#x57FA;&#x5730;&#x654F;&#x611F;&#x8054;&#x7CFB;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x70ED;&#x5904;&#x7406;&#x7684; CP (HTCP) &#x5BFC;&#x81F4;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4F7F; fpp &#x6B63;&#x5E38;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x6210;&#x51CB;&#x4EA1;&#x679C;&#x80F6;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x624B;&#x6BB5;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x7684;&#x5F88;&#x9AD8;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4E2D;&#x679C;&#x80F6;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x5143;&#x7D20;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8D1F;&#x8D23;&#x53EF;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#xFF0C;&#x6216;&#x70ED;&#x5904;&#x7406;&#x7684; CP &#x7684;&#x5145;&#x5B9E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x679C;&#x80F6;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x673A;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x679C;&#x80F6;&#x7684;&#x836F;&#x54C1;&#x3001; &#x8425;&#x517B;&#x54C1;&#x3001; &#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x6216;&#x63A8;&#x8350;&#x7684;&#x996E;&#x98DF;&#x4E60;&#x60EF;&#x6539;&#x53D8;&#x65E8;&#x5728;&#x6253;&#x51FB;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7684;&#x53D1;&#x751F;&#x548C;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

&#x679C;&#x80F6;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF1A; &#x51CB;&#x4EA1;&#x679C;&#x80F6;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

Treatment options for androgen-independent prostate cancer cells are limited. Therefore, it is critical to identify agents that induce death of both androgen-responsive and androgen-insensitive cells. Here we demonstrate that a product of plant cell walls, pectin, is capable of inducing apoptosis in androgen-responsive (LNCaP) and androgen-independent (LNCaP C4-2) human prostate cancer cells. Commercially available fractionated pectin powder (FPP) induced apoptosis (approximately 40-fold above non-treated cells) in both cell lines as determined by the Apoptosense assay and activation of caspase-3 and its substrate, poly(ADP-ribose) polymerase. Conversely, citrus pectin (CP) and the pH-modified CP, PectaSol, had little or no apoptotic activity. Glycosyl residue composition and linkage analyses revealed no significant differences among the pectins. Mild base treatment to remove ester linkages destroyed FPP's apoptotic activity and yielded homogalacturonan (HG) oligosaccharides. The treatment of FPP with pectinmethylesterase to remove galacturonosyl carboxymethylesters and/or with endopolygalacturonase to cleave nonmethylesterified HG caused no major reduction in apoptotic activity, implicating the requirement for a base-sensitive linkage other than the carboxymethylester. Heat treatment of CP (HTCP) led to the induction of significant levels of apoptosis comparable to FPP, suggesting a means for generating apoptotic pectic structures. These results indicate that specific structural elements within pectin are responsible for the apoptotic activity, and that this structure can be generated, or enriched for, by heat treatment of CP. These findings provide the foundation for mechanistic studies of pectin apoptotic activity and a basis for the development of pectin-based pharmaceuticals, nutraceuticals, or recommended diet changes aimed at combating prostate cancer occurrence and progression.

Pectin induces apoptosis in human prostate cancer cells: correlation of apoptotic function with pectin structure.

Options de traitement pour le cancer de la prostate androg&eacute;no-ind&eacute;pendant sont limit&eacute;es. Par cons&eacute;quent, il est essentiel d&#39;identifier les agents qui provoquent la mort des cellules sensibles aux androg&egrave;nes et insensibles aux androg&egrave;nes. Nous d&eacute;montrons qu&#39;un produit des parois cellulaires des plantes, pectine, est capable d&#39;induire l&#39;apoptose sensibles aux androg&egrave;nes (LNCaP) et de cellules de cancer de la prostate humain androg&eacute;no-ind&eacute;pendant (LNCaP C4-2). Poudre de pectine fractionn&eacute;s commercialement disponibles (FPP) induit l&#39;apoptose (environ les cellules non trait&eacute;es qui pr&eacute;c&egrave;de 40 fois) dans les deux lign&eacute;es cellulaires, tel que d&eacute;termin&eacute; par le dosage de l&#39;Apoptosense et l&#39;activation de la caspase-3 et son substrat, ribose polym&eacute;rase. &Agrave; l&#39;inverse, pectine de citrus (CP) et la CP pH modifi&eacute;, PectaSol, avait une activit&eacute; apoptotique peu ou pas. R&eacute;sidu glycosyl composition et &agrave; l&#39;assemblage, les analyses ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; aucune diff&eacute;rence significative entre les pectines. Doux traitement basique pour supprimer des liaisons ester d&eacute;truit l&#39;activit&eacute; apoptotique FPP et a donn&eacute; homogalacturonan oligosaccharides (HG). Le traitement de la FPP avec pectinmethylesterase pour supprimer galacturonosyl carboxymethylesters et/ou endopolygalacturonase en conjonction avec nonmethylesterified HG ne caus&eacute; aucune r&eacute;duction majeure en activit&eacute; apoptotique, impliquant l&#39;obligation pour un lien sensible &agrave; base autre que le carboxymethylester. Traitement thermique de CP (HTCP) a conduit &agrave; l&#39;induction de concentrations &eacute;lev&eacute;es d&#39;apoptose comparable &agrave; FPP, sugg&eacute;rant un moyens de produire des structures pectiques apoptotic. Ces r&eacute;sultats indiquent que les &eacute;l&eacute;ments structuraux sp&eacute;cifiques au sein de la pectine sont responsables de l&#39;activit&eacute; apoptotique, et que cette structure peut &ecirc;tre g&eacute;n&eacute;r&eacute;e, ou enrichie, par traitement thermique des CP. Ces r&eacute;sultats fournissent la Fondation pour les &eacute;tudes m&eacute;canistes d&#39;activit&eacute; apoptotique de la pectine et une base pour le d&eacute;veloppement de pectine ax&eacute;e sur les produits pharmaceutiques, nutraceutiques, ou recommand&eacute; des changements de r&eacute;gime visant &agrave; lutter contre la progression et l&#39;apparition du cancer de la prostate.

