Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay

The study of erythropoiesis aims to understand how red cells are formed from earlier hematopoietic and erythroid progenitors. Specifically, the rate of ...

University of Massachusetts Medical School

El uso de microarrays para monitorizar la expresi&oacute;n g&eacute;nica se ha convertido en una herramienta de investigaci&oacute;n est&aacute;ndar en ambas instituciones de investigaci&oacute;n acad&eacute;mica e industrial. Control de calidad de los defectos de impresi&oacute;n comunes durante la deposici&oacute;n de ADN sobre sustratos de vidrio es fundamental para mantener la integridad de los datos y evitar el consumo innecesario de ARN preciosa, etiquetado reactivos y tiempo. Aqu&iacute; demostramos un m&eacute;todo no destructivo para el monitoreo de la calidad de cada punto en cada chip de una ciclo de producci&oacute;n de microarrays. Hemos identificado muchos defectos de fabricaci&oacute;n com&uacute;n, mientras que no perturban el accesorio de nuestro objetivo de oligonucle&oacute;tidos al sustrato o alterar m&aacute;s hibridaci&oacute;n. Este protocolo es simple, r&aacute;pido y barato.

Control de calidad no destructiva para la producci&oacute;n de microarrays.

&#x76D1;&#x6D4B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5FAE;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5B66;&#x672F;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x7814;&#x7A76;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x671F;&#x95F4; DNA &#x6C89;&#x79EF;&#x5230;&#x73BB;&#x7483;&#x57FA;&#x5E95;&#x4E0A;&#x5E38;&#x89C1;&#x6253;&#x5370;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x4FDD;&#x6301;&#x6570;&#x636E;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x548C;&#x9632;&#x6B62;&#x4E0D;&#x5FC5;&#x8981;&#x5730;&#x6D88;&#x8017;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684; RNA&#xFF0C;&#x6807;&#x8BB0;&#x8BD5;&#x5242;&#x3001; &#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C55;&#x793A;&#x65E0;&#x635F;&#x76D1;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x70B9;&#x4E0A;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x82AF;&#x7247;&#x7684;&#x82AF;&#x7247;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FD0;&#x884C;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5F88;&#x591A;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x5236;&#x9020;&#x7F3A;&#x9677;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x4E0D;&#x6270;&#x52A8;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x4E3A;&#x57FA;&#x6750;&#x7684;&#x9644;&#x4EF6;&#x6216;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6539;&#x53D8;&#x6742;&#x4EA4;&#x3002;&#x8BE5;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x662F;&#x7B80;&#x5355;&#x3001; &#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x4FBF;&#x5B9C;&#x3002;

&#x65E0;&#x635F;&#x82AF;&#x7247;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;

The use of microarrays to monitor gene expression has become a standard research tool at both academic and industrial research institutions. Quality control of common printing defects during DNA deposition onto glass substrates is critical to maintaining data integrity and preventing the needless consumption of precious RNA, labeling reagents, and time. Here we demonstrate a nondestructive method for monitoring the quality of every spot on every chip of a microarray production run. We have identified many common manufacturing defects, while not perturbing the attachment of our oligonucleotide target to the substrate or altering further hybridization. This protocol is simple, fast, and inexpensive.

Nondestructive quality control for microarray production.

L&#39;utilisation de puces &agrave; ADN pour contr&ocirc;ler l&#39;expression des g&egrave;nes est devenu un outil de recherche standard &agrave; deux institutions de recherche acad&eacute;miques et industriels. Contr&ocirc;le de la qualit&eacute; des d&eacute;fauts d&#39;impression communs durant la d&eacute;position de l&#39;ADN sur des substrats de verre est essentiel au maintien de l&#39;int&eacute;grit&eacute; des donn&eacute;es et pr&eacute;venir la consommation inutile d&#39;ARN pr&eacute;cieux, r&eacute;actifs, d&#39;&eacute;tiquetage et de temps. Nous d&eacute;montrons une m&eacute;thode non destructive pour la surveillance de la qualit&eacute; de chaque tache sur chaque puce d&#39;une cycle de production de puces. Nous avons identifi&eacute; de nombreux d&eacute;fauts de fabrication courante, tout en ne perturbant l&#39;attachement de notre objectif d&#39;oligonucl&eacute;otide au substrat ou alt&eacute;rant davantage l&#39;hybridation. Ce protocole est simple, rapide et peu co&ucirc;teux.

Contr&ocirc;le de la qualit&eacute; non destructif pour la production de puces.

Zerst&#xF6;rungsfreie Qualit&#xE4;tskontrolle f&#xFC;r die Herstellung von Microarrays.

L&#39;uso di microarrays per monitorare l&#39;espressione di gene &egrave; diventato uno strumento di ricerca standard di entrambe le istituzioni di ricerca accademica e industriale. Controllo di qualit&agrave; dei comuni difetti di stampa durante la deposizione del DNA su substrati di vetro &egrave; fondamentale per mantenere l&#39;integrit&agrave; dei dati e prevenire il consumo inutile di RNA prezioso, reagenti, di etichettatura e tempo. Qui mostriamo un metodo non distruttivo per il monitoraggio della qualit&agrave; di ogni spot su ogni chip di un ciclo di produzione di microarray. Abbiamo identificato molti comuni difetti di fabbricazione, mentre non perturbino l&#39;attaccamento del nostro target del oligonucleotide al substrato o alterare ulteriormente l&#39;ibridazione. Questo protocollo &egrave; semplice, veloce e poco costoso.

Controllo qualit&agrave; non distruttivo per la produzione di microarray.

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5927;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7523;&#x696D;&#x754C;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x6A5F;&#x95A2;&#x3067;&#x6A19;&#x6E96;&#x7814;&#x7A76;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x306B; DNA &#x5806;&#x7A4D;&#x6642;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x5370;&#x5237;&#x6B20;&#x9665;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x7BA1;&#x7406;&#x306F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x3066;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A; RNA &#x306E;&#x5206;&#x985E;&#x306E;&#x8A66;&#x85AC;&#x306E;&#x4E0D;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6D88;&#x8CBB;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x4E0A;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8CEA;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x975E;&#x7834;&#x58CA;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x88FD;&#x9020;&#x4E0A;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3001;&#x306A;&#x3044;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x57FA;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x4ED8;&#x7740;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x4EA4;&#x914D;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x5224;&#x65AD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7C21;&#x5358;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x3001;&#x304B;&#x3064;&#x5B89;&#x4FA1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x7834;&#x58CA;&#x54C1;&#x8CEA;&#x7BA1;&#x7406;&#x3002;

Microarrays &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB450; &#xD559;&#xBB38;&#xACFC; &#xC0B0;&#xC5C5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAE30;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC900; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. DNA &#xC720;&#xB9AC; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC99D; &#xCC29; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xC1C4; &#xACB0;&#xD568;&#xC758; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD00;&#xB9AC;&#xB294; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; RNA, &#xC2DC; &#xC57D;, &#xB77C;&#xBCA8;&#xC758; &#xBD88;&#xD544;&#xC694; &#xD55C; &#xC18C;&#xBE44;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; microarray &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC2E4;&#xD589;&#xC758; &#xAC01; &#xCE69;&#xC758; &#xD488;&#xC9C8;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xBE44;&#xD30C;&#xAD34; &#xBC29;&#xBC95; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; perturbing &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; oligonucleotide &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; &#xB610;&#xB294; &#xAD50; &#xC7A1; &#xCD94;&#xAC00; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB9CE;&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC870; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xBE60;&#xB974;&#xACE0;, &#xC800;&#xB834; &#xD558; &#xAC8C;.

Microarray &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBE44;&#xD30C;&#xAD34; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD00;&#xB9AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3001; &#x89C4;&#x8303;&#x5316;&#x548C;&#x6D88;&#x51CF; cDNA &#x5E93;&#x6709;&#x7279;&#x70B9;&#x7684;&#x597D;&#x5F97;&#x591A;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x4E2D;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x7F55;&#x89C1;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5355;&#x4F4D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x597D;&#x5F97;&#x591A;&#x7684; Mu11k&#xFF0C;&#x9541;-U74 &#x4E2D;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EE3;&#x8868;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x591A;&#x8FBE; 86&#x3001; 45&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C0F;&#x9F20; cDNA &#x514B;&#x9686;&#x96C6;&#x5408;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x514B;&#x9686;&#x7684; 30%&#x548C; MG 430 &#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x522B;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x3002;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x51CF;&#x53BB;&#x5E93;&#x5C06;&#x4ECE;&#x9F20;&#x6807;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5411;&#x90A3;&#x4E9B;&#x6BEB;&#x514B; 430 &#x5171;&#x8BC6;&#x5E8F;&#x5217;&#x751F;&#x6210;&#x7684; EST &#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; UniGene &#x751F;&#x6210; 124 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5171;&#x540C;&#x7684;&#x53C2;&#x8003;&#x3002;1111 &#x975E;&#x5197;&#x4F59;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4EE3;&#x8868;&#x5546;&#x4E1A;&#x7684;&#x6570;&#x7EC4;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E00;&#x7EC4;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x96C6;&#x7FA4;&#x88AB;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x5668;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x6790;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; Pde6b(rd1) &#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x7684; 12,325 &#x529F;&#x80FD;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C; cDNA &#x82AF;&#x7247;&#x4E0A;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x6837;&#x672C;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x3002;QRT PCR &#x9A8C;&#x8BC1;&#x7531;&#x82AF;&#x7247;&#x6807;&#x8BC6;&#x7684;&#x516B;&#x4E2A;&#x552F;&#x4E00;&#x8A8A;&#x672C;&#x3002;&#x4E03;&#x7B14;&#x5F55;&#x663E;&#x793A;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5168;&#x957F;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x7B56;&#x7565;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x65E0;&#x5BB3;&#x73AF;&#x5883;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x5168;&#x957F;&#x9F20;&#x6807;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5316;&#x9176; 2 &#x697C; (GUCY2F) &#x548C;&#x7FA7;&#x57FA;&#x622A;&#x65AD;&#x62FC;&#x63A5;&#x53D8;&#x4F53;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C; S-&#x6297;&#x539F; &#xFF08;SAG&#xFF09; &#x79F0;&#x4E3A;&#x89C6;&#x89C9; phototransduction G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5E8F;&#x5217;&#x5DF2;&#x5206;&#x914D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#x52A0;&#x5165;&#x53F7; &#xFF08;&#x5355;&#x6570;&#xFF09;&#x3002;&#x548C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;

&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x53D8;&#x6027;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

Generation of tissue-specific, normalized and subtracted cDNA libraries has the potential to characterize the expression of rare transcriptional units not represented on Affymetrix GeneChips. Initial sequence analysis of our murine cDNA clone collections showed that as much as 86, 45, and 30% of clones are not represented on the Affymetrix Mu11k, MG-U74, and MG-430 chip sets, respectively. A detailed study that compared EST sequences of a subtracted library generated from mouse retina to those of MG-430 consensus sequences was undertaken, using UniGene build 124 as the common reference. A set of 1111 nonredundant transcript regions, not represented on the commercial array, was identified. These clusters were used as the primary filter for analyzing a data set produced by assaying samples from the Pde6b(rd1) mouse model of retinal degeneration on a 12,325-feature retinal cDNA microarray. QRT-PCR validated eight unique transcripts identified by microarray. Seven of the transcripts showed retina-specific expression. Full-length cloning strategies were applied to two of the ESTs. The genes discovered by this approach are the full-length mouse homologue of guanylate cyclase 2F (GUCY2F) and a carboxy-truncated splice variant of retinal S-antigen (SAG), known as regulators of the visual phototransduction G-protein-coupled receptor-mediated signaling pathway. These sequences have been assigned GenBank Accession Nos. and , respectively.

Application of functional genomic technologies in a mouse model of retinal degeneration.

