in-vivo-and-in-vitro-studies-of-adaptor-clathrin-interaction

<em>In vivo</em> and <em>in vitro</em> Studies of Adaptor-clathrin Interaction

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Colorado State University

&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 1 &#x548C;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 2 &#x4EE3;&#x8868;&#x4ECE;&#x7EFF;&#x85FB;&#x6D52;&#x82D4;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x662F; 20-22 kDa &#x5355;&#x94FE; nonglycosylated &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5360;&#x5176;&#x4E3B;&#x8981;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; 70%&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 1 &#x548C;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 2 &#x662F;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x6C89;&#x79EF;&#x6269;&#x6563;&#x5E73;&#x8861;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 1 &#x548C;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 2 &#x6709; 60000 + /-6000 Da &#xFF08;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 1&#xFF09; &#x548C; 59500 + /-3000 Da &#xFF08;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 2)&#xFF0C;&#x5E73;&#x5747;&#x660E;&#x663E;&#x5206;&#x5B50;&#x7FA4;&#x4F17;&#x8868;&#x660E;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 1 &#x548C;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 2 &#x6709; self-associate &#x5230;&#x9AD8;&#x987A;&#x5E8F;&#x805A;&#x5408;&#x3001; &#x53EF;&#x80FD;&#x662F; homodimers &#x548C; homotetramers&#xFF0C;&#x5728;&#x5E73;&#x8861;&#x7684;&#x8D8B;&#x52BF;&#x3002;&#x78B3;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x7ED3;&#x5408;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 2 &#x662F;&#x9176;&#x8054;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x542B;&#x91CF;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x548C;&#x56FA;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 2 &#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x70B9;&#x662F;&#x53EF;&#x5BB9;&#x7EB3; D-&#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x548C; L-&#x5CA9;&#x85FB;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5171;&#x4EAB;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x7F9F;&#x57FA;&#x4F4D;&#x7F6E; &#xFF08;&#x8F74;&#x5411;&#xFF09; 2 &#x548C; 4 &#xFF08;&#x8D64;&#x9053;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5305;&#x62EC;&#x5728; O1 &#x53D6;&#x4EE3;&#x548C;&#x5206;&#x652F;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x5B50;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;

&#x7EFF;&#x85FB;&#x6D52;&#x82D4;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7518;&#x9732;&#x805A;&#x7CD6;-&#x548C; L-&#x5CA9;&#x85FB;&#x7CD6;&#x7ED3;&#x5408;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#xFF1A; &#x751F;&#x5316;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x82F1;&#x8D85;&#x8054;&#x8D5B;&#x7B2C; 2&#x3002;

EPL-1 and EPL-2 represent lectins isolated from the green alga Enteromorpha prolifera. Both lectins are 20- to 22-kDa single-chain, nonglycosylated proteins. N-terminal sequence analysis of peptides representing over 70% of their primary structures shows that EPL-1 and EPL-2 represent novel proteins. Sedimentation-diffusion equilibrium experiments showed that EPL-1 and EPL-2 had average apparent molecular masses of 60000+/-6000 Da (EPL-1) and 59500+/-3000 Da (EPL-2), indicating that EPL-1 and EPL-2 have a tendency to self-associate into higher order aggregates, possibly homodimers and homotetramers, in equilibrium. The carbohydrate-binding specificity of EPL-2 was studied by enzyme-linked lectin assay and intrinsic fluorescence measurements. The results show that the combining site of EPL-2 is capable of accommodating both D-mannose and L-fucose, which share the conformation of the hydroxyl groups at positions 2 (axial) and 4 (equatorial), and includes subsites for the substituents at O1 and for branched mannose residues.

Isolation of two novel mannan- and L-fucose-binding lectins from the green alga Enteromorpha prolifera: biochemical characterization of EPL-2.

EPL-1 et EPL-2 repr&eacute;sentent les lectines isol&eacute;es de l&#39;algue verte Enteromorpha prolifera. Les lectines sont des prot&eacute;ines de glycosyl&eacute;es de cha&icirc;ne unique, 20 &ndash; 22 kDa. Analyse de la s&eacute;quence N-terminale des peptides qui repr&eacute;sentent plus de 70 % de leurs structures primaires montre que EPL-1 et EPL-2 repr&eacute;sentent de nouvelles prot&eacute;ines. Exp&eacute;riences d&#39;&eacute;quilibre de s&eacute;dimentation-diffusion ont montrent que EPL-1 et EPL-2 masses mol&eacute;culaires moyennes de 60000 +/-6000 Da (EPL-1) et 59500 +/-3000 Da (EPL-2), indiquant que l&#39;EPL-1 et EPL-2 ont une tendance &agrave; l&#39;auto-association en plus ordre agr&eacute;gats, &eacute;ventuellement des homodim&egrave;res et des HOMOTETRAMERES, en &eacute;quilibre. La sp&eacute;cificit&eacute; de liaison aux glucides de l&#39;EPL-2 a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e par dosage immunoenzymatique lectine et les mesures de fluorescence intrins&egrave;que. Les r&eacute;sultats montrent que le site de combinaison d&#39;EPL-2 est compatible avec le D-mannose et le L-fucose, qui se partagent la conformation des groupes hydroxyles aux positions 2 (axiale) et 4 (&eacute;quatoriale) et comprend des sous-sites pour les substituants &agrave; O1 et pour les r&eacute;sidus de mannose ramifi&eacute;s.

