Fabrication of Electrochemical-DNA Biosensors for the Reagentless Detection of Nucleic Acids, Proteins and Small Molecules

As medicine is currently practiced, doctors send specimens to a central laboratory for testing and thus must wait hours or days to 
receive the results. ...

University Of California Santa Barbara

&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B; DNA-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x901A;&#x8FC7;&#x8868;&#x9762;&#x589E;&#x5F3A;&#x5171;&#x632F;&#x62C9;&#x66FC;&#x6563;&#x5C04; &#xFF08;SERRS&#xFF09;&#x3002;&#x9540;&#x94F6;&#x7684; DNA &#x548C;&#x91D1;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x8BC6;&#x522B;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684; DNA &#x80DE;&#x5627;&#x5576;&#x7684; C5 &#x4F4D;&#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x548C;&#x771F;&#x6838;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#xFF0C;&#x5854;&#x5854;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x62C9;&#x66FC;&#x4E3B;&#x52A8;&#x6807;&#x7B7E;&#x548C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5173;&#x8054;&#x5F88;&#x597D;&#x5730;&#x4E0E;&#x7531;&#x5176;&#x4ED6;&#x65B9;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x4EB2;&#x7F18;&#x5173;&#x7CFB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x62C9;&#x66FC;&#x4E3B;&#x52A8;&#x6807;&#x7B7E;&#x548C;&#x53EF;&#x4E92;&#x6362;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x521B;&#x5EFA;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x8C03;&#x67E5; multiprotein &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;

&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; DNA-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x901A;&#x8FC7;&#x8868;&#x9762;&#x589E;&#x5F3A;&#x5171;&#x632F;&#x62C9;&#x66FC;&#x6563;&#x5C04;&#x3002;

We developed a new strategy to detect protein-DNA binding through surface enhanced resonance Raman scattering (SERRS). Silver-plated DNA and gold nanoparticle assemblies were used to identify sequence-specific and concentration-dependent binding of a DNA cytosine-C5-methyltransferase and the eukaryotic transcriptional regulator, TATA binding protein. Proteins were identified through specific Raman-active labels, and affinities observed correlate well with those determined by other methods. Raman-active labeling and interchangeable DNA sequences create a platform for versatile investigation of multiprotein complexes.

Detection of sequence-specific protein-DNA interactions via surface enhanced resonance Raman scattering.

Nous avons d&eacute;velopp&eacute; une nouvelle strat&eacute;gie visant &agrave; d&eacute;tecter la liaison prot&eacute;ine-ADN par l&#39;interm&eacute;diaire de surface am&eacute;lior&eacute;e r&eacute;sonance Raman scattering (SERRS). ADN plaqu&eacute; argent et or nanoparticule assembl&eacute;es ont servi &agrave; identifier la liaison s&eacute;quence-sp&eacute;cifique et concentration-d&eacute;pendante d&#39;une ADN cytosine-C5-m&eacute;thyltransf&eacute;rase et le r&eacute;gulateur transcriptionnel eucaryote, TATA binding protein. Prot&eacute;ines ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es gr&acirc;ce &agrave; des labels de Raman-actifs sp&eacute;cifiques et affinit&eacute;s observ&eacute;es &agrave; corr&eacute;ler avec celles d&eacute;termin&eacute;es par d&#39;autres m&eacute;thodes. Raman-active l&#39;&eacute;tiquetage et les s&eacute;quences d&#39;ADN interchangeables cr&eacute;ent une plate-forme pour enqu&ecirc;te polyvalente des complexes multiprot&eacute;iques.

D&eacute;tection des interactions prot&eacute;ine-ADN de s&eacute;quence-sp&eacute;cifique par surface enhanced Raman de r&eacute;sonance diffusion.

Wir entwickelten eine neue Strategie zur Erkennung von Protein-DNA-Bindung durch Oberfl&auml;che erh&ouml;hte Resonanz Raman Streuung (SERRS). Versilberte DNA und gold-Nanopartikel-Assemblys wurden zur Sequenz-spezifische und Konzentration-abh&auml;ngige Bindung eine DNA Cytosin-C5-Methyltransferase und der eukaryotischen transkriptionelle Regler, TATA verbindliches Protein zu identifizieren. Proteine wurden durch spezifische Raman-aktiv-Etiketten und Affinit&auml;ten beobachtet korrelieren gut mit jenen von anderen Methoden identifiziert. Erstellen eine Plattform f&uuml;r vielseitige Untersuchung der multiprotein komplexe, Raman-aktiven Kennzeichnung und austauschbar DNA-Sequenzen.

Erkennung von Sequenz-spezifische Protein-DNA-Wechselwirkungen &uuml;ber Oberfl&auml;che verbessert Resonanz Raman Streuung.

Abbiamo sviluppato una nuova strategia per rilevare il legame proteina-DNA attraverso la superficie maggiore risonanza Raman scattering (SERRS). DNA argentato e gli assembly delle nanoparticelle d&#39;oro sono stati utilizzati per identificare il legame sequenza-specifico e la concentrazione-dipendente di una citosina-C5-methyltransferase del DNA e il regolatore trascrizionale eucariotico, TATA binding protein. Le proteine sono state identificate attraverso specifiche etichette Raman-attivo e affinit&agrave; osservato correlano bene con quelli determinati da altri metodi. Etichettatura Raman-attivo e sequenze di DNA intercambiabili creano una piattaforma versatile indagine di complessi multiproteici.

Rilevamento delle interazioni proteina-DNA sequenza-specifico tramite superficie maggiore risonanza Raman scattering.

&#x8868;&#x9762;&#x5897;&#x5F37;&#x5171;&#x9CF4;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x6563;&#x4E71;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x6563;&#x4E71; (SERR)&#x3002;&#x9280;&#x3081;&#x3063;&#x304D; DNA &#x3068;&#x91D1;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306F; DNA &#x306E;&#x30B7;&#x30C8;&#x30B7;&#x30F3;-C5-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;&#x30BF;&#x30BF;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x76F8;&#x95A2;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x4EA4;&#x63DB;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A; DNA &#x914D;&#x5217;&#x591A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6C4E;&#x7528;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8868;&#x9762;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; DNA &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5897;&#x5F37;&#x5171;&#x9CF4;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x6563;&#x4E71;&#x3002;

&#xD45C;&#xBA74; &#xAC15;&#xD654; &#xB41C; &#xACF5;&#xBA85; &#xB77C;&#xB9CC; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-DNA&#xB97C; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC804;&#xB7B5; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC0B0;&#xB780; (SERRS). &#xC740;&#xC0C9; &#xB3C4;&#xAE08;&#xB41C; DNA&#xC640; &#xAE08; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; DNA &#xC2DC;-C5-methyltransferase &#xBC0F; &#xC9C4; &#xD575; transcriptional &#xADE4;, &#xD0C0; &#xD0C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC885;&#xC18D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xD2B9;&#xC815; &#xB77C;&#xB9CC;-&#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xBC0F; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB77C;&#xB9CC;-&#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB77C;&#xBCA8; &#xBC0F; &#xAD50;&#xD658;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; multiprotein &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4E0;&#xB2E4;.

&#xAC80;&#xC0C9; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; DNA &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xACF5;&#xBA85; &#xB77C;&#xB9CC; &#xC0B0;&#xB780;.

Hemos desarrollado una nueva estrategia para detectar la prote&iacute;na-DNA obligatorio a trav&eacute;s de la superficie mayor resonancia Raman scattering (SERR). ADN plateado y asambleas de nanopart&iacute;culas de oro fueron utilizadas para identificar la Uni&oacute;n secuencia espec&iacute;fica y dependiente de la concentraci&oacute;n de una citosina-C5-metiltransferasa de ADN y el regulador transcripcional eucariota, TATA binding protein. Las prote&iacute;nas fueron identificadas mediante etiquetas Raman-activa determinadas y afinidades observadas correlaci&oacute;n con los determinados por otros m&eacute;todos. Etiquetado Raman-activo y secuencias de ADN intercambiables crean una plataforma para la investigaci&oacute;n vers&aacute;til de Complejos Multiproteinas.

Detecci&oacute;n de interacciones prote&iacute;na-DNA de secuencia-espec&iacute;fica v&iacute;a superficie mayor resonancia Raman dispersi&oacute;n.

Aqu&#xED; nos demuestran una plataforma reactivos,, electroqu&#xED;mico para la detecci&#xF3;n espec&#xED;fica de las prote&#xED;nas que se unen al ADN de una sola o de doble hebra. El sensor est&#xE1; compuesto de un doble o de cadena sencilla, sonda de ADN redox de etiquetado que est&#xE1; unido covalentemente a un electrodo de interrogaci&#xF3;n. Al prote&#xED;na de uni&#xF3;n a la corriente derivada de la etiqueta redox se suprime, lo que indica la presencia de la diana. El uso de este enfoque que hemos fabricado sensores de silicio frente a las prote&#xED;nas de ADN de doble cadena de uni&#xF3;n TATA-box prote&#xED;na de uni&#xF3;n y M.HhaI metiltransferasa, y en contra de la SSBP un &#x200B;&#x200B;solo cap&#xED;tulo de E. coli y las prote&#xED;nas de uni&#xF3;n prote&#xED;na de replicaci&#xF3;n A los cuatro objetivos se detectan en concentraciones nanomolares , en cuesti&#xF3;n de minutos, y en un lugar conveniente, en general, f&#xE1;cilmente reutilizable, el formato de electroqu&#xED;mica. El enfoque es espec&#xED;fico; se observ&#xF3; ninguna reactividad cruzada significativa entre los sensores. Asimismo, el enfoque es selectivo; que soporta, por ejemplo, la detecci&#xF3;n de prote&#xED;na sola hebra se une directamente en crudo extractos nucleares. La generalidad de nuestro enfoque (incluyendo su capacidad para detectar los dos dobles y un solo cap&#xED;tulo prote&#xED;nas de uni&#xF3;n) y una fuerte, no monot&#xF3;nica dependencia de la ganancia de la se&#xF1;al de la sonda en la densidad de apoyar un mecanismo de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de colisi&#xF3;n en la que altera la uni&#xF3;n de la eficiencia de colisi&#xF3;n, y por lo tanto eficiencia de transferencia de electrones, de la etiqueta redox adjunta. Dada la ubicuidad con la que la prote&#xED;na de uni&#xF3;n va a alterar la din&#xE1;mica colisionales de un oligonucle&#xF3;tido, creemos que este enfoque puede resultar de utilidad general en la detecci&#xF3;n de ADN y las prote&#xED;nas de uni&#xF3;n al ARN.