Pectine induit l&#39;apoptose dans les cellules de cancer de la prostate humain : corr&eacute;lation de fonction apoptotic avec structure de pectine.

Behandlungsoptionen f&uuml;r Androgen-unabh&auml;ngigen Prostatakrebs-Zellen sind begrenzt. Daher ist es wichtig, die Agenten zu identifizieren, die Tod der Androgen-responsive und Androgen-unempfindliche Zellen induzieren. Hier zeigen wir, dass ein Produkt der pflanzlichen Zellw&auml;nde, Pektin, Androgen-responsive (LNCaP) und Androgen-unabh&auml;ngigen (LNCaP-C4-2) menschliche Prostatakrebszellen Apoptose induzieren kann. Handels&uuml;bliche fraktionierte Pektin Pulver (FPP) induzierten Apoptose (ca. 40-fold oben unbehandelte Zellen) in beiden Zelllinien festgelegt durch die Apoptosense-Assay und Aktivierung von Caspase-3 und seine Substrat, poly(ADP-ribose)-Polymerase. Umgekehrt citrus Pektin (CP) und die pH-Wert-&Auml;nderung CP, PectaSol, hatte wenig oder gar keine Apoptotic Aktivit&auml;t. Glycosyl R&uuml;ckstand Zusammensetzung und Gest&auml;nge Analysen ergab keine signifikanten Unterschiede zwischen der Pektine. Milde Basis Behandlung Ester-Verbindungen entfernen zerst&ouml;rt FPPs Apoptotic Aktivit&auml;t und ergab Homogalacturonan (HG) Oligosaccharide. Die Behandlung von FPP mit Pectinmethylesterase, Galacturonosyl Carboxymethylesters zu entfernen und/oder Endopolygalacturonase zu Nonmethylesterified HG cleave verursachte keine bedeutende Abnahme Apoptotic Aktivit&auml;t, zielbewu&szlig;t die Voraussetzung f&uuml;r eine Base-Sensitive-Verbindung als die Carboxymethylester. W&auml;rmebehandlung von CP (HTCP) f&uuml;hrte zu die Induktion von Apoptose FPP, schl&auml;gt ein Mittel zur Erzeugung von Apoptotic pectic Strukturen vergleichbar bedeutende Mengen. Diese Ergebnisse zeigen, dass spezifische Strukturelemente in Pektin f&uuml;r die Apoptotic Aktivit&auml;t verantwortlich sind und diese Struktur generiert oder durch W&auml;rmebehandlung von CP, bereichert werden kann. Diese Ergebnisse liefern die Grundlage f&uuml;r mechanistische Untersuchungen Pektin Apoptotic Aktivit&auml;t und eine Grundlage f&uuml;r die Entwicklung von Pektin-basierte Pharmaceuticals, Nutrazeutika, oder empfohlenen Di&auml;t-&Auml;nderungen, die zur Bek&auml;mpfung von Prostatakrebs auftreten und Fortschreiten.

Pektin induziert Apoptose in menschlichen Prostatakrebszellen: Korrelation von Apoptotic Funktion mit Pektin-Struktur.

