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Pulse-chase Analysis of N-linked Sugar Chains from Glycoproteins in Mammalian Cells

Attachment of the Glc3Man9GlcNAc2 precursor oligosaccharide to nascent polypeptides in the ER is a common modification for secretory proteins. Although ...

Tel Aviv University

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&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x7EA0;&#x7F20;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; &#xFF08;ER&#xFF09; &#x6FC0;&#x6D3B; ER &#x819C;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x5916;&#x5FEB;&#x548C; IRE1 &#x5BFC;&#x81F4;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5E94;&#x7B54; (UPR)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x666E;&#x904D;&#x5B9A;&#x671F;&#x5BA1;&#x8BAE;&#x673A;&#x5236;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x89E6;&#x53D1;&#x5668;&#x7684;&#x5916;&#x5FEB;&#x548C; IRE1 &#x9694;&#x79BB;&#x4ECE;&#x627F;&#x4FDD;&#x8303;&#x56F4;&#x548C;&#x5230; ER &#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x5BA4; (ERQC)&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684; pericentriolar &#x8F66;&#x53A2;&#x4E0E;&#x7EA0;&#x7F20;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5176;&#x6392;&#x5E8F;&#x3002;&#x516C;&#x56ED; phosphorylates &#x7FFB;&#x8BD1;&#x56E0;&#x5B50; eIF2alpha&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x7D2F;&#x8BA1;&#x6E38;&#x79BB;&#x4E00;&#x4FA7;&#x7684; ERQC&#x3002;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x7684;&#x5916;&#x5FEB;&#x6216; eIF2alpha(S51A) &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x9632;&#x6B62;&#x5404;&#x81EA;&#x4E3A;&#x653F;&#x7684;&#x73B0;&#x8C61;&#xFF0C;&#x800C; eIF2alpha(S51D) &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x79CD;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6A21;&#x4EFF;&#x672C;&#x6784;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5B83;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; eIF2alpha &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; pericentriolar &#x6D53;&#x5EA6;&#x5728; ERQC&#xFF0C;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x653E;&#x5927;&#x666E;&#x904D;&#x5B9A;&#x671F;&#x5BA1;&#x8BAE;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53CD;&#x9988;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x96CC;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x9000;&#x5316; (&#x8BFB;&#x4E66;) &#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x666E;&#x904D;&#x5B9A;&#x671F;&#x5BA1;&#x8BAE;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B; &#xFF1B;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x8BFB;&#x4E66;&#x7EC4;&#x4EF6; &#xFF08;Sec61beta&#xFF0C;HRD1&#xFF0C;p97 &#x9ED1;&#x8272;&#xFF09;/&#x6B21;&#x4E8E;&#x6CDB;&#x7D20;) &#x88AB;&#x5F81;&#x8058;&#x5230; ERQC&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5B83;&#x53EF;&#x80FD;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E3A; retrotranslocation&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x81EA;&#x566C;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5728;&#x6D88;&#x9664;&#x805A;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x65E0;&#x5173; ERQC &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;

&#x6761;&#x5757;&#x5206;&#x5272;&#x7684;&#x5916;&#x5FEB;&#x4F9D;&#x8D56;&#x73B0;&#x8C61;&#x8BFB;&#x4E66;&#x548C;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x53CD;&#x5E94;&#x673A;&#x5236; ER &#x80C1;&#x8FEB;&#x671F;&#x95F4;&#x3002;

Accumulation of misfolded proteins in the endoplasmic reticulum (ER) activates the ER membrane kinases PERK and IRE1 leading to the unfolded protein response (UPR). We show here that UPR activation triggers PERK and IRE1 segregation from BiP and their sorting with misfolded proteins to the ER-derived quality control compartment (ERQC), a pericentriolar compartment that we had identified previously. PERK phosphorylates translation factor eIF2alpha, which then accumulates on the cytosolic side of the ERQC. Dominant negative PERK or eIF2alpha(S51A) mutants prevent the compartmentalization, whereas eIF2alpha(S51D) mutant, which mimics constitutive phosphorylation, promotes it. This suggests a feedback loop where eIF2alpha phosphorylation causes pericentriolar concentration at the ERQC, which in turn amplifies the UPR. ER-associated degradation (ERAD) is an UPR-dependent process; we also find that ERAD components (Sec61beta, HRD1, p97/VCP, ubiquitin) are recruited to the ERQC, making it a likely site for retrotranslocation. In addition, we show that autophagy, suggested to play a role in elimination of aggregated proteins, is unrelated to protein accumulation in the ERQC.