G&eacute;n&eacute;ration de banques d&#39;ADNc de tissu-sp&eacute;cifique, normalis&eacute;e et soustraits a le potentiel pour caract&eacute;riser l&#39;expression des unit&eacute;s de transcriptionnelles rares non repr&eacute;sent&eacute;s sur Affymetrix GeneChips. Analyse de la s&eacute;quence initiale de nos collections de clone cDNA murin qui a montr&eacute; que 86, 45 et 30 % de clones ne sont pas repr&eacute;sent&eacute;es sur la Affymetrix Mu11k, MG-U74, et affecte &agrave; puce 430 MG, respectivement. A entrepris une &eacute;tude d&eacute;taill&eacute;e qui a compar&eacute; les s&eacute;quences EST une biblioth&egrave;que soustraites g&eacute;n&eacute;r&eacute;s par la r&eacute;tine de souris &agrave; celles des s&eacute;quences consensus MG-430, &agrave; l&#39;aide de UniGene build 124 comme r&eacute;f&eacute;rence commune. Un ensemble de r&eacute;gions 1111 transcription non redondante, non repr&eacute;sent&eacute; sur le tableau commercial, a &eacute;t&eacute; identifi&eacute;. Ces regroupements ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s comme le filtre primaire pour analyser un ensemble de donn&eacute;es produit par l&#39;analyse des &eacute;chantillons du mod&egrave;le de souris Pde6b(rd1) de d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence r&eacute;tinienne sur un 12 325-fonction r&eacute;tinienne cDNA microarray. QRT-PCR valid&eacute;es huit transcriptions uniques identifi&eacute;es par microarray. Sept des transcriptions ont montr&eacute; une expression sp&eacute;cifique &agrave; la r&eacute;tine. Strat&eacute;gies de clonage pleine longueur ont &eacute;t&eacute; appliqu&eacute;s &agrave; deux de la SUST. Les g&egrave;nes d&eacute;couverts par cette approche sont l&#39;homologue pleine longueur de la guanylate cyclase 2F (GUCY2F) et une variante de l&#39;&eacute;pissure carboxy-tronqu&eacute; de r&eacute;tine S-antig&egrave;ne (SAG), connu comme r&eacute;gulateurs de la phototransduction visual coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G m&eacute;di&eacute;e par les r&eacute;cepteurs voie de signalisation. Ces s&eacute;quences ont &eacute;t&eacute; affect&eacute;s GenBank Accession amendements. et, respectivement.

Application des technologies de g&eacute;nomiques fonctionnelles dans un mod&egrave;le murin de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence r&eacute;tinienne.

Die Anwendung der funktionellen Genomik-Technologien in einem Mausmodell der Degeneration der Netzhaut.

Generazione di librerie di cDNA tessuto-specifici, normalizzata e sottratto ha il potenziale per caratterizzare l&#39;espressione di rara unit&agrave; trascrizionale non rappresentati su Affymetrix GeneChips. Analisi di sequenza iniziale delle nostre collezioni di clone del cDNA murino che ha mostrato quanto 86, 45 e il 30% dei cloni non sono rappresentati sull&#39;Affymetrix Mu11k, MG-U74, e set di chip 430 MG, rispettivamente. &Egrave; stato intrapreso uno studio dettagliato che ha confrontato le sequenze EST di una libreria sottratto generato dalla retina di topo a quelli delle sequenze consenso MG-430, utilizzando UniGene costruire 124 come riferimento comune. Un insieme di regioni 1111 nonredundant trascrizione, non rappresentati dalla matrice commerciale, &egrave; stato identificato. Questi ammassi sono stati utilizzati come filtro primario per l&#39;analisi di un set di dati prodotto da analizzare campioni dal modello del mouse Pde6b(rd1) di degenerazione della retina su un 12.325-funzione retinica cDNA microarray. QRT-PCR convalidati otto trascrizioni uniche identificate da microarray. Sette le trascrizioni hanno mostrato espressione retina-specifica. Full-length clonazione strategie sono state applicate a due l&#39;ESTs. I geni scoperti da questo approccio sono l&#39;omologo del mouse full-length di guanilato ciclasi 2F (GUCY2F) e una variante di splice carboxy-troncata di S-antigene retinico (SAG), noto come regolatori del phototransduction visivo G-protein-coupled receptor mediated via di segnalazione. Queste sequenze sono state assegnate GenBank adesione Nos. e, rispettivamente.

Applicazione delle tecnologie di genomiche funzionale in un modello murino di degenerazione retinica.

&#x7D44;&#x7E54;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x6B63;&#x898F;&#x5316;&#x3068;&#x6E1B;&#x7B97;&#x306E; cDNA &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9; GeneChips &#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x73CD;&#x3057;&#x3044;&#x8EE2;&#x5199;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8868;&#x60C5;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x540C;&#x3058;&#x304F;&#x3089;&#x3044; 86, 45, &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; cDNA &#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3; &#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E; 30 &#xFF05;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E; Mu11k &#x3067;&#x3001;MG U74 &#x306A;&#x3044;&#x306F;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x3001;MG 430 &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x53C2;&#x7167;&#x3068;&#x3057;&#x3066; UniGene 124 &#x306E;&#x30D3;&#x30EB;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; EST &#x914D;&#x5217;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7DB2;&#x819C;&#x304B;&#x3089; MG 430 &#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6E1B;&#x7B97;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x691C;&#x8A0E;&#x304C;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5546;&#x696D;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3001;1111&#x5E74;&#x975E;&#x5197;&#x9577;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x8A66;&#x91D1;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x7DB2;&#x819C;&#x5909;&#x6027; 12,325 &#x6A5F;&#x80FD;&#x7DB2;&#x819C; cDNA &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x4E0A;&#x306E; Pde6b(rd1) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;QRT PCR &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B; 8 &#x4E00;&#x610F;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3002;7 &#x3064;&#x306E;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x6226;&#x7565;&#x306F; 2 &#x3064;&#x306E; Est &#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; 2F &#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x76F8;&#x540C;&#x3067;&#x3042;&#x308B; (GUCY2F) &#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C; S-&#x6297;&#x539F; visual &#x9310;&#x4F53; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; &#xFF08;&#x30B5;&#x30B0;&#xFF09;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F; GenBank &#x52A0;&#x76DF; Nos &#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7DB2;&#x819C;&#x5909;&#x6027;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xD45C;&#xC900;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xBE80; cDNA &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xC138;&#xB300; Affymetrix Genechips&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB4DC;&#xBB38; transcriptional &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; &#xC2DD;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC73C;&#xB85C; 86, 45, &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; murine cDNA &#xD074;&#xB860; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D;&#xACFC; &#xD074;&#xB860;&#xC758; 30% MG U74 Affymetrix mu11k&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xBC00;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB7A8;-430 &#xCE69; &#xC138;&#xD2B8;, &#xAC01;&#xAC01;. UniGene &#xBE4C;&#xB4DC; 124 &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xCC38;&#xC870; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC00;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB7A8;-430 &#xC77C;&#xCE58; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xBE80;&#xB41C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; EST &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xCC29;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;. 1111 &#xBE44;&#xC911;&#xBCF5; &#xC0AC;&#xBCF8; &#xC601;&#xC5ED;, &#xC0C1;&#xC5C5; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xC9C0; &#xC9D1;&#xD569; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; assaying &#xC0D8;&#xD50C; 12,325 &#xAE30;&#xB2A5; &#xB9DD;&#xB9C9; cDNA microarray&#xC5D0; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xBCC0;&#xC131;&#xC758; Pde6b(rd1) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD544;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. QRT PCR microarray&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC131;&#xC801; &#xD655;&#xC778;. 7 &#xC131;&#xC801;&#xD45C; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xAD00;&#xB828; &#xC2DD;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC804;&#xB7B5; 2&#xB294; Ests&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; guanylate cyclase 2 &#xCE35;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; homologue (GUCY2F) &#xBC0F; &#xB9DD;&#xB9C9; S &#xD56D; &#xC6D0; (SAG) visual phototransduction G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-&#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xC758; carboxy&#xB97C; &#xC790;&#xB97C; &#xBD99;&#xC5EC; &#xC11C; &#xBCC0;&#xD615;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC740;&#xD589; &#xC7AC;&#xC0B0; &#xAC00;&#xCE58; Nos &#xD560;&#xB2F9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;, &#xAC01;&#xAC01;.

&#xAE30;&#xB2A5; &#xAC8C;&#xB188; &#xAE30;&#xC220; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xBCC0;&#xC131; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;.

Generaci&oacute;n de bibliotecas de cDNA de tejidos espec&iacute;ficos, normalizado y resta tiene el potencial para caracterizar la expresi&oacute;n de unidades transcripcionales raras no representados en Affymetrix GeneChips. An&aacute;lisis de la secuencia inicial de nuestras colecciones de clon de cDNA murino mostr&oacute; que tanto como 86, 45 y 30% de los clones no est&aacute;n representados en el Affymetrix Mu11k, MG-U74, y MG-430 chip establece, respectivamente. Se realiz&oacute; un estudio detallado que compararon las secuencias EST de una biblioteca resta generados de retina de rat&oacute;n a las secuencias de consenso MG-430, usando UniGene construir 124 como referencia com&uacute;n. Se identific&oacute; un conjunto de regiones de transcripci&oacute;n no redundante 1111, no representados en el arreglo de discos comercial. Estos grupos fueron utilizados como el filtro primario para el an&aacute;lisis de un conjunto de datos producido por detectar muestras del modelo de rat&oacute;n de Pde6b(rd1) de la degeneraci&oacute;n retiniana en un microarrays de cDNA retiniana 12.325-caracter&iacute;stica. QRT-PCR validado ocho transcripciones &uacute;nicas identificadas por microarrays. Siete de las transcripciones mostraron expresi&oacute;n espec&iacute;fica de la retina. Se aplicaron estrategias de clonaci&oacute;n de larga duraci&oacute;n a dos de las tecnolog&iacute;as ecol&oacute;gicamente racionales. Los genes descubiertos por este enfoque son el hom&oacute;logo de rat&oacute;n de cuerpo entero de la guanilato ciclasa 2F (GUCY2F) y una variante de empalme carboxi-truncado de retina S-ant&iacute;geno (SAG), conocido como reguladores de la fototransducci&oacute;n visual v&iacute;a se&ntilde;alizaci&oacute;n mediada por receptores g-prote&iacute;na-juntados. Estas secuencias se han asignado Nos adhesi&oacute;n de GenBank. y, respectivamente.

Aplicaci&oacute;n de tecnolog&iacute;as gen&oacute;micas funcionales en un modelo de rat&oacute;n de la degeneraci&oacute;n retiniana.

Nous avons d&eacute;velopp&eacute; une amplification de RNA totale et marquage de strat&eacute;gie pour une utilisation avec Affymetrix GeneChips. Notre protocole, dont nous notons BIIB, emploie deux cycles d&#39;amplification lin&eacute;aire de T7 suivie de Klenow &eacute;tiquetage pour g&eacute;n&eacute;rer un ADNc biotinyl&eacute;s. Dans l&#39;analyse comparative des &eacute;tudes utilisant un titrage de l&#39;ARN total universel de souris, BIIB a surpass&eacute; les kits disponibles dans le commerce en termes de sensibilit&eacute;, pr&eacute;cision et amplifi&eacute; la longueur de la cible, tout en donnant des r&eacute;sultats &eacute;quivalents pour la reproductibilit&eacute; technique. BIIB maintenu 50 et 44 % pr&eacute;sentent des appels &agrave; partir de 100 et 50 pg d&#39;ARN total, respectivement. Inter- et &eacute;tudes de pr&eacute;cision intrasample a indiqu&eacute; que BIIB produit un profil de l&#39;expression compl&egrave;te et impartiale dans un rayon de 5 ng &agrave; 50 pg d&#39;&agrave; partir de l&#39;ARN total. D&#39;un panel de transcriptions exog&egrave;nes enrichis, nous avons &eacute;tabli le seuil de d&eacute;tection lin&eacute;aire de BIIB pour &ecirc;tre 20 exemplaires absolues. En outre, nous d&eacute;montrons que BIIB est assez sensible pour d&eacute;tecter les ph&eacute;nom&egrave;nes stochastiques inh&eacute;rentes &agrave; un &eacute;chantillon tr&egrave;s dilu&eacute;. Utilisant l&#39;ARN isol&eacute; de tissus entiers, nous avons valid&eacute; davantage BIIB pr&eacute;cision et justesse par comparaison des 224 ratios d&#39;expression g&eacute;n&eacute;r&eacute;e par quantitative PCR en temps r&eacute;el. En fin de compte, l&#39;utilit&eacute; de notre m&eacute;thode est illustr&eacute;e par la d&eacute;tection de tendances biologiquement attendus dans un titrage de cellules lymphocytes T/B d&#39;&eacute;coulement de 100 piles tri&eacute;e de la rate des souris saines.