Opzioni di trattamento per le cellule tumorali della prostata androgeno-indipendente sono limitate. Pertanto, &egrave; fondamentale per identificare gli agenti che inducono la morte delle cellule androgeno-sensibili e androgeno-insensibili. Qui dimostriamo che un prodotto di pareti della cellula vegetale, pectina, &egrave; in grado di indurre apoptosi in androgeno-sensibili (LNCaP) e cellule di cancro umano della prostata androgeno-indipendente (LNCaP C4-2). Polvere commercialmente disponibile pectina frazionato (FPP) induce apoptosi (circa 40-fold sopra non trattate cellule) in entrambe le linee cellulari come determinato dal saggio Apoptosense e attivazione di caspase-3 e il suo substrato, poly(ADP-ribose) polimerasi. Al contrario, pectina di agrumi (CP) e il pH modificato CP, PectaSol, aveva poca o nessuna attivit&agrave; apoptotic. Glicosil residui composizione e sollevatore analisi hanno evidenziato differenze significative tra le pectine. Lieve trattamento base per rimuovere legami estere distrutto attivit&agrave; apoptotic FPP e reso homogalacturonan oligosaccaridi (HG). Il trattamento di FPP pectinmethylesterase galacturonosyl carboxymethylesters di rimuovere e/o con endopolygalacturonase a fendere nonmethylesterified HG non causato nessun importante riduzione nell&#39;attivit&agrave; apoptotic, implicando l&#39;esigenza di un collegamento di base sensibile oltre il carboxymethylester. Trattamento termico di CP (HTCP) ha condotto per l&#39;induzione di livelli significativi di apoptosis paragonabile a FPP, suggerendo un mezzo per la generazione di strutture pectiche apoptotic. Questi risultati indicano che gli elementi strutturali specifici all&#39;interno di pectina sono responsabili per l&#39;attivit&agrave; apoptotic, e che questa struttura pu&ograve; essere generata, o arricchita, da trattamento termico di CP. Questi risultati forniscono le basi per Studi meccanicistici di attivit&agrave; apoptotic pectina e una base per lo sviluppo di prodotti farmaceutici a base di pectina, nutraceutici, o raccomandato cambiamenti di dieta, volti a combattere la progressione e la ricorrenza del cancro della prostata.

Pectina induce apoptosi nelle cellule umane di cancro alla prostata: correlazione di apoptotic funzione con struttura di pectina.

&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x80A2;&#x306F;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x690D;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7523;&#x7269;&#x304C;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x53CD;&#x5FDC; (LNCaP) &#x3068;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58; (LNCaP C4-2) &#x3072;&#x3068;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5E02;&#x8CA9;&#x306E;&#x5206;&#x753B;&#x3057;&#x305F;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D1;&#x30A6;&#x30C0;&#x30FC; &#xFF08;FPP&#xFF09; &#xFF08;&#x7D04; 40-fold &#x4E0A;&#x8A18;&#x7121;&#x51E6;&#x7406;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09; Apoptosense &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30FC;&#x30B9; &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E21;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;&#x67D1;&#x6A58;&#x985E;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; (CP) &#x3068; pH &#x5909;&#x66F4; CP&#x3001;PectaSol&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x5168;&#x304F;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30EC;&#x30CF; &#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x6B8B;&#x6E23;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x3092;&#x8A8D;&#x3081;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x8EFD;&#x5EA6;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x6CBB;&#x7642; FPP &#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3001;&#x30DB;&#x30E2;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C4;&#x30ED;&#x30CA;&#x30F3; (HG) &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x7CD6;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;FPP &#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3068; galacturonosyl carboxymethylesters &#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AC;&#x30E9;&#x30C1;&#x30E5;&#x30ED;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F; nonmethylesterified HG &#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D6; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C4;&#x30ED;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304C; carboxymethylester &#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092; implicating &#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3067;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;.&#x71B1;&#x51E6;&#x7406; CP (HTCP) &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x8CEA;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x793A;&#x5506; FPP &#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x8981;&#x7D20;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3092;&#x8CA0;&#x3044;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305F;&#x3081;&#x3001;CP &#x306E;&#x71B1;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x306F;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x6A5F;&#x5E8F;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x76E4;&#x3068;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x3001;&#x6804;&#x990A;&#x88DC;&#x52A9;&#x98DF;&#x54C1;&#x3001;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x30FB;&#x9032;&#x5C55;&#x306E;&#x64B2;&#x6EC5;&#x3092;&#x76EE;&#x6307;&#x3057;&#x305F;&#x98DF;&#x4E8B;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306F;&#x3072;&#x3068;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;: &#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x95A2;&#x6570;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x3002;