PERK-dependent compartmentalization of ERAD and unfolded protein response machineries during ER stress.

L&#x26;#39;accumulation de prot&#xE9;ines mal repli&#xE9;es dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE) active les kinases membrane du RE Perk et IRE1 conduisant &#xE0; la r&#xE9;ponse des prot&#xE9;ines d&#xE9;pli&#xE9;e (UPR). Nous montrons ici que l&#x26;#39;activation d&#xE9;clenche la s&#xE9;gr&#xE9;gation EPU PERK et IRE1 de BiP et leur tri avec prot&#xE9;ines mal repli&#xE9;es vers le compartiment ER-d&#xE9;riv&#xE9; de contr&#xF4;le de qualit&#xE9; (ERQC), un compartiment p&#xE9;ricentriolaire que nous avions identifi&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment. PERK phosphoryle facteur de traduction eIF2alpha, qui s&#x26;#39;accumule alors dans la face cytosolique de la ERQC. Dominant n&#xE9;gatifs avantage ou eIF2alpha (S51A) mutants &#xE9;viter le cloisonnement, alors que eIF2alpha (S51D) mutant, qui imite une phosphorylation constitutive, elle favorise. Ceci sugg&#xE8;re une boucle de r&#xE9;troaction o&#xF9; phosphorylation eIF2alpha provoque la concentration p&#xE9;ricentriolaire &#xE0; la ERQC, qui &#xE0; son tour amplifie l&#x26;#39;EPU. ER-associ&#xE9; de la d&#xE9;gradation (ERAD) est un processus de l&#x26;#39;EPU-d&#xE9;pendante; nous constatons &#xE9;galement que les composants ERAD (Sec61beta, HRD1, p97/VCP, ubiquitine) sont recrut&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;ERQC, ce qui en fait un site probable pour retrotranslocation. En outre, nous montrons que l&#x26;#39;autophagie, a sugg&#xE9;r&#xE9; de jouer un r&#xF4;le dans l&#x26;#39;&#xE9;limination des prot&#xE9;ines agr&#xE9;g&#xE9;es, n&#x26;#39;est pas li&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;accumulation de prot&#xE9;ines dans le ERQC.

PERK-d&#xE9;pendante de la compartimentation ERAD et d&#xE9;pli&#xE9; Machineries Protein Response Pendant le stress du RE

Anh&auml;ufung von misfolded Proteine in dem Endoplasmatischen Retikulum (ER) aktiviert die ER-Membran-Kinasen PERK und IRE1 f&uuml;hrt zu die entfaltet Protein-Reaktion (UPR). Wir zeigen hier, dass die UPR-Aktivierung l&ouml;st PERK und IRE1 Segregation von BiP und ihre Sortierung mit misfolded Proteine zum Qualit&auml;tskontrolle ER abgeleiteten Fach (ERQC), ein Pericentriolar-Fach, die wir zuvor identifiziert hatte. PERK phosphorylates &Uuml;bersetzung Faktor eIF2alpha, die dann Zytosolische auf der die ERQC ansammelt. Dominante negative PERK oder eIF2alpha(S51A) Mutanten verhindern die Untergliederung, w&auml;hrend eIF2alpha(S51D) Mutant, die konstitutiven Phosphorylierung imitiert, sie f&ouml;rdert. Dies deutet auf eine Feedback-Schleife, in denen eIF2alpha Phosphorylierung Pericentriolar Konzentration auf die ERQC bewirkt wiederum die UPR wiederum verst&auml;rken. ER-assoziierte Abbau (ERAD) ist ein UPR-abh&auml;ngigen Prozess; Wir finden auch, dass ERAD-Komponenten (Sec61beta, HRD1, p97/VCP, Ubiquitin) zu den ERQC rekrutiert werden macht es einen wahrscheinlich Standort f&uuml;r Retrotranslocation. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass Autophagy ist vorgeschlagen, um die Beseitigung der aggregierte Proteine eine Rolle spielen, nicht im Zusammenhang mit Protein Akkumulation in der ERQC.

PERK-abh&auml;ngige Untergliederung der ERAD und entfaltet Protein Reaktion Maschinen bei ER Stress.