Exactes et pr&eacute;cises des profils transcriptionnelles de 50 pg d&#39;ARN total ou 100 lymphocytes primaires d&#39;&eacute;coulement-tri.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x603B;&#x7684; RNA &#x6269;&#x589E;&#x548C;&#x8D34;&#x6807;&#x4F7F;&#x7528;&#x6218;&#x7565;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x597D;&#x5F97;&#x591A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x793A; BIIB&#xFF0C;&#x91C7;&#x7528;&#x4E24;&#x8F6E;&#x8DDF; Klenow &#x6807;&#x8BB0;&#x6765;&#x751F;&#x6210;&#x7D20; cDNA &#x7684;&#x7EBF;&#x6027; T7 &#x653E;&#x5927;&#x3002;&#x5728;&#x57FA;&#x51C6;&#x4F7F;&#x7528;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x9F20;&#x6807;&#x901A;&#x7528;&#x603B; RNA &#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;BIIB &#x8868;&#x73B0;&#x4F18;&#x4E8E;&#x5E02;&#x9762;&#x5DE5;&#x5177;&#x5305;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3001; &#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x653E;&#x5927;&#x76EE;&#x6807;&#x957F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7B49;&#x540C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x53EF;&#x91CD;&#x590D;&#x6027;&#x3002;BIIB &#x4FDD;&#x6301; 50 &#x548C; 44%&#x5206;&#x522B;&#x63D0;&#x51FA;&#x8981;&#x6C42;&#x4ECE; 100 &#x548C; 50 pg &#x7684;&#x603B; RNA&#x3002;&#x9664;-intrasample &#x7CBE;&#x5EA6;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; BIIB &#x4EA7;&#x751F; 5 &#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x65E0;&#x504F;&#x89C1;&#x548C;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x548C;&#x5434;&#x81F3; 50 pg &#x7684;&#x5F00;&#x59CB;&#x603B; RNA&#x3002;&#x4ECE;&#x9762;&#x677F;&#x4E2D;&#x523A;&#x5916;&#x6E90;&#x8A8A;&#x672C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86; BIIB &#x7EBF;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6781;&#x9650;&#x662F; 20 &#x7EDD;&#x5BF9;&#x526F;&#x672C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; BIIB &#x662F;&#x4E0D;&#x591F;&#x654F;&#x611F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7A00;&#x91CA;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x968F;&#x673A;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x9694;&#x79BB;&#x4ECE;&#x6574;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684; RNA&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x9A8C;&#x8BC1; BIIB &#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x548C;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x7531;&#x751F;&#x6210;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8367;&#x5149;&#x5B9A;&#x91CF; PCR &#x7684; 224 &#x8868;&#x8FBE;&#x7387;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x6700;&#x7EC8;&#x4E00;&#x70B9; 100 &#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D41;&#x6392;&#x5E8F;&#x4ECE;&#x5065;&#x5EB7;&#x5C0F;&#x9F20;&#x813E;&#x810F; T &#x7EC6;&#x80DE; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x751F;&#x7269;&#x9884;&#x671F;&#x8D8B;&#x52BF;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

&#x4ECE; 50 pg &#x7684;&#x603B; RNA &#x6216; 100 &#x6D41;&#x91CF;&#x6392;&#x5E8F;&#x4E3B;&#x8981;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x51C6;&#x786E;&#x548C;&#x7CBE;&#x786E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6982;&#x51B5;&#x3002;

We have developed a total RNA amplification and labeling strategy for use with Affymetrix GeneChips. Our protocol, which we denote BIIB, employs two rounds of linear T7 amplification followed by Klenow labeling to generate a biotinylated cDNA. In benchmarking studies using a titration of mouse universal total RNA, BIIB outperformed commercially available kits in terms of sensitivity, accuracy, and amplified target length, while providing equivalent results for technical reproducibility. BIIB maintained 50 and 44% present calls from 100 and 50 pg of total RNA, respectively. Inter- and intrasample precision studies indicated that BIIB produces an unbiased and complete expression profile within a range of 5 ng to 50 pg of starting total RNA. From a panel of spiked exogenous transcripts, we established the BIIB linear detection limit to be 20 absolute copies. Additionally, we demonstrate that BIIB is sensitive enough to detect the stochastic events inherent in a highly diluted sample. Using RNA isolated from whole tissues, we further validated BIIB accuracy and precision by comparison of 224 expression ratios generated by quantitative real-time PCR. The utility of our method is ultimately illustrated by the detection of biologically expected trends in a T cell/B cell titration of 100 primary cells flow sorted from a healthy mouse spleen.

Accurate and precise transcriptional profiles from 50 pg of total RNA or 100 flow-sorted primary lymphocytes.

Wir haben eine total RNA-Amplifikation und Kennzeichnung Strategie f&uuml;r den Einsatz mit Affymetrix GeneChips entwickelt. Unser Protokoll, das wir BIIB, besch&auml;ftigt zwei Runden der linear T7-Verst&auml;rkung gefolgt bezeichnen von Klenow zu beschriften, um einem biotinylierten cDNA zu generieren. Benchmarking Studien eine Titration Maus universal total RNA, BIIB besser als handels&uuml;bliche Baus&auml;tze in Bezug auf die Empfindlichkeit, Genauigkeit und verst&auml;rkt Ziel L&auml;nge, wobei die gleichwertige Ergebnisse f&uuml;r technischen Reproduzierbarkeit. BIIB gepflegt, 50 % und 44 % Anrufe von 100 und 50 Pg total RNA bzw. pr&auml;sentieren. Inter- und intrasample Pr&auml;zision Studien angedeutet, BIIB eine unvoreingenommene und vollst&auml;ndige Ausdruck-Profil einer Spanne von 5 produziert ng bis 50 Pg Gesamt RNA zu starten. Von einem Panel von Spike exogene Mitschriften gr&uuml;ndeten wir die BIIB lineare Nachweisgrenze 20 absolute Kopien zu sein. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass BIIB empfindlich genug, um die inh&auml;renten in einer stark verd&uuml;nnten Probe stochastische Ereignisse zu erkennen. Mit RNA aus ganzen Gewebe isoliert, validiert wir weitere BIIB Genauigkeit und Pr&auml;zision durch Vergleich der 224 Ausdruck-Verh&auml;ltnisse, die durch quantitative Echtzeit-PCR generiert. Das Dienstprogramm unserer Methode ist letztlich durch den Nachweis von biologisch erwarteten Trend in eine T-Zell/B Zelle Titration von 100 Prim&auml;rzellen Str&ouml;mung von gesunden Maus Milz sortiert dargestellt.

Genaue und pr&auml;zise transkriptionelle Profile mit 50 Pg Gesamt RNA oder 100 Str&ouml;mung sortiert prim&auml;r-Lymphozyten.

Abbiamo sviluppato un&#39;amplificazione di RNA totale e l&#39;etichettatura di strategia per l&#39;uso con Affymetrix GeneChips. Il nostro protocollo, che denotiamo BIIB, impiega due turni di linear T7 amplificazione seguita da Klenow etichettatura per generare un cDNA biotinilato. In studi utilizzando una titolazione di RNA totale universale del mouse di benchmarking, BIIB sovraperformato kit commercialmente disponibili in termini di sensibilit&agrave;, precisione e amplificato lunghezza destinazione, fornendo risultati equivalenti per la riproducibilit&agrave; tecnica. BIIB mantenuto 50 e 44% presenti chiamate da 100 e 50 pg di RNA totale, rispettivamente. Inter- e studi di precisione intrasample indicarono che BIIB produce un profilo di espressione imparziale e completa all&#39;interno di una gamma di 5 ng a 50 pg di partenza RNA totale. Da un panel di trascrizioni esogene a spillo, abbiamo stabilito il limite di rilevazione lineare BIIB per essere 20 copie assolute. Inoltre, dimostriamo che BIIB &egrave; abbastanza sensibile per rilevare gli eventi stocastici inerenti a un campione altamente diluito. Usando RNA isolato dai tessuti tutto, abbiamo ulteriormente convalidato BIIB accuratezza e precisione dal confronto di 224 rapporti di espressione generata mediante PCR quantitativa in tempo reale. L&#39;utilit&agrave; del nostro metodo &egrave; infine illustrato dall&#39;individuazione delle tendenze biologicamente previste in una titolazione di cellula cellula T/B di 100 celle primarie flusso ordinato da una milza sana del mouse.

Accurati e precisi profili transcriptional da 50 pg di RNA totale o 100 ordinato flusso dei linfociti primari.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30C8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30EB; RNA &#x5897;&#x5E45;&#x3068;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9; GeneChips &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB; BIIB&#x3001;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316; cDNA &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; Klenow &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x30EA;&#x30CB;&#x30A2; T7 &#x5897;&#x5E45;&#x306E; 2 &#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E6;&#x30CB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B5;&#x30EB;&#x7DCF; RNA &#x306E;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C1;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;, BIIB &#x5E02;&#x8CA9;&#x30AD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3001;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3001;&#x9762;&#x3067;&#x4E0A;&#x56DE;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306B;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x9577;&#x3055;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;BIIB 50 &#x3068; 44 &#xFF05; &#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; 100 &#x3068; 50 &#x306E; pg &#x7DCF; rna &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x547C;&#x3073;&#x51FA;&#x3057;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Inter- &#x3068; intrasample &#x7CBE;&#x5EA6;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x304C;&#x793A;&#x3057;&#x305F; BIIB&#x3001;&#x516C;&#x5E73;&#x304B;&#x3064;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092; 5 &#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x5185;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x7DCF; RNA &#x3092;&#x958B;&#x59CB; 50 pg &#x306B; ng&#x3002;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x8EE2;&#x5199;&#x7269;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x306F;&#x3001;20 &#x7D76;&#x5BFE;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x3067; BIIB &#x7DDA;&#x5F62;&#x691C;&#x51FA;&#x5236;&#x9650;&#x3092;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; BIIB &#x304C;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5E0C;&#x91C8;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x78BA;&#x7387;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x5341;&#x5206;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3088;&#x308A;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F; RNA &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3055;&#x3089;&#x306B; BIIB &#x78BA;&#x5EA6;&#x3068;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; PCR &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B; 224 &#x5F0F;&#x6BD4;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x691C;&#x8A3C;&#x3002;&#x672C;&#x624B;&#x6CD5;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x5065;&#x5EB7;&#x306A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x813E;&#x81D3;&#x304B;&#x3089;&#x306B;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048; 100 &#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x96FB;&#x6C60;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x30FB; B &#x7D30;&#x80DE;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x3067;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x50BE;&#x5411;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

50 &#x306E; pg &#x306E;&#x7DCF; RNA &#x307E;&#x305F;&#x306F; 100 &#x306E;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x306B;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x4E00;&#x6B21;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x304B;&#x3064;&#x7CBE;&#x5BC6;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;