&#xC548; &#xB4DC;&#xB85C; &#xAC90; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC635;&#xC158;&#xC774; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xBBC0;&#xB85C;, &#xC548; &#xB4DC;&#xB85C; &#xAC90;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC751; &#xD558; &#xACE0; &#xC548; &#xB4DC;&#xB85C; &#xAC90;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD;&#xC758; &#xD399; &#xD2F4;, &#xC81C;&#xD488;&#xC774; &#xC548; &#xB4DC;&#xB85C; &#xAC90;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC751; (LNCaP)&#xC640; &#xC548; &#xB4DC;&#xB85C; &#xAC90; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; (LNCaP c 4&#xAC00;-2) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; apoptosis &#xC720;&#xB3C4; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xC6A9; &#xBD84;&#xB958; &#xD55C; &#xD399; &#xD2F4; &#xBD84;&#xB9D0; (FPP) Apoptosense &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC0F; caspase 3 &#xBC0F; &#xADF8; &#xAE30;&#xD310;, poly(ADP-ribose) &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB41C; &#xB450; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; (&#xC57D; 40-fold &#xC704;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBE44; &#xC138;&#xD3EC;) apoptosis &#xC720;&#xB3C4;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, &#xAC10;&#xADE4; &#xB958; &#xD399; &#xD2F4; (CP)&#xC640; pH &#xC218;&#xC815; CP, PectaSol, &#xAC70;&#xC758; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD558;&#xAC8C; apoptotic &#xD65C;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4;. Glycosyl &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC870;&#xC131;&#xACFC; &#xC5F0;&#xACC4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; pectins &#xAC04;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xC720;&#xB300; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xAE30;&#xBCF8; &#xCE58;&#xB8CC; FPP&#xC758; apoptotic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD30C;&#xAD34; &#xD558; &#xACE0; homogalacturonan (HG) oligosaccharides &#xAD74;&#xBCF5;. Pectinmethylesterase galacturonosyl carboxymethylesters&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; nonmethylesterified HG &#xCABC;&#xAC1C; &#xB2E4; endopolygalacturonase FPP&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; apoptotic &#xD65C;&#xB3D9;, &#xC5F0;&#xB8E8;&#xB294; carboxymethylester &#xC774;&#xC678;&#xC758; &#xC790;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC5F0;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD070; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Apoptosis FPP apoptotic pectic &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC218;&#xB2E8; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xC5F4; &#xCC98;&#xB9AC; CP (HTCP)&#xC758; &#xC8FC;&#xB3C4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD399; &#xD2F4; &#xB0B4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xC694;&#xC18C; apoptotic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xC9C0;&#xB294; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC774; &#xAD6C;&#xC870; &#xC0DD;&#xC131;, &#xB610;&#xB294; CP&#xC758; &#xC5F4; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;, &#xB18D;&#xCD95; &#xC218;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC740; &#xD399; &#xD2F4; apoptotic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC7AC;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xD399; &#xD2F4;-&#xAE30;&#xBC18; &#xC758;&#xC57D;&#xD488;, &#xC57D;&#xB9AC;, &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xB610;&#xB294; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xACFC; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xD1F4;&#xCE58; &#xACA8;&#xB0E5; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4;&#xD2B8; &#xBCC0;&#xACBD; &#xAD8C;&#xC7A5;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; apoptosis&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xD399; &#xD2F4;: &#xD399; &#xD2F4; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; apoptotic &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;.