Accumulo di proteine malpiegate nel reticolo endoplasmatico (ER) attiva la chinasi di membrana ER PERK e IRE1 che conduce alla risposta spiegata della proteina (UPR). Mostriamo qui che la attivazione di UPR attiva segregazione PERK e IRE1 da BiP e loro ordinamento con proteine malpiegate per il controllo qualit&agrave; derivato ER vano (ERQC), un vano pericentriolar che avevamo individuato in precedenza. PERK tirosine traduzione fattore eIF2alpha, che quindi si accumula sul lato citosolico della ERQC. Dominante negativi mutanti PERK o eIF2alpha(S51A) evitare la compartimentazione, considerando che eIF2alpha(S51D) mutante, che imita la fosforilazione costitutiva, lo promuove. Questo suggerisce un ciclo di feedback dove eIF2alpha fosforilazione provoca la concentrazione di pericentriolar presso il ERQC, che a sua volta amplifica la UPR. Degradazione ER-associati (ERAD) &egrave; un processo di UPR-dipendente; troviamo anche che componenti ERAD (Sec61beta, HRD1, p97/VCP, ubiquitina) vengono reclutati per l&#39;ERQC, rendendolo un probabile sito per retrotranslocation. Inoltre, mostriamo che autophagy, ha suggerito di svolgere un ruolo nell&#39;eliminazione di proteine aggregate, &egrave; correlata all&#39;accumulo di proteine nella ERQC.

Compartimentazione PERK-dipendente di ERAD e macchinari risposta spiegata della proteina durante lo stress ER.

&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30DF;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x304C;&#x5C55;&#x958B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5FDC;&#x7B54;&#xFF08;UPR&#xFF09;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;PERK&#x3068;IRE1&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x819C;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;UPR&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;BIP&#x3068;&#x30DF;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x9078;&#x5225;&#x304B;&#x3089;ER&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x7BA1;&#x7406;&#x5BA4;&#xFF08;ERQC&#xFF09;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;pericentriolar&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;PERK&#x3068;IRE1&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;ERQC&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5074;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;PERK&#x7FFB;&#x8A33;&#x56E0;&#x5B50;eIF2alpha&#x3001;&#x3002;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;eIF2alpha&#xFF08;S51D&#xFF09;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;PERK&#x307E;&#x305F;&#x306F;eIF2alpha&#xFF08;S51A&#xFF09;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x533A;&#x753B;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;eIF2alpha&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x9806;&#x756A;&#x306B;UPR&#x3092;&#x5897;&#x5E45;ERQC&#x3001;&#x3067;pericentriolar&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x95A2;&#x9023;&#x5206;&#x89E3;&#xFF08;ERAD&#xFF09;&#x306F;&#x3001;UPR&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;ERAD&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;Sec61beta&#x3001;HRD1&#x3001;p97/VCP&#xFF09;&#x3001;&#x305D;&#x308C;retrotranslocation&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x4F5C;&#x308A;&#x3001;ERQC&#x306B;&#x52D5;&#x54E1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x51DD;&#x96C6;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;ERQC&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

PERK&#x4F9D;&#x5B58;ERAD&#x306E;&#x533A;&#x753B;&#x3068;&#x306F;&#x3001;ER&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x4E2D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x7528;&#x6A5F;&#x68B0;&#x5C55;&#x958B;&#x50CF;

Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;) misfolded &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD95;&#xC801; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD2B9;&#xAD8C; &#xBC0F; IRE1 ER &#xB9C9; kinases &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC18;&#xC751; (&#xB0B4;). &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC5EC;&#xAE30; &#xB0B4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; BiP &#xBC0F; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD00;&#xB9AC; &#xC2E4; (ERQC), &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB358; pericentriolar &#xAD6C;&#xD68D;&#xC744; misfolded &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xC815;&#xB82C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD2B9;&#xAD8C; &#xBC0F; IRE1 &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xACFC;&#xAE30;&#xB294; ERQC cytosolic&#xC5D0; &#xCD95;&#xC801; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC74C; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC694;&#xC18C; eIF2alpha phosphorylates. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD2B9;&#xAD8C; &#xB610;&#xB294; eIF2alpha(S51A) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC81C;&#xC815; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xBAA8;&#xBC29;&#xD55C; eIF2alpha(S51D) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xADF8;&#xAC83;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;, &#xBCF4;&#xD5D8;&#xD68C;&#xC0AC;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. EIF2alpha &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; &#xB0B4; ERQC&#xC5D0;&#xC11C; pericentriolar &#xB18D;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC704;&#xCE58; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xAD00;&#xB828; &#xC800;&#xD558; (ERAD)&#xC740; &#xB0B4; &#xC885;&#xC18D; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; ERAD &#xBD80;&#xD488; (Sec61beta, HRD1, p97/VCP, &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;) &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; ERQC&#xC744; retrotranslocation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xAE30; &#xCC3E;&#xC744;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xADF8; autophagy &#xC9D1;&#xACC4; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;&#xB294; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB294; ERQC&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCD95;&#xC801;.