Isolement des lectines de deux nouveaux mannan - et L-fucose-liaison de l&#39;algue verte Enteromorpha prolifera : caract&eacute;risation biochimique de l&#39;EPL-2.

Isolierung von zwei neuartigen Mannan-und L-Fucose-bindenden Lektine aus der Gr&#xFC;nalge Enteromorpha prolifera: biochemische Charakterisierung von EPL-2.

EPL-1 ed EPL-2 rappresentano le lectine isolate dall&#39;alga verde Enteromorpha prolifera. Entrambe le lectine sono proteine di 20-22 kDa catena singola, nonglycosylated. Analisi di sequenza N-terminale dei peptidi che rappresentano oltre il 70% delle loro strutture primarie dimostra che EPL-1 ed EPL-2 rappresentano le proteine romanzo. Esperimenti di equilibrio di sedimentazione-diffusione ha mostrato che EPL-1 ed EPL-2 aveva medie apparente masse molecolari di 60000 + Da 6000 (EPL-1) e 59500 + Da 3000 (EPL-2), che indica che la EPL-1 ed EPL-2 hanno la tendenza a self-associate nel pi&ugrave; alto ordine aggregati, possibilmente omodimeri e homotetramers, in equilibrio. La specificit&agrave; di carboidrati-associazione di EPL-2 &egrave; stata studiata da analisi enzima-collegato lectina e le misure di fluorescenza intrinseca. I risultati mostrano che il sito di combinazione di EPL-2 &egrave; in grado di accogliere il D-mannosio e L-fucosio, che condividono la conformazione dei gruppi ossidrile in posizione 2 (assiale) e 4 (equatoriale) e include siti secondari per i sostituenti a O1 e residui di mannosio ramificato.

Isolamento delle lectine due romanzo mannan-L-fucosio associazione e dall&#39;alga verde Enteromorpha prolifera: caratterizzazione biochimica di EPL-2.

EPL-1 &#x3068; EPL-2 &#x7DD1;&#x85FB;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A2;&#x30AA;&#x30CE;&#x30EA;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; 20-22 kDa &#x4E00;&#x672C;&#x9396; nonglycosylated &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x306E; 70 &#xFF05; &#x4EE5;&#x4E0A;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790; EPL-1 &#x3068; EPL-2 &#x65B0;&#x898F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x62E1;&#x6563;&#x6C88;&#x964D;&#x5E73;&#x8861;&#x5B9F;&#x9A13; EPL-1 &#x3068; EPL-2 60000 + 6000 Da (EPL-1)/&#x304A;&#x3088;&#x3073; 59500 3000 Da (EPL-2)&#x3001;+/-&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x306E;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x56FA;&#x307E;&#x308A; EPL-1 &#x3068; EPL-2 &#x9AD8;&#x3044;&#x6CE8;&#x6587;&#x96C6;&#x8A08;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x30DB;&#x30E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073; homotetramers&#x3001;&#x5E73;&#x8861;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x50BE;&#x5411;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;EPL-2 &#x306E;&#x7CD6;&#x7D50;&#x5408;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; EPL-2 &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;-&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068; L &#x30D5;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x4F4D;&#x7F6E; 2 (&#x8EF8;) &#x3067;&#x6C34;&#x9178;&#x57FA;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x914D;&#x5EA7;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3092;&#x53CE;&#x5BB9;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3068; 4 &#xFF08;&#x8D64;&#x9053;&#xFF09; O1 &#x3067;&#x7F6E;&#x63DB;&#x57FA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5C90;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

2 &#x65B0;&#x898F;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CA;&#x30F3;&#x3068; L-&#x30D5;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;-&#x7D50;&#x5408;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7DD1;&#x85FB;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A2;&#x30AA;&#x30CE;&#x30EA;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;: EPL-2 &#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