Opciones de tratamiento para las c&eacute;lulas de c&aacute;ncer de pr&oacute;stata andr&oacute;geno-independiente son limitadas. Por lo tanto, es fundamental para identificar a agentes que inducen la muerte de las c&eacute;lulas sensibles al andr&oacute;geno tanto andr&oacute;geno-insensibles. Aqu&iacute; demostramos que un producto de las paredes celulares, pectina, es capaz de inducir apoptosis en andr&oacute;geno-sensible (LNCaP) y c&eacute;lulas de c&aacute;ncer de pr&oacute;stata humano andr&oacute;geno-independiente (LNCaP C4-2). Polvo de pectina fraccionada comercialmente disponibles (FPP) indujo apoptosis (aproximadamente 40-fold anteriores no tratadas c&eacute;lulas) en ambas l&iacute;neas celulares seg&uacute;n lo determinado por el an&aacute;lisis de Apoptosense y activaci&oacute;n de la caspasa-3 y su sustrato, ribosa polimerasa. Por el contrario, pectina c&iacute;trica (CP) y el CP pH-modificado, PectaSol, ten&iacute;a poca o ninguna actividad apopt&oacute;tica. An&aacute;lisis de composici&oacute;n y acoplamiento de residuo glycosyl revelaron diferencias significativas entre las pectinas. Tratamiento de base suave para quitar v&iacute;nculos &eacute;ster hab&iacute;a destruido actividad apopt&oacute;tica FPP y rindi&oacute; homogalacturonan oligosac&aacute;ridos (HG). El tratamiento de la FPP con pectinmethylesterase para eliminar galacturonosyl carboxymethylesters y/o endopolygalacturonase de allegarse nonmethylesterified HG no caus&oacute; ninguna reducci&oacute;n en actividad apopt&oacute;tica, implicando la exigencia de un v&iacute;nculo sensible a la base que no sea el carboxymethylester. Tratamiento t&eacute;rmico de CP (HTCP) condujo a la inducci&oacute;n de niveles significativos de apoptosis comparable a la FPP, sugiriendo un medio para generar estructuras p&eacute;cticas apopt&oacute;tica. Estos resultados indican que los elementos estructurales espec&iacute;ficos dentro de pectina son responsables de la actividad apopt&oacute;tica, y que esta estructura puede ser generada, o enriquecida, por tratamiento t&eacute;rmico de CP. Estos resultados proporcionan la base para estudios mecan&iacute;sticos de pectina apopt&oacute;tica actividad y una base para el desarrollo de f&aacute;rmacos basados en pectina, nutrac&eacute;uticos, o recomiendan cambios en la dieta encaminados a combatir la progresi&oacute;n y ocurrencia de c&aacute;ncer de pr&oacute;stata.

Pectina induce apoptosis en c&eacute;lulas humanas de c&aacute;ncer de pr&oacute;stata: correlaci&oacute;n de la funci&oacute;n de la apoptosis con la estructura de la pectina.

&#x5149;&#x7CFB;&#x7EDF; II &#xFF08;PSII&#xFF09; &#x662F;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x50AC;&#x5316;&#x6C34;&#x9530;&#x9499;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x5149;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6C27;&#x5316;&#x3002;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5149;&#x7684;&#x635F;&#x4F24;&#x4E0E;&#x4FEE;&#x590D;&#x5728; PSII &#x5149;&#x9AD8;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x6838;&#x5FC3;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x5EFA;&#x7B51;&#x7FA4;&#x7531; D1&#x3001; D2&#x3001; CP43 &#x548C; CP47 &#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x591A;&#x80BD;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x4E86;&#x4ECE;&#x6C27;&#x5316;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x65B0;&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x662F; CP43 &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E2D;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31;&#x80BD;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x662F;&#x7B26;&#x5408;&#x6C27;&#x5316; CP43 &#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x4FA7;&#x94FE;&#xFF0C;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;-365&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F; N-formylkynurenine (NFK)&#x3002;&#x4E0E;&#x7D2B;&#x5916;&#x53EF;&#x89C1;&#x5438;&#x6536;&#x548C;&#x7D2B;&#x5916;&#x5171;&#x632F;&#x62C9;&#x66FC;&#x5149;&#x8C31;&#x8868;&#x5F81;&#x652F;&#x6301;&#x6B64;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x5206;&#x914D;&#x3002;&#x5149;&#x5B66;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;NFK &#x7684;&#x4EA7;&#x91CF;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; 2 &#x500D; (2.2 &plusmn; 0.5) &#x4E0B;&#x9AD8;&#x706F;&#x5149;&#x7167;&#x660E;&#x3002;&#x968F;&#x4E4B;&#x800C;&#x6765;&#x7684; 2.4 &plusmn; 0.5-fold &#x4E0B;&#x8DCC;&#x7A33;&#x6001;&#x7387;&#x9AD8;&#x7684;&#x5149;&#x7167;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x6C27;&#x6C14;&#x6F14;&#x5316;&#x3002;NFK &#x662F;&#x7531;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x4E0E;&#x5355;&#x7EBF;&#x6001;&#x6C27;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728; PSII &#x5F3A;&#x5149;&#x80C1;&#x8FEB;&#x4E0B;&#x4EA7;&#x751F;&#x53CD;&#x5E94;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x7269;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6C27;&#x5316;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3001; D1 &#x86CB;&#x767D;&#x5468;&#x8F6C;&#x548C;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x90FD;&#x7B26;&#x5408; CP43 NFK &#x4FEE;&#x6539;&#x5728;&#x5149;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

N-formylkynurenine &#x4F5C;&#x4E3A;&#x9AD8;&#x5149;&#x80C1;&#x8FEB;&#x5728;&#x5149;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;