ER &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xB3D9;&#xC548; ERAD&#xC640; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC751;&#xB2F5; &#xAE30;&#xACC4; &#xD2B9;&#xAD8C; &#xC885;&#xC18D; &#xBCF4;&#xD5D8;&#xD68C;&#xC0AC;.

La acumulaci&#xF3;n de prote&#xED;nas mal plegadas en el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE) activa las quinasas de membrana ER Perk y IRE1 que conducen a la respuesta de la prote&#xED;na desplegada (UPR). Hemos demostrado que la activaci&#xF3;n de la UPR provoca la segregaci&#xF3;n Perk y IRE1 del BIP y su clasificaci&#xF3;n con las prote&#xED;nas mal plegadas en el compartimiento de la calidad de ER-derivada de control (ERQC), un compartimiento pericentriolar que hab&#xED;amos identificado previamente. PERK fosforila traducci&#xF3;n factor de eIF2alfa, que luego se acumula en la cara citos&#xF3;lica de la ERQC. Dominante negativo PERK o eIF2alfa (S51A) mutantes evitar la compartimentaci&#xF3;n, mientras que eIF2alfa (S51D) mutante, que imita a la fosforilaci&#xF3;n constitutiva, la promueve. Esto sugiere un bucle de retroalimentaci&#xF3;n donde la fosforilaci&#xF3;n eIF2alfa causa la concentraci&#xF3;n en el pericentriolar ERQC, que a su vez amplifica la UPR. ER asociada a la degradaci&#xF3;n (ERAD) es un proceso de la UPR-dependiente, tambi&#xE9;n encontramos que los componentes ERAD (Sec61beta, HRD1, p97/VCP, ubiquitina) son reclutados a la ERQC, por lo que es un sitio probable para retrotranslocaci&#xF3;n. Adem&#xE1;s, se demuestra que la autofagia, propuesto para desempe&#xF1;ar un papel en la eliminaci&#xF3;n de agregados de prote&#xED;nas, no est&#xE1; relacionada con la acumulaci&#xF3;n de prote&#xED;nas en el ERQC.

PERK dependiente de la compartimentaci&#xF3;n de los ERAD y desdobl&#xF3; Maquinarias respuesta a prote&#xED;nas durante el estr&#xE9;s ER

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER)-&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x9000;&#x5316; (&#x8BFB;&#x4E66;) &#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x6D89;&#x53CA;&#x4E09;&#x5230;&#x56DB;&#x4E2A;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x4ECE; Man(9)GlcNAc(2) N-&#x8FDE;&#x4F4E;&#x805A;&#x7CD6;&#x7684;&#x4FEE;&#x6574;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#x9879;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x5019;&#x9009; ER &#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x82F7;&#x9176;&#x6211; &#xFF08;ERManI&#xFF09;&#xFF0C;&#x52A0;&#x901F;&#x4E86;&#x8BFB;&#x4E66;&#x57FA;&#x8D28;&#x6297;&#x539F;&#x65F6;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5728;&#x8BD5;&#x7BA1;&#x91CC;&#xFF0C;&#x5728;&#x4F4E;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;ERManI &#x4E2D;&#x5220;&#x9664;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x6E23;&#xFF0C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5F88;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x5B83;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6D88;&#x8D39;&#x7A0E;&#x6700;&#x591A;&#x56DB;&#x4E2A; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#xFF0C;2 &#x94FE;&#x63A5;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684; ERManI &#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x6572;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x662F; Man(5-6)GlcNAc(2) &#x4FEE;&#x6574;&#x548C;&#x8BFB;&#x4E66;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684; Man(9)GlcNAc(2) &#x548C; Glc(1)Man(9)GlcNAc(2) &#x6A21;&#x578B;&#x886C;&#x5E95;&#x4E0A;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x4F4E;&#x805A;&#x7CD6;&#x7531; ERManI &#x4FEE;&#x6574;&#x4F1A;&#x5C06;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECE; reglucosylation &#x548C; calnexin &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5468;&#x671F;&#x3002;ERManI &#x662F;&#x60CA;&#x4EBA;&#x5730;&#x96C6;&#x4E2D;&#x4E00;&#x8D77;&#x8BFB;&#x4E66;&#x57FA;&#x4F53;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E86;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684; pericentriolar ER &#x6D3E;&#x751F;&#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x5BA4; (ERQC)&#x3002;ERManI &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x53EF;&#x9632;&#x6B62; ERQC &#x57FA;&#x677F;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; ERQC &#x63D0;&#x4F9B;&#x672C;&#x5730;&#x9AD8;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684; ERManI&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x8F66;&#x53A2;&#x91CC;&#x7684;&#x4F1A;&#x8BA9;&#x8BFB;&#x4E66;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x79CD;&#x5FAA;&#x73AF;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x65F6;&#x673A;&#x3002;&#x5F53;&#x65B0;&#x8BA2;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0D;&#x80FD;&#x6B63;&#x786E;&#x6298;&#x53E0;&#x65F6;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; ERQC &#x8FD0;&#x8F93;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4FEE;&#x6574;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&#x89E6;&#x53D1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;