EPL 1&#xACFC; EPL 2 lectins&#xB97C; &#xB179;&#xC0C9; &#xC870;&#xB958; Enteromorpha prolifera&#xC5D0;&#xC11C; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; lectins&#xB294; 20-22 kDa &#xB2E8;&#xC77C; &#xCCB4;&#xC778; nonglycosylated &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; 70% &#xC774;&#xC0C1; &#xB300;&#xD45C; &#xD558;&#xB294; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; EPL 1&#xACFC; EPL 2 &#xB300;&#xD45C; &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE68;&#xC804; &#xD655;&#xC0B0; &#xD3C9;&#xD615; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xB294; EPL-1&#xACFC; EPL 2 6000 &#xB2E4; (EPL-1) + 60000 59500 + 3000 &#xB2E4; (EPL-2)&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; EPL 1&#xACFC; EPL 2 &#xB192;&#xC740; &#xC8FC;&#xBB38; &#xC9D1;&#xACC4;, &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; homodimers &#xBC0F; homotetramers &#xD3C9;&#xD615;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC73C;&#xB85C; self-associate &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. EPL 2 &#xD0C4;&#xC218;&#xD654;&#xBB3C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; lectin &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xAD11; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; EPL 2&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xBAA8;&#xB450; D-&#xC2A4;&#xC640; L fucose &#xC704;&#xCE58; 2 (&#xCD95;)&#xC5D0; &#xC218; &#xC0B0; &#xAE30; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xACF5;&#xC720; &#xD558;&#xB294; &#xC218; &#xBC0F; 4 (&#xC801;&#xB3C4;) &#xBD84;&#xAE30; &#xC2A4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBC0F; o 1&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE58;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD558;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0;.

&#xB450; &#xC18C;&#xC124; mannan-&#xBC0F; L-fucose &#xBC14;&#xC778;&#xB529; lectins &#xB179;&#xC0C9; &#xC870;&#xB958; Enteromorpha prolifera&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC;: EPL 2&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;.

EPL-1 y EPL-2 representan lectinas aisladas de la alga verde Enteromorpha prolifera. Ambos lectinas son prote&iacute;nas de nonglycosylated de cadena simple, de 20 a 22-kDa. An&aacute;lisis de la secuencia N-terminal de p&eacute;ptidos que representa m&aacute;s del 70% de sus estructuras primarias muestra que el EPL-1 y EPL-2 representan nuevas prote&iacute;nas. Sedimentaci&oacute;n-difusi&oacute;n equilibrio experimentos demostraron que EPL-1 y EPL-2 ten&iacute;an masa molecular aparente promedio de 60000 +/-6000 Da (EPL-1) y 59500 +/-3000 Da (EPL-2), indicando que el EPL-1 y EPL-2 tienen una tendencia a self-associate en el mayor orden agregados, posiblemente homod&iacute;meros y homotetramers, en equilibrio. La especificidad de uni&oacute;n a carbohidratos de EPL-2 fue estudiada por an&aacute;lisis enzima-ligado lectinas y mediciones de fluorescencia intr&iacute;nseca. Los resultados muestran que el sitio de la combinaci&oacute;n del EPL-2 es capaz de acomodar la d-manosa y L-fucosa, que comparten la conformaci&oacute;n de los grupos hidroxilos en las posiciones 2 (axial) y 4 (Ecuatorial) e incluye los subsitios de los sustituyentes en O1 y residuos de manosa ramificado.

Aislamiento de lectinas dos novela Manano - y L-fucosa-obligatorio de la alga verde Enteromorpha prolifera: caracterizaci&oacute;n bioqu&iacute;mica de EPL-2.

&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x9053;&#x671F;&#x95F4;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE; gastrulation &#x5206;&#x6CCC; Frizzled &#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D; (sFRP) Sizzled/&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x63A7;&#x5236; BMP &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x53CD;&#x5E94;&#x610F;&#x60F3;&#x4E0D;&#x5230;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x663E;&#x5FAE;&#x6CE8;&#x5C04;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;Sizzled &#x7684; Frizzled &#x57DF;&#x89C4;&#x7BA1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; Xolloid &#x76F8;&#x5173; (Xlr)&#xFF0C;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#xFF0C;&#x964D;&#x4F4E; Chordin&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x9014;&#x5F84;&#xFF1A; Szl-|Xlr-|&#x51A0;&#x5FC3;&#x75C5;-|--&gt; P Smad1--&gt; Szl BMP&#x3002;&#x5728;&#x751F;&#x5316;&#x5316;&#x9A8C;&#xFF0C;Xlr &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5177;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4EB2;&#x7F18;&#x5173;&#x7CFB;&#x4E3A;&#x5176;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x677F; Chordin &#x548C; Sizzled&#xFF0C;&#x7ADE;&#x4E89;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x662F;&#x6297;&#x9176;&#x6D88;&#x5316;&#x3002;&#x539F;&#x80A0;&#x80DA;&#x548C;&#x9176;&#x53CD;&#x5E94;&#x5E38;&#x6570;&#x7684; Sizzled &#x548C; Chordin &#x80DE;&#x5916;&#x6C34;&#x5E73;&#x90FD; 10(-8) M &#x8303;&#x56F4;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x5728;&#x8C03;&#x8282;&#x80CC;&#x8179;&#x4FA7;&#x9635;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x53D1;&#x51FA;&#x549D;&#x549D;&#x58F0;&#x4E5F;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x5929;&#x7136;&#x6291;&#x5236;&#x5242; BMP1&#xFF0C;Tolloid &#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x533B;&#x5B66;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9F20;&#x6807; sFRP2 &#x6291;&#x5236; Xlr&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x53D1;&#x6325;&#x66F4;&#x5927;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x80DA;&#x80CE;&#x80CC;&#x8179;&#x4FA7;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF1A; &#x70EB;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684; tolloid &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;