&#xCD1D; RNA &#xC99D;&#xD3ED; &#xBC0F; Affymetrix Genechips&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC804;&#xB7B5; &#xB77C;&#xBCA8; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; BIIB, &#xC120;&#xD615; T7 &#xC99D;&#xD3ED; Klenow &#xB77C;&#xBCA8; biotinylated Cdna&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC74C;&#xC758; &#xACE0;&#xC6A9; 2 &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xD3B8;&#xC801;&#xC778; &#xCD1D; RNA&#xC758; &#xC801;&#xC815; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xBCA4;&#xCE58;&#xB9C8;&#xD0B9;&#xC5D0;&#xC11C; BIIB &#xAC10;&#xB3C4;, &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xC6A9; &#xD0A4;&#xD2B8; &#xC2E4;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xAE30;&#xC220;&#xC801; &#xC7AC;&#xD604;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xB300;&#xC0C1; &#xAE38;&#xC774; &#xC99D;&#xD3ED;. BIIB 50&#xACFC; 44% &#xAC01;&#xAC01; &#xCD1D; RNA&#xC758; 100&#xC640; 50 &#xC138;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD638;&#xCD9C;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC720;&#xC9C0;. &#xC778;&#xD14C;&#xB974;-intrasample &#xC815;&#xBC00; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD45C;&#xC2DC; BIIB 5&#xC758; &#xBC94;&#xC704; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xD3C9; &#xD558; &#xACE0; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xCD1D; RNA&#xC758; 50 &#xC138;&#xC5D0; ng. &#xC544;&#xAD70;&#xB41C; exogenous &#xC0AC;&#xBCF8;&#xC740; &#xD328;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; BIIB &#xC120;&#xD615; &#xAC10;&#xC9C0;&#xB3C4; 20 &#xC808;&#xB300; &#xBD80; &#xC124;&#xB9BD;. &#xB610;&#xD55C;, BIIB&#xB294; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xD76C;&#xC11D;&#xB41C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xC7AC; &#xB41C; &#xD655;&#xB960; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; RNA&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; &#xAC80;&#xC99D; BIIB &#xC815;&#xD655;&#xC131;&#xACFC; &#xC815;&#xBC00; &#xC815;&#xB7C9; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; 224 &#xC2DD; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBE44;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xB82C; 100 &#xCC28; &#xC140; &#xD750;&#xB984;&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC;/B &#xC140; &#xC801;&#xC815; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; &#xD2B8;&#xB80C;&#xB4DC; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD1D; RNA &#xB610;&#xB294; 100 &#xD750;&#xB984; &#xC815;&#xB82C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB9BC;&#xD504; &#xD1A8;&#xC758; 50 &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xBC00;&#xD55C; transcriptional &#xD504;&#xB85C;&#xD544;.

Hemos desarrollado una amplificaci&oacute;n de RNA total y etiquetado estrategia para uso con Affymetrix GeneChips. Nuestro protocolo, que nos denotan BIIB, emplea dos rondas de amplificaci&oacute;n lineal de T7 seguido Klenow etiquetado para generar un cDNA biotinilado. En el benchmarking estudios usando una titulaci&oacute;n de ARN total universal de rat&oacute;n, BIIB superaron a los kits disponibles en el mercado en t&eacute;rminos de sensibilidad, precisi&oacute;n y amplificado Vestido de blanco, mientras que proporciona resultados equivalentes de reproductibilidad t&eacute;cnica. BIIB mantiene 50 y 44% presentan llamadas de 100 y 50 pg de ARN total, respectivamente. Inter- y estudios de precisi&oacute;n intrasample indicaron que BIIB produce un perfil de la expresi&oacute;n completa e imparcial dentro de un rango de 5 ng a 50 pg de a partir de ARN total. De un panel de transcripciones ex&oacute;genos claveteados, establecimos el l&iacute;mite de detecci&oacute;n lineal de BIIB para 20 copias absolutas. Adem&aacute;s, demostramos que BIIB es lo suficientemente sensible como para detectar los eventos estoc&aacute;sticos inherentes en una muestra muy diluida. Utilizando ARN aislado de todo tejidos, m&aacute;s validamos BIIB exactitud y precisi&oacute;n por comparaci&oacute;n de 224 cocientes de expresi&oacute;n generado por PCR cuantitativa en tiempo real. La utilidad de nuestro m&eacute;todo es ilustrada en &uacute;ltima instancia por la detecci&oacute;n de tendencias biol&oacute;gicamente esperadas en una titulaci&oacute;n de c&eacute;lula T cell/B de flujo de 100 pilas ordenada de un bazo de rat&oacute;n sano.

Exactos y precisos perfiles transcripcionales de 50 pg de ARN total o 100 linfocitos principales flujo clasificadas.

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; SSc &#xD53C;&#xBD80; &#xC0DD; &#xAC80; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xC591; &#xAC8C;&#xC7AC; &#xC5EC;&#xBD80;&#xC640; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC784;&#xC0C1; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD56D;&#xBCF5;&#xC774; &#xD76C;&#xADC0; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xAD00;&#xCE21; &#xACB0;&#xD569;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xACBD;&#xD654; (SSc)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC0DD; &#xAC80; &#xD45C;&#xBCF8; &#xB4E0; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD655;&#xC778;.

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xBD88;&#xC644;&#xC804; explanted &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB300; &#xBCF8; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC601; &#xB418;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC11C;&#xBA85; &#xBC1D;&#xD600; scleroderma &#xD53C;&#xBD80;&#xB97C; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Para determinar si los espec&iacute;menes de la biopsia obtienen de esclerosis sist&eacute;mica (SSc) lesiones muestran un perfil distintivo gene, si se mantiene ese perfil de gene en fibroblastos cultivados de SSc espec&iacute;menes de la biopsia de piel, y si los resultados de tejido Obtenido de m&uacute;ltiples centros cl&iacute;nicos pueden combinarse para producir observaciones &uacute;tiles en esta enfermedad rara.

Gene perfiles de piel escleroderma revela robustas firmas de enfermedad que imperfectamente se reflejan en los perfiles de la transcripci&oacute;n de los fibroblastos explantados.

&#x82E5;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x4ECE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x786C;&#x76AE;&#x75C5; (SSc) &#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x6D3B;&#x68C0;&#x6807;&#x672C;&#x75C5;&#x53D8;&#x663E;&#x793A;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x57FA;&#x56E0;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE; SSc &#x76AE;&#x80A4;&#x6D3B;&#x68C0;&#x6807;&#x672C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x662F;&#x5426;&#x4ECE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4ECE;&#x591A;&#x4E2A;&#x4E34;&#x5E8A;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x884C;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x751F;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x610F;&#x89C1;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7F55;&#x89C1;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x786C;&#x76AE;&#x75C5;&#x76AE;&#x80A4;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x53CD;&#x6620;&#x5728; explanted &#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8A8A;&#x672C;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x7684;&#x7B7E;&#x540D;&#x3002;

To determine whether biopsy specimens obtained from systemic sclerosis (SSc) lesions show a distinctive gene profile, whether that gene profile is maintained in fibroblasts cultured from SSc skin biopsy specimens, and whether results from tissue obtained from multiple clinical centers can be combined to yield useful observations in this rare disease.

Gene profiling of scleroderma skin reveals robust signatures of disease that are imperfectly reflected in the transcript profiles of explanted fibroblasts.

Pour d&eacute;terminer si des sp&eacute;cimens de biopsie provenant de la scl&eacute;rodermie syst&eacute;mique (SSc) l&eacute;sions montrent un profil g&eacute;n&eacute;tique particuli&egrave;re, si le profil de ce g&egrave;ne est maintenu dans les fibroblastes cultiv&eacute;s de sp&eacute;cimens de biopsie de peau SSc et si les r&eacute;sultats de tissus obtenus &agrave; partir des centres cliniques multiples peut &ecirc;tre combin&eacute; pour produire des observations utiles &agrave; cette maladie rare.

G&egrave;ne profilage de peau de scl&eacute;rodermie r&eacute;v&egrave;le robustes signatures de maladie qui sont imparfaitement refl&eacute;t&eacute;es dans les profils de transcription des fibroblastes explant&eacute;s.

Um festzustellen, ob Biopsie Proben von Systemische Sklerose (SSc) erhalten L&auml;sionen eine unverwechselbare gen-Profil zeigen, ob dieses Gen-Profil in Fibroblasten gew&auml;hrleistet aus SSc Haut Biopsie Proben kultiviert, und ob Ergebnisse aus Gewebe von mehreren klinischen Zentren erhalten kann kombiniert werden, um n&uuml;tzliche Beobachtungen in dieser seltenen Krankheit zu erzielen.

Gen Profilerstellung Sklerodermie Haut zeigt robuste Unterschriften der Krankheit, die in den Profilen der Abschrift der explantierten Fibroblasten unvollst&auml;ndig wiedergegeben werden.

Per determinare se i campioni bioptici ottenuti da sclerosi sistemica (SSc) lesioni mostrano un profilo caratteristico gene, se quel profilo gene &egrave; mantenuto in fibroblasti coltivati da SSc campioni di biopsia della pelle e se risultati da tessuti ottenuti da diversi centri clinici possono essere combinati per produrre utili osservazioni in questa malattia rara.

Gene profiling della pelle sclerodermia rivela robuste firme della malattia che imperfettamente sono riflesse nei profili di trascrizione dei fibroblasti espiantati.

&#x751F;&#x691C;&#x691C;&#x4F53;&#x5168;&#x8EAB;&#x6027;&#x786C;&#x5316;&#x75C7; (SSc) &#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x75C5;&#x5909;&#x306F;&#x7279;&#x5FB4;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x8868;&#x793A;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B; SSc &#x76AE;&#x819A;&#x751F;&#x691C;&#x6A19;&#x672C;&#x304B;&#x3089;&#x57F9;&#x990A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x73CD;&#x3057;&#x3044;&#x75C5;&#x6C17;&#x3067;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5F37;&#x76AE;&#x75C7;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168; explanted &#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306B;&#x53CD;&#x6620;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x7F72;&#x540D;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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Over the last decade, gene expression microarrays have had a profound impact on biomedical research. The diversity of platforms and analytical methods available to researchers have made the comparison of data from multiple platforms challenging. In this study, we describe a framework for comparisons across platforms and laboratories. We have attempted to include nearly all the available commercial and 'in-house' platforms. Using probe sequences matched at the exon level improved consistency of measurements across the different microarray platforms compared to annotation-based matches. Generally, consistency was good for highly expressed genes, and variable for genes with lower expression values as confirmed by quantitative real-time (QRT)-PCR. Concordance of measurements was higher between laboratories on the same platform than across platforms. We demonstrate that, after stringent preprocessing, commercial arrays were more consistent than in-house arrays, and by most measures, one-dye platforms were more consistent than two-dye platforms.

A sequence-oriented comparison of gene expression measurements across different hybridization-based technologies.

Durant la derni&egrave;re d&eacute;cennie, gene expression microarrays ont eu un impact profond sur la recherche biom&eacute;dicale. La diversit&eacute; des plates-formes et des m&eacute;thodes d&#39;analyse disponibles aux chercheurs ont fait la comparaison des donn&eacute;es de plusieurs plates-formes difficiles. Dans cette &eacute;tude, les auteurs d&eacute;crivent un cadre pour les comparaisons sur plusieurs plates-formes et laboratoires. Nous avons tent&eacute; d&#39;inclure presque toutes les plateformes commerciales et &laquo; in House &raquo; disponibles. En utilisant des s&eacute;quences de sonde correspondait &agrave; la coh&eacute;rence am&eacute;lior&eacute;e niveau exon de mesures sur les plateformes microarray diff&eacute;rentes par rapport aux matches ax&eacute;e sur l&#39;annotation. En g&eacute;n&eacute;ral, coh&eacute;rence &eacute;tait bon pour les g&egrave;nes exprim&eacute;s fortement et variable pour les g&egrave;nes &agrave; expression inf&eacute;rieure des valeurs comme l&#39;a confirm&eacute; en temps r&eacute;el quantitative (QRT)-PCR. Concordance des mesures a &eacute;t&eacute; plus &eacute;lev&eacute; entre les laboratoires sur la m&ecirc;me plateforme que les plates-formes. Nous d&eacute;montrons que, apr&egrave;s un pr&eacute;traitement rigoureuses, baies commerciales &eacute;taient plus uniformes que les baies internes et par la plupart des mesures, un colorant plates-formes &eacute;taient plus uniformes que les plates-formes de deux colorants.

Une comparaison ax&eacute;e sur la s&eacute;quence des mesures d&#39;expression de g&egrave;ne dans diff&eacute;rentes technologies bas&eacute;es sur l&#39;hybridation.