Adici&#xF3;n de reactivos, el M&#xE9;todo electroqu&#xED;mico para la detecci&#xF3;n espec&#xED;fica de las prote&#xED;nas de ADN de doble cadena y el &#xFA;nico de Uni&#xF3;n

&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5355;&#x4E2A;-&#x6216;&#x53CC;&#x94FE; DNA &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65E0;&#x8BD5;&#x5242;&#x3001; &#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x53CC;&#x6216;&#x5355;&#x7EDE;&#xFF0C;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x6807;&#x8BB0; DNA &#x63A2;&#x9488;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x76F8;&#x8FDE;&#x7684;&#x67E5;&#x8BE2;&#x7684;&#x7535;&#x6781;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x5F53;&#x524D;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x540E;&#x538B;&#x5236;&#x6807;&#x8BB0;&#x4EE5;&#x6307;&#x793A;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6211;&#x4EEC;&#x634F;&#x9020;&#x7684;&#x53CC;&#x94FE; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5854;&#x5854;&#x6846;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; M.HhaI &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#xFF0C;&#x53CD;&#x5BF9;&#x548C;&#x5355;&#x94FE;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; SSBP &#x548C;&#x590D;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; A.&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x4EE5;&#x5206;&#x949F;&#x4E3A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x548C;&#x65B9;&#x4FBF;&#xFF0C;&#x4E00;&#x822C;&#xFF0C;&#x968F;&#x65F6;&#x53EF;&#x91CD;&#x7528;&#xFF0C;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x683C;&#x5F0F;&#x5728; nanomolar &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x662F;&#x5177;&#x4F53;&#x7684; &#xFF1B;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#xFF0C;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x4E4B;&#x95F4;&#x6CA1;&#x6709;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x4EA4;&#x53C9;&#x6027;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x662F;&#x9009;&#x62E9;&#x6027; &#xFF1B;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x5B83;&#x652F;&#x6301;&#x76F4;&#x63A5;&#x5728;&#x539F;&#x6CB9;&#x6838;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x94FE;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5; &#xFF08;&#x5305;&#x62EC;&#x5176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E24;&#x53CC;-&#x548C;&#x5355;&#x94FE;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF09; &#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x6027;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x4E0B;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F3A;&#x3001; &#x975E;&#x5355;&#x8C03;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6536;&#x76CA;&#x63A2;&#x9488;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x652F;&#x6301;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F1A;&#x6539;&#x53D8;&#x78B0;&#x649E;&#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x9644;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x78B0;&#x649E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x9012;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x9274;&#x4E8E;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x54EA;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F1A;&#x6539;&#x53D8;&#x78B0;&#x649E;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x505A;&#x6CD5;&#x53EF;&#x80FD;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E2D;&#x7684; DNA &#x548C; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x65E0;&#x8BD5;&#x5242;&#x3001; &#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x53CC;&#x548C;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Here we demonstrate a reagentless, electrochemical platform for the specific detection of proteins that bind to single- or double-stranded DNA. The sensor is composed of a double- or single-stranded, redox-tagged DNA probe which is covalently attached to an interrogating electrode. Upon protein binding the current arising from the redox tag is suppressed, indicating the presence of the target. Using this approach we have fabricated sensors against the double-stranded DNA binding proteins TATA-box binding protein and M.HhaI methyltransferase, and against the single-strand binding proteins Escherichia coli SSBP and replication protein A. All four targets are detected at nanomolar concentrations, in minutes, and in a convenient, general, readily reusable, electrochemical format. The approach is specific; we observed no significant cross-reactivity between the sensors. Likewise the approach is selective; it supports, for example, the detection of single strand binding protein directly in crude nuclear extracts. The generality of our approach (including its ability to detect both double- and single-strand binding proteins) and a strong, non-monotonic dependence of signal gain on probe density support a collisional signaling mechanism in which binding alters the collision efficiency, and thus electron transfer efficiency, of the attached redox tag. Given the ubiquity with which protein binding will alter the collisional dynamics of an oligonucleotide, we believe this approach may prove of general utility in the detection of DNA and RNA binding proteins.

Reagentless, electrochemical approach for the specific detection of double- and single-stranded DNA binding proteins.

Ici nous d&#xE9;montrons une r&#xE9;actif, plate-forme &#xE9;lectrochimique pour la d&#xE9;tection sp&#xE9;cifique des prot&#xE9;ines qui se lient &#xE0; l&#x26;#39;ADN simple brin ou double brin. Le capteur est compos&#xE9; d&#x26;#39;un double ou simple brin, la sonde d&#x26;#39;ADN marqu&#xE9; redox qui est attach&#xE9; de mani&#xE8;re covalente &#xE0; une &#xE9;lectrode d&#x26;#39;interrogation. Lors de la prot&#xE9;ine liant le courant r&#xE9;sultant de la balise d&#x26;#39;oxydor&#xE9;duction est supprim&#xE9;e, indiquant la pr&#xE9;sence de la cible. En utilisant cette approche, nous avons fabriqu&#xE9; des capteurs contre les prot&#xE9;ines d&#x26;#39;ADN double-brin de liaison TATA-box binding protein et M.HhaI m&#xE9;thyltransf&#xE9;rase, et contre la simple brin SSBP prot&#xE9;ines de liaison coli Escherichia et A. prot&#xE9;ine de r&#xE9;plication Tous les quatre cibles sont d&#xE9;tect&#xE9;es &#xE0; des concentrations nanomolaires , en quelques minutes, et dans un format pratique, en g&#xE9;n&#xE9;ral, ais&#xE9;ment r&#xE9;utilisables, format &#xE9;lectrochimique. L&#x26;#39;approche est sp&#xE9;cifique; nous n&#x26;#39;avons observ&#xE9; aucune r&#xE9;action crois&#xE9;e significative entre les capteurs. De m&#xEA;me, l&#x26;#39;approche est s&#xE9;lective, elle soutient, par exemple, la d&#xE9;tection de la prot&#xE9;ine de liaison simple brin directement dans des extraits bruts nucl&#xE9;aires. La g&#xE9;n&#xE9;ralit&#xE9; de notre approche (y compris sa capacit&#xE9; &#xE0; d&#xE9;tecter &#xE0; la fois en simple et double-brin prot&#xE9;ines de liaison) et une forte d&#xE9;pendance &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;gard non-monotone de gain de signal sur la densit&#xE9; de la sonde de soutenir un m&#xE9;canisme de signalisation de collision dans laquelle modifie l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de liaison de collision, et donc l&#x26;#39;efficacit&#xE9; du transfert d&#x26;#39;&#xE9;lectrons, de la balise ci-joint redox. Compte tenu de l&#x26;#39;omnipr&#xE9;sence avec laquelle la liaison aux prot&#xE9;ines va modifier la dynamique de collision d&#x26;#39;un oligonucl&#xE9;otide, nous croyons que cette approche peut se r&#xE9;v&#xE9;ler d&#x26;#39;une utilit&#xE9; g&#xE9;n&#xE9;rale dans la d&#xE9;tection de l&#x26;#39;ADN et les prot&#xE9;ines liant l&#x26;#39;ARN.

Sans r&#xE9;actif, Approche &#xE9;lectrochimique pour la d&#xE9;tection sp&#xE9;cifique de prot&#xE9;ines d&#x26;#39;ADN double-brin et simple-Reliure

Hier zeigen wir eine geh&ouml;rt, elektrochemische Plattform zum spezifischen Nachweis von Proteinen, die f&uuml;r Einzel - oder doppelstr&auml;ngige DNA binden. Der Sensor besteht aus ein Doppel - oder einzelstr&auml;ngige, Redox-Tags DNA-Sonde, die kovalent an ein Verh&ouml;r Elektrode gebunden. Auf Protein binden die aktuellen infolge des Redoxpotential wird Tag unterdr&uuml;ckt, das Vorhandensein des Ziels. Mit diesem Ansatz haben wir Sensoren gegen die doppelstr&auml;ngige DNA verbindliche Proteine TATA-Box verbindliches Protein und M.HhaI Methyltransferase und gegen das Single-Strand-verbindliche Proteine Escherichia coli SSBP und Replikation Protein A. fabriziert Alle vier Ziele auf nanomolare Konzentrationen, in Minuten und in einem bequemen, allgemeine, leicht wiederverwendbare, elektrochemische Format erkannt. Der Ansatz ist spezifisch; Wir beobachteten keine erhebliche Kreuzreaktivit&auml;t zwischen den Sensoren. Der Ansatz ist ebenso selektiv; Es unterst&uuml;tzt beispielsweise die Erkennung von einzelnen Faser verbindliches Protein direkt in grobe nukleare Extrakte. Der Allgemeing&uuml;ltigkeit unseres Ansatzes (einschlie&szlig;lich seiner F&auml;higkeit, beide Doppel und Single-Strand bindenden Proteinen zu erkennen) und eine starke, nicht-monotone Abh&auml;ngigkeit der Signal gewinnen &uuml;ber die F&ouml;rderung der Sonde-Dichte einen collisional Signalisierungsmechanismus, die in dem Bindung der Kollision Effizienz und somit Elektronen Transfer Effizienz, der dem angeschlossenen Redox-Tag &auml;ndert. Angesichts die weiten Verbreitung mit dem, die Protein Bindung die collisional Dynamik des Oligonukleotids ver&auml;ndern wird, glauben wir, dass dieser Ansatz der allgemeinen Dienstprogramm bei der Entdeckung von DNA und RNA-bindende Proteine erweisen.

Geh&ouml;rt, elektrochemische Ansatz zur spezifischen Detektion von Einzel- und Doppelstrang-DNA-bindende Proteine.

Qui dimostriamo una piattaforma reagentless, elettrochimica per la rilevazione delle proteine che si legano a single - o double-stranded DNA specifica. Il sensore &egrave; composto da una doppio o singolo filamento, redox-tagged sonda di DNA che legame covalente &egrave; collegata ad un elettrodo inquisitorie. Su proteina vincolante la corrente derivanti dalla redox tag &egrave; soppresso, che indica la presenza del bersaglio. Utilizzando questo approccio noi abbiamo fabbricato sensori contro il double-stranded del DNA binding proteine TATA-box binding protein e M.HhaI metiltransferasi e contro il single-strand binding proteine Escherichia coli SSBP e replica proteina A. Tutti e quattro gli obiettivi vengono rilevati a concentrazioni nanomolari, in pochi minuti e in un formato conveniente, generale, facilmente riutilizzabile, elettrochimico. L&#39;approccio &egrave; specifico; abbiamo non osservato alcuna significativa reattivit&agrave; crociata tra i sensori. Allo stesso modo l&#39;approccio &egrave; selettivo; ad esempio, supporta il rilevamento di single strand binding protein direttamente in greggi estratti nucleari. La genericit&agrave; del nostro approccio (compresa la capacit&agrave; di rilevare entrambi doppio - e single-strand binding proteine) e una dipendenza forte, non-monotona del segnale di guadagno sul supporto sonda densit&agrave; un meccanismo di segnalazione collisionale in cui associazione altera l&#39;efficienza di collisione e quindi efficienza di trasferimento dell&#39;elettrone, del tag associato redox. Data l&#39;ubiquit&agrave; con quale proteina associazione alterer&agrave; la dinamica di un oligonucleotide collisionale, crediamo che questo approccio pu&ograve; risultare di utilit&agrave; generale nella rilevazione di DNA e RNA binding proteins.

Approccio reagentless, elettrochimico per il rilevamento specifico di double e single-stranded DNA binding proteins.

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;DNA&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x8A66;&#x85AC;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x6709;&#x5C0B;&#x554F;&#x96FB;&#x6975;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E8C;&#x91CD;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x3001;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x305F;DNA&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x30BF;&#x30B0;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;DNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;TATA&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;M.HhaI&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;SSBP&#x3068;&#x8907;&#x88FD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;A&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;4&#x3064;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x306F;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x6570;&#x5206;&#x3067;&#x3001;&#x4FBF;&#x5229;&#x306A;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x518D;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x7C97;&#x6838;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x4E2D;&#x306E;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x6027;&#xFF08;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5229;&#x5F97;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x3001;&#x975E;&#x5358;&#x8ABF;&#x306A;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306F;&#x885D;&#x7A81;&#x52B9;&#x7387;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x306E;&#x885D;&#x7A81;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x52B9;&#x7387;&#x3001;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x885D;&#x7A81;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x308B;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x504F;&#x5728;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;DNA&#x3084;RNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x6C4E;&#x7528;&#x7684;&#x306A;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x4FE1;&#x3058;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x53CD;&#x5FDC;&#x8A66;&#x85AC;&#x3001;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x3068;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;

&#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xC77C;-&#xB610;&#xB294; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xBB36;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; reagentless &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC911; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5;, redox &#xD0DC;&#xADF8; DNA &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#x70AD; interrogating &#xC804;&#xADF9;&#xC5D0; &#xBD99;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xC13C;&#xC11C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Redox&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD0DC;&#xADF8; &#xC5B5;&#xC555; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC13C;&#xC11C;&#xC640; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Escherichia&#xC758; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; SSBP &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1. &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; TATA &#xC0C1;&#xC790; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; M.HhaI methyltransferase&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC870;&#xC791; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xBD84;, &#xACE0;, &#xC77C;&#xBC18;, &#xC27D;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;, &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; &#xD615;&#xC2DD; nanomolar &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xD2B9;&#xC815;; &#xC13C;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBD84;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740;, &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xC6D0;&#xC720; &#xD575; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. (&#xBAA8;&#xB450; &#xB354;&#xBE14;-&#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xC77C;-&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB79C;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;) &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC15;&#xD55C;, &#xBE44; &#xBAA8;&#xB178; &#xD1A0; &#xB2C9; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBCC0;&#xACBD; &#xCDA9;&#xB3CC; &#xD6A8;&#xC728; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; redox &#xD0DC;&#xADF8;&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xD6A8;&#xC728; collisional &#xC2E0;&#xD638; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xC774;&#xB4DD;. &#xC720;&#xBE44;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC740; oligonucleotide&#xC758; collisional &#xC5ED;&#xD559; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xBC14;&#xAFC0; &#xAC83;&#xC744; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xC811;&#xADFC;&#xC758; DNA&#xC640; RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBC18; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xC99D;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBBFF;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC774;&#xC911; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; reagentless, &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC778; &#xC811;&#xADFC;.