&#x6211;&#x662F;&#x5272;&#x88C2;&#x548C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7CD6; ER &#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x5728; Man5 6GlcNAc2 N-&#x8FDE;&#x63A5;&#x7CD6;&#x4FEE;&#x6574;&#xFF0C;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; &#xFF08;ER&#xFF09; &#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x82F7;&#x9176;&#x3002;

We had previously shown that endoplasmic reticulum (ER)-associated degradation (ERAD) of glycoproteins in mammalian cells involves trimming of three to four mannose residues from the N-linked oligosaccharide Man(9)GlcNAc(2). A possible candidate for this activity, ER mannosidase I (ERManI), accelerates the degradation of ERAD substrates when overexpressed. Although in vitro, at low concentrations, ERManI removes only one specific mannose residue, at very high concentrations it can excise up to four alpha1,2-linked mannose residues. Using small interfering RNA knockdown of ERManI, we show that this enzyme is required for trimming to Man(5-6)GlcNAc(2) and for ERAD in cells in vivo, leading to the accumulation of Man(9)GlcNAc(2) and Glc(1)Man(9)GlcNAc(2) on a model substrate. Thus, trimming by ERManI to the smaller oligosaccharides would remove the glycoprotein from reglucosylation and calnexin binding cycles. ERManI is strikingly concentrated together with the ERAD substrate in the pericentriolar ER-derived quality control compartment (ERQC) that we had described previously. ERManI knockdown prevents substrate accumulation in the ERQC. We suggest that the ERQC provides a high local concentration of ERManI, and passage through this compartment would allow timing of ERAD, possibly through a cycling mechanism. When newly made glycoproteins cannot fold properly, transport through the ERQC leads to trimming of a critical number of mannose residues, triggering a signal for degradation.

Endoplasmic reticulum (ER) mannosidase I is compartmentalized and required for N-glycan trimming to Man5-6GlcNAc2 in glycoprotein ER-associated degradation.

Nous avions pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; que le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE)-associ&#xE9; de la d&#xE9;gradation (ERAD) des glycoprot&#xE9;ines dans les cellules de mammif&#xE8;res implique coupe de trois &#xE0; quatre r&#xE9;sidus mannose de l&#x26;#39;Homme oligosaccharides N-li&#xE9;s (9) GlcNAc (2). Un candidat possible pour cette activit&#xE9;, mannosidase ER I (ERManI), acc&#xE9;l&#xE8;re la d&#xE9;gradation des substrats ERAD, lorsqu&#x26;#39;il est surexprim&#xE9;. Bien que in vitro, &#xE0; des concentrations faibles, ERManI supprime uniquement un r&#xE9;sidu sp&#xE9;cifique du mannose, &#xE0; des concentrations tr&#xE8;s &#xE9;lev&#xE9;e, il peut d&#x26;#39;accise jusqu&#x26;#39;&#xE0; quatre alpha1 ,2-linked r&#xE9;sidus mannose. Aide d&#x26;#39;un petit ARN interf&#xE9;rent knockdown de ERManI, nous montrons que cette enzyme est n&#xE9;cessaire pour la coupe de l&#x26;#39;homme (5-6) GlcNAc (2) et pour ERAD dans les cellules in vivo, conduit &#xE0; l&#x26;#39;accumulation de l&#x26;#39;Homme (9) GlcNAc (2) et Glc (1) Man (9) GlcNAc (2) sur un substrat mod&#xE8;le. Ainsi, le parage par ERManI aux oligosaccharides plus petits supprimerait la glycoprot&#xE9;ine de reglucosylation et calnexine cycles contraignants. ERManI est frappante concentr&#xE9; avec le substrat ERAD dans le p&#xE9;ricentriolaire ER-d&#xE9;riv&#xE9;e compartiment contr&#xF4;le de la qualit&#xE9; (ERQC) que nous avions d&#xE9;crit pr&#xE9;c&#xE9;demment. Knockdown ERManI emp&#xEA;che l&#x26;#39;accumulation de substrat dans le ERQC. Nous sugg&#xE9;rons que la ERQC fournit une forte concentration locale de ERManI, et le passage &#xE0; travers ce compartiment permettrait moment de ERAD, &#xE9;ventuellement par le biais d&#x26;#39;un m&#xE9;canisme &#xE0; v&#xE9;lo. Lorsque glycoprot&#xE9;ines nouvellement faits ne peuvent pas se replier correctement, le transport &#xE0; travers le ERQC conduit &#xE0; couper d&#x26;#39;un nombre critique de r&#xE9;sidus mannose, le d&#xE9;clenchement d&#x26;#39;un signal de d&#xE9;gradation.