Im letzten Jahrzehnt hatten Gen Ausdruck Microarrays eine profunde Auswirkung auf biomedizinische Forschung. Die Vielfalt der Plattformen und Analysemethoden Forschern zur Verf&uuml;gung habe den Vergleich von Daten aus mehreren Plattformen herausfordernd. In dieser Studie beschreiben wir einen Rahmen f&uuml;r die Vergleiche auf unterschiedlichen Plattformen und Labors. Wir haben versucht, die fast alle verf&uuml;gbaren kommerziellen und &quot;Inhouse&quot; Plattformen enthalten. Mit Sonde Sequenzen bei der Exon Ebene verbesserte Konsistenz der Messungen &uuml;ber die verschiedenen Microarray-Plattformen im Vergleich zu Anmerkung-basierte Spiele abgestimmt. Allgemein, Konsistenz war gut f&uuml;r stark exprimierten Genen und Variable f&uuml;r Gene mit niedriger Ausdruck Werte wie quantitative Real-Time (QRT) best&auml;tigt-PCR. Konkordanz der Messungen lag zwischen Laboratorien auf derselben Plattform als plattform&uuml;bergreifend. Wir zeigen, dass nach strengen Vorverarbeitung, kommerzielle Arrays konsistenter als Inhouse-Arrays, und durch die meisten Ma&szlig;nahmen, eins-Farbstoff-Plattformen konsistenter als zwei-Farbstoff-Plattformen waren.

Ein Sequenz-orientierte Vergleich der Gen-Ausdruck-Messungen in verschiedenen Hybridation basierenden Technologien.

Nell&#39;ultimo decennio, microarrays di espressione genica hanno avuto un profondo impatto sulla ricerca biomedica. La diversit&agrave; delle piattaforme e dei metodi analitici disponibili per i ricercatori hanno fatto il confronto dei dati da pi&ugrave; piattaforme impegnativo. In questo studio, descriviamo un quadro per i confronti su piattaforme e laboratori. Abbiamo cercato di includere quasi tutte le piattaforme disponibili &#39;in loco&#39; e commerciale. Utilizzando sequenze di sonda abbinati all&#39;esone livello consistenza migliorata delle misurazioni attraverso le piattaforme microarray differenti rispetto alle partite di annotazione. In genere, consistenza era buona per geni altamente espressi, e valori di variabile per geni con espressione inferiore come confermato da quantitativa in tempo reale (QRT)-PCR. Concordanza delle misure era superiore tra laboratori sulla stessa piattaforma di piattaforme. Dimostriamo che, dopo severi pre-elaborazione, matrici commerciali erano pi&ugrave; coerente di matrici in-House e dalla maggior parte delle misure, un colorante piattaforme erano pi&ugrave; coerente di tintura di due piattaforme.

Un confronto orientato alla sequenza di misurazioni di espressione genica attraverso diverse tecnologie di ibridazione.

&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B1;&#x30A4;&#x30C9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x6DF1;&#x3044;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x304C;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3084;&#x5206;&#x6790;&#x624B;&#x6CD5;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x6311;&#x6226;&#x7684;&#x306A;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3092;&#x4F5C;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3084;&#x7814;&#x7A76;&#x6240;&#x9593;&#x3067;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x67A0;&#x7D44;&#x307F;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307B;&#x307C;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5546;&#x696D;&#x3068; &#39;&#x30A4;&#x30F3;&#x30CF;&#x30A6;&#x30B9;&#39; &#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A66;&#x307F;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x5411;&#x4E0A;&#x306E;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3067;&#x30A2;&#x30CE;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x4E00;&#x81F4;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4; &#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x9593;&#x3067;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x826F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x4F4E;&#x3044;&#x5F0F;&#x306E;&#x5909;&#x6570;&#x5024;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E; (QRT) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;-PCR&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC; &#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x5BA4;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x540C;&#x3058;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x9593;&#x306B;&#x9AD8;&#x304B;&#x3063;&#x305F;.&#x6211;&#x3005; &#x53B3;&#x3057;&#x3044;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x5F8C;&#x5546;&#x696D;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306F;&#x793E;&#x5185;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x5BFE;&#x7B56;&#x3067;&#x306F;&#x3001;1 &#x3064;&#x8272;&#x7D20;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; 2 &#x8272;&#x7D20;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x6307;&#x5411;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x4EA4;&#x914D;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3002;

&#xC9C0;&#xB09C; 10 &#xB144;&#xAC04; &#xC9C4; &#xC2DD; microarrays &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC758;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAE4A;&#xC740; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xB07C;&#xCCE4;&#xB2E4;. &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xBC0F; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xB3C4;&#xC804; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC0C1;&#xC5C5; &#xBC0F; &#39;&#xC0AC;&#xB0B4;&#39; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB824;&#xACE0; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xC8FC;&#xC11D; &#xAE30;&#xBC18;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB2E4;&#xB978; microarray &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; exon &#xC218;&#xC900; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC77C;&#xAD00;&#xC131;&#xC5D0; &#xC77C;&#xCE58; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC77C;&#xAD00;&#xC131; &#xB192;&#xC740; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC88B;&#xC558;&#xC5B4;&#xC694; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCC0;&#xC218; &#xAC12;&#xC744; &#xC815;&#xB7C9; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; (QRT)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778;-PCR. &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xC6A9;&#xC5B4; &#xC0C9;&#xC778; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xC0AC;&#xC774; &#xB354; &#xB192;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;, &#xC5C4;&#xACA9;&#xD55C; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC; &#xD6C4; &#xC0C1;&#xC5C5; &#xBC30;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xB0B4; &#xBC30;&#xC5F4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xACE0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC870;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD55C; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; 2 &#xC5FC;&#xB8CC; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC77C;&#xAD00;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E4;&#xB978; &#xAD50; &#xC7A1; &#xAE30;&#xBC18; &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xCE21;&#xC815; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC9C0;&#xD5A5; &#xBE44;&#xAD50;.

En la &uacute;ltima d&eacute;cada, microarrays de expresi&oacute;n g&eacute;nica han tenido un profundo impacto en la investigaci&oacute;n biom&eacute;dica. La diversidad de plataformas y m&eacute;todos anal&iacute;ticos disponibles a los investigadores hicieron la comparaci&oacute;n de datos de m&uacute;ltiples plataformas desafiante. En este estudio, se describe un marco para las comparaciones entre plataformas y laboratorios. Hemos intentado incluir casi todas las plataformas comerciales y &#39;internas&#39; disponibles. Usando secuencias de sonda emparejado en el ex&oacute;n nivel consistencia mejorada de mediciones a trav&eacute;s de las plataformas de microarray diferente en comparaci&oacute;n con los partidos basados en anotaci&oacute;n. Generalmente, la consistencia era bueno para genes altamente expresados, y valores de variable de genes con expresi&oacute;n inferior seg&uacute;n lo confirmado por cuantitativa en tiempo real (QRT)-PCR. Concordancia de las mediciones fue mayor entre los laboratorios en la misma plataforma que a trav&eacute;s de plataformas. Demostramos que, despu&eacute;s de rigurosos preprocesamiento, arreglos comerciales eran m&aacute;s constantes que arreglos internos, y por la mayor&iacute;a de las medidas, un tinte plataformas eran m&aacute;s constantes que tinte dos plataformas.

Una comparaci&oacute;n orientada a secuencia de mediciones de expresi&oacute;n del gen a trav&eacute;s de diferentes tecnolog&iacute;as basadas en la hibridaci&oacute;n.

&#x4EE5;&#x524D;&#x53D1;&#x5E03;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x786C;&#x76AE;&#x75C5; (SSc) &#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5C55;&#x793A;&#x6C34;&#x5E73;&#x5347;&#x9AD8;&#x7684;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x2170; &#x578B;&#x53D7;&#x4F53; (TGFbetaRI)&#x3002;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6982;&#x62EC;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6761;&#x4EF6;&#x6210;&#x7ACB;&#x7531;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; (AdTGFbetaRI) TGFbetaRI &#x63A7;&#x5236;&#x76AE;&#x80A4;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x8FDB;&#x884C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; TGFbetaRI &#x5728;&#x5357;&#x5357;&#x5408;&#x4F5C;&#x4E2D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x540E;&#x679C;&#x3002;

&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x53D7;&#x4F53; I &#x578B;&#x548C;&#x4E0A;&#x8C03;&#x7684;&#x77E9;&#x9635;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF1A; &#x4E00;&#x79CD;&#x786C;&#x76AE;&#x75C5;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Previously published studies have demonstrated that a majority of systemic sclerosis (SSc) fibroblasts exhibit elevated levels of transforming growth factor beta type I receptor (TGFbetaRI). An experimental model that recapitulates this condition was established in control dermal fibroblasts by titrating the dose of adenovirus vector expressing TGFbetaRI (AdTGFbetaRI). The present study was undertaken to determine the functional consequences of increased levels of TGFbetaRI in SSc.

Increased levels of transforming growth factor beta receptor type I and up-regulation of matrix gene program: A model of scleroderma.

Des &eacute;tudes d&eacute;j&agrave; publi&eacute;es ont d&eacute;montr&eacute; que la majorit&eacute; des fibroblastes de la scl&eacute;rodermie syst&eacute;mique (SSc) pr&eacute;sentent des niveaux &eacute;lev&eacute;s de facteur de croissance transformant b&ecirc;ta du r&eacute;cepteur (TGFbetaRI) de type I. Un mod&egrave;le exp&eacute;rimental qui r&eacute;capitule cette condition a &eacute;t&eacute; cr&eacute;&eacute; dans les fibroblastes dermiques contr&ocirc;le par titrage de la dose de vecteurs ad&eacute;novirus exprimant TGFbetaRI (AdTGFbetaRI). La pr&eacute;sente &eacute;tude visait &agrave; d&eacute;terminer les cons&eacute;quences fonctionnelles des niveaux accrus de TGFbetaRI dans le SSc.

Des niveaux accrus de transforming growth factor receptor de b&ecirc;ta de type I et vers le haut-r&egrave;glement du programme de g&egrave;ne de matrice : un mod&egrave;le de la scl&eacute;rodermie.

Bereits ver&ouml;ffentlichte Studien haben gezeigt, dass eine Mehrheit der Systemische Sklerose (SSc) Fibroblasten zeigen erh&ouml;hte Konzentrationen von transforming-Growth-Factor Beta Typ I Rezeptor (TGFbetaRI). Ein experimentelles Modell, das diese Bedingung rekapituliert wurde im Steuerelement dermalen Fibroblasten vom titrating der Dosis von Adenovirus-Vektor Ausdr&uuml;cken TGFbetaRI (AdTGFbetaRI) eingerichtet. Die vorliegende Studie wurde durchgef&uuml;hrt, um zu bestimmen, die funktionellen Folgen der umfassendere TGFbetaRI im SSc.

Erh&ouml;hte Niveaus der Transformation von Wachstumsfaktor-Beta-Rezeptor Typ I und oben-Regelung der Matrix-gen-Programm: ein Modell der Sklerodermie.

Studi precedentemente pubblicati hanno dimostrato che una maggioranza di fibroblasti di sclerosi sistemica (SSc) presentano livelli elevati di trasformazione di fattore di crescita beta tipo I recettori (TGFbetaRI). Un modello sperimentale che riassume questa condizione &egrave; stato fondato in fibroblasti dermici controllo di titolazione della dose di vettore dell&#39;adenovirus esprimendo TGFbetaRI (AdTGFbetaRI). Il presente studio &egrave; stato intrapreso per determinare le conseguenze funzionali dell&#39;aumento dei livelli di TGFbetaRI in SSc.

Aumento dei livelli di trasformazione di fattore di crescita recettore beta tipo I e up-regolamento del programma gene matrix: un modello di sclerodermia.