We have developed a high-throughput protein binding microarray (PBM) assay to systematically investigate transcription regulatory protein complexes binding to DNA with varied specificity and affinity. Our approach is based on the novel coupling of total internal reflectance fluorescence (TIRF) spectroscopy, swellable hydrogel double-stranded DNA microarrays and dye-labeled regulatory proteins, making it possible to determine both equilibrium binding specificities and kinetic rates for multiple protein:DNA interactions in a single experiment. DNA specificities and affinities for the general transcription factors TBP, TFIIA and IIB determined by TIRF-PBM are similar to those determined by traditional methods, while simultaneous measurement of the factors in binary and ternary protein complexes reveals preferred binding combinations. TIRF-PBM provides a novel and extendible platform for multi-protein transcription factor investigation.

Tracking transcription factor complexes on DNA using total internal reflectance fluorescence protein binding microarrays.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B; (PBM) &#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x8C03;&#x67E5;&#x5404;&#x79CD;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x548C;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x4E0E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; DNA &#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#x57FA;&#x4E8E;&#x65B0;&#x578B;&#x603B;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04; &#xFF08;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;) &#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x6CD5;&#x3001; &#x81A8;&#x80C0;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x53CC;&#x94FE; DNA &#x5FAE;&#x9635;&#x5217;&#x548C;&#x67D3;&#x6599;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x786E;&#x5B9A;&#x5747;&#x8861;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7279;&#x70B9;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x901F;&#x7387;&#x4E3A;&#x5355;&#x4E00;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF1A; DNA &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8026;&#x5408;&#x3002;DNA &#x7279;&#x70B9;&#x548C;&#x4EB2;&#x7F18;&#x5173;&#x7CFB;&#x4E3A; TBP&#x3001; TFIIA &#x548C;&#x7531;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B; PBM IIB &#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x7531;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x4E8C;&#x5143;&#x548C;&#x4E09;&#x5143;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x663E;&#x793A;&#x4E2D;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x800C;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x666E;&#x901A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x9996;&#x9009;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B; PBM &#x4E3A; multi-protein &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x8C03;&#x67E5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x548C;&#x53EF;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;

&#x8DDF;&#x8E2A;&#x4F7F;&#x7528;&#x603B;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x82AF;&#x7247;&#x7684; DNA &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;

Nous avons mis au point une analyse de microarray (PBM) haut d&eacute;bit prot&eacute;ine obligatoire afin d&#39;&eacute;tudier syst&eacute;matiquement les complexes de prot&eacute;ine r&eacute;gulatrice de transcription liant &agrave; l&#39;ADN avec sp&eacute;cificit&eacute; vari&eacute;e et affinit&eacute;. Notre approche est bas&eacute;e sur le couplage de roman de la spectroscopie de fluorescence (FRBR) r&eacute;flexion interne totale, hydrogel dilatables micror&eacute;seaux d&#39;ADN bicat&eacute;naire et marqu&eacute;s au colorant prot&eacute;ines r&eacute;gulatrices, ce qui permet de d&eacute;terminer les sp&eacute;cificit&eacute;s &eacute;quilibre et taux cin&eacute;tiques de multiples interactions prot&eacute;ine-ADN dans une exp&eacute;rience simple. Sp&eacute;cificit&eacute;s de l&#39;ADN et des affinit&eacute;s pour les facteurs de transcription g&eacute;n&eacute;raux TBP, TFIIA et IIB d&eacute;termin&eacute; par FRBR-PBM sont semblables &agrave; celles d&eacute;termin&eacute;es par les m&eacute;thodes traditionnelles, tandis que la mesure simultan&eacute;e des facteurs r&eacute;v&egrave;le des complexes binaires et ternaires prot&eacute;ine pr&eacute;f&eacute;raient contraignant des combinaisons. FRBR-PBM fournit une plateforme extensible et un roman pour enqu&ecirc;te de facteur de transcription multi-prot&eacute;ine.

Complexes de facteur de transcription de suivi sur l&#39;ADN &agrave; l&#39;aide de la r&eacute;flexion interne totale fluorescence protein binding microarrays.

Wir entwickelten eine Hochdurchsatz-Bindung Microarray (PBM) Proteinprobe Transkription regelndes Protein-komplexe binden an die DNA mit abwechslungsreichen Spezifit&auml;t und Affinit&auml;t systematisch zu untersuchen. Unser Ansatz basiert auf die neuartige Kupplung interne Totalreflexion Fluoreszenzspektroskopie (TIRF), Quellbar Hydrogel-Doppelstrang-DNA-Microarrays und Farbstoff-markierten regulatorischen Proteine, macht es m&ouml;glich, kinetische Preise mehrere Protein: DNA-Wechselwirkungen in einem einzigen Experiment und Gleichgewicht Bindung Besonderheiten zu bestimmen. DNA-Besonderheiten und Affinit&auml;ten f&uuml;r die allgemeine Transkriptionsfaktoren, die TBP, TFIIA und IIB von TIRF-PBM bestimmt &auml;hnlich denen nach traditionellen Methoden, w&auml;hrend der gleichzeitigen Messung der Faktoren bei der bin&auml;ren und tern&auml;ren Protein-komplexen zeigt bestimmt sind bevorzugte Bindung Kombinationen. TIRF-PBM stellt eine neuartige und erweiterbare Plattform f&uuml;r multi-protein Transkription Faktor Untersuchung.

Tracking-Transkription Faktor-komplexe auf interne Totalreflexion Fluoreszenz-Protein-Bindung-Microarrays mit DNA.

Abbiamo sviluppato un&#39;analisi di microarray (PBM) associazione high-throughput di proteine per indagare sistematicamente complessi di regolamentazione della proteina di trascrizione vincolante al DNA con diverse specificit&agrave; e affinit&agrave;. Il nostro approccio &egrave; basato sull&#39;accoppiamento romanzo di spettroscopia di fluorescenza (TIRF) riflessione interna totale, idrogel rigonfiabili double-stranded del DNA microarrays e proteine regolatorie tingere-contrassegnati, rendendo possibile determinare la specificit&agrave; di legame di equilibrio sia cinetici tariffe per le interazioni della proteina: DNA multipli in un singolo esperimento. DNA specificit&agrave; e affinit&agrave; per i fattori di trascrizione generali TBP TFIIA e IIB determinato da TIRF-PBM sono simili a quelli determinati dai metodi tradizionali, mentre la misurazione simultanea dei fattori in mischie binarie e ternarie proteina complessi rivela preferito combinazioni di associazione. TIRF-PBM fornisce un romanzo e la piattaforma estendibile per indagine di fattore di trascrizione multi-protein.

Tracking complessi di fattore di trascrizione su DNA usando i microarrays associazione riflessione interna totale fluorescenza della proteina.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B; DNA &#x306B;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4; (PBM) &#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149; &#xFF08;TIRF) &#x5206;&#x5149;&#x3001;&#x81A8;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396; DNA &#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5E73;&#x8861;&#x7D50;&#x5408;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;: DNA &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x67D3;&#x3081;&#x5206;&#x985E;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x512A;&#x5148; DNA &#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x89AA;&#x548C;&#x6027; TBP&#x3001;TFIIA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;-PBM &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B; IIB &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30EA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E09;&#x5143;&#x7CFB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x57FA;&#x672C;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TIRF PBM &#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3068;&#x62E1;&#x5F35;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; DNA &#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3002;

&#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBC0F; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC640; DNA&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC804;&#xC0AC; &#xADDC;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; microarray (PBM) &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC740; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC;&#xC728; (TIRF) &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;, swellable hydrogel &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; DNA microarrays &#xC5FC;&#xB8CC; &#xB77C;&#xB294; &#xADDC;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC218; &#xD3C9;&#xD615; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBC0F; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC694;&#xAE08; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;: DNA &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DNA &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBC0F; affinities TBP, TFIIA &#xBC0F; IIB TIRF PBM&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC774;&#xC9C4; &#xBC0F; &#xC0BC;&#xC9C4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C; &#xACC4;&#xC2DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB41C; &#xAC83;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC77C;&#xBC18; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC120;&#xD638; &#xD558;&#xB294;. TIRF PBM multi-protein &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xC870;&#xC0AC; &#xC18C;&#xC124;&#xACFC; &#xD3BC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC;&#xC728; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; microarrays&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; DNA&#xC5D0; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xCD94;&#xC801;.

Hemos desarrollado un an&aacute;lisis de microarrays (PBM) prote&iacute;na de alto rendimiento vinculante para investigar sistem&aacute;ticamente complejos de la prote&iacute;na reguladora de transcripci&oacute;n Uni&oacute;n a ADN con variada especificidad y afinidad. Nuestro enfoque se basa en el acoplamiento de la novela de espectroscopia de fluorescencia (TIRF) de reflexi&oacute;n interna total, hidrogel swellable double-stranded DNA microarrays y prote&iacute;nas reguladoras de marcado tinte, lo que es posible determinar tanto las especificidades de atascamiento de equilibrio y cin&eacute;ticas tarifas para m&uacute;ltiples interacciones prote&iacute;na: ADN en un experimento &uacute;nico. Especificidades de ADN y las afinidades de los factores generales de la transcripci&oacute;n TFIIA, TBP y IIB determinado por TIRF-PBM son similares a los determinados por m&eacute;todos tradicionales, mientras que la medida simult&aacute;nea de los factores en prote&iacute;na binarios y ternarios complejos revela prefer&iacute;an vinculante combinaciones. TIRF-PBM proporciona una plataforma extensible y novela para investigaci&oacute;n del factor de transcripci&oacute;n multi-prote&iacute;na.

Seguimiento complejos del factor de transcripci&oacute;n de ADN utilizando microarrays de reflexi&oacute;n interna total fluorescencia prote&iacute;na obligatoria.