Here we report an unexpected role for the secreted Frizzled-related protein (sFRP) Sizzled/Ogon as an inhibitor of the extracellular proteolytic reaction that controls BMP signaling during Xenopus gastrulation. Microinjection experiments suggest that the Frizzled domain of Sizzled regulates the activity of Xolloid-related (Xlr), a metalloproteinase that degrades Chordin, through the following molecular pathway: Szl -| Xlr -| Chd -| BMP --> P-Smad1 --> Szl. In biochemical assays, the Xlr proteinase has similar affinities for its endogenous substrate Chordin and for its competitive inhibitor Sizzled, which is resistant to enzyme digestion. Extracellular levels of Sizzled and Chordin in the gastrula embryo and enzyme reaction constants were all in the 10(-8) M range, consistent with a physiological role in the regulation of dorsal-ventral patterning. Sizzled is also a natural inhibitor of BMP1, a Tolloid metalloproteinase of medical interest. Furthermore, mouse sFRP2 inhibited Xlr, suggesting a wider role for this molecular mechanism.

Embryonic dorsal-ventral signaling: secreted frizzled-related proteins as inhibitors of tolloid proteinases.

Nous rapportons ici un r&ocirc;le inattendu pour la prot&eacute;ine Frizzled s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e (sFRP) grill&eacute;/Ogon comme un inhibiteur de la r&eacute;action prot&eacute;olytique extracellulaire qui contr&ocirc;le BMP signaling au cours de la gastrulation Xenopus. Les exp&eacute;riences de microinjection sugg&egrave;rent que le domaine Frizzled de grill&eacute; r&eacute;gule l&#39;activit&eacute; des Xolloid li&eacute;s (Xlr), une m&eacute;talloprot&eacute;ase qui d&eacute;grade Chordin, par la voie mol&eacute;culaire suivante : Szl-| XLR-| CHD-| BMP--&gt; P-Smad1--&gt; Szl. Dans les &eacute;preuves biochimiques, la prot&eacute;inase Xlr a des affinit&eacute;s similaires pour son substrat endog&egrave;ne Chordin et pour son inhibiteur comp&eacute;titif grill&eacute;, qui r&eacute;siste &agrave; la digestion enzymatique. Taux extracellulaires de grill&eacute; et Chordin dans les constantes de r&eacute;action gastrula embryon et enzyme &eacute;tait tous dans la gamme de 10(-8) M, compatible avec un r&ocirc;le physiologique dans la r&eacute;gulation de la structuration de la dorsale-ventral. Gr&eacute;sillait est &eacute;galement un inhibiteur naturel de BMP1, une m&eacute;talloprot&eacute;ase de Tolloid d&#39;int&eacute;r&ecirc;t m&eacute;dical. En outre, la souris sFRP2 inhib&eacute;e Xlr, sugg&eacute;rant un r&ocirc;le plus large pour ce m&eacute;canisme mol&eacute;culaire.

Signalisation de dorsale-ventral embryonnaire : s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e cr&eacute;pus prot&eacute;ines comme inhibiteurs des prot&eacute;ases &agrave; tolloid.

Hier berichten wir eine unerwartete Rolle f&uuml;r das sezernierte gezischten-bezogene Protein (sFRP) Sizzled/Ogon als Inhibitor der extrazellul&auml;ren proteolytischen Reaktion, die steuert, BMP zu signalisieren, w&auml;hrend Xenopus Gastrulation. Mikroinjektion Experimente deuten darauf hin, dass die gezischten-Dom&auml;ne der Sizzled die Aktivit&auml;t der im Zusammenhang mit Xolloid (Xlr), regelt ein Metalloprotease, die Chordin, durch die folgende Molekulare Pathway degradiert: Szl-| XLR-| CHD-| BMP--&gt; P-Smad1--&gt; Szl. Bei biochemischen Assays, die Xlr-Proteinase hat &auml;hnliche Affinit&auml;ten f&uuml;r die endogene Substrat Chordin und f&uuml;r seine kompetitiver Inhibitor Sizzled, die resistent gegen Enzym Verdauung. Extrazellul&auml;re Konzentrationen von Sizzled und Chordin in die Konstanten Gastrula Embryo und Enzym Reaktion waren alle in der 10(-8) M-Bereich, eine physiologische Rolle bei der Regulierung der dorsal-Ventral Musterung entsprechen. Zischte ist auch ein nat&uuml;rlicher Inhibitor der BMP1, ein Tolloid-Metalloproteasen des medizinischen Interesses. Au&szlig;erdem hemmte Maus sFRP2 Xlr, eine gr&ouml;&szlig;ere Rolle f&uuml;r diese molekulare Mechanismen vorgeschlagen.