&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x51FA;&#x7248;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x5168;&#x8EAB;&#x6027;&#x786C;&#x5316;&#x75C7; (SSc) &#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x5C55;&#x793A;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5165;&#x529B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (TGFbetaRI)&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3059;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5236;&#x5FA1;&#x771F;&#x76AE;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; TGFbetaRI (AdTGFbetaRI) &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7528;&#x91CF;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;SSc &#x306E; TGFbetaRI &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x578B;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;: &#x5F37;&#x76AE;&#x75C7;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3002;

&#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAC8C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xACBD;&#xD654; (SSc) &#xAC8C;&#xC7AC;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC804;&#xC2DC; &#xC785;&#xC99D; &#xB098; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TGFbetaRI)&#xB97C; &#xC785;&#xB825; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC870;&#xAC74;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD53C;&#xBD80; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; titrating TGFbetaRI (AdTGFbetaRI)&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Ssc&#xC5D0; Tgfbetari&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xACB0;&#xACFC; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xCC29;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC785;&#xB825; I&#xC640; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xC5C5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;: scleroderma&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;.

Estudios previamente publicados han demostrado que la mayor&iacute;a de los fibroblastos de la esclerosis sist&eacute;mica (SSc) exhiben niveles elevados de factor de crecimiento transformante beta del receptor (TGFbetaRI) de tipo I. Un modelo experimental que recapitula esta condici&oacute;n fue establecido en fibroblastos d&eacute;rmicos control por valorar la dosis del vector de adenovirus expresando TGFbetaRI (AdTGFbetaRI). El presente estudio se realiz&oacute; para determinar las consecuencias funcionales de aumento en los niveles de TGFbetaRI en SSc.

Los niveles crecientes de transformar el receptor de factor de crecimiento beta tipo I y para arriba-regulaci&oacute;n del programa de gene de matriz: un modelo del escleroderma.

&#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC778;&#xC790; (TNF) superfamily &#xD68C;&#xC6D0; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC744; &#xBC1B;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. Apoptosis (TWEAK)&#xC758; TNF &#xAC19;&#xC740; &#xC57D;&#xD55C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C;, &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; TNF &#xAC00;&#xC871; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xCE74;&#xC778;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; 14 (Fn14)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xBCF4;&#xB0B4;&#xB294;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;.

&#xD305; &#xACA8; &#xBCF4;&#xACE0;/Fn14 &#xD1B5;&#xB85C;: &#xC7C1;&#xC774;/&#xC7A5;&#xB0B4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xCD95; &#xD1B5;&#xD574; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC7A5;&#xC758; &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC911;&#xBCF5; &#xC5ED;&#xD560;.

Miembros de la Superfamilia del factor de necrosis tumoral (TNF) han atra&iacute;do la atenci&oacute;n como nuevas dianas terap&eacute;uticas para el tratamiento de la enfermedad inflamatoria. TNF-como d&eacute;bil inductor de apoptosis (TWEAK) es una &uacute;nica, multifuncional TNF familia citoquina que se&ntilde;ala a trav&eacute;s de su receptor, mol&eacute;cula inducible por factor de crecimiento de fibroblasto 14 (Fn14). El papel de esta v&iacute;a en el intestino no se ha divulgado previamente.

TWEAK/Fn14 v&iacute;a: un papel no redundante en da&ntilde;o intestinal en ratones a trav&eacute;s de un eje de c&eacute;lula epitelial intestinal TWEAK.

&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; (TNF) &#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x9776;&#x70B9;&#x6CBB;&#x7597;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x5F15;&#x8D77;&#x6CE8;&#x610F;&#x3002;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x6837;&#x51CB;&#x4EA1;&#x5FAE;&#x5F31;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5242; (&#x8C03;&#x6574;) &#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x5BB6;&#x65CF;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x78B1;&#x6027;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5206;&#x5B50; 14 (Fn14)&#x3002;&#x5C1A;&#x672A;&#x62A5;&#x544A;&#x6B64;&#x8DEF;&#x5F84;&#x5728;&#x80A0;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x8C03;&#x6574;/Fn14 &#x9014;&#x5F84;&#xFF1A; &#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x6574;/&#x80A0;&#x9053;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5C0F;&#x80A0;&#x9ECF;&#x819C;&#x635F;&#x5BB3;&#x4E86;&#x975E;&#x5197;&#x4F59;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Tumor necrosis factor (TNF) superfamily members have attracted attention as new therapeutic targets for treating inflammatory disease. TNF-like weak inducer of apoptosis (TWEAK) is a unique, multifunctional TNF family cytokine that signals through its receptor, fibroblast growth factor-inducible molecule 14 (Fn14). The role of this pathway in the intestine has not been previously reported.

TWEAK/Fn14 pathway: a nonredundant role in intestinal damage in mice through a TWEAK/intestinal epithelial cell axis.

Facteur de n&eacute;crose tumorale (TNF) membres de la superfamille ont attir&eacute; l&#39;attention comme nouvelles cibles th&eacute;rapeutiques pour le traitement des maladies inflammatoires. TNF-comme faible inducteur de l&#39;apoptose (TWEAK) est une cytokine famille TNF &agrave; la fois unique et multifonctionnelle qui signale gr&acirc;ce &agrave; son r&eacute;cepteur, la mol&eacute;cule inductible par facteur de croissance des fibroblastes 14 (Fn14). Le r&ocirc;le de cette voie dans l&#39;intestin n&#39;a pas &eacute;t&eacute; signal&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment.

Voie de TWEAK/Fn14 : un r&ocirc;le non redondant dans les l&eacute;sions intestinales chez les souris par un axe de cellules &eacute;pith&eacute;liales TWEAK/intestinale.

Tumor-Nekrose-Faktor (TNF) &Uuml;berfamilie Mitglieder haben Aufmerksamkeit erregt, als neue therapeutische Ziele f&uuml;r die Behandlung der entz&uuml;ndlichen Erkrankung. TNF-wie schwacher Induktor von Apoptosis (TWEAK) ist eine einzigartige, multifunktionale TNF Familie Cytokine, die durch seinen Rezeptor, Fibroblasten-Wachstumsfaktor-inducible Molek&uuml;l 14 (Fn14) signalisiert. Die Rolle von diesem Weg im Darm wurde bisher nicht berichtet.

ZWICKEN/Fn14 Weg: ein nicht redundantes Rolle im Darm Sch&auml;den bei M&auml;usen durch ein ZWICKEN/intestinalen Epithelzellen-Achse.

Membri superfamily di fattore di necrosi tumorale (TNF) hanno attirato l&#39;attenzione come nuovi bersagli terapeutici per il trattamento delle malattie infiammatorie. TNF-come debole induttore dell&#39;apoptosi (TWEAK) &egrave; un&#39;unica, multifunzionale TNF famiglia citochina che segnali attraverso il suo recettore, molecola inducibile di fattore di crescita dei fibroblasti 14 (Fn14). Il ruolo di questo percorso nell&#39;intestino non &egrave; stato segnalato in precedenza.

TWEAK/Fn14 pathway: un ruolo nonredundant danni intestinali nei topi attraverso un asse delle cellule epiteliali intestinali/TWEAK.

&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; (TNF) &#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6CE8;&#x76EE;&#x3092;&#x96C6;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TNF &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5F31;&#x3044;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B5; &#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#xFF08;&#x5FAE;&#x8ABF;&#x6574;&#xFF09; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x8A98;&#x5C0E;&#x5206;&#x5B50; 14 (Fn14) &#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD; TNF &#x5BB6;&#x65CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8178;&#x7BA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x5FAE;&#x8ABF;&#x6574;/Fn14 &#x7D4C;&#x8DEF;&#xFF1A; &#x5FAE;&#x8ABF;&#x6574;/&#x8178;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x8EF8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8178;&#x7BA1;&#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x975E;&#x5197;&#x9577;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x5206;&#x5316;&#x540C;&#x65F6;&#x6D4F;&#x89C8;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x5468;&#x671F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x662F;&#x5426;&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x7814;&#x7A76;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80CE;&#x809D;&#x4F53;&#x5185;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x6210;&#x5904;&#x7406;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; CD71 &#x6807;&#x8BC6;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x4E0A;&#x8C03;&#x5339;&#x914D;&#x6027;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE; S &#x9636;&#x6BB5;&#x7D27;&#x5BC6;&#x540C;&#x6B65;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5185;&#x8FD9; DNA &#x7684;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4EE5;&#x540E;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x662F;&#x5206;&#x5316;&#x4EA4;&#x6362;&#x673A;&#x7EC4;&#x6210;&#x5176;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x8BA1;&#x65F6;&#x662F;&#x4EE5;&#x524D;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x540C;&#x65F6;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x8FC7;&#x6E21;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x63AA;&#x65BD;&#x5305;&#x62EC;&#x4FC3;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x6210;&#x7D20;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3001; &#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;-1&#x3001; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x5207;&#x6362;&#x5230;&#x6D3B;&#x6027;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x6784;&#x8C61;&#x5728; &beta;-&#x73E0;&#x86CB;&#x767D;&#x80BD;&#x94FE;&#x8F68;&#x8FF9;&#x53D1;&#x75C5;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x5730;&#x8BF4;&#xFF0C;S &#x9636;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x5C55;&#x662F;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x5F62;&#x6210;&#x6211;&#x8FC7;&#x654F;&#x7F51;&#x7AD9;&#x548C; DNA &#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x5728;&#x6B64;&#x8F68;&#x8FF9;&#x3002;&#x673A;&#x68B0;&#x5316;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x6B64;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#x5173;&#x952E;&#x4EA4;&#x4ED8; S &#x9636;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x5C55;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176; p57(KIP2) &#x4E0B;&#x8C03;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; PU.1&#xFF0C;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 1 &#x51FD;&#x6570;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x56E0;&#x6B64;&#x7A81;&#x51FA;&#x65B0;&#x578B;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x9000;&#x51FA;&#x5176;&#x5DF2;&#x77E5;&#x51FD;&#x6570;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5C0F;&#x8BF4;&#xFF0C;PU.1 &#x8868;&#x8FBE;&#x548C; S &#x9636;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x5C55;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&quot;&#x540C;&#x6B65;&quot;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&quot;&#x9501;&#x5B9A;&quot;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x65F6;&#x949F;&#xFF0C;&#x786E;&#x4FDD;&#x5173;&#x952E;&#x5206;&#x5316;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x3002;

&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x4E00;&#x9879;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x627F;&#x8BFA;&#x6B65;&#x4E0E;&#x901A;&#x8FC7; PU.1 &#x548C; S &#x9636;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x5C55;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x65F6;&#x949F;&#x540C;&#x6B65;&#x3002;

Hematopoietic progenitors undergo differentiation while navigating several cell division cycles, but it is unknown whether these two processes are coupled. We addressed this question by studying erythropoiesis in mouse fetal liver in vivo. We found that the initial upregulation of cell surface CD71 identifies developmentally matched erythroblasts that are tightly synchronized in S-phase. We show that DNA replication within this but not subsequent cycles is required for a differentiation switch comprising rapid and simultaneous committal transitions whose precise timing was previously unknown. These include the onset of erythropoietin dependence, activation of the erythroid master transcriptional regulator GATA-1, and a switch to an active chromatin conformation at the Î²-globin locus. Specifically, S-phase progression is required for the formation of DNase I hypersensitive sites and for DNA demethylation at this locus. Mechanistically, we show that S-phase progression during this key committal step is dependent on downregulation of the cyclin-dependent kinase p57(KIP2) and in turn causes the downregulation of PU.1, an antagonist of GATA-1 function. These findings therefore highlight a novel role for a cyclin-dependent kinase inhibitor in differentiation, distinct to their known function in cell cycle exit. Furthermore, we show that a novel, mutual inhibition between PU.1 expression and S-phase progression provides a "synchromesh" mechanism that "locks" the erythroid differentiation program to the cell cycle clock, ensuring precise coordination of critical differentiation events.

A key commitment step in erythropoiesis is synchronized with the cell cycle clock through mutual inhibition between PU.1 and S-phase progression.

Prog&#xE9;niteurs h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques subissent une diff&#xE9;renciation lors de la navigation de plusieurs cycles de division cellulaire, mais il ne sait pas si ces deux processus sont coupl&#xE9;s. Nous avons abord&#xE9; cette question en &#xE9;tudiant l&#x26;#39;&#xE9;rythropo&#xEF;&#xE8;se dans le foie du f&#x153;tus de souris in vivo. Nous avons constat&#xE9; que la r&#xE9;gulation &#xE0; la hausse initiale de la surface des cellules CD71 identifie d&#xE9;veloppemental correspond &#xE9;rythroblastes qui sont &#xE9;troitement synchronis&#xE9;s en phase S. Nous montrons que la r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN dans cela, mais les cycles ult&#xE9;rieurs pas est n&#xE9;cessaire pour un commutateur de diff&#xE9;renciation comprenant rapide et simultan&#xE9;e des transitions d&#x26;#39;incarc&#xE9;ration dont le calendrier pr&#xE9;cis &#xE9;tait auparavant inconnu. , Notamment le d&#xE9;but de la d&#xE9;pendance &#xE9;rythropo&#xEF;&#xE9;tine, l&#x26;#39;activation de la transcription r&#xE9;gulateur ma&#xEE;tre &#xE9;rythro&#xEF;de GATA-1, et un commutateur &#xE0; une conformation de chromatine connexion au niveau du locus &#x3B2;-globine. En particulier, la progression de la phase S est n&#xE9;cessaire pour la formation de sites hypersensibles de DNase I et pour la d&#xE9;m&#xE9;thylation d&#x26;#39;ADN &#xE0; ce locus. M&#xE9;caniquement, nous montrons que S-phase de progression au cours de cette &#xE9;tape cl&#xE9; de renvoi d&#xE9;pend de la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de la kinase cycline-d&#xE9;pendante p57 (KIP2) et dans des causes &#xE0; son tour la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de PU.1, un antagoniste de la fonction de GATA-1. Ces r&#xE9;sultats soulignent donc un nouveau r&#xF4;le pour un inhibiteur de kinases cycline-d&#xE9;pendantes dans la diff&#xE9;renciation, distincte de leur fonction connue dans la sortie du cycle cellulaire. En outre, nous montrons que d&#x26;#39;un roman, l&#x26;#39;inhibition mutuelle entre PU.1 expression et S-phase de progression fournit une &#x26;quot;synchronis&#xE9;e&#x26;quot; m&#xE9;canisme qui &#xAB;verrouille&#xBB; le programme de diff&#xE9;renciation &#xE9;rythro&#xEF;de &#xE0; l&#x26;#39;horloge du cycle cellulaire, en assurant la coordination pr&#xE9;cise des &#xE9;v&#xE9;nements de diff&#xE9;renciation essentiels.

Une &#xE9;tape cl&#xE9; dans l&#x26;#39;&#xE9;rythropo&#xEF;&#xE8;se engagement est synchronis&#xE9; avec l&#x26;#39;horloge du cycle cellulaire Gr&#xE2;ce inhibition mutuelle entre PU.1 et S-phase de progression

H&auml;matopoetische Vorl&auml;uferzellen unterziehen Differenzierung w&auml;hrend der Navigation mehrere Zellteilung-Zyklen, aber es ist nicht bekannt, ob diese beiden Prozesse gekoppelt sind. Wir widmeten sich dieser Frage durch das Studium der Erythropoese in Maus fetalen Leber in-vivo. Wir fanden, dass die anf&auml;ngliche Hochregulation der Zelloberfl&auml;che, die entwicklungspolitisch CD71 identifiziert Erythroblasten zugeordnet, die in S-Phase eng synchronisiert werden. Wir zeigen, dass die DNA-Replikation innerhalb dieses aber nicht nachfolgende Zyklen wird ben&ouml;tigt f&uuml;r eine Differenzierung-Schalter, bestehend aus schnellen und gleichzeitige Einlieferung &Uuml;berg&auml;nge deren zeitgenaues zuvor unbekannt war. Dazu geh&ouml;ren den Beginn der Erythropoetin-Abh&auml;ngigkeit, Aktivierung der Erythroid Meister transcriptional Regulator GATA-1 und eine Umstellung auf eine aktive Chromatin-Konformation, bei der &beta;-Globin Locus. Insbesondere Fortschreiten der S-Phase ist erforderlich f&uuml;r die Bildung von DNase I &uuml;berempfindlich Websites und f&uuml;r DNA-Demethylierung am dieses Locus. Mechanistisch, zeigen wir, dass die S-Phase Progression w&auml;hrend dieses Schritts wichtige Zwangseinweisung ist abh&auml;ngig von Heraufregulation des cyclin-abh&auml;ngige Kinase-p57(KIP2) und wiederum f&uuml;hrt die Heraufregulation des PU.1, ein Antagonist des GATA-1-Funktion. Diese Ergebnisse unterstreichen daher eine neue Rolle f&uuml;r ein cyclin-abh&auml;ngige Kinasehemmer bei Differenzierung, unterschiedliche an ihre bekannten Funktion im Zellzyklus-Exit. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass einen Roman, gegenseitige Hemmung zwischen PU.1 Ausdruck und Fortschreiten der S-Phase bietet einen &quot;vollsynchronisiertes&quot; Mechanismus, der das Programm Erythroid Differenzierung der Zellzyklus-Uhr, eine genaue Koordinierung der kritische Differenzierung Ereignisse &quot;aufh&auml;ngt&quot;.

Ein wichtige Verpflichtung Schritt bei der Erythropoese wird mit der Uhr des Zellzyklus durch gegenseitige Hemmung zwischen PU.1 und S-Phasen Fortschreiten synchronisiert.

Progenitori ematopoietici subiscono differenziazione durante la navigazione di diversi cicli di divisione cellulare, ma non &egrave; noto se questi due processi sono accoppiati. Abbiamo rivolto questa domanda studiando l&#39;eritropoiesi nel fegato fetale di topo in vivo. Abbiamo trovato che la sovraregolazione di superficie cellulare che CD71 identifica inerente allo sviluppo iniziale corrispondenza eritroblasti strettamente sincronizzati in fase S. Mostriamo che la replicazione del DNA all&#39;interno di questo, ma non successivi cicli &egrave; richiesto per un interruttore di differenziazione che comprende le transizioni impegnativa rapida e simultanea cui timing preciso era precedentemente sconosciuto. Questi includono l&#39;insorgenza della dipendenza di eritropoietina, attivazione del regolatore trascrizionale master eritroidi GATA-1 e un interruttore per una conformazione della cromatina attiva presso il locus di &beta;-globina. In particolare, progressione di S-fase &egrave; necessaria per la formazione della dnasi I siti ipersensibili e per demetilazione del DNA a questo locus. Meccanicistico, mostriamo che progressione fase S durante questo passaggio chiave evasive dipende downregulation del p57(KIP2) di chinasi ciclina-dipendenti e a sua volta provoca la downregulation del PU.1, un antagonista della funzione GATA-1. Questi risultati evidenziano pertanto un ruolo romanzo per un inibitore delle chinasi ciclina-dipendente nella differenziazione, distinti per la loro funzione conosciuta in uscita del ciclo cellulare. Inoltre, ci mostrano che un romanzo, inibizione reciproca tra espressione PU.1 e progressione fase S fornisce un meccanismo di &quot;sincronizzato&quot; che si &quot;blocca&quot; il programma di differenziazione eritroide per l&#39;orologio del ciclo cellulare, assicurare un coordinamento preciso degli eventi critici di differenziazione.

Un passo fondamentale impegno nella eritropoiesi &egrave; sincronizzato con l&#39;orologio del ciclo cellulare attraverso l&#39;inibizione reciproca tra PU.1 e S-fase di progressione.

&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x30CA;&#x30D3;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x5DEE;&#x5225;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x304C;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80CE;&#x5150;&#x306E;&#x809D;&#x81D3;&#x3067;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;CD71&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;S&#x671F;&#x306B;&#x540C;&#x671F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x767A;&#x9054;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x5185;&#x3067;&#x306E;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x540C;&#x6642;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x793A;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B9;&#x30ED;&#x30DD;&#x30A8;&#x30C1;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;GATA-1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3B2;-&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3078;&#x306E;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;S&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x200B;&#x200B;&#x306F;DNase I&#x9AD8;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DNA&#x8131;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x69CB;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x4E2D;&#x306B;S&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x200B;&#x200B;&#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;P57&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xFF08;KIP2&#xFF09;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x9806;&#x756A;&#x306B;PU.1&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;GATA-1&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30BF;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x51FA;&#x53E3;&#x3067;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;PU.1&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;S&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3001;&#x76F8;&#x4E92;&#x6291;&#x5236;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x8ABF;&#x6574;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403;&#x5206;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092; &#x26;quot;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x26;quot;&#x3068; &#x26;quot;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AF;&#x30ED;&#x26;quot;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x7523;&#x751F;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;PU.1&#x3068;S&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x200B;&#x200B;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x540C;&#x671F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;

Hematopoietic progenitors &#xBC1B;&#xC544;&#xC57C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC8FC;&#xAE30;&#xB97C; &#xD0D0;&#xC0C9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC54C;&#xC774; &#xB450; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD0DC;&#xC544; &#xAC04; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xB97C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xD574;&#xACB0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; CD71 &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC1C;&#xB2EC;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; upregulation S &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE34;&#xBC00; &#xD558; &#xAC8C; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB418;&#xB294; erythroblasts&#xC744; &#xC77C;&#xCE58; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC774; &#xB0B4; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xD6C4;&#xC18D; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D;&#xC740; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xBE60;&#xB974;&#xACE0; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC5B8; &#xC9C8; &#xC804;&#xD658; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE48;&#xD608;&#xC99D; &#xC758;&#xC874;, erythroid &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; transcriptional &#xADE4; GATA-1&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &beta;-globin &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131; chromatin &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC758; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, S &#xC0C1; &#xC9C4;&#xD589;&#xC740; &#xB0B4;&#xAC00; &#xACFC;&#xBBFC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; DNase &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xC774; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; DNA demethylation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. Mechanistically, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; S &#xC0C1; &#xC9C4;&#xD589;&#xC774; &#xD0A4; &#xC5B8; &#xC9C8; &#xB2E8;&#xACC4; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; p57(kip2)&#xC758; downregulation&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; PU.1, &#xAC00;&#xD0C0;-1 &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xC801;&#xC5D0; &#xAC8C; downregulation&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBD84;&#xD654;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xCD9C;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C;&#xC5D0; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC15;&#xC870;. PU.1 &#xC2DD;&#xACFC; S &#xC0C1; &#xC9C4;&#xD589; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5B5;&#xC81C; &quot;&#xC7A0;&#xAE08;&quot; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC870;&#xC815; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xD074;&#xB85D; erythroid &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &quot;synchromesh&quot; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC18C;&#xC124;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;.

&#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xD22C;&#xC785; &#xB2E8;&#xACC4; PU.1 &#xBC0F; S &#xC0C1; &#xC9C4;&#xD589; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC2DC;&#xACC4;&#xC640; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Progenitores hematopoy&#xE9;ticos someterse a la diferenciaci&#xF3;n durante la navegaci&#xF3;n de varios ciclos de divisi&#xF3;n celular, pero se desconoce si estos dos procesos se acoplan. Hemos tratado esta cuesti&#xF3;n mediante el estudio de la eritropoyesis en el h&#xED;gado de rat&#xF3;n fetal en vivo. Hemos encontrado que la activaci&#xF3;n inicial de CD71 en la superficie celular identifica el desarrollo emparejado eritroblastos que est&#xE1;n estrechamente sincronizadas en fase-S. Se demuestra que la replicaci&#xF3;n del ADN dentro de este, pero no ciclos posteriores se requiere de un interruptor de la diferenciaci&#xF3;n que comprende las transiciones r&#xE1;pidas y simult&#xE1;neas de prisi&#xF3;n preventiva, cuya fecha exacta era desconocida hasta entonces. Estos incluyen la aparici&#xF3;n de la dependencia de la eritropoyetina, la activaci&#xF3;n del regulador transcripcional eritroide maestro GATA-1, y un interruptor para una conformaci&#xF3;n activa de la cromatina en el locus &#x3B2;-globina. Espec&#xED;ficamente, la fase S progresi&#xF3;n se requiere para la formaci&#xF3;n de DNasa I sitios hipersensibles y por desmetilaci&#xF3;n del ADN en este locus. Mec&#xE1;nicamente, se muestra que la fase S progresi&#xF3;n durante esta etapa clave de internamiento depende de la regulaci&#xF3;n a la baja de la quinasa dependiente de ciclina P57 (kip2) y a su vez provoca la regulaci&#xF3;n a la baja de PU.1, un antagonista de GATA-1 funci&#xF3;n. Estos hallazgos destacan por lo tanto, un nuevo papel para un inhibidor de la quinasa dependiente de ciclina en la diferenciaci&#xF3;n, distinto a su funci&#xF3;n conocida en la salida del ciclo celular. Por otra parte, nos muestran que una novela, la inhibici&#xF3;n mutua entre PU.1 expresi&#xF3;n y la progresi&#xF3;n de la fase S proporciona una &#x26;quot;sincronizada&#x26;quot; mecanismo que &#x26;quot;bloquea&#x26;quot; el programa de diferenciaci&#xF3;n eritroide con el reloj del ciclo celular, lo que garantiza la coordinaci&#xF3;n precisa de los fen&#xF3;menos de diferenciaci&#xF3;n cr&#xED;ticos.

Un paso clave en el compromiso de la eritropoyesis est&#xE1; sincronizado con el reloj del ciclo celular mediante la inhibici&#xF3;n mutua entre PU.1 y la progresi&#xF3;n de la fase S

In the mammalian genome, 5'-CpG-3' dinucleotides are frequently methylated, correlating with transcriptional silencing. Genome-wide demethylation is thought to occur only twice during development, in primordial germ cells and in the pre-implantation embryo. These demethylation events are followed by de novo methylation, setting up a pattern inherited throughout development and modified only at tissue-specific loci. We studied DNA methylation in differentiating mouse erythroblasts in vivo by using genomic-scale reduced representation bisulfite sequencing (RRBS). Demethylation at the erythroid-specific Î²-globin locus was coincident with global DNA demethylation at most genomic elements. Global demethylation was continuous throughout differentiation and required rapid DNA replication. Hence, DNA demethylation can occur globally during somatic cell differentiation, providing an experimental model for its study in development and disease.

Global DNA demethylation during mouse erythropoiesis in vivo.

&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#xFF0C;5&#39;-&#x4E2D;&#x592E;&#x4EBA;&#x6C11;&#x653F;&#x5E9C;-3&#39; &#x7532;&#x57FA; dinucleotides &#x9891;&#x7E41;&#x5316;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7532;&#x57FA;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x53D1;&#x751F;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5728;&#x539F;&#x59CB;&#x751F;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x53EA;&#x6709;&#x4E24;&#x6B21;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7532;&#x57FA;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x88AB;&#x8DDF; de novo &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#xFF0C;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7EE7;&#x627F;&#x6574;&#x4E2A;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x4FEE;&#x6539;&#x53EA;&#x5728;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E9A;&#x786B;&#x9178;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x89C4;&#x6A21;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x4EE3;&#x8868;&#x6027; (RRBS) &#x9274;&#x522B;&#x9F20;&#x6807;&#x6027;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x7EA2;&#x7CFB;&#x7279;&#x5F02; &beta;-&#x73E0;&#x86CB;&#x767D;&#x80BD;&#x94FE;&#x8F68;&#x8FF9;&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x662F;&#x5168;&#x7403; DNA &#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x5728;&#x6700;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5143;&#x7D20;&#x4E0E;&#x91CD;&#x5408;&#x3002;&#x5168;&#x7403;&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x662F;&#x8FDE;&#x7EED;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F; DNA &#x590D;&#x5236;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;DNA &#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5168;&#x7403;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x5176;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x5168;&#x7403; DNA &#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x6210;&#x3002;

Dans le g&#xE9;nome des mammif&#xE8;res, 5&#x26;#39;-CpG-3 &#x26;#39;dinucl&#xE9;otides sont tr&#xE8;s fr&#xE9;quemment m&#xE9;thyl&#xE9;s, en corr&#xE9;lation avec le silencing transcriptionnel. L&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome d&#xE9;m&#xE9;thylation est suppos&#xE9;e se produire deux fois seulement au cours du d&#xE9;veloppement, dans les cellules germinales primordiales et dans l&#x26;#39;embryon pr&#xE9;-implantatoire. Ces &#xE9;v&#xE9;nements de d&#xE9;m&#xE9;thylation sont suivis par la m&#xE9;thylation de novo, la cr&#xE9;ation d&#x26;#39;un mod&#xE8;le h&#xE9;rit&#xE9; au long du d&#xE9;veloppement et que des modifications au niveau du tissu-sp&#xE9;cifiques loci. Nous avons &#xE9;tudi&#xE9; m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN dans la diff&#xE9;renciation des &#xE9;rythroblastes de souris in vivo en utilisant g&#xE9;nomique &#xE9;chelle r&#xE9;duite s&#xE9;quen&#xE7;age du bisulfite de repr&#xE9;sentation (SLBRRE). D&#xE9;m&#xE9;thylation &#xE0; la &#xE9;rythro&#xEF;de sp&#xE9;cifique &#x3B2;-globine locus a co&#xEF;ncid&#xE9; avec d&#xE9;m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN mondiale dans la plupart des &#xE9;l&#xE9;ments g&#xE9;nomiques. D&#xE9;m&#xE9;thylation globale a &#xE9;t&#xE9; continue tout au long de diff&#xE9;renciation et de r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN requis rapide. Par cons&#xE9;quent, d&#xE9;m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN peut se produire au niveau mondial lors de la diff&#xE9;renciation de cellules somatiques, en fournissant un mod&#xE8;le exp&#xE9;rimental pour l&#x26;#39;&#xE9;tude dans le d&#xE9;veloppement et la maladie.

Au cours de d&#xE9;m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN global &#xE9;rythropo&#xEF;&#xE8;se souris in vivo

Im S&auml;ugetier-Genom 5&#39;-CpG-3&#39; Dinucleotides sind h&auml;ufig methyliert, Korrelation mit transkriptionelle zum Schweigen. Genomweiten Demethylierung ist vermutlich nur zweimal w&auml;hrend der Entwicklung in primordialen Keimzellen und der Pr&auml;implantations Embryo auftreten. Diese Demethylierung Ereignisse folgen de Novo Methylierung, ein Muster in der gesamten Entwicklung geerbt und aktualisiert nur am Gewebe-spezifischen Loci einrichten. Wir studierten die DNA-Methylierung in Maus Erythroblasten in-vivo mithilfe von genomischen operierenden reduzierte Darstellung Bisulfit Sequenzierung (RRBS) zu unterscheiden. Demethylierung bei der Erythroid-spezifische &beta;-Globin Locus wurde mit globalen DNA-Demethylierung am meisten genomische Elemente zusammen. Globale Demethylierung wurde kontinuierlich im gesamten Differenzierung und erforderliche schnelle DNA-Replikation. Daher kann die DNA-Demethylierung Global w&auml;hrend somatische Differenzierung, die ein experimentelles Modell f&uuml;r seine Studie in Entwicklung und Krankheit auftreten.

Globale DNA-Demethylierung w&auml;hrend Maus Erythropoese in-vivo.

Nel genoma dei mammiferi, 5&#39;--CpG 3&#39; dinucleotidi sono frequentemente metilati, correlazione di silenziamento trascrizionale. Genome-wide demetilazione &egrave; pensato per accadere solo due volte durante lo sviluppo, nelle cellule germinali primordiali e nell&#39;embrione preimpianto. Questi eventi demetilazione sono seguiti da de novo metilazione, creazione di un modello ereditato per tutto lo sviluppo e modificati solo in tessuto-specifici loci. Abbiamo studiato la metilazione del DNA nel differenziare eritroblasti topo in vivo mediante sequenziamento del bisolfuro di rappresentazione ridotta su scala genomica (RRBS). Demetilazione presso il locus eritroide-specifico &beta;-globina era coincidente con global demetilazione del DNA genomic pi&ugrave; elementi. Demetilazione globale &egrave; stato continuo nel corso di differenziazione e richiesta rapida replicazione del DNA. Quindi, demetilazione del DNA pu&ograve; verificarsi a livello globale durante la differenziazione delle cellule somatiche, fornendo un modello sperimentale per il relativo studio nello sviluppo e malattia.

Global demetilazione del DNA durante l&#39;eritropoiesi topo in vivo.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001; &#x26;#39;&#x3001;5&#x26;#39;-CpG&#x306E;3&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x59CB;&#x539F;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x7740;&#x5E8A;&#x524D;&#x306E;&#x80DA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x6642;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x56DE;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8131;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x7D99;&#x627F;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;de novo&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x304C;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x898F;&#x6A21;&#x306E;&#x7E2E;&#x5C0F;&#x8868;&#x73FE;&#x91CD;&#x4E9C;&#x786B;&#x9178;&#x5869;&#x30B7;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;RRBS&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403;&#x3092;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x3B2;-&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x8131;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x9023;&#x7D9A;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;DNA&#x8131;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

in vivo&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9020;&#x8840;&#x6642;&#x306B;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;DNA&#x8131;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; 5&#39;-&#xD3EC;&#xC7A5; &#xC18C;&#xBE44;&#xC7AC;-3&#39; &#xADF8;&#xB294; &#xC790;&#xC8FC; &#xAC20; transcriptional &#xC785;&#xC744;. &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; demethylation pre-implantation &#xBC30;&#xC544;&#xC640; &#xC6D0;&#xC2DC; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB450; &#xBC88;&#xB9CC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; demethylation &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;, &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0C1;&#xC18D; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; loci&#xC5D0;&#xB9CC; &#xC218;&#xC815; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xB97C; &#xAC8C;&#xB188; &#xADDC;&#xBAA8; &#xAC10;&#xC18C; &#xD45C;&#xD604; &#xD669;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; (RRBS)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; erythroblasts vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC5D0; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. Demethylation erythroid &#xD2B9;&#xC815; &beta; globin &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC8C;&#xB188; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; DNA demethylation&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; demethylation&#xB294; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC5F0;&#xC18D;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, DNA demethylation &#xC138;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;, &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

In vivo &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xC911; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; DNA demethylation&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En el genoma de los mam&#xED;feros, 5&#x26;#39;-CpG-3 &#x26;#39;dinucle&#xF3;tidos son frecuentemente metilado, en correlaci&#xF3;n con el silenciamiento transcripcional. Genoma toda la desmetilaci&#xF3;n se cree que ocurre s&#xF3;lo dos veces durante el desarrollo, en las c&#xE9;lulas germinales primordiales y en el embri&#xF3;n antes de la implantaci&#xF3;n. Estos eventos son seguidos por desmetilaci&#xF3;n de la metilaci&#xF3;n de novo, la creaci&#xF3;n de un patr&#xF3;n heredado a trav&#xE9;s del desarrollo y modificada s&#xF3;lo en tejidos espec&#xED;ficos de los loci. Se estudi&#xF3; la metilaci&#xF3;n del ADN en la diferenciaci&#xF3;n de eritroblastos de rat&#xF3;n in vivo mediante el uso de la secuenciaci&#xF3;n gen&#xF3;mica a escala reducida de bisulfito de representaci&#xF3;n (RRB). Desmetilaci&#xF3;n en el eritroide-espec&#xED;fica &#x3B2;-globina locus fue coincidente con la desmetilaci&#xF3;n del ADN global en la mayor&#xED;a de los elementos gen&#xF3;micos. Desmetilaci&#xF3;n global fue continua a lo largo de diferenciaci&#xF3;n y replicaci&#xF3;n del ADN requerido r&#xE1;pida. Por lo tanto, desmetilaci&#xF3;n del ADN puede ocurrir a nivel mundial durante la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas, proporcionando un modelo experimental para su estudio en el desarrollo y la enfermedad.

Jeffrey R. Shearstone

Department of Pediatrics and Department of Cancer Biology

University of Massachusetts Medical School

Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay

Jeffrey R. Shearstone

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Pediatrics and Department of Cancer Biology

University of Massachusetts Medical School

Identification and Analysis of Mouse Erythroid Progenitors using the CD71/TER119 Flow-cytometric Assay

Department of Pediatrics and Department of Cancer Biology