Photosystem II (PSII) is the membrane protein complex that catalyzes the photo-induced oxidation of water at a manganese-calcium active site. Light-dependent damage and repair occur in PSII under conditions of high light stress. The core reaction center complex is composed of the D1, D2, CP43, and CP47 intrinsic polypeptides. In this study, a new chromophore formed from the oxidative post-translational modification of tryptophan is identified in the CP43 subunit. Tandem mass spectrometry peptide sequencing is consistent with the oxidation of the CP43 tryptophan side chain, Trp-365, to produce N-formylkynurenine (NFK). Characterization with ultraviolet visible absorption and ultraviolet resonance Raman spectroscopy supports this assignment. An optical assay suggests that the yield of NFK increases 2-fold (2.2 Â± 0.5) under high light illumination. A concomitant 2.4 Â± 0.5-fold decrease is observed in the steady-state rate of oxygen evolution under the high light conditions. NFK is the product formed from reaction of tryptophan with singlet oxygen, which can be produced under high light stress in PSII. Reactive oxygen species reactions lead to oxidative damage of the reaction center, D1 protein turnover, and inhibition of electron transfer. Our results are consistent with a role for the CP43 NFK modification in photoinhibition.

N-formylkynurenine as a marker of high light stress in photosynthesis.

Photosyst&egrave;me II (PSII) est la complexe de prot&eacute;ine membranaire qui catalyse l&#39;oxydation induite par la photo de l&#39;eau &agrave; un site actif de mangan&egrave;se en calcium. R&eacute;paration et d&eacute;pendante de la lumi&egrave;re des dommages se produisent dans PSII dans des conditions de stress &eacute;lev&eacute; de lumi&egrave;re. Le complexe de centre de r&eacute;action core se compose des polypeptides intrins&egrave;ques D1, D2, CP43 et CP47. Dans cette &eacute;tude, un chromophore nouveau form&eacute; &agrave; partir de la modification post-traductionnelle oxydative du tryptophane est identifi&eacute; dans la sous-unit&eacute; CP43. Le s&eacute;quen&ccedil;age de peptides de spectrom&eacute;trie de masse tandem est conforme &agrave; l&#39;oxydation de la cha&icirc;ne lat&eacute;rale de CP43 tryptophane, Trp-365, pour produire des N-formylkynur&eacute;nine (NFK). Caract&eacute;risation avec ultraviolette absorption dans le visible et l&#39;ultraviolet r&eacute;sonance spectroscopie Raman prend en charge cette mission. Une analyse optique sugg&egrave;re que le rendement de NFK augmente 2 fois (2,2 &plusmn; 0,5) sous un &eacute;clairement lumineux &eacute;lev&eacute;. Un concomitant &plusmn; 2,4 0.5-fold diminution est observ&eacute;e dans le taux d&#39;&eacute;quilibre de d&eacute;gagement d&#39;oxyg&egrave;ne sous les conditions de luminosit&eacute; &eacute;lev&eacute;es. NFK est le produit form&eacute; par r&eacute;action du tryptophane avec l&#39;oxyg&egrave;ne singulet, qui peut &ecirc;tre produite sous fortes sollicitations l&eacute;g&egrave;res en PSII. R&eacute;actions des esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;oxyg&egrave;ne entra&icirc;ner des dommages oxydatifs du centre de r&eacute;action, renouvellement des prot&eacute;ines D1 et l&#39;inhibition du transfert d&#39;&eacute;lectrons. Nos r&eacute;sultats sont en accord avec un r&ocirc;le pour la modification de CP43 NFK dans photoinhibition.

N-formylkynur&eacute;nine comme marqueurs de stress l&eacute;ger &eacute;lev&eacute; dans la photosynth&egrave;se.

Photosystem II (PSII) ist die Membran Proteinkomplex, die Foto-induzierte Oxidation von Wasser an einem Mangan-Calcium-aktiv-Standort katalysiert. Licht-abh&auml;ngige-Sch&auml;digung und Reparatur auftreten in PSII unter Bedingungen der hohen leichte Belastungen. Der Kern Reaktion Mitte Komplex besteht aus der D1, D2, CP43 und CP47 systeminterne Polypeptide. In dieser Studie wird eine neue Chromophor bildete der oxidativen POSTTRANSLATIONELLE Ver&auml;nderung von Tryptophan in der CP43-Untereinheit identifiziert. Tandem-Massenspektrometrie-Peptid-Sequenzierung steht im Einklang mit der Oxidation der CP43-Tryptophan-Seitenkette, Trp-365, N-Formylkynurenine (NFK) zu produzieren. Charakterisierung mit Ultraviolett sichtbare Absorption und UV-Resonanz-Raman-Spektroskopie unterst&uuml;tzt diese Zuordnung. Ein optischer Assay legt nahe, dass der Ertrag von NFK 2-fach erh&ouml;ht (2,2 &plusmn; 0,5) unter hohen Licht Beleuchtung. Eine damit einhergehende 2,4 &plusmn; 0.5-fold Abnahme wird in der station&auml;ren bei der Sauerstoff-Evolution unter den hohen Lichtverh&auml;ltnissen beobachtet. NFK ist das Produkt gebildet durch Reaktion von Tryptophan mit Singulett-Sauerstoff, die unter hohen Licht Stress in PSII produziert werden k&ouml;nnen. Reaktive Sauerstoff Spezies Reaktionen f&uuml;hren zu oxidativen Sch&auml;den der Reaktion Mitte, D1-Protein-Umsatz und Hemmung der Elektronentransfer. Unsere Ergebnisse sind konsistent mit eine Rolle f&uuml;r die CP43 NFK-&Auml;nderung in Photoinhibition.

N-Formylkynurenine als Marker des hohen hellen Stress in der Photosynthese.

Fotosistema II (PSII) &egrave; il complesso proteico di membrana che catalizza l&#39;ossidazione dell&#39;acqua, in un sito attivo di manganese-calcio foto-indotta. Riparazione e danno luce-dipendente si verificano ISOFORMS in condizioni di elevato stress leggero. Il complesso del centro di reazione core &egrave; composto dei polipeptidi intrinseche D1, D2, CP43 e CP47. In questo studio, un nuovo cromoforo formato dalla modificazione ossidativa alberino-di traduzione di triptofano &egrave; identificato la subunit&agrave; CP43. Sequenziamento di peptide spettrometria di massa tandem &egrave; coerenza con l&#39;ossidazione della catena laterale CP43 triptofano, Trp-365, per produrre N-formylkynurenine (NFK). Caratterizzazione con assorbimento ultravioletto visibile e ultravioletta risonanza spettroscopia Raman supporta questa assegnazione. Un test ottico suggerisce che il rendimento del NFK aumenta 2 volte (2.2 &plusmn; 0,5) sotto illuminazione luce alta. Un concomitante &plusmn; 2,4 0.5-fold diminuzione si osserva nel tasso di steady-state di evoluzione di ossigeno in condizioni di luce elevate. NFK &egrave; il prodotto formato dalla reazione del triptofano con ossigeno singoletto, che pu&ograve; essere prodotta sotto stress elevato luce nel PSII. Reazioni di specie reattive dell&#39;ossigeno portano a danni ossidativi del centro di reazione, fatturato proteina D1 e inibizione del trasferimento di elettroni. I nostri risultati sono coerenti con un ruolo per la modifica CP43 NFK nella fotoinibizione.

N-formylkynurenine come un marcatore di stress elevato luce nella fotosintesi.

&#x5149;&#x5316;&#x5B66;&#x7CFB; II (PSII) &#x6C34;&#x30DE;&#x30F3;&#x30AC;&#x30F3; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x306E;&#x5149;&#x8A98;&#x8D77;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3068;&#x4FEE;&#x5FA9; PSII &#x9AD8;&#x5149;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30A2;&#x53CD;&#x5FDC;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E; D1&#x3001;D2&#x3001;CP43&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; CP47 &#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x4FEE;&#x98FE;&#x304B;&#x3089;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x767A;&#x8272;&#x56E3; CP43 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x914D;&#x5217;&#x3067;&#x3059; CP43 &#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x5074;&#x9396;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B; Trp-365, N-formylkynurenine (NFK) &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D2B;&#x5916;&#x53EF;&#x8996;&#x5438;&#x53CE;&#x3068;&#x7D2B;&#x5916;&#x5171;&#x9CF4;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3053;&#x306E;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x5B66;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x500D; NFK &#x306E;&#x53CE;&#x91CF;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; (2.2 &plusmn; 0.5) &#x9AD8;&#x5149;&#x7167;&#x660E;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x3002;&#x4F75;&#x7528; 2.4 &plusmn; 0.5-fold &#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x5149;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x9178;&#x7D20;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x7387;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;NFK &#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3; PSII &#x3067;&#x9AD8;&#x3044;&#x5149;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x4E0B;&#x306B;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x4E00;&#x91CD;&#x9805;&#x9178;&#x7D20;&#x3068;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304B;&#x3089;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x88FD;&#x54C1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F;&#x3001;&#x53CD;&#x5FDC;&#x4E2D;&#x5FC3; D1 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3; &#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x640D;&#x50B7;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; CP43 NFK &#x4FEE;&#x98FE;&#x5149;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3002;

N-formylkynurenine &#x306E;&#x5149;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9AD8;&#x5149;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

Photosystem II (PSII) &#xC0AC;&#xC9C4; &#xC720;&#xBC1C; &#xC0B0;&#xD654; &#xB9DD;&#xAC04; &#xCE7C;&#xC298; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB3C;&#xC758; catalyzes&#xB294; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE5B;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xC190;&#xC0C1;&#xACFC; &#xBCF5;&#xAD6C; PSII &#xB192;&#xC740; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCF54;&#xC5B4; &#xBC18;&#xC751; &#xC13C;&#xD130; &#xBCF5;&#xD569; D1, D2, CP43, &#xBC0F; CP47 &#xAE30;&#xBCF8; polypeptides&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; &#xD3EC;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC0C1; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC1C; CP43 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD150; &#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC5F0;&#xC18D; CP43 &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; Trp-365, N-formylkynurenine (NFK) &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBCF4;&#xC774;&#xB294; &#xC790;&#xC678;&#xC120; &#xD761;&#xC218;&#xC640; &#xC790;&#xC678;&#xC120; &#xACF5;&#xBA85; &#xB77C;&#xB9CC; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC774;&#xC774; &#xD560;&#xB2F9;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD11;&#xD559; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4; NFK &#xC218;&#xC775;&#xB960; 2-fold &#xC99D;&#xAC00; (2.2 &plusmn; 0.5) &#xB192;&#xC740; &#xBE5B; &#xC870;&#xBA85; &#xC544;&#xB798;. &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; 2.4 &plusmn; 0.5-fold &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xC870;&#xBA85; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC9C4;&#xD654;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. NFK &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xB192;&#xC740; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; PSII &#xC0DD;&#xC0B0;&#xD560; &#xC218; &#xB0B4;&#xC758; &#xC0B0;&#xC18C;&#xC640;&#xC758; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC81C;&#xD488;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; &#xBC18;&#xC751; &#xBC18;&#xC751; &#xC13C;&#xD130;, D1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD68C;&#xC804;&#xC728; &#xBC0F; &#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; &#xC190;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; photoinhibition&#xC5D0;&#xC11C; CP43 NFK &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB192;&#xC740; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xAD11;&#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; N formylkynurenine.

Fotosistema II (PSII) es el complejo de prote&iacute;na de membrana que cataliza la oxidaci&oacute;n inducida por foto de agua en un sitio activo de manganeso-calcio. Reparaci&oacute;n y da&ntilde;os dependientes de la luz ocurren en PSII bajo condiciones de alto estr&eacute;s ligero. El complejo de centro de reacci&oacute;n de n&uacute;cleo se compone de los polip&eacute;ptidos intr&iacute;nsecos D1, D2, CP43 y CP47. En este estudio, se identifica un nuevo crom&oacute;foro formado a partir de la modificaci&oacute;n poste-de translaci&oacute;n oxidativa de tript&oacute;fano en la subunidad CP43. Secuenciaci&oacute;n de p&eacute;ptidos de espectrometr&iacute;a de masas en t&aacute;ndem es consistente con la oxidaci&oacute;n de la cadena lateral del tript&oacute;fano CP43, Trp-365, para producir N-formylkynurenine (NFK). Caracterizaci&oacute;n con absorci&oacute;n ultravioleta visible y ULTRAVIOLETA resonancia espectroscop&iacute;a Raman apoya esta asignaci&oacute;n. Un an&aacute;lisis &oacute;ptico sugiere que el rendimiento de NFK aumenta 2 (2.2 &plusmn; 0.5) bajo iluminaci&oacute;n luz alta. Un &plusmn; 2.4 concomitante disminuci&oacute;n 0.5-fold se observa en la tasa de estado estacionario de la evoluci&oacute;n de ox&iacute;geno en las condiciones de luz altas. NFK es el producto formado por la reacci&oacute;n del tript&oacute;fano con ox&iacute;geno singlete, que puede ser utilizada bajo alta tensi&oacute;n ligera en PSII. Reacciones de especies reactivas de ox&iacute;geno conducen al da&ntilde;o oxidativo de la centro de reacci&oacute;n, la facturaci&oacute;n de prote&iacute;na D1 y la inhibici&oacute;n de la transferencia de electrones. Nuestros resultados son consistentes con un papel para la modificaci&oacute;n de CP43 NFK en fotoinhibici&oacute;n.

Tina M. Dreaden

School of Chemistry and Biochemistry

Georgia Institute of Technology

Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

Tina M. Dreaden

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}School of Chemistry and Biochemistry

Georgia Institute of Technology

Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

School of Chemistry and Biochemistry