Embryonale dorsal-Ventral Signalisierung: frizzled-&auml;hnliche Proteine als Inhibitoren der Tolloid Proteinasen abgesondert.

Qui riportiamo un ruolo inatteso per la proteina secreta Frizzled-correlati (sFRP) GRILLETTATO/Ogon come inibitore della reazione proteolitico extracellulare che controlla la segnalazione BMP durante la gastrulazione Xenopus. Esperimenti di microiniezione suggeriscono che il dominio Frizzled di GRILLETTATO regola l&#39;attivit&agrave; di Xolloid-correlati (Xlr), un metalloproteinase che degrada Chordin, attraverso il pathway molecolare seguente: Szl-| XLR-| CHD-| BMP--&gt; P-Smad1--&gt; Szl. Nelle analisi biochimiche, la proteinasi Xlr ha un&#39;affinit&agrave; simile per il suo substrato endogeno Chordin e per il suo inibitore competitivo GRILLETTATO, che &egrave; resistente alla digestione enzimatica. Livelli extracellulari di GRILLETTATO e Chordin nelle costanti di reazione dell&#39;embrione e l&#39;enzima di gastrula erano tutti nella gamma 10(-8) M, coerenza con un ruolo fisiologico nella regolazione di patterning dorso-ventrale. Friggeva &egrave; anche un inibitore naturale di BMP1, un metalloproteinase Tolloid di interesse medico. Inoltre, sFRP2 del mouse inibito Xlr, suggerendo un ruolo pi&ugrave; ampio di questo meccanismo molecolare.

Embrionale dorsale-ventrale segnalazione: secreta frizzled-relative proteine come inibitori di tolloid proteinases.

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x539F;&#x8178;&#x9665;&#x5165;&#x6642;&#x306B;&#x5206;&#x6CCC;&#x63DA;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (sFRP) Sizzled/&#x9EC4;&#x91D1; BMP &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5236;&#x5FA1;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x4E88;&#x60F3;&#x5916;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5B9F;&#x9A13;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B; Sizzled &#x306E;&#x63DA;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x306E; Xolloid (Xlr) &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068; Chordin&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF1A; Szl-|Xlr-|Chd-|BMP P-Smad1 Szl--&gt;--&gt;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B; Xlr &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A3;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x305D;&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x6027;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3092;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304C; Chordin &#x3068;&#x7AF6;&#x4E89;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; Sizzled &#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D88;&#x5316;&#x529B;&#x306B;&#x8010;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x8178;&#x80DA;&#x306E;&#x80DA;&#x3068;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x5B9A;&#x6570;&#x3067; Sizzled &#x3068; Chordin &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 10(-8) M &#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306F;&#x3001;&#x80CC;&#x8179;&#x8EF8;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x9154;&#x3063;&#x3071;&#x3089;&#x3063;&#x305F;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F; BMP1&#x3001;Tolloid &#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x533B;&#x7642;&#x3078;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x81EA;&#x7136;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; sFRP2 &#x306F;&#x5E83;&#x3044;&#x5F79;&#x5272;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;Xlr &#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x80DA;&#x80CC;&#x8179;&#x8EF8;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF1A; tolloid &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B8;&#x30EA;&#x30B8;&#x30EA;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Xenopus gastrulation &#xC911; &#xBE44; Frizzled &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (sFRP) Sizzled/Ogon BMP &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xC0C1;&#xCE58; &#xBABB;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Microinjection &#xC2E4;&#xD5D8; Sizzled Frizzled &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; Xolloid &#xAD00;&#xB828; (Xlr)&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xC74C; &#xBD84;&#xC790; &#xACBD;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; Chordin, &#xC800;&#xD558; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; metalloproteinase: Szl-| Xlr-| Chd-| BMP Szl--&gt; P-Smad1--&gt;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;, Xlr &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xB294; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0DD; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Chordin&#xC758; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC801; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; Sizzled&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC18C;&#xD654;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Gastrula &#xBC30;&#xC544;&#xC640; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC18;&#xC751; &#xC0C1;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; Sizzled &#xBC0F; Chordin&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xBAA8;&#xB450; 10(-8) M &#xBC94;&#xC704;, &#xC9C0; &#xBCF5; &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xC77C;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4;. Sizzled &#xB610;&#xD55C; BMP1, Tolloid metalloproteinase &#xC758;&#xB8CC; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xC790;&#xC5F0; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xAC00; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; sFRP2 &#xC800;&#xD574; Xlr,&#xC774; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC30;&#xC544; &#xC9C0; &#xBCF5; &#xC2E0;&#xD638;: tolloid proteinases&#xC758; &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xB85C; &#xC11C; frizzled &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBD84; &#xBE44; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Presentamos un papel inesperado para la prote&iacute;na secretada freido relacionadas (sFRP) frito/Ogon como un inhibidor de la reacci&oacute;n proteol&iacute;tica extracelular que controla BMP se&ntilde;alizaci&oacute;n durante la gastrulaci&oacute;n de Xenopus. Microinyecci&oacute;n experimentos sugieren que el dominio de freido de frito regula la actividad de Xolloid-relacionadas (Xlr), una Metaloproteinasa que degrada Chordin, con el siguiente camino molecular: Szl-| XLR-| CHD-| BMP--&gt; P-Smad1--&gt; Szl. En ensayos bioqu&iacute;micos, la proteinasa Xlr tiene afinidades similares para su sustrato end&oacute;geno Chordin y su inhibidor competitivo frito, que es resistente a la digesti&oacute;n de la enzima. Niveles extracelulares de frito y Chordin en las constantes de reacci&oacute;n de embri&oacute;n y enzima de g&aacute;strula estaban todos en la gama de 10(-8) M, consistente con un papel fisiol&oacute;gico en la regulaci&oacute;n de dorsal-ventral patrones. Chisporrote&oacute; tambi&eacute;n es un inhibidor natural de BMP1, un Tolloid de metaloproteinasa de inter&eacute;s m&eacute;dico. Adem&aacute;s, el rat&oacute;n sFRP2 hab&iacute;a inhibido Xlr, sugiriendo un papel m&aacute;s amplio para este mecanismo molecular.