R&#xE9;ticulum endoplasmique (RE) mannosidase I est compartiment&#xE9; et requis pour la N-glycane de d&#xE9;coupe pour Man5-6GlcNAc2 dans la glycoprot&#xE9;ine associ&#xE9;e &#xE0; la d&#xE9;gradation des ER

Wir hatten zuvor gezeigt, dass Endoplasmatisches Reticulum (ER)-assoziierten Degradation (ERAD) der Glykoproteine in den S&auml;ugetier-Zellen beinhaltet Trimmen von drei bis vier Mannose R&uuml;ckst&auml;nde aus der N-chromosomale Oligosaccharid Man(9)GlcNAc(2). Als m&ouml;glicher Kandidat f&uuml;r diese T&auml;tigkeit ER Mannosidase ich (ERManI), beschleunigt den Abbau von ERAD Substraten beim Pleuramesotheliom. Obwohl in vitro, in niedrigen Konzentrationen ERManI wird nur eine bestimmte Mannose-R&uuml;ckst&auml;nde entfernt, in sehr hohen Konzentrationen kann es bis zu vier alpha1, 2-linked Mannose R&uuml;ckst&auml;nde Verbrauchsteuern. Anhand kleiner interferierender RNA Niederschlag von ERManI zeigen wir, dass dieses Enzym f&uuml;r trimmen, Man(5-6)GlcNAc(2) und ERAD in Zellen in vivo f&uuml;hrt zu die Ansammlung von Man(9)GlcNAc(2) und Glc(1)Man(9)GlcNAc(2) auf ein Modell-Substrat erforderlich ist. Trimmen von ERManI auf die kleinere Oligosaccharide w&uuml;rde somit das Glykoprotein aus Reglucosylation und Calnexin Bindung Zyklen entfernen. ERManI ist auffallend konzentriert zusammen mit dem ERAD-Substrat im Pericentriolar ER abgeleiteten Qualit&auml;tskontrolle Fach (ERQC), das wir zuvor beschrieben hatte. ERManI Niederschlag verhindert Anh&auml;ufung von Substrat in den ERQC. Wir schlagen vor, da&szlig; die ERQC eine hohe lokale Konzentration von ERManI bietet und Passage durch dieses Fach Timing der ERAD, m&ouml;glicherweise durch eine Radsport-Mechanismus erlauben w&uuml;rde. Beim frischgebackenen Glykoproteine richtig falten k&ouml;nnen nicht, f&uuml;hrt Transport durch die ERQC zu trimmen einer kritische Anzahl von Mannose-R&uuml;ckst&auml;nde, ein Signal f&uuml;r die Verschlechterung ausl&ouml;sen.

Endoplasmatisches Reticulum (ER)-Mannosidase ich aufgeteilt und f&uuml;r N-Glykan Trimmen zu Man5-6GlcNAc2 in Glykoprotein ER-assoziierte Abbau erforderlich ist.

Noi avevamo precedentemente dimostrato che reticolo endoplasmatico (ER)-degradazione associato (ERAD) di glicoproteine in cellule di mammifero coinvolge rifilatura di tre o quattro residui di mannosio l&#39;oligosaccaride legato N Man(9)GlcNAc(2). Un possibile candidato per questa attivit&agrave;, ER mannosidase I (ERManI), accelera la degradazione dei substrati ERAD quando overexpressed. Sebbene in vitro, a concentrazioni basse, ERManI Rimuove residui di mannosio specifico solo uno, a concentrazioni molto elevate pu&ograve; recidere fino a quattro alpha1, residui di mannosio collegato 2. Utilizzando piccolo atterramento di RNA interferente di ERManI, ci mostrano che questo enzima &egrave; necessario per il taglio a Man(5-6)GlcNAc(2) e per ERAD nelle cellule in vivo, portando all&#39;accumulo di Man(9)GlcNAc(2) e Glc(1)Man(9)GlcNAc(2) su un substrato di modello. Cos&igrave;, rifilatura di ERManI per i pi&ugrave; piccoli oligosaccaridi sarebbe togliere la glicoproteina da reglucosylation e calnexin associazione cicli. ERManI &egrave; straordinariamente concentrato insieme con il substrato ERAD nel vano pericentriolar ER-derivato di controllo di qualit&agrave; (ERQC) che noi avevamo descritto in precedenza. ERManI atterramento impedisce l&#39;accumulo del substrato nella ERQC. Suggeriamo che il ERQC fornisce un&#39;alta concentrazione locale di ERManI e passaggio attraverso questo vano permetterebbe tempi di ERAD, possibilmente attraverso un meccanismo di ciclismo. Quando glicoproteine appena fatte non possono piegare correttamente, trasporto attraverso il ERQC porta alla rimozione di un numero critico di residui di mannosio, innescando un segnale per la degradazione.

Reticolo endoplasmatico (ER) mannosidase I &egrave; compartimentato e necessaria per N-glycan rifilatura a Man5-6GlcNAc2 nella degradazione ER-associated glycoprotein.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x95A2;&#x9023;&#x5206;&#x89E3;&#xFF08;ERAD&#xFF09;&#x306F;N-&#x7D50;&#x5408;&#x578B;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x7CD6;&#x30DE;&#x30F3;&#xFF08;9&#xFF09;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B5;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;2&#xFF09;&#x4E09;&#x304B;&#x3089;&#x56DB;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x3001;ER&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;I&#xFF08;ERManI&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x904E;&#x5270;ERAD&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; in vitro&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x4F4E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;ERManI&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x5927;4&#x3064;&#x306E;&#x3B1;1,2-&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x7269;&#x54C1;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;1&#x3064;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; ERManI&#x306E;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;GlcNAc&#xFF08;2&#xFF09;&#x7537;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#xFF08;9&#xFF09;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x30DE;&#x30F3;&#xFF08;5-6&#xFF09;GlcNAc&#x306E;&#xFF08;2&#xFF09;&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;ERAD&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#xFF08;1&#xFF09;&#x306E;man&#xFF08;9&#xFF09;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;GlcNAc&#xFF08;2&#xFF09;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x7CD6;&#x306B;ERManI&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30EA;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;reglucosylation&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; ERManI&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;pericentriolar ER&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x7BA1;&#x7406;&#x5BA4;&#xFF08;ERQC&#xFF09;&#x306E;ERAD&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; ERManI&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;ERQC&#x3067;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;ERQC&#x304C;ERManI&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5C40;&#x6240;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x533A;&#x753B;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x306F;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;ERAD&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x4F5C;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x6B63;&#x3057;&#x304F;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x304D;&#x306F;&#x3001;ERQC&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8F38;&#x9001;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3001;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6570;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;I&#x306F;&#x3001;N&#x578B;&#x7CD6;&#x9396;&#x306F;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x95A2;&#x9023;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;Man5-6GlcNAc2&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x533A;&#x753B;&#x3057;&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xADF8; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;-&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; glycoproteins&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0;&#xB41C; &#xC800;&#xD558; (ERAD) N &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2F9; man(9)glcnac(2)&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; 3 ~ 4 &#xC2A4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBC0D;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD6C4;&#xBCF4; ER mannosidase (ERManI) &#xB098; &#xAC00;&#xC18D; overexpressed &#xB54C; ERAD &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC800;&#xD558;. &#xBE44;&#xB85D; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xB0AE;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC2A4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; ERManI, &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xB300; 4 &#xAC1C;&#xC758; alpha1, &#xC2A4; 2 &#xC5F0;&#xACB0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC18C;&#xBE44; &#xC138; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ermani&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xCD5C;&#xC800;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBAA8;&#xB378; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; man(9)glcnac(2)&#xC640; glc(1)man(9)glcnac(2)&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xC140; vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; ERAD &#xBC0F; Man(5-6)GlcNAc(2) &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBC0D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Ermani&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC791;&#xC740; oligosaccharides &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBC0D;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; reglucosylation &#xBC0F; calnexin &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC5D0;&#xC11C;. Ermani&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4; pericentriolar ER &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD00;&#xB9AC; &#xC2E4; (ERQC)&#xC5D0;&#xC11C; ERAD &#xAE30;&#xD310; &#xD568;&#xAED8; &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C; &#xC9D1;&#xC911;. ERManI &#xCD5C;&#xC800;&#xB294; ERQC&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xD310; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ERQC ERManI, &#xB192;&#xC740; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC9D1;&#xC911; &#xD558;&#xBA70;&#xC774; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD1B5;&#xACFC; &#xC790;&#xC804;&#xAC70; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; ERAD&#xC758; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C8;&#xB85C; &#xB9CC;&#xB4E0;&#xB41C; glycoproteins &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC811;&#xC744; &#xC218;&#xB294; ERQC &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC1A1; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBC0D; &#xC2A4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;, &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB9C1; &#xC2E0;&#xD638; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC218;&#xC758; &#xB9AC;&#xB4DC;.

Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;) mannosidase &#xC5B4; &#xB4E4; &#xC5D0;&#xAC8C;&#xB9CC; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xAD00;&#xB828; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; Man5 6glcnac2&#xB97C; N glycan &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBC0D;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;.

Se hab&#xED;a demostrado previamente que el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE)-asociada degradaci&#xF3;n (ERAD) de glicoprote&#xED;nas en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero implica el recorte de tres a cuatro residuos de manosa del hombre oligosac&#xE1;rido unida a N (9) GlcNAc (2). Un posible candidato para esta actividad, ER manosidasa I (ERManI), acelera la degradaci&#xF3;n de sustratos ERAD cuando se sobreexpresa. Aunque in vitro, a bajas concentraciones, ERManI elimina s&#xF3;lo un residuo espec&#xED;fico manosa, a concentraciones muy altas puede especiales hasta cuatro alfa1 ,2-enlazadas residuos de manosa. Usando peque&#xF1;o interferir desmontables ARN de ERManI, nos muestran que esta enzima es necesaria para recortar al hombre (5-6) GlcNAc (2) y para ERAD en c&#xE9;lulas in vivo, que conduce a la acumulaci&#xF3;n de Man (9) GlcNAc (2) y Glc (1) hombre (9) GlcNAc (2) sobre un sustrato modelo. Por lo tanto, el recorte por ERManI a los oligosac&#xE1;ridos m&#xE1;s peque&#xF1;os que eliminar&#xED;a la glicoprote&#xED;na de la reglucosylation calnexin y ciclos obligatorios. ERManI est&#xE1; sorprendentemente concentrado junto con el sustrato en el ERAD pericentriolar ER derivado compartimiento de control de calidad (ERQC) que se hab&#xED;a descrito previamente. Ca&#xED;da ERManI evita la acumulaci&#xF3;n de sustrato en el ERQC. Sugerimos que la ERQC proporciona una alta concentraci&#xF3;n local de ERManI, y el paso a trav&#xE9;s de este compartimento permitir&#xED;a momento de ERAD, posiblemente a trav&#xE9;s de un mecanismo de ciclismo. Cuando glicoprote&#xED;nas reci&#xE9;n hechos no se puede doblar, transportar a trav&#xE9;s de la ERQC conduce a la poda de un n&#xFA;mero importante de residuos de manosa, lo que provoc&#xF3; una se&#xF1;al para la degradaci&#xF3;n.

Ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE) Manosidasa que est&#xE1; compartimentado y requeridos para la N-glicanos Recorte de Man5-6GlcNAc2 en la glicoprote&#xED;na asociada a la degradaci&#xF3;n de ER-

Edward Avezov

Department of Cell Research and Immunology,
George Wise Faculty of Life Sciences,
Department of Cell Research and Immunology, George Wise Faculty of Life Sciences

Tel Aviv University

Pulse-chase Analysis of N-linked Sugar Chains from Glycoproteins in Mammalian Cells

Edward Avezov

Department of Cell Research and Immunology,George Wise Faculty of Life Sciences,Department of Cell Research and Immunology, George Wise Faculty of Life Sciences

Tel Aviv University

Pulse-chase Analysis of N-linked Sugar Chains from Glycoproteins in Mammalian Cells

Department of Cell Research and Immunology,
George Wise Faculty of Life Sciences,
Department of Cell Research and Immunology, George Wise Faculty of Life Sciences