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x9B54;&#x9B3C;&#xFF09; &#x4E3E;&#x884C;&#x627F;&#x8BFA;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x518D;&#x751F;&#x7597;&#x6CD5;&#x7528;&#x4E8E;&#x6210;&#x4EBA;&#x6D3E;&#x751F;&#xFF0C;&#x60A3;&#x8005;&#x7279;&#x6709;&#x7684;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6765;&#x6E90;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7E41;&#x7410;&#x548C;&#x6602;&#x8D35;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x7406;&#x89E3;&#x57FA;&#x7840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x4E86;&#x89E3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x3001; &#x751F;&#x5B58;&#x3001; &#x548C;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x4F7F;&#x7528; Oct-3/4&#xFF0C;Sox 2 &#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x7EBF;&#x6761;&#x3001; Nanog &#x548C;&#x6797; 28 &#x8868;&#x8FBE;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684; hESCs&#xFF0C;&#x7A81;&#x51FA;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA; alpha5&#x3001; alpha6&#x3001; alphav&#x3001; beta1 &#x548C; beta5 &#x4E0E;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B;&#x3002;&#x5728;&#x65E0;&#x9972;&#x517B;&#x5C42;&#x4E0A; Matrigel &#x6216;&#x4E0E;&#x53D7;&#x7CBE;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x6BD4;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x9B54;&#x9B3C;&#xFF0C;&#x6574;&#x5408;&#x529F;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;beta1 &#x6574;&#x5408;&#x8FD8;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x589E;&#x6B96;&#x5728; Matrigel&#xFF0C;&#x514D;&#x75AB;&#x5C01;&#x9501;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x5173;&#x4E8E;&#x4E0E;&#x53D7;&#x7CBE;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x6574;&#x5408;&#x7D20; alphavbeta5 &#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x521D;&#x59CB;&#x7684;&#x9644;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x4F46; alphavbeta5 &#x548C; beta1 &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x8981;&#x6C42;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C0F;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x6269;&#x6563;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9B54;&#x9B3C; 9 &#x901A;&#x9053;&#x4E0E;&#x53D7;&#x7CBE;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x57F9;&#x517B;&#x4FDD;&#x7559;&#x6B63;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6838;&#x578B;&#x3001; &#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x6807;&#x8BB0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x53D7;&#x7CBE;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x6216;&#x5176;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x53EF;&#x80FD;&#x66FF;&#x6362; Matrigel &#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x66F4;&#x591A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E3A;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x6587;&#x5316;&#x3002;

&#x6574;&#x5408;&#x7D20; Matrigel &#x548C;&#x4E0E;&#x53D7;&#x7CBE;&#x5173;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Human induced pluripotent stem cells (iPSCs) hold promise as a source of adult-derived, patient-specific pluripotent cells for use in cell-based regenerative therapies. However, current methods of cell culture are tedious and expensive, and the mechanisms underlying cell proliferation are not understood. In this study, we investigated expression and function of iPSC integrin extracellular matrix receptors to better understand the molecular mechanisms of cell adhesion, survival, and proliferation. We show that iPSC lines generated using Oct-3/4, Sox-2, Nanog, and Lin-28 express a repertoire of integrins similar to that of hESCs, with prominent expression of subunits alpha5, alpha6, alphav, beta1, and beta5. Integrin function was investigated in iPSCs cultured without feeder layers on Matrigel or vitronectin, in comparison to human embryonic stem cells. beta1 integrins were required for adhesion and proliferation on Matrigel, as shown by immunological blockade experiments. On vitronectin, the integrin alphavbeta5 was required for initial attachment, but inhibition of both alphavbeta5 and beta1 was required to significantly decrease iPSC proliferation. Furthermore, iPSCs cultured on vitronectin for 9 passages retained normal karyotype, pluripotency marker expression, and capacity to differentiate in vitro. These studies suggest that vitronectin, or derivatives thereof, might substitute for Matrigel in a more defined system for iPSC culture.

Roles of integrins in human induced pluripotent stem cell growth on Matrigel and vitronectin.

Les cellules souches humaines pluripotentes induites (CISP) semblent prometteurs comme source de cellules pluripotentes adultes d&eacute;riv&eacute;s, sp&eacute;cifiques &agrave; un patient pour une utilisation dans les th&eacute;rapies r&eacute;g&eacute;n&eacute;ratives bas&eacute;s sur les cellules. Cependant, les m&eacute;thodes actuelles de culture cellulaire sont fastidieux et co&ucirc;teux, et les m&eacute;canismes sous-jacents &agrave; la prolif&eacute;ration des cellules ne sont pas comprises. Dans cette &eacute;tude, nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;expression et la fonction des int&eacute;grines iPSC de matrice extracellulaire afin de mieux comprendre les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires de l&#39;adh&eacute;sion cellulaire, la survie et la prolif&eacute;ration. Nous montrons qu&#39;iPSC lignes g&eacute;n&eacute;r&eacute;s &agrave; l&#39;aide de Oct-3/4, 2-Sox, Nanog et Lin-28 expriment un r&eacute;pertoire des int&eacute;grines semblables &agrave; celle des CSEh, avec une expression importante de sous-unit&eacute;s alpha5 alpha6, alphav, beta1 et beta5. Int&eacute;grine fonction a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e au CISP cultiv&eacute;s sans couches mangeoire sur Matrigel ou la vitronectine, comparativement aux cellules souches embryonnaires humaines. beta1 int&eacute;grines &eacute;taient n&eacute;cessaires pour l&#39;adh&eacute;sion et la prolif&eacute;ration sur Matrigel, tel qu&#39;illustr&eacute; par des exp&eacute;riences de blocus immunologiques. Sur la vitronectine, alphavbeta5 de l&#39;int&eacute;grine &eacute;tait n&eacute;cessaire pour la fixation initiale, mais l&#39;inhibition des alphavbeta5 tant beta1 devait diminuer consid&eacute;rablement la prolif&eacute;ration de l&#39;iPSC. En outre, CISP cultiv&eacute;s sur la vitronectine pour 9 passages retenus caryotype normal, l&#39;expression de marqueurs pluripotence et capacit&eacute; de se diff&eacute;rencier in vitro. Ces &eacute;tudes sugg&egrave;rent que la vitronectine, ou leurs d&eacute;riv&eacute;s, pourraient remplacer Matrigel dans un syst&egrave;me plus d&eacute;fini pour la culture de l&#39;iPSC.

R&ocirc;le des int&eacute;grines dans la croissance de cellules souches humaines pluripotentes induites sur Matrigel et la vitronectine.

Menschliche induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) halten versprechen als eine Quelle von Erwachsener, patientenspezifische pluripotenten Zellen f&uuml;r den Einsatz in Zellbasierte regenerative Therapien. Jedoch aktuelle Methoden der Zellkultur sind langwierig und teuer, und die Mechanismen, die Zellproliferation nicht verstanden. In dieser Studie untersuchten wir Ausdruck und Funktion iPSC Integrin extrazellul&auml;ren Matrix Rezeptoren, die molekularen Mechanismen der Zelladh&auml;sion, &Uuml;berleben und Verbreitung besser zu verstehen. Wir zeigen, dass iPSC Linien mit Oct-3/4, Sox-2 generiert, Nanog und Lin-28 schnelles Ein Repertoire an Integrine des Zellkulturen, vergleichbar mit prominenten Ausdruck der Untereinheiten alpha5 alpha6, Alphav, beta1 und beta5. Integrin-Funktion wurde im iPSCs kultiviert ohne Zuf&uuml;hrung Schichten auf Matrigel oder spezifischer, im Vergleich zu menschlichen embryonalen Stammzellen untersucht. Beta1 Integrine sind zur Haftung und Verbreitung auf Matrigel, erforderlich, wie immunologische Blockade Experimente gezeigt. Spezifischer der Integrin-alphavbeta5 war bei der ersten Anlage, aber Hemmung der alphavbeta5 und beta1 musste iPSC Vermehrung erheblich verringern. Dar&uuml;ber hinaus erhalten iPSCs kultiviert auf spezifischer 9 Passagen unauff&auml;lligen Karyotyp, Pluripotenz Markierung Ausdruck und Kapazit&auml;t, in-vitro zu unterscheiden. Diese Studien legen nahe, dass spezifischer oder Derivate davon, m&ouml;glicherweise Matrigel in einem st&auml;rker definierten System f&uuml;r iPSC Kultur ersetzen.

Rollen der Integrine in menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen Wachstum auf Matrigel und spezifischer.

Cellule staminali umane pluripotenti indotte (iPSCs) promettono come fonte di cellule pluripotenti derivate da adulto, paziente-specifici per uso in terapie rigenerative cell-based. Tuttavia, attuali metodi di coltura delle cellule sono noioso e costoso, e non sono chiari i meccanismi alla base della proliferazione cellulare. In questo studio, abbiamo studiato espressione e funzione di recettori di matrice extracellulare dell&#39;integrina iPSC per comprendere meglio i meccanismi molecolari di adesione delle cellule, la sopravvivenza e la proliferazione. Mostriamo che iPSC linee generate mediante Oct-3/4, Sox-2, Nanog e Lin-28 esprimono un repertorio di integrine simile a quella di hESCs, con espressione prominente della subunit&agrave; alpha5 alpha6, alphav, beta1 e beta5. Funzione di integrina &egrave; stato studiato in iPSCs coltivate senza strati alimentatore su Matrigel o vitronectina, rispetto alle cellule staminali embrionali umane. integrins beta1 sono stati richiesti per l&#39;adesione e la proliferazione su Matrigel, come dimostrato dagli esperimenti di blocco immunologica. Vitronectina, l&#39;integrina alphavbeta5 &egrave; stato richiesto per attacco iniziale, ma l&#39;inibizione di alphavbeta5 e di beta1 era richiesto di ridurre in modo significativo la proliferazione iPSC. Inoltre, iPSCs coltivati su vitronectina per 9 passaggi mantenuti cariotipo normale, espressione di marcatori di pluripotenza e capacit&agrave; di differenziarsi in vitro. Questi studi suggeriscono che vitronectina, o derivati, potrebbero sostituire Matrigel in un sistema pi&ugrave; definito per iPSC cultura.

Ruolo delle integrine nella crescita delle cellule staminali umane pluripotenti indotte su Matrigel e vitronectina.

&#x3072;&#x3068;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;ips &#x7D30;&#x80DE;&#xFF09; &#x5927;&#x4EBA;&#x6D3E;&#x751F;&#x3001;&#x60A3;&#x8005;&#x7279;&#x6709;&#x306E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x518D;&#x751F;&#x6CBB;&#x7642;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x9000;&#x5C48;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x306A;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x30FB;&#x751F;&#x5B58;&#x30FB;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B; iPSC &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x305D;&#x306E; iPSC &#x3092;&#x793A;&#x3059; Oct-3/4&#x3001;Sox 2 &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x884C;&#x3001;Nanog&#x3001;Lin 28 &#x8868;&#x73FE;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3; hESCs, &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; alpha5 alpha6&#x3001;alphav&#x3001;beta1,&#x3001;beta5 &#x306E;&#x8457;&#x540D;&#x306A;&#x5F0F;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;ips &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x4E0A;&#x306E;&#x9001;&#x308A;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x5C64;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x5C01;&#x9396;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046; beta1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x63A5;&#x7740;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x3001;&#x4E0A;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3; alphavbeta5 &#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3001;alphavbeta5 &#x3068; beta1 &#x306E;&#x6291;&#x5236; iPSC &#x5897;&#x6B96;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; 9 &#x901A;&#x8DEF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F; ips &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x6838;&#x578B;&#x3001;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068; in vitro &#x3067;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#xFF0C; &#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x4EE3;&#x7528;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x3092; iPSC &#x6587;&#x5316;&#x3088;&#x308A;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x3002;

&#x3072;&#x3068;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x7528;&#x5897;&#x6B96;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSCs) &#xC140; &#xAE30;&#xBC18; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC131;&#xC778; &#xD30C;&#xC0DD;, &#xD658;&#xC790; &#xAD00;&#xB828; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6D0;&#xCC9C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xC7A1;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC9C0;&#xB8E8;&#xD558;&#xACE0; &#xBE44;&#xC2FC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; iPSC integrin &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29;, &#xC0DD;&#xC874;&#xACFC; &#xD655;&#xC0B0;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB354; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; iPSC &#xC1FC; &#xB77C;&#xC778; 10 &#xC6D4;-3/4, &#xC0AD;&#xC2A4; 2&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC131;, Nanog, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB9B0;-28 &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; subunits alpha5, alpha6, alphav, beta1, &#xBC0F; beta5&#xC758; &#xC800;&#xBA85;&#xD55C; &#xC2DD;&#xC774; &#xC788;&#xB294; hESCs, &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; integrins&#xC758; &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC;. Integrin &#xD568;&#xC218; iPSCs Matrigel &#xB610;&#xB294; vitronectin, &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAE09;&#xC9C0;&#xB300; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; &#xC5C6;&#xC774; &#xAD50;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBA74;&#xC5ED;&#xD559; &#xBD09;&#xC1C4; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; beta1 integrins Matrigel&#xC5D0; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC811;&#xCC29; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. Vitronectin, integrin alphavbeta5&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5B5;&#xC81C; alphavbeta5 &#xBC0F; beta1 iPSC &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2E8;&#xCD95;&#xD560; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, iPSCs 9 &#xAD6C;&#xC808;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; vitronectin&#xC5D0; &#xAD50;&#xC591; &#xC720;&#xC9C0; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; karyotype, pluripotency &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC2DD; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; vitronectin, &#xB610;&#xB294; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488;, Matrigel iPSC &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB300;&#xCCB4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Matrigel &#xBC0F; vitronectin&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; integrins&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

C&eacute;lulas pluripotentes inducidas humanas (iPSCs) son prometedoras como fuente de c&eacute;lulas pluripotentes adultas, espec&iacute;fico para cada paciente para su uso en terapia celular regenerativa. Sin embargo, los m&eacute;todos actuales de cultivo celular est&aacute;n tedioso y costoso, y no se entienden los mecanismos subyacentes de la proliferaci&oacute;n celular. En este estudio, investigamos la expresi&oacute;n y funci&oacute;n de los receptores de matriz extracelular de integrina iPSC para comprender mejor los mecanismos moleculares de la adhesi&oacute;n celular, supervivencia y proliferaci&oacute;n. Mostramos que iPSC l&iacute;neas mediante Oct-3/4, Sox-2 Nanog y Lin-28 expresan un repertorio de integrinas similares a la de hESCs, con expresi&oacute;n prominente de subunidades alpha5, alpha6, alphav, beta1 y beta5. Funci&oacute;n de la integrina fue investigada en iPSCs cultivadas sin capas de alimentador en Matrigel o vitronectina, en comparaci&oacute;n con c&eacute;lulas madre embrionarias humanas. las integrinas beta1 fueron requeridas para la adhesi&oacute;n y proliferaci&oacute;n en Matrigel, como se muestra por experimentos de bloqueo inmunol&oacute;gico. En la vitronectina, la integrina alphavbeta5 era necesario para la fijaci&oacute;n inicial, pero inhibici&oacute;n de alphavbeta5 y beta1 deb&iacute;a disminuir significativamente la proliferaci&oacute;n de iPSC. Adem&aacute;s, iPSCs cultivada vitronectina para 9 pasajes retuvo cariotipo normal, la expresi&oacute;n de marcador de pluripotencia y capacidad para distinguir in vitro. Estos estudios sugieren que vitronectina, o sus derivados, podr&iacute;an sustituir Matrigel en un sistema m&aacute;s definido para la cultura de iPSC.

Funciones de las integrinas en el crecimiento de c&eacute;lulas madre pluripotentes inducidas humanas en Matrigel y vitronectina.

&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149; &#xFF08;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;&#xFF09; &#x52A0;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6; DNA &#x6EF4;&#x82AF;&#x7247;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7EA6;&#x675F;&#x805A;&#x7532;&#x57FA;&#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x7532;&#x916F;&#x886C;&#x5E95;&#x4E0A;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53EF;&#x91CD;&#x7528;&#x7684;&#x3001; &#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x5E73;&#x53F0;&#x4E3A;&#x8BC4;&#x4EF7; DNA &#x6742;&#x4EA4;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x751F;&#x7269;&#x82AF;&#x7247;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x5FAE;&#x9635;&#x5217;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7684; DNA &#x63A2;&#x9488;&#xFF0C;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x5370;&#x5237;&#x548C;&#x5149;&#x4EA4;&#x8054;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x3002;&#x6570;&#x7EC4;&#x7684;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;&#x6D4B;&#x91CF;&#x663E;&#x793A;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x53EF;&#x91CD;&#x7528;&#x6027;&#x3001; &#x663E;&#x793A;&#x5230; 5 fmol &#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x76EE;&#x6807; DNA&#xFF0C;&#x7EBF;&#x6027;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x548C;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x5355;&#x4E00; basepair &#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; PCR &#x6269;&#x589E;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x5BA1;&#x95EE;&#x5927; DNA &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x7EC8;&#x8BC1;&#x660E;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x3001; &#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x7684;&#x3001; &#x4F4E;&#x6210;&#x672C;&#x7684;&#x5E73;&#x53F0;&#xFF0C;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x5FEB;&#x901F;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x8BCA;&#x65AD;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x751F;&#x7269;&#x82AF;&#x7247;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684; DNA &#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x6E29;&#x5EA6;&#x548C;&#x53EF;&#x91CD;&#x7528;&#x7684; DNA &#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x82AF;&#x7247;&#x603B;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x65F6;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Total internal reflection fluorescence (TIRF) coupled with hydrogel-DNA droplet microarrays covalently bound on PMMA substrates presents a reusable, sensitive platform for evaluating DNA hybridization and for rapid biochip development. Hydrogel microarrays, which contain covalently bound DNA probes, are created via a simple printing and photocross-linking process. TIRF measurements of the arrays display robust reusability, show linear sensitivity down to 5 fmol of fluorescently labeled target DNA, and are sensitive to single basepair mismatches. Additionally, the ability to interrogate larger DNA is shown through studies with PCR amplification hybridization. We conclusively demonstrate an efficient, reproducible, low cost platform for DNA hybridization studies that could be used for fast high-throughput diagnostics as well as biochip development.

Temperature and time-resolved total internal reflectance fluorescence analysis of reusable DNA hydrogel chips.

Fluorescence de la r&eacute;flexion totale interne (FRBR) coupl&eacute; avec puces &agrave; gouttelettes hydrogel-ADN de fa&ccedil;on covalente sur des substrats PMMA pr&eacute;sente une plate-forme r&eacute;utilisable, sensible pour l&#39;&eacute;valuation d&#39;hybridation de l&#39;ADN et pour le d&eacute;veloppement de biopuces rapide. Hydrogel microarrays, qui contiennent des sondes d&#39;ADN covalente, sont cr&eacute;&eacute;s via une impression simple et processus photocross-lier. FRBR mesures des tableaux affichent r&eacute;utilisabilit&eacute; robuste, montrent une sensibilit&eacute; lin&eacute;aire jusqu&#39;&agrave; 5 fmol de fluorescent &eacute;tiquet&eacute;s de cible ADN et sont sensibles aux r&eacute;gions unique non-correspondances. En outre, la capacit&eacute; d&#39;interroger plu ADN est montr&eacute;e au moyen d&#39;&eacute;tudes avec l&#39;hybridation d&#39;amplification PCR. Nous avons d&eacute;montr&eacute; avec certitude une plateforme efficace, reproductible, &agrave; faible co&ucirc;t pour les &eacute;tudes d&#39;hybridation ADN qui pourraient &ecirc;tre utilis&eacute;s pour le diagnostic rapide haut d&eacute;bit ainsi que le d&eacute;veloppement de biopuces.

Temp&eacute;rature et analyse de fluorescence r&eacute;solue en temps de r&eacute;flexion interne totale de r&eacute;utilisables hydrogel des puces &agrave; ADN.

Totalreflexion Fluoreszenz (TIRF) gepaart mit Hydrogel-Tr&ouml;pfchen DNAmicroarrays kovalent gebunden auf PMMA-Substraten pr&auml;sentiert eine wiederverwendbare, sensible Plattform zur Bewertung von DNA-Hybridisierung und schnelle Biochip-Entwicklung. Hydrogel-Microarrays, die kovalent gebundene DNA-Sonden enthalten, werden &uuml;ber ein einfaches und Photocross-Verkn&uuml;pfung Prozess erstellt. TIRF Messungen der Arrays anzeigen robuste Wiederverwendbarkeit, zeigen lineare Empfindlichkeit bis auf 5 Fmol von Leuchtstoff beschriftetem Ziel DNA und reagieren empfindlich auf einzelne Basepair Missverh&auml;ltnis. Dar&uuml;ber hinaus ist die F&auml;higkeit, gr&ouml;&szlig;ere DNA zu Verh&ouml;ren durch Studien mit PCR Verst&auml;rkung Hybridisierung angezeigt. Wir zeigen eindeutig eine effiziente, reproduzierbare und kosteng&uuml;nstige Plattform f&uuml;r DNA Hybridation Studien, die f&uuml;r schnelle Hochdurchsatz-Diagnose sowie Biochip-Entwicklung verwendet werden k&ouml;nnte.

Temperatur und Zeit aufgel&ouml;st interne Totalreflexion R&ouml;ntgenfluoreszenz-Analyse von wieder verwendbaren DNA-Hydrogel-Chips.

Fluorescenza di riflessione interna totale (TIRF) accoppiato con idrogel-DNA microarrays di gocciolina legato covalentemente su substrati PMMA presenta una piattaforma riutilizzabile, sensibile per valutare l&#39;ibridazione DNA e biochip rapido sviluppo. Idrogel microarrays, che contengono le sonde di DNA covalentemente, vengono creati tramite un processo che collega photocross e stampa semplice. Misurazioni TIRF delle matrici display robusto riutilizzabilit&agrave;, mostrano sensibilit&agrave; lineare fino a 5 fmol di DNA fluorescente contrassegnati dell&#39;obiettivo e sono sensibili alle mancate corrispondenze basepair singolo. Inoltre, la possibilit&agrave; di interrogare pi&ugrave; grande del DNA &egrave; dimostrata attraverso studi con l&#39;ibridazione di amplificazione di PCR. Noi conclusivamente dimostrare una piattaforma efficiente, riproducibile, a basso costo per gli studi di ibridazione DNA che potrebbe essere utilizzato per la diagnostica rapida ad alta velocit&agrave;, nonch&eacute; lo sviluppo biochip.

Temperatura e l&#39;analisi di fluorescenza riflessione interna totale time-resolved riutilizzabili idrogel di DNA chip.

&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408; PMMA &#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB; DNA &#x6DB2;&#x6EF4;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3068;&#x76F8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149; &#xFF08;TIRF) &#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068; DNA &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x518D;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; DNA &#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x5370;&#x5237;&#x3068;&#x30D8;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E1;&#x30ED;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x518D;&#x8868;&#x793A;&#x86CD;&#x5149;&#x306B;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; DNA &#x306E; 5 fmol &#x307E;&#x3067;&#x7DDA;&#x5F62;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x5358;&#x4E00; basepair &#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4;&#x306B;&#x533A;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x3044; DNA &#x3092;&#x5C0B;&#x554F;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B; PCR &#x5897;&#x5E45;&#x4EA4;&#x914D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3001;&#x518D;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x4F4E;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x9AD8;&#x901F;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B; DNA &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6E29;&#x5EA6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x518D;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A; DNA &#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB; &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x3002;

&#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD615;&#xAD11; (TIRF) hydrogel DNA &#xB4DC;&#xB86D;&#xB9BF; microarrays &#x70AD; PMMA &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xD568;&#xAED8; &#xD3C9;&#xAC00; DNA &#xAD50; &#xC7A1; &#xD558; &#xACE0; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xCE69; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC7AC;&#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C;, &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hydrogel microarrays &#x70AD; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; DNA &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC778;&#xC1C4; &#xBC0F; photocross &#xC5F0;&#xACB0; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC30;&#xC5F4; TIRF &#xCE21;&#xC815; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC7AC;&#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC544;&#xB798; &#xB193;&#xC5EC;&#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xB300;&#xC0C1; DNA&#xC758; 5 fmol &#xC120;&#xD615; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB2E8;&#xC77C; basepair &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xB354; &#xD070; DNA&#xAC00; PCR &#xC99D;&#xD3ED; &#xAD50; &#xC7A1;&#xACFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE68;&#xB9AC; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xCE69; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; DNA &#xAD50; &#xC7A1; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD6A8;&#xC728;, &#xC7AC;&#xD604;, &#xC800;&#xB834; &#xD55C; &#xBE44;&#xC6A9; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC628;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; DNA hydrogel &#xCE69;&#xC758; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC;&#xC728; &#xC2DC;&#xAC04; &#xD574;&#xACB0; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC11D;.

Fluorescencia de reflexi&oacute;n interna total (TIRF) juntada con hidrogel-DNA microarrays de gota covalentemente en sustratos PMMA presenta una plataforma reutilizable, sensible para la evaluaci&oacute;n de hibridaci&oacute;n de ADN y para el desarrollo r&aacute;pido de biochips. Hidrogel microarrays, que contienen covalente sondas de ADN, se crean mediante una impresi&oacute;n simple y el proceso de vinculaci&oacute;n photocross. TIRF medidas de los arreglos de Mostrar la reutilizaci&oacute;n robusta, mostrar sensibilidad lineal hasta 5 fmol de ADN de fluorescencia etiquetada Diana y son sensibles a basepair solo desajustes. Adem&aacute;s, la posibilidad de interrogar el ADN m&aacute;s grande se muestra a trav&eacute;s de estudios con la hibridaci&oacute;n de amplificaci&oacute;n PCR. Concluyente demostramos una plataforma eficiente, reproducible, de bajo costo para los estudios de hibridaci&oacute;n de ADN que podr&iacute;a ser utilizado para el diagn&oacute;stico r&aacute;pido de alto rendimiento as&iacute; como desarrollo de biochip.

Temperatura y el an&aacute;lisis de fluorescencia de reflexi&oacute;n interna total resuelta en el tiempo de reutilizables chips de ADN hidrogel.

El desarrollo de pr&#xE1;cticas en tiempo real, sondas para la funci&#xF3;n de supervisi&#xF3;n de prote&#xED;nas en muestras biol&#xF3;gicas representa un reto importante de la era posgen&#xF3;mica. En respuesta, presentamos aqu&#xED; &#x26;quot;balizas factor de transcripci&#xF3;n&#x26;quot;, vinculante activados por sondas fluorescentes de ADN que indican la presencia de determinadas actividades de uni&#xF3;n al ADN. Como una prueba de principio, se presentan las balizas para la detecci&#xF3;n r&#xE1;pida y sensible de los tres factores de transcripci&#xF3;n (prote&#xED;na obligatoria de TATA, Myc-Max, y NF-kB), y la actividad medida vinculante directamente en crudo extractos nucleares.

Faros factor de transcripci&#xF3;n para la detecci&#xF3;n cuantitativa de la actividad de uni&#xF3;n al ADN

&#x65B9;&#x4FBF;&#x3001; &#x5B9E;&#x65F6;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x76D1;&#x6D4B;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x662F;&#x540E;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x65F6;&#x4EE3;&#x7684;&#x4E00;&#x9879;&#x91CD;&#x8981;&#x6311;&#x6218;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x56DE;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x513F;&#x4ECB;&#x7ECD;&quot;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4FE1;&#x6807;&#xFF0C;&quot;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8367;&#x5149; DNA &#x63A2;&#x9488;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E09;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x4FE1;&#x6807; (TATA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;Myc-Max &#x548C; NF-&kappa; B&#xFF09;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8861;&#x91CF;&#x5728;&#x539F;&#x6CB9;&#x6838;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4FE1;&#x6807;&#x7684; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

The development of convenient, real-time probes for monitoring protein function in biological samples represents an important challenge of the postgenomic era. In response, we introduce here "transcription factor beacons," binding-activated fluorescent DNA probes that signal the presence of specific DNA-binding activities. As a proof of principle, we present beacons for the rapid, sensitive detection of three transcription factors (TATA Binding Protein, Myc-Max, and NF-ÎºB), and measure binding activity directly in crude nuclear extracts.

Transcription factor beacons for the quantitative detection of DNA binding activity.

Le d&#xE9;veloppement de pratiques, en temps r&#xE9;el des sondes pour la fonction des prot&#xE9;ines de surveillance dans des &#xE9;chantillons biologiques repr&#xE9;sente un d&#xE9;fi important de l&#x26;#39;&#xE8;re post-g&#xE9;nomique. En r&#xE9;ponse, nous introduisons ici &#x26;quot;balises de facteurs de transcription,&#xAB; lie-activ&#xE9;s sondes d&#x26;#39;ADN fluorescentes qui signalent la pr&#xE9;sence de liaison &#xE0; l&#x26;#39;ADN sp&#xE9;cifiques des activit&#xE9;s. Comme une preuve de principe, nous pr&#xE9;sentons des balises pour la d&#xE9;tection rapide, sensible de trois facteurs de transcription (TATA Binding Protein, Myc-Max, et NF-kB), et l&#x26;#39;activit&#xE9; mesure contraignante directement dans des extraits bruts nucl&#xE9;aires.

Beacons facteur de transcription pour la d&#xE9;tection quantitative de l&#x26;#39;activit&#xE9; de liaison d&#x26;#39;ADN

Die Entwicklung von bequemen, Echtzeit-Sonden zur &Uuml;berwachung der Proteinfunktion in biologischen Proben stellt eine wichtige Herausforderung der postgenomic-&Auml;ra. Im Gegenzug stellen wir hier &quot;Transkription Faktor Leuchtt&uuml;rme,&quot; Bindung aktivierte fluoreszierenden DNA Sonden, die das Vorhandensein von spezifischen DNA-bindenden T&auml;tigkeiten zu signalisieren. Als Beweis des Prinzips, pr&auml;sentieren wir Ihnen Leuchten f&uuml;r den schnellen, empfindlichen Nachweis von drei Transkriptionsfaktoren (TATA verbindliches Protein, Myc-Max und NF-&kappa;B), und Binden von Aktivit&auml;t direkt in grobe nukleare Extrakte zu messen.

Transkription Faktor Leuchtfeuer zum quantitativen Nachweis von DNA-Bindung-Aktivit&auml;t.

Lo sviluppo di comodo, in tempo reale le sonde per il monitoraggio della funzione delle proteine in campioni biologici rappresenta una sfida importante di epoca postgenomic. In risposta, introduciamo qui &quot;Beacon di fattore trascrizione,&quot; associazione attivato fluorescente DNA sonde che segnalano la presenza di attivit&agrave; specifiche di DNA-binding. Come prova di principio, vi presentiamo Beacon per la rilevazione rapida e sensibile di tre fattori di trascrizione (TATA Binding Protein, Myc-Max e NF-&kappa;B) e misurare l&#39;attivit&agrave; di associazione direttamente in greggi estratti nucleari.

Beacon di fattore di trascrizione per la rilevazione quantitativa dell&#39;attivit&agrave; di legame del DNA.

&#x751F;&#x4F53;&#x8A66;&#x6599;&#x4E2D;&#x306E;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4FBF;&#x5229;&#x306A;&#x3001;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x6642;&#x4EE3;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F; &#x26;quot;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3001;&#x26;quot;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;DNA&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x86CD;&#x5149;DNA&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x3054;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x539F;&#x7406;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;3&#x3064;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x3001;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#xFF08;TATA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;Myc-Max&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;NF-&#x3BA;B&#xFF09;&#x306E;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x7C97;&#x88FD;&#x6838;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

DNA&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;

&#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xACAC;&#xBCF8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xD3B8;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0;, &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xAC1C;&#xBC1C; postgenomic &#xC2DC;&#xB300;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACFC;&#xC81C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30; &quot;&#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xBE44;&#xCF58;,&quot; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC774; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD615;&#xAD11; DNA &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xD2B9;&#xC815; DNA &#xBB36;&#xB294; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xAC1C;. &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB85C; &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; 3 &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C;, &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBE44;&#xCF58; (&#xD0C0; &#xD0C0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Myc &#xB9E5;&#xC2A4;&#xC640; NF &kappa;B), &#xC6D0;&#xC720; &#xD575; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE21;&#xC815;.

&#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; &#xBE44;&#xCF58; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C;.

&#x867D;&#x7136; potentiostats &#x662F;&#x73B0;&#x4EE3;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x770B;&#x5230;&#x4E86;&#x8D44;&#x6E90;&#x532E;&#x4E4F;&#xFF0C;&#x5982;&#x672C;&#x79D1;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x8BFE;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F83;&#x5C0F;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x4E16;&#x754C;&#x3002;Potentiostats &#x7684;&#x6E17;&#x900F;&#x7387;&#x5F88;&#x4F4E;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x5176;&#x6210;&#x672C;&#xFF0C;&#x751A;&#x81F3;&#x6700;&#x4FBF;&#x5B9C;&#x5E02;&#x9762;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4; potentiostats &#x5356;&#x8D85;&#x8FC7;&#x4E00;&#x5343;&#x7F8E;&#x5143;&#x3002;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x7684;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x7AD9;&#x53EF;&#x80FD;&#x56E0;&#x6B64;&#x8BC1;&#x660E;&#x6709;&#x76CA;&#x4E8E;&#x6559;&#x80B2;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#xFF0C;&#x5E76;&#x589E;&#x52A0;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x6280;&#x672F;&#x83B7;&#x5F97;&#x98DF;&#x7269;&#x3001; &#x836F;&#x7269;&#x548C;&#x73AF;&#x5883;&#x76D1;&#x6D4B;&#x3002;&#x94ED;&#x8BB0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x52A8;&#x673A;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x6B64;&#x5904;&#x63CF;&#x8FF0; CheapStat&#xFF0C;&#x4EF7;&#x683C;&#x4F4E;&#x5EC9; &#xFF08;&lt; 80 &#x5143;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6052;&#x7535;&#x4F4D;&#x7684;&#x5F00;&#x6E90; &#xFF08;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x548C;&#x786C;&#x4EF6;&#xFF09;&#xFF0C;&#x624B;&#x6301;&#x4EEA;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7531;&#x4EFB;&#x4F55;&#x4EBA;&#x64C5;&#x957F;&#x4E8E;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7535;&#x8DEF;&#x6784;&#x9020;&#x3002;&#x6B64;&#x8BBE;&#x5907;&#x652F;&#x6301;&#x6F5C;&#x5728;&#x6CE2;&#x5F62;&#x6267;&#x884C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3001; &#x65B9;&#x5F62;&#x6CE2;&#x3001; &#x7EBF;&#x6027;&#x626B;&#x63CF;&#x548C;&#x9633;&#x6781;&#x6EB6;&#x51FA;&#x4F0F;&#x5B89;&#x6CD5;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x8303;&#x56F4;&#x4ECE;&#x98DF;&#x7269;&#x548C;&#x836F;&#x7269;-&#x8D28;&#x91CF;&#x68C0;&#x9A8C;&#x5230;&#x73AF;&#x5883;&#x76D1;&#x6D4B;&#x3001; &#x5FEB;&#x901F; DNA &#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x6559;&#x80B2;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8BBE;&#x5907;&#x7684;&#x539F;&#x7406;&#x56FE;&#x3001; &#x90E8;&#x4EF6;&#x6E05;&#x5355;&#x3001; &#x7535;&#x8DEF;&#x677F;&#x5E03;&#x5C40;&#x6587;&#x4EF6;&#x3001; &#x793A;&#x4F8B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x548C;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x6307;&#x4EE4;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x652F;&#x6301;&#x4FE1;&#x606F;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x6253;&#x5F00;&#x786C;&#x4EF6;&#x8BB8;&#x53EF;&#x4E0B;&#x88AB;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;

&#x6052;&#x7535;&#x4F4D; CheapStat&#xFF1A; &#x5F00;&#x653E;&#x6E90;&#x7801;&#xFF0C;&quot;&#x81EA;&#x5DF1;&#x52A8;&#x624B;&quot;&#x4EEA;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x6559;&#x80B2;&#x4E0A;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

Although potentiostats are the foundation of modern electrochemical research, they have seen relatively little application in resource poor settings, such as undergraduate laboratory courses and the developing world. One reason for the low penetration of potentiostats is their cost, as even the least expensive commercially available laboratory potentiostats sell for more than one thousand dollars. An inexpensive electrochemical workstation could thus prove useful in educational labs, and increase access to electrochemistry-based analytical techniques for food, drug and environmental monitoring. With these motivations in mind, we describe here the CheapStat, an inexpensive (<$80), open-source (software and hardware), hand-held potentiostat that can be constructed by anyone who is proficient at assembling circuits. This device supports a number of potential waveforms necessary to perform cyclic, square wave, linear sweep and anodic stripping voltammetry. As we demonstrate, it is suitable for a wide range of applications ranging from food- and drug-quality testing to environmental monitoring, rapid DNA detection, and educational exercises. The device's schematics, parts lists, circuit board layout files, sample experiments, and detailed assembly instructions are available in the supporting information and are released under an open hardware license.