Embrionario dorsal-ventral se&ntilde;alizaci&oacute;n: secretan prote&iacute;nas relacionadas con crispado como inhibidores de Proteinasas de tolloid.

&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269; Crossveinless-2 (CV2) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6216;&#x5BF9;&#x6297; BMP &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x80DA;&#x80CE;&#x5B66;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF1A; &#xFF08;1&#xFF09; CV2 &#x51FD;&#x6570;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x80DA;&#x80CE; &#xFF1B; &#x8179;&#x4FA7;&#x5730;&#x533A; BMP4 &#x53CD;&#x9988;&#x6291;&#x5236;&#x5242;(2) CV2 &#x914D;&#x5408; Twisted gastrulation &#x548C; BMP4 &#xFF1B;(3) CV2 &#x4E0D;&#x662F;&#x57FA;&#x677F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; tolloid &#xFF1B;(4) CV2 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EAF; Chordin &#x86CB;&#x767D;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B; &#xFF08;K(D) 1 nM &#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#xFF09; &#xFF1B;(5) CV2 &#x751A;&#x81F3;&#x66F4;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Chordin &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x788E;&#x7247;&#x9020;&#x6210;&#x7684; Tolloid &#x6D88;&#x5316;&#x6216;&#x5168;&#x957F; Chordin/BMP &#x914D;&#x5408; &#xFF1B;(6) CV2 &#x67AF;&#x7AED;&#x5BFC;&#x81F4;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x80DA;&#x80CE;&#x6210;&#x4E3A;&#x8FC7;&#x654F;&#x53CD; BMP Chordin &#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x6216; tolloid &#x6291;&#x5236;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; CV2/Chordin &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x5E2E;&#x52A9;&#x534F;&#x8C03; BMP &#x6269;&#x6563;&#x5230;&#x8179;&#x4E00;&#x4FA7;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x786E;&#x4FDD; BMPs &#x4ECE; Chordin &#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684; tolloid &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x4E8B;&#x4E1A;&#x9AD8;&#x5CF0;&#x4E2D;&#x89E3;&#x653E;&#x51FA;&#x6765;&#x3002;

Crossveinless-2 &#x662F;&#x7ED1;&#x5B9A; Chordin/BMP&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684; BMP &#x53CD;&#x9988;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;

Vertebrate Crossveinless-2 (CV2) is a secreted protein that can potentiate or antagonize BMP signaling. Through embryological and biochemical experiments we find that: (1) CV2 functions as a BMP4 feedback inhibitor in ventral regions of the Xenopus embryo; (2) CV2 complexes with Twisted gastrulation and BMP4; (3) CV2 is not a substrate for tolloid proteinases; (4) CV2 binds to purified Chordin protein with high affinity (K(D) in the 1 nM range); (5) CV2 binds even more strongly to Chordin proteolytic fragments resulting from Tolloid digestion or to full-length Chordin/BMP complexes; (6) CV2 depletion causes the Xenopus embryo to become hypersensitive to the anti-BMP effects of Chordin overexpression or tolloid inhibition. We propose that the CV2/Chordin interaction may help coordinate BMP diffusion to the ventral side of the embryo, ensuring that BMPs liberated from Chordin inhibition by tolloid proteolysis cause peak signaling levels.

Crossveinless-2 Is a BMP feedback inhibitor that binds Chordin/BMP to regulate Xenopus embryonic patterning.

Vert&eacute;br&eacute;s Crossveinless-2 (CV2) est une prot&eacute;ine s&eacute;cr&eacute;t&eacute;e qui peut potentialiser ou antagoniser BMP signaling. Gr&acirc;ce &agrave; des exp&eacute;riences embryologiques et biochimiques, nous constatons que: (1) CV2 fonctionne comme un inhibiteur de r&eacute;troaction BMP4 dans les r&eacute;gions ventrales de l&#39;embryon de Xenopus. (2) CV2 complexes avec Twisted gastrulation et BMP4 ; (3) CV2 n&#39;est pas un substrat pour tolloid prot&eacute;inases ; (4) CV2 se lie &agrave; la prot&eacute;ine purifi&eacute;e de Chordin avec une haute affinit&eacute; (K(D) dans la gamme de 1 nM) ; (5) CV2 se lie encore plus fortement pour les fragments prot&eacute;olytiques Chordin r&eacute;sultant de la digestion Tolloid ou pleine longueur complexes Chordin/BMP ; (6) CV2 l&#39;appauvrissement entra&icirc;ne l&#39;embryon de Xenopus devenir hypersensible aux effets anti-BMP de Chordin surexpression ou l&#39;inhibition de la tolloid. Nous proposons que l&#39;interaction CV2/Chordin peut aider &agrave; coordonner la diffusion de BMP vers la face ventrale de l&#39;embryon, en veillant &agrave; ce que PGO lib&eacute;r&eacute;e de Chordin inhibition par pic de cause de prot&eacute;olyse tolloid niveaux de signalisation.

Crossveinless-2 est un inhibiteur de r&eacute;troaction BMP qui lie Chordin/BMP pour r&eacute;glementer la structuration embryonnaire de Xenopus.

Vertebrate Crossveinless-2 (CV2) ist ein sezernierte Protein, das potenzieren oder ver&auml;rgern, BMP signalisieren kann. Durch embryologische und biochemische Experimente finden wir, dass: (1) CV2 fungiert als ein BMP4-R&uuml;ckmeldungen-Inhibitor im ventralen Regionen des Xenopus Embryos; (2) CV2-komplexe mit Twisted Gastrulation und BMP4; (3) CV2 ist kein Substrat f&uuml;r Tolloid Proteinasen; (4) CV2 bindet an gereinigtes Chordin Protein mit hoher Affinit&auml;t (K(D) im Bereich von 1 nM); (5) CV2 bindet noch st&auml;rker an Chordin proteolytische Fragmente aus Tolloid Verdauung oder in Chordin/BMP-komplexen; (6) CV2 Ersch&ouml;pfung bewirkt, dass den Xenopus-Embryo &uuml;berempfindlich auf die Anti-BMP-Wirkungen der Chordin &Uuml;berexpression oder Tolloid Hemmung zu werden. Wir schlagen die CV2/Chordin-Interaktion kann dabei helfen, die BMP-Verbreitung auf der Bauchseite des Embryos, koordinieren sichergestellt wird, dass BMPs befreite von Chordin Hemmung durch Tolloid Proteolyse Ursache Peak Level signalisieren.

Crossveinless-2 ist ein BMP-R&uuml;ckmeldungen-Inhibitor, der bindet Chordin/BMP, Xenopus embryonalen Musterung zu regulieren.

Vertebrati Crossveinless-2 (CV2) &egrave; una proteina secreta che pu&ograve; potenziare o antagonizzare segnalazione BMP. Attraverso esperimenti embriologici e biochimici che troviamo: CV2 (1) funziona come un inibitore di feedback BMP4 nelle regioni ventrale dell&#39;embrione di Xenopus; (2) CV2 complessi con Twisted gastrulazione e BMP4; (3) CV2 non &egrave; un substrato per tolloid proteinases; (4) CV2 si lega alla proteina purificata di Chordin con alta affinit&agrave; (K(D) nell&#39;1 intervallo nM); (5) CV2 si lega ancora pi&ugrave; fortemente di frammenti proteolitici Chordin derivanti dalla digestione Tolloid o di complessi di Chordin/BMP full-length; (6) CV2 deplezione provoca l&#39;embrione di Xenopus a diventare ipersensibile agli effetti anti-BMP di Chordin iperespressione o inibizione di tolloid. Proponiamo che l&#39;interazione CV2/Chordin pu&ograve; aiutare a coordinare la diffusione BMP al lato ventrale dell&#39;embrione, assicurando che BMPs liberato da Chordin inibizione dal picco di tolloid proteolisi causa livelli di segnalazione.

Crossveinless-2 &egrave; un inibitore di feedback BMP che lega Chordin/BMP regolare Xenopus patterning embrionale.