CheapStat: an open-source, "do-it-yourself" potentiostat for analytical and educational applications.

Bien que potentiostats sont le fondement de la recherche moderne &#xE9;lectrochimique, ils ont vu la demande relativement peu dans les milieux pauvres en ressources, telles que des cours de premier cycle et de laboratoire dans le monde en d&#xE9;veloppement. Une des raisons du faible taux de p&#xE9;n&#xE9;tration de potentiostats est leur co&#xFB;t, car m&#xEA;me les moins chers potentiostats de laboratoire disponibles dans le commerce de vendre pour plus de mille dollars. Un poste de travail bon march&#xE9; &#xE9;lectrochimique pourrait donc s&#x26;#39;av&#xE9;rer utile dans les laboratoires d&#x26;#39;enseignement, et accro&#xEE;tre l&#x26;#39;acc&#xE8;s &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;lectrochimie &#xE0; base de techniques analytiques pour l&#x26;#39;alimentation, des m&#xE9;dicaments et surveillance de l&#x26;#39;environnement. Avec ces motivations &#xE0; l&#x26;#39;esprit, que nous d&#xE9;crivons ici la CheapStat, un peu co&#xFB;teux (&#x26;lt;80 $), open-source (software et hardware), tenu &#xE0; la main potentiostat qui peut &#xEA;tre construit par quelqu&#x26;#39;un qui est comp&#xE9;tent dans l&#x26;#39;assemblage des circuits. Ce dispositif prend en charge un certain nombre de formes d&#x26;#39;onde potentiel n&#xE9;cessaire pour effectuer cyclique, onde carr&#xE9;e, balayage lin&#xE9;aire et voltamp&#xE9;rom&#xE9;trie anodique. Comme nous le d&#xE9;montrons, il est adapt&#xE9; &#xE0; un large &#xE9;ventail d&#x26;#39;applications allant des analyses alimentaires et des m&#xE9;dicaments de qualit&#xE9; &#xE0; la surveillance environnementale, la d&#xE9;tection rapide de l&#x26;#39;ADN, et des exercices p&#xE9;dagogiques. Sch&#xE9;mas de l&#x26;#39;appareil, des listes de pi&#xE8;ces, des fichiers de circuits de mise en page du conseil d&#x26;#39;administration, des exp&#xE9;riences d&#x26;#39;&#xE9;chantillons, et des instructions de montage d&#xE9;taill&#xE9;es sont disponibles dans les informations de support et sont publi&#xE9;s sous une licence mat&#xE9;rielle ouverte.

CheapStat: un Open-source, &#x26;quot;do-it-yourself&#x26;quot; Potentiostat pour les applications analytiques et de l&#x26;#39;&#xE9;ducation

Obwohl Potentiostats die Grundlage f&uuml;r moderne elektrochemische Forschung sind, haben sie relativ wenig Anwendung in armen Ressourceneinstellungen, z. B. Bachelor &Uuml;bungen und der sich entwickelnden Welt gesehen. Ein Grund f&uuml;r die geringe Verbreitung von Potentiostats ist ihre Kosten, als sogar die billigsten handels&uuml;blichen Laboratorium, die Potentiostats f&uuml;r mehr als tausend Dollar zu verkaufen. Eine preiswerte elektrochemische Workstation konnte so n&uuml;tzlich sein, in den p&auml;dagogischen Labors und Ausweitung des Zugangs zu Elektrochemie-basierten Analysemethoden f&uuml;r Lebensmittel, Arzneimittel und Umwelt&uuml;berwachung. Mit dieser Motivationen im Auge, beschreiben wir hier die CheapStat, eine preiswerte (&lt;$ 80), Open Source (Software und Hardware), Hand-Held Potentiostat, die von jedermann kann, die t&uuml;chtig konstruiert werden bei Montage Schaltungen ist. Dieses Ger&auml;t unterst&uuml;tzt eine Reihe von potenziellen Wellenformen notwendig zyklische, quadratische Welle, linear Sweep und anodische stripping-Voltammetrie durchzuf&uuml;hren. Wie wir zeigen, eignet es sich f&uuml;r eine Vielzahl von Anwendungen reichen von Essen - und -Arzneimittelqualit&auml;t und Umwelt&uuml;berwachung, schnelle DNA Abfragung und p&auml;dagogische &Uuml;bungen testen. Des Ger&auml;ts Schaltpl&auml;ne, St&uuml;cklisten, Leiterplatten-Layout-Dateien Beispiel Experimente und detaillierte Montageanleitung stehen in der unterst&uuml;tzenden Informationen und werden unter einer open-Hardware-Lizenz freigegeben.

CheapStat: eine Open-Source-, &quot;Do-it-yourself&quot; Potentiostat f&uuml;r analytische und p&auml;dagogische Anwendungen.

Anche se potentiostats sono il fondamento della moderna ricerca elettrochimico, hanno visto relativamente poca applicazione in impostazioni scarsa risorsa, ad esempio corsi di laboratorio dello studente non laureato e del mondo in via di sviluppo. Uno dei motivi per la bassa penetrazione della potentiostats &egrave; loro costo, come anche il meno costoso commercialmente disponibile laboratorio potentiostats vendere per pi&ugrave; di mille dollari. Un poco costoso workstation elettrochimica potrebbe quindi rivelarsi utile nei laboratori didattici e aumentare l&#39;accesso alle tecniche analitiche basate su elettrochimica per cibo, farmaci e monitoraggio ambientale. Con queste motivazioni nella mente, descriviamo qui la CheapStat, un poco costoso (&lt;$ 80), open source (software e hardware), palmare potenziostato che possono essere costruito da chi &egrave; esperto in assemblaggio di circuiti. Questo dispositivo supporta un certo numero di forme d&#39;onda potenziale necessarie eseguire onda ciclica, quadrato, sweep lineare e voltammetria di ridissoluzione anodica. Come dimostreremo, &egrave; adatto per una vasta gamma di applicazioni che vanno da cibo-droga-qualit&agrave; e test di monitoraggio ambientale, rilevamento di DNA rapido ed esercizi educativi. Gli schemi del dispositivo, liste parti, file di layout del circuito stampato, esperimenti campione e istruzioni di montaggio dettagliate sono disponibili nelle informazioni di supporto e sono rilasciate sotto una licenza open hardware.

CheapStat: un potenziostato open-source, &quot;fai da te&quot; per le applicazioni analitiche ed educative.

&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x4EE3;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x57FA;&#x76E4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5B66;&#x90E8;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5BA4;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x767A;&#x5C55;&#x9014;&#x4E0A;&#x56FD;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4E4F;&#x3057;&#x3044;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x3001;&#x898B;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3067;&#x3082;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x306A;&#x5E02;&#x8CA9;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5BA4;&#x3067;&#x306E;&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E7;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x5343;&#x30C9;&#x30EB;&#x3067;&#x58F2;&#x5374;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x4F4E;&#x6D78;&#x900F;&#x7406;&#x7531;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6559;&#x80B2;&#x7814;&#x7A76;&#x5BA4;&#x3067;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x3001;&#x98DF;&#x54C1;&#x3001;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x53CA;&#x3073;&#x74B0;&#x5883;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x6280;&#x8853;&#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5FF5;&#x982D;&#x306B;&#x7F6E;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52D5;&#x6A5F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;CheapStat&#x3001;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x306B;&#x719F;&#x7DF4;&#x3057;&#x305F;&#x4EBA;&#x306F;&#x8AB0;&#x3067;&#x3082;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#xFF08;&#x26;lt;$ 80&#xFF09;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#xFF08;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C9;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#xFF09;&#x3001;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EB;&#x30C9;&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30AA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;&#x306E;&#x3001;&#x65B9;&#x5F62;&#x6CE2;&#x3001;&#x30EA;&#x30CB;&#x30A2;&#x30B9;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x30A2;&#x30CE;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x30DC;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6CE2;&#x5F62;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x304C;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x98DF;&#x54C1;&#x3068;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x54C1;&#x8CEA;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x74B0;&#x5883;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;DNA&#x691C;&#x51FA;&#x3001;&#x6559;&#x80B2;&#x6F14;&#x7FD2;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x5E45;&#x5E83;&#x3044;&#x7528;&#x9014;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x56DE;&#x8DEF;&#x56F3;&#x3001;&#x90E8;&#x54C1;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x56DE;&#x8DEF;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x30EC;&#x30A4;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#xB7;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3001;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x547D;&#x4EE4;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x60C5;&#x5831;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#xB7;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C9;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#xB7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CheapStat&#xFF1A;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x6559;&#x80B2;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7528;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001; &#x26;quot;&#x65E5;&#x66DC;&#x5927;&#x5DE5;&#x26;quot;&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30C8;

Potentiostats&#xB294; &#xD604;&#xB300; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;, &#xD559;&#xBD80; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xACFC;&#xC815; &#xAC19;&#xC740; &#xC790;&#xC6D0; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB3C4;&#xC0C1;&#xAD6D; &#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. Potentiostats&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xCE68;&#xD22C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC720; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; potentiostats &#xC774;&#xC0C1; &#xCC9C; &#xB2EC;&#xB7EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD310;&#xB9E4; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC800;&#xB834; &#xC0C1;&#xC6A9; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC18C;&#xB3C4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC800;&#xB834; &#xD55C; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; &#xC6CC;&#xD06C;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC774;&#xC158; &#xC218; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4;, &#xC720;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DD;&#xD488;, &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC0F; &#xD658;&#xACBD; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xAE30;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00;. &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3D9;&#xAE30;&#xC640; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC800;&#xB834; &#xD55C; CheapStat &#xC124;&#xBA85; (&lt;$ 80), &#xC624;&#xD508; &#xC18C;&#xC2A4; (&#xC18C;&#xD504;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xD558;&#xB4DC;&#xC6E8;&#xC5B4;) &#xD734;&#xB300;&#xC6A9; potentiostat &#xD68C;&#xB85C; &#xC870;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xB2A5;&#xC219; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC218; &#xC788;&#xB294;. &#xC774; &#xC7A5;&#xCE58;&#xAC00; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xD30C;&#xD615;&#xC744; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801;, &#xC815;&#xC0AC;&#xAC01;&#xD615; &#xD30C;, &#xC120;&#xD615; &#xCCAD;&#xC18C; &#xBC0F; &#xC544;&#xB178;&#xB2E4;&#xC774;&#xC9D5; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BD; voltammetry &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC5B4;&#xD50C;&#xB9AC;&#xCF00;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC74C;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC57D;&#xBB3C;-&#xD488;&#xC9C8; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD658;&#xACBD; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;, &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; DNA &#xAC80;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xAD50;&#xC721; &#xD6C8;&#xB828;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAE30;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC704;&#xD574; &#xC801;&#xB2F9; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB514;&#xBC14;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xD68C;&#xB85C;&#xB3C4;, &#xBD80;&#xD488; &#xBAA9;&#xB85D;, &#xD68C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xB4DC; &#xB808;&#xC774;&#xC544;&#xC6C3; &#xD30C;&#xC77C;, &#xC0D8;&#xD50C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xC138; &#xC870;&#xB9BD; &#xC9C0;&#xCE68; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xC815;&#xBCF4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC624;&#xD508; &#xD558;&#xB4DC;&#xC6E8;&#xC5B4; &#xB77C;&#xC774;&#xC13C;&#xC2A4; &#xD558;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xD45C; &#xD588;&#xB2E4;.

CheapStat:&#xB294; &#xC624;&#xD508; &#xC18C;&#xC2A4;, &quot;&#xC790;&#xC791;&quot; potentiostat &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xAD50;&#xC721; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;.

Aunque potenciostatos son la base de la moderna investigaci&#xF3;n electroqu&#xED;mica, que han visto la aplicaci&#xF3;n relativamente poco en entornos con escasos recursos, como los cursos de pregrado y de laboratorio del mundo en desarrollo. Una de las razones para la baja penetraci&#xF3;n de potenciostatos es su costo, ya que incluso los menos costosos de laboratorio potenciostatos disponibles en el mercado se venden a m&#xE1;s de mil d&#xF3;lares. Una estaci&#xF3;n de trabajo de bajo costo electroqu&#xED;mico por lo tanto podr&#xED;a ser &#xFA;til en los laboratorios de ense&#xF1;anza, y aumentar el acceso a la electroqu&#xED;mica basados &#x200B;&#x200B;en t&#xE9;cnicas anal&#xED;ticas para alimentos, medicamentos y monitoreo ambiental. Con estas motivaciones en mente, como se describe aqu&#xED; el CheapStat, una barata (&#x26;lt;$ 80), de c&#xF3;digo abierto (software y hardware), de mano potenciostato que puede ser construido por cualquier persona que sea competente en el montaje de circuitos. Este dispositivo es compatible con una serie de formas de onda potencial necesario para llevar a cabo la onda c&#xED;clica, cuadrado, de barrido lineal y voltamperometr&#xED;a de redisoluci&#xF3;n an&#xF3;dica. Como hemos demostrado, es apto para una amplia gama de aplicaciones que van desde an&#xE1;lisis de alimentos y calidad de los medicamentos para la vigilancia ambiental, la detecci&#xF3;n r&#xE1;pida de ADN, y los ejercicios educativos. El esquema del dispositivo, listas de piezas, el circuito de archivos de dise&#xF1;o de mesa, los experimentos de la muestra, y las instrucciones detalladas de montaje est&#xE1;n disponibles en la informaci&#xF3;n de apoyo y se publican bajo una licencia de hardware abierto.

CheapStat: un c&#xF3;digo abierto, &#x26;quot;do-it-yourself&#x26;quot; potenciostato para aplicaciones de anal&#xED;tica y de la Educaci&#xF3;n

Niveaux de facteurs de transcription d&#x26;#39;expression, qui refl&#xE8;tent le d&#xE9;veloppement sensibilit&#xE9; cellulaire et &#xE9;tat de la maladie, sont g&#xE9;n&#xE9;ralement surveill&#xE9;es par la lourdeur, le r&#xE9;actif &#xE0; forte intensit&#xE9; de tests qui n&#xE9;cessitent des quantit&#xE9;s relativement importantes de cellules. Ici, nous d&#xE9;montrons une approche simple et quantitative de leur d&#xE9;tection bas&#xE9; sur une plate-forme simple, de d&#xE9;tection &#xE9;lectrochimique. Ce capteur sensible et quantitativement d&#xE9;tecte sa cible facteur de transcription dans des milieux complexes (par exemple, 250 pg / mL extraits bruts nucl&#xE9;aires) dans un format pratique, &#xE0; faible r&#xE9;actif de proc&#xE9;d&#xE9; ne n&#xE9;cessitant que 10 ul de l&#x26;#39;&#xE9;chantillon. Notre approche appara&#xEE;t ainsi comme un moyen prometteur de la surveillance des niveaux de facteurs de transcription.

Quantification des facteur de transcription liant dans des extraits cellulaires en utilisant une &#xE9;lectrochimique, Structure-Switching biocapteur

Transkription Faktor Ausdruck Niveaus, die sensibel Zellentwicklung und Krankheitsstadium widerspiegeln, werden in der Regel &uuml;ber schwerf&auml;llig, Reagenz-Intensive Proben &uuml;berwacht, die relativ gro&szlig;e Mengen von Zellen erfordern. Hier zeigen wir ein einfaches, quantitative Verfahren zu ihrer Erkennung basiert auf einer einfachen, elektrochemische Fernerkundung-Plattform. Dieser Sensor erkennt einf&uuml;hlsam und quantitativ sein Ziel-Transkriptionsfaktor in komplexen Medien (z. B. 250 &mu;g/mL grobe nukleare Extrakte) in einem bequemen, niedrig-Reagenz Prozess erfordern nur 10 &mu;L der Probe. Unser Ansatz scheint daher ein vielversprechendes Mittel, mit denen Transkription Faktor Ebenen.

Quantifizierung der Transkriptionsfaktor binden in Zelle extrahiert unter Verwendung einer elektrochemischen, Struktur-Switching-Biosensor.

Livelli di espressione di fattore trascrizione, che riflettono sensibilmente lo sviluppo cellulare e stato di malattia, in genere vengono monitorati tramite dosaggi ingombrante, reagente-intensive che richiedono relativamente grandi quantit&agrave; di cellule. Qui, noi dimostrare un approccio semplice, quantitativo al loro rilevamento basato su una piattaforma semplice, elettrochimica di telerilevamento. Questo sensore sensibile e quantitativamente rileva il fattore di trascrizione di destinazione nel complesso media (ad es., 250 &mu;g/mL grezzo nucleare estratti) in un processo conveniente, basso-reagente che richiedono solo 10 &mu;L di campione. Il nostro approccio appare cos&igrave; un mezzo promettente per monitorare i livelli di fattore di trascrizione.

Quantificazione del fattore di trascrizione vincolante nella cella estratti utilizzando un biosensore elettrochimico, struttura di commutazione.

&#x654F;&#x611F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3084;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x591A;&#x91CF;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x9762;&#x5012;&#x306A;&#x8A66;&#x85AC;&#x3092;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x76E3;&#x8996;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306A;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306F;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x304B;&#x3064;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306B;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x308F;&#x305A;&#x304B;10&#x3BC;L&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x4FBF;&#x5229;&#x3067;&#x4F4E;&#x8A66;&#x85AC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;250&#x3BC;g/ mL&#x306E;&#x539F;&#x6CB9;&#x6838;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#xFF09;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x76E3;&#x8996;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x4E2D;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;

&#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD558;&#xAC8C; &#xBC18;&#xC601;, &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xC2DD; &#xB808;&#xBCA8; &#xC140;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xD070; &#xC218;&#xB7C9;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC131;&#xAC00;&#xC2E0;, &#xC2DC; &#xC57D;&#xC744; &#xB9CE;&#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0;, &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; &#xC13C;&#xC11C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0;, &#xC591;&#xC801; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC13C;&#xC11C; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD558;&#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xC591;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; 10 &mu; L&#xB97C; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD3B8;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0;, &#xB0AE;&#xC740;-&#xC2DC; &#xC57D; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4; (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, 250 &mu;g/mL &#xC6D0;&#xC720; &#xD575; &#xCD94;&#xCD9C;)&#xC5D0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xB294; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559;, &#xAD6C;&#xC870; &#xC804;&#xD658; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC13C;&#xC11C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Los niveles de expresi&#xF3;n del factor de transcripci&#xF3;n, que reflejan sensiblemente el desarrollo celular y estado de la enfermedad, son t&#xED;picamente controla mediante engorrosos e intensivos reactivo-ensayos que requieren cantidades relativamente grandes de c&#xE9;lulas. Este sentido, demuestran un enfoque simple y cuantitativo para su detecci&#xF3;n basado en un simple plataforma, la detecci&#xF3;n electroqu&#xED;mica. Este sensor sensible y cuantitativamente detecta su factor de transcripci&#xF3;n diana en medios complejos (por ejemplo, 250 mg / mL extractos nucleares crudo) en una manera conveniente, de bajo reactivo proceso que requiere s&#xF3;lo 10 l de la muestra. Nuestro enfoque de lo que parece un medio prometedor de los niveles de vigilancia de factores de transcripci&#xF3;n.

La cuantificaci&#xF3;n de factor de transcripci&#xF3;n vinculante en extractos celulares usando una electroqu&#xED;mica, estructura de conmutaci&#xF3;n-Biosensor

&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x654F;&#x611F;&#x5730;&#x53CD;&#x6620;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x75BE;&#x75C5;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x901A;&#x5E38;&#x9700;&#x8981;&#x76D1;&#x89C6;&#x901A;&#x8FC7;&#x7E41;&#x7410;&#x3001; &#x8BD5;&#x5242;&#x5BC6;&#x96C6;&#x578B;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x9700;&#x8981;&#x8F83;&#x5927;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C55;&#x793A;&#x5176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x3001; &#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x9065;&#x611F;&#x5E73;&#x53F0;&#x7B80;&#x5355;&#x3001; &#x5B9A;&#x91CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6B64;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7075;&#x654F;&#x3001; &#x5B9A;&#x91CF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5176;&#x76EE;&#x6807;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x590D;&#x6742;&#x5A92;&#x4F53; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;250 &#x5FAE;&#x514B;/&#x6BEB;&#x5347;&#x7C97;&#x6838;&#x63D0;&#x53D6;&#xFF09; &#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B9;&#x4FBF;&#x3001; &#x4F4E;&#x8BD5;&#x5242;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x53EA;&#x6709; 10 &mu;L&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#x770B;&#x6765;&#x76D1;&#x6D4B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x597D;&#x529E;&#x6CD5;&#x3002;

&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x3001; &#x7ED3;&#x6784;&#x5207;&#x6362;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x3002;

Transcription factor expression levels, which sensitively reflect cellular development and disease state, are typically monitored via cumbersome, reagent-intensive assays that require relatively large quantities of cells. Here, we demonstrate a simple, quantitative approach to their detection based on a simple, electrochemical sensing platform. This sensor sensitively and quantitatively detects its target transcription factor in complex media (e.g., 250 Î¼g/mL crude nuclear extracts) in a convenient, low-reagent process requiring only 10 Î¼L of sample. Our approach thus appears a promising means of monitoring transcription factor levels.

Andrew J. Bonham

Department of Chemistry and Biochemistry

University Of California Santa Barbara

Fabrication of Electrochemical-DNA Biosensors for the Reagentless Detection of Nucleic Acids, Proteins and Small Molecules

Andrew J. Bonham

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Chemistry and Biochemistry

University Of California Santa Barbara

Fabrication of Electrochemical-DNA Biosensors for the Reagentless Detection of Nucleic Acids, Proteins and Small Molecules

Department of Chemistry and Biochemistry