&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E; Crossveinless 2 &#xFF08;CV2&#xFF09; &#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x307E;&#x305F;&#x306F; BMP &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x53CD;&#x611F;&#x3092;&#x8CB7;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x5206;&#x6CCC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x767A;&#x751F;&#x5B66;&#x7684;&#x30FB;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;: (1) CV2 &#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x80DA;; &#x306E;&#x8179;&#x5074;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; BMP4 &#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;(&#x30C4;&#x30A4;&#x30B9;&#x30C8;&#x539F;&#x8178;&#x9665;&#x5165;&#x53CA;&#x3073; BMP4 CV2 2) &#x932F;&#x4F53;;(3) CV2 tolloid &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;;(&#x6D44;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F; Chordin &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027; (1 nM &#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067; K(D)); CV2 4) &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;(CV2 5) &#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5F37;&#x304F; Tolloid &#x6D88;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B; Chordin &#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x89E3;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E; Chordin/BMP &#x932F;&#x4F53;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;;6&#xFF09; CV2 &#x67AF;&#x6E07; Chordin &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x307E;&#x305F;&#x306F; tolloid &#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x53CD; BMP &#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x904E;&#x654F;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x80DA;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;Bmp &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092; Chordin &#x304B;&#x3089; tolloid &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x539F;&#x56E0;&#x306E;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x89E3;&#x653E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3001;CV2/Chordin &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x3001;&#x80DA;&#x306E;&#x8179;&#x5074;&#x306B; BMP &#x62E1;&#x6563;&#x8ABF;&#x6574;&#x52A9;&#x3051;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Crossveinless 2 &#x306F; Chordin/BMP &#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x80DA;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B; BMP &#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3002;

&#xCC99;&#xCD94; Crossveinless-2 (CV2) &#xC57D;&#xD6A8; &#xB610;&#xB294; BMP &#xC2E0;&#xD638; &#xBC18;&#xB300; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBE44; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. Embryological &#xBC0F; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744;: (1) CV2 Xenopus &#xBC30;&#xC544;;&#xC758; &#xBCF5; &#xBD80; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; BMP4 &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; (2) CV2 &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB4A4;&#xD2C0; &#xB9AC;&#xACE0; gastrulation &#xBC0F; BMP4; (3) Cv2&#xC740; tolloid proteinases;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xD310; (4) CV2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC21C;&#xD654; Chordin &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; (1 nM &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; K(D)); (5) CV2 Tolloid &#xC18C;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; Chordin &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC870;&#xAC01; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xC9C0;; Chordin/BMP &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xB354;&#xC6B1; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xC18D; (6) CV2 &#xACE0;&#xAC08; &#xB420; Chordin overexpression &#xB610;&#xB294; tolloid &#xC800;&#xD574;&#xC758; &#xC548;&#xD2F0; BMP &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xB098;&#xCE58;&#xAC8C; Xenopus &#xBC30;&#xC544;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; BMPs tolloid &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; &#xC6D0;&#xC778; &#xD53C;&#xD06C; &#xC2E0;&#xD638; &#xB808;&#xBCA8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; Chordin&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xBC29; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; CV2/Chordin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;, &#xD0DC;&#xC544;&#xC758; &#xBCF5; &#xBD80; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; BMP &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC870;&#xC815;&#xD560; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Crossveinless-2&#xB294; Chordin/BMP Xenopus &#xBC30;&#xC544; &#xD328;&#xD134;&#xD654;&#xB97C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; BMP &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C;.

Vertebrados Crossveinless-2 (CV2) es una prote&iacute;na secretada que puede potenciar o antagonizar BMP se&ntilde;alizaci&oacute;n. A trav&eacute;s de experimentos embriol&oacute;gicos y bioqu&iacute;micos encontramos que: (1) CV2 funciona como un inhibidor de la regeneraci&oacute;n de BMP4 en regiones ventrales del embri&oacute;n Xenopus; (2) CV2 complejos con Twisted gastrulaci&oacute;n y BMP4; (3) CV2 no es un sustrato para tolloid proteinasas; (4) CV2 se une a la prote&iacute;na purificada de Chordin con alta afinidad (K(D) entre 1 nm); (5) CV2 ATA a&uacute;n m&aacute;s fuertemente Chordin proteol&iacute;ticas fragmentos resultantes de la digesti&oacute;n Tolloid o complejos de larga duraci&oacute;n Chordin/BMP; (6) CV2 agotamiento hace que el embri&oacute;n de Xenopus a ser hipersensibles a los efectos anti-BMP de sobreexpresi&oacute;n de Chordin o inhibici&oacute;n de la tolloid. Proponemos que la interacci&oacute;n CV2/Chordin puede ayudar a coordinar la difusi&oacute;n de BMP al lado ventral del embri&oacute;n, asegurando que BMPs liberados de Chordin inhibici&oacute;n por pico de causa prote&oacute;lisis tolloid niveles de se&ntilde;alizaci&oacute;n.

Andrea L. Ambrosio

Department of Biochemistry and Molecular Biology

Colorado State University

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction