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Isolation and Characterization of RNA-Containing Exosomes

The field of exosome research is rapidly expanding, with a dramatic increase in publications in recent years. These small vesicles (30-100 nm) of ...

University of Gothenburg

&#x957F;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x4E8C;&#x624B;&#x70DF;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x548C; CD8(+) &#x548C; CD4(+) &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x822A;&#x7A7A;&#x516C;&#x53F8; CD4(+) &#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; 16 &#x7684;&#x4EBA;&#x6570;&#x6709;&#x6240;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x662F;&#x5426;&#x70DF;&#x8349;&#x70DF;&#x96FE;&#x8017;&#x5C3D;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-16 &#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x540C;&#x65F6;&#x589E;&#x52A0;&#x80DE;&#x5916;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-16 &#x548C;&#x662F;&#x5426;&#x6D89;&#x53CA;&#x6C27;&#x81EA;&#x7531;&#x57FA; (OFR) CD8(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x822A;&#x7A7A;&#x516C;&#x53F8;&#x548C;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-16 &#x4ECE;&#x5934;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x5438;&#x70DF;&#x8005;&#x6162;&#x6027;&#x652F;&#x6C14;&#x7BA1;&#x80BA;&#x6CE1;&#x704C;&#x6D17; (BAL) &#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x5728; CD8(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-16 &#x86CB;&#x767D;&#x548C; mRNA &#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E5F;&#x662F;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8840;&#x6DB2; CD8(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x70DF;&#x8349;&#x70DF;&#x96FE;&#x6210;&#x5206;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x660E;&#x663E;&#x4E0A;&#x5347;&#x6C27;&#x5316;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x3002;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-16 &#x80DE;&#x5916;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x589E;&#x52A0;&#x6162;&#x6027;&#x5438;&#x70DF;&#x8005;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE; BAL &#x6DB2;&#x4E2D;&#x548C;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x6DB2; CD8(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x70DF;&#x8349;&#x70DF;&#x96FE;&#x6210;&#x5206;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E2D;&#x672A;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x5076;&#x5C14;&#x5438;&#x70DF;&#x540E;&#x77ED;&#x671F;&#x63A5;&#x89E6;&#x70DF;&#x8349;&#x70DF;&#x96FE;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B; (CD69) &#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6807;&#x5FD7;&#x662F;&#x7565;&#x4E3A;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x800C;&#x5176;&#x4ED6;&#x6307;&#x6807;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD; (&#x819C;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x3001; &#x51CB;&#x4EA1;&#x53CA;&#x589E;&#x6B96;) &#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8840;&#x6DB2; CD8(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x5230;&#x4E0D;&#x5229;&#x5F71;&#x54CD;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x70DF;&#x8349;&#x70DF;&#x96FE;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;OFR &#x6E05;&#x9053;&#x592B;&#x963B;&#x6B62;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x800C;&#x86CB;&#x767D;&#x5408;&#x6210;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3001; &beta;-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x3001; &#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x3001; &#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176;&#x3001; &#x78F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x548C;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5374;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x6837;&#x505A;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x70DF;&#x8349;&#x70DF;&#x96FE;&#x8017;&#x5C3D;&#x9884;&#x5236;&#x80DE;&#x5185;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-16 &#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x6291;&#x5236;&#x5176;&#x5FB7;&#x8BFA;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x626D;&#x66F2;&#x4E86;&#x4EBA; CD8(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;OFR &#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5728;&#x8FD9;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5F71;&#x54CD;&#x70DF;&#x8349;&#x70DF;&#x96FE; CD8 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x822A;&#x7A7A;&#x516C;&#x53F8;&#x548C;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-16 &#x65E5;: &#x6C27;&#x81EA;&#x7531;&#x57FA;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x5417;&#xFF1F;

Chronic exposure to tobacco smoke leads to an increase in the frequency of infections and in the number of CD8(+) and CD4(+) cells as well as the CD4(+) chemoattractant cytokine IL-16 in the airways. Here, we investigated whether tobacco smoke depletes intracellular IL-16 protein and inhibits de novo production of IL-16 in CD8(+) cells from human airways and blood while increasing extracellular IL-16 and whether oxygen free radicals (OFR) are involved. Intracellular IL-16 protein in CD8(+) cells and mRNA in all cells was decreased in bronchoalveolar lavage (BAL) samples from chronic smokers. This was also the case in human blood CD8(+) cells exposed to water-soluble tobacco smoke components in vitro, in which oxidized proteins were markedly increased. Extracellular IL-16 protein was increased in cell-free BAL fluid from chronic smokers and in human blood CD8(+) cells exposed to water-soluble tobacco smoke components in vitro. This was not observed in occasional smokers after short-term exposure to tobacco smoke. A marker of activation (CD69) was slightly increased, whereas other markers of key cellular functions (membrane integrity, apoptosis, and proliferation) in human blood CD8(+) cells in vitro were negatively affected by water-soluble tobacco smoke components. An OFR scavenger prevented these effects, whereas a protein synthesis inhibitor, a Î²-adrenoceptor, a glucocorticoid receptor agonist, a phosphodiesterase, a calcineurin phosphatase, and a caspase-3 inhibitor did not. In conclusion, tobacco smoke depletes preformed intracellular IL-16 protein, inhibits its de novo synthesis, and distorts key cellular functions in human CD8(+) cells. OFR may play a key role in this context.

Effects of tobacco smoke on IL-16 in CD8+ cells from human airways and blood: a key role for oxygen free radicals?

Une exposition chronique &agrave; la fum&eacute;e de tabac entra&icirc;ne une augmentation de la fr&eacute;quence des infections et du nombre de cellules CD8 et CD4 + ainsi que la CD4 + facteur chimiotactique cytokine IL-16 dans les voies respiratoires. Ici, nous avons examin&eacute; si la fum&eacute;e de tabac est &eacute;puis&eacute;e intracellulaire des prot&eacute;ines IL-16 et inhibe la production de novo de IL-16 dans les cellules CD8 airways humaines et de sang tout en augmentant l&#39;IL-16 extracellulaire et si les radicaux libres d&#39;oxyg&egrave;ne (OFR) sont impliqu&eacute;s. IL-16 intracellulaire des prot&eacute;ines dans les cellules CD8 et ARNm dans toutes les cellules a diminu&eacute; dans des &eacute;chantillons de lavage (LBA) de broncho-alv&eacute;olaire de fumeurs chroniques. C&#39;&eacute;tait &eacute;galement le cas dans les globules de CD8 humains expos&eacute;s &agrave; des composants solubles dans l&#39;eau dans la fum&eacute;e in vitro, dans lequel les prot&eacute;ines oxyd&eacute;es ont nettement augment&eacute;s. Prot&eacute;ine extracellulaire de IL-16 a &eacute;t&eacute; augment&eacute;e dans le liquide BAL acellulaire de fumeurs chroniques et dans les globules de CD8 humains expos&eacute;s &agrave; des composants solubles dans l&#39;eau dans la fum&eacute;e in vitro. Cela n&#39;a pas &eacute;t&eacute; observ&eacute; chez les fumeurs occasionnels apr&egrave;s une br&egrave;ve exposition &agrave; la fum&eacute;e de tabac. Un marqueur de l&#39;activation (CD69) a l&eacute;g&egrave;rement augment&eacute; tandis que les autres marqueurs des principales fonctions cellulaires (prolif&eacute;ration, apoptose et int&eacute;grit&eacute; de la membrane) dans les cellules CD8 sang humain in vitro ont &eacute;t&eacute; contrari&eacute;s par les composants de la fum&eacute;e de tabac soluble dans l&#39;eau. Un charognard OFR emp&ecirc;ch&eacute; ces effets, contrairement &agrave; un inhibiteur de synth&egrave;se de prot&eacute;ine, un r&eacute;cepteur &beta;-adr&eacute;nergique, un agoniste du r&eacute;cepteur glucocortico&iuml;de, une phosphodiest&eacute;rase, une phosphatase de la calcineurine et un inhibiteur de la caspase-3. En conclusion, fum&eacute;e de tabac &eacute;puise intracellulaire des prot&eacute;ines de l&#39;IL-16 pr&eacute;form&eacute;s, inhibe la synth&egrave;se de novo et d&eacute;forme les principales fonctions cellulaires dans les cellules CD8 humaines. OFR peut jouer un r&ocirc;le cl&eacute; dans ce contexte.

Effets du tabac fument sur IL-16 cellules CD8 + de voies respiratoires humains et du sang : un r&ocirc;le cl&eacute; pour les radicaux libres d&#39;oxyg&egrave;ne ?

Chronischer Exposition gegen&uuml;ber Tabakrauch f&uuml;hrt zu einer Zunahme der H&auml;ufigkeit von Infektionen und die Anzahl der Zellen CD8(+) und CD4(+) sowie die CD4(+) Chemoattractant Cytokine IL-16 in den Atemwegen. Hier wir gepr&uuml;ft, ob Tabakrauch intrazellul&auml;re IL-16-Protein ersch&ouml;pft und hemmt die de-Novo-Produktion von IL-16 in CD8(+) Zellen aus menschlichen Atemwege und Blut w&auml;hrend gleichzeitig die extrazellul&auml;re IL-16 und ob freie Sauerstoff-Radikale (OFR) beteiligt sind. Intrazellul&auml;re IL-16-Protein in den CD8(+) Zellen und mRNA in allen Zellen wurde in Bronchoalveol&auml;re Lavage (BAL) Proben von chronischen Rauchern verringert. Dies war auch der Fall in menschlichem Blut CD8(+) Zellen, wasserl&ouml;slichen Tabakrauch-Komponenten in vitro ausgesetzt, in denen oxidierte Proteine deutlich erh&ouml;ht wurden. Extrazellul&auml;re IL-16-Protein wurde in zellfreien BAL-Fl&uuml;ssigkeit aus chronischen Raucher und in menschlichem Blut CD8(+) Zellen ausgesetzt wasserl&ouml;slichen Tabakrauch-Komponenten, die in-vitro-erh&ouml;ht. Dies wurde nicht nach kurzfristigen Exposition gegen&uuml;ber Tabakrauch in gelegentliche Raucher beobachtet. Eine Markierung der Aktivierung (CD69) wurde leicht erh&ouml;ht, w&auml;hrend die anderen Markern der wichtige Zellfunktionen (Membran Integrit&auml;t, Apoptose und Proliferation) in menschlichem Blut CD8(+) Zellen in vitro durch wasserl&ouml;sliche Tabakrauch-Komponenten negativ beeinflusst wurden. Eine Schnitzeljagd OFR verhindert diese Effekte, w&auml;hrend ein Protein-Synthese-Hemmer, ein &beta;-Adrenozeptor, ein Glukokortikoid-Rezeptor-Agonist, eine Phosphodiesterase, eine Calcineurin-Phosphatase und ein Caspase-3-Hemmer nicht tat. Abschlie&szlig;end Tabakrauch ersch&ouml;pft vorgeformte intrazellul&auml;re IL-16-Protein, die de-Novo-Synthese hemmt, und verzerrt wichtige Zellfunktionen in den menschlichen Zellen in CD8(+). OFR kann in diesem Zusammenhang eine Schl&uuml;sselrolle spielen.

Auswirkungen des Tabaks Rauch auf IL-16 in CD8 +-Zellen aus menschlichen Atemwege und Blut: eine Schl&uuml;sselrolle f&uuml;r freie Sauerstoff-Radikale?

L&#39;esposizione cronica al fumo di tabacco provoca un aumento della frequenza di infezioni e del numero di cellule cellule e CD4(+) cos&igrave; come il CD4(+) chemioattrattanti citochine IL-16 nelle vie aeree. Qui, abbiamo studiato se fumo di tabacco si consuma intracellulare della proteina IL-16 e inibisce la de novo produzione di IL-16 in cellule cellule umane airways e sangue incrementando IL extracellulare-16 e se sono coinvolti i radicali liberi dell&#39;ossigeno (OFR). Intracellulare della proteina IL-16 in cellule cellule e mRNA in tutte le cellule &egrave; diminuite in campioni (BAL) un lavaggio broncoalveolare da fumatori cronici. Questo era anche il caso nel sangue umano cellule cellule esposte a componenti idrosolubili fumo di tabacco in vitro, in cui le proteine ossidate erano marcatamente aumentate. Extracellulare della proteina IL-16 &egrave; stata aumentata nel fluido BAL cell-free da fumatori cronici e nel sangue umano cellule cellule esposte a componenti idrosolubili fumo di tabacco in vitro. Questa non &egrave; stata osservata in fumatori occasionali dopo breve esposizione al fumo di tabacco. Un marcatore di attivazione (CD69) &egrave; stato leggermente aumentato, mentre altri marcatori delle principali funzioni cellulari (l&#39;integrit&agrave; della membrana, apoptosi e proliferazione) in cellule di cellule del sangue umano in vitro sono stati influenzati negativamente da componenti del fumo di tabacco solubile in acqua. Un saprofago OFR ha impedito a questi effetti, considerando che un inibitore della sintesi proteica, un &beta;-adrenocettore, un agonista del recettore glucocorticoide, una fosfodiesterasi, una fosfatasi calcineurina e un inibitore di caspasi-3 non ha fatto. In conclusione, fumo di tabacco esaurisce preformata intracellulare della proteina IL-16, inibisce la sintesi de novo e distorce le principali funzioni cellulari nelle cellule cellule umane. OFR pu&ograve; giocare un ruolo chiave in questo contesto.

Gli effetti del tabacco di fumo su IL-16 in cellule CD8 + da airways umano e sangue: un ruolo chiave per i radicali liberi dell&#39;ossigeno?

&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x306E;&#x7159;&#x3078;&#x306E;&#x6162;&#x6027;&#x9732;&#x51FA;&#x306F;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x983B;&#x5EA6;&#x3068;&#x6C17;&#x9053; CD4(+) &#x8D70;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; IL-16 &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x3068; CD4(+) &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x306E;&#x7159;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E; IL-16 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x3044;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3057;&#x3001;de novo &#x751F;&#x7523; IL-16 &#x3072;&#x3068;&#x6C17;&#x9053;&#x3084;&#x8840;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E; IL-16 &#x3068;&#x9178;&#x7D20;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AB;&#x30EB; (OFR) &#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;IL 16 &#x86CB;&#x767D;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E; mRNA &#x6162;&#x6027;&#x306E;&#x55AB;&#x7159;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6C17;&#x7BA1;&#x652F;&#x80BA;&#x80DE;&#x6D17;&#x6D44; (BAL) &#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;.&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x9178;&#x5316;&#x50B7;&#x5BB3;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x7159;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x8840;&#x6DB2;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E; IL-16 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE; BAL &#x6DB2;&#x6162;&#x6027;&#x306E;&#x55AB;&#x7159;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8840;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x7D30;&#x80DE; in vitro &#x306E;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x7159;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3067;&#x6642;&#x6298;&#x55AB;&#x7159;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x7159;&#x3078;&#x306E;&#x77ED;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x306F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD; (&#x819C;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x6027;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;) in vitro &#x3067;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x8840;&#x7403;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x7159;&#x6210;&#x5206;&#x304C;&#x60AA;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3044;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; (CD69) &#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306F;&#x5FAE;&#x5897;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x963B;&#x5BB3; &beta; &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30B8;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3; &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;caspase3 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; OFR &#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x306E;&#x7159;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x3082;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; IL 16 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x3044;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x305D;&#x306E; de novo &#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3066;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6B6A;&#x3081;&#x3002;OFR &#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x30AD;&#x30FC;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x62C5;&#x3046;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

&#x305F;&#x3070;&#x3053;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7159; IL-16 cd8 &#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x6C17;&#x9053;&#x3084;&#x8840;&#x6DB2;&#x306E;&#x4E0A;: &#x9178;&#x7D20;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AB;&#x30EB;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#xFF1F;

&#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB9CC;&#xC131; &#xB178;&#xCD9C; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xBE48;&#xB3C4; CD8(+) &#xBC0F; CD4(+) &#xC140; &#xC218; &#xAE30;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; IL-16 CD4(+) chemoattractant cytokine &#xC99D;&#xAC00;&#xB85C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0B8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30; depletes &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; IL 16 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; IL-16&#xACFC; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC790;&#xC720; &#xB798; &#xB514; &#xCE7C; (OFR) &#xCC38;&#xC5EC; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xB3C4; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; CD8(+) &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; IL-16 &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. CD8(+) &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; IL 16 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; mRNA &#xB9CC;&#xC131; &#xD761;&#xC5F0; &#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; bronchoalveolar &#xC138;&#xCC99; (BAL) &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xCCB4; &#xC678;, &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD53C; CD8(+) &#xC140;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC0B0;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9CC;&#xC131; &#xD761;&#xC5F0; &#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C; &#xC561; &#xC140; &#xBB34;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD53C; CD8(+) &#xC140; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; IL 16 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83; &#xD558;&#xC9C0; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xAE30;&#xAC04; &#xB178;&#xCD9C; &#xD6C4; &#xAC00;&#xB054; &#xD761;&#xC5F0; &#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xC131;&#xD654; (CD69)&#xC758; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561; CD8(+) &#xC138;&#xD3EC; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC694; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; (&#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;, apoptosis, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD655;&#xC0B0;)&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD558; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; &#xC57D;&#xAC04; &#xC99D;&#xAC00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. OFR &#xD3D0;&#xD488; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, &beta;-adrenoceptor, glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC2A4;, calcineurin &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC0F; caspase 3 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xB97C; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xD615;&#xC131;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; IL 16 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; depletes &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD8(+) &#xC140;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC65C;&#xACE1;. OFR &#xC774;&#xB7F0;&#xC774; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2F4;&#xBC30;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xB3C4; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; CD8 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; IL-16 &#xC5F0;&#xAE30;: &#xC0B0;&#xC18C; &#xC790;&#xC720; &#xB798; &#xB514; &#xCE7C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD575;&#xC2EC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;?

La exposici&oacute;n cr&oacute;nica al humo del tabaco conduce a un aumento en la frecuencia de infecciones y en el n&uacute;mero de c&eacute;lulas CD8 y CD4 como la CD4 quimioatrayentes citocina IL-16 en las v&iacute;as respiratorias. Aqu&iacute;, hemos investigado si el humo del tabaco consume la prote&iacute;na intracelular de IL-16 e inhibe la producci&oacute;n de novo de IL-16 en las c&eacute;lulas CD8 airways humanas y sangre aumentando extracelular IL-16 y si est&aacute;n implicados los radicales libres de ox&iacute;geno (RLO). Prote&iacute;na de IL-16 intracelular en las c&eacute;lulas CD8 y mRNA en todas las c&eacute;lulas se redujeron en las muestras de lavado (BAL) broncoalveolar de fumadores cr&oacute;nicos. Esto tambi&eacute;n fue el caso en sangre humana CD8 c&eacute;lulas expuestas a componentes del humo del tabaco soluble en agua in vitro, en el que fueron aumentadas marcado prote&iacute;nas oxidadas. Prote&iacute;na extracelular de IL-16 fue aumentada en el l&iacute;quido del BAL acelulares de fumadores cr&oacute;nicos y en sangre humana CD8 c&eacute;lulas expuestas a componentes del humo del tabaco soluble en agua in vitro. Esto no se observ&oacute; en los fumadores ocasionales despu&eacute;s de exposici&oacute;n a corto plazo al humo de tabaco. Un marcador de activaci&oacute;n (CD69) aument&oacute; ligeramente, mientras que otros marcadores de las funciones celulares claves (integridad de la membrana, apoptosis y proliferaci&oacute;n) en c&eacute;lulas de CD8 de sangre humana in vitro fueron afectados negativamente por los componentes del humo del tabaco soluble en agua. Un limpiador OFR prevenir estos efectos, mientras que un inhibidor de la s&iacute;ntesis de prote&iacute;na, un receptores &beta;-adren&eacute;rgicos, un agonista del receptor de glucocorticoides, una fosfodiesterasa, una fosfatasa calcineurina y un inhibidor de la caspasa-3 no lo hizo. En conclusi&oacute;n, el humo del tabaco agota preformada prote&iacute;na intracelular de la IL-16, inhibe la s&iacute;ntesis de novo y distorsiona las funciones celulares claves en c&eacute;lulas humanas de CD8. OFR puede desempe&ntilde;ar un papel clave en este contexto.

&iquest;Efectos del tabaco fuman en IL-16 en c&eacute;lulas CD8 + de v&iacute;as a&eacute;reas humanas y sangre: un papel clave para los radicales libres de ox&iacute;geno?

&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x662F;&#x5C0F;&#x541E;&#x51FA;&#x8EAB;&#x7684;&#x80DE;&#x5916; nanovesicles &#x8C03;&#x89E3;&#x4E0D;&#x540C;&#x8868;&#x9762;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6216;&#x8005;&#x7A7F;&#x68AD;&#x5728;&#x6EE1;&#x5E03;&#x529F;&#x80FD; RNA &#x5230;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x53D1;&#x8868;&#x8BB8;&#x591A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5305;&#x62EC;&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x4E0D;&#x540C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5176;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x5927;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x5728;&#x5176; RNA&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x8102;&#x8D28;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;

&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x5728;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0; &#xFF1B; &#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x901A;&#x4FE1;&#x4FDD;&#x62A4;&#x90AE;&#x4EF6;exosomal &#x7A7F;&#x68AD; RNA &#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Exosomes are small extracellular nanovesicles of endocytic origin that mediate different signals between cells, by surface interactions and by shuttling functional RNA from one cell to another. Exosomes are released by many cells including mast cells, dendritic cells, macrophages, epithelial cells and tumour cells. Exosomes differ compared to their donor cells, not only in size, but also in their RNA, protein and lipid composition.

Exosomes communicate protective messages during oxidative stress; possible role of exosomal shuttle RNA.

Exosomes sont petit nanovesicles extracellulaire d&#39;origine endocytose qui m&eacute;dient diff&eacute;rents signaux entre les cellules, par des interactions de surfaces et par navette ARN fonctionnelle d&#39;une cellule &agrave; l&#39;autre. Exosomes sont sortis de nombreuses cellules, y compris les mastocytes, cellules dendritiques, macrophages, cellules &eacute;pith&eacute;liales et les cellules tumorales. Exosomes diff&egrave;rent par rapport &agrave; leurs cellules de donneur, non seulement en taille, mais aussi dans leur composition d&#39;ARN, de prot&eacute;ines et de lipides.

Exosomes communiquer des messages de protection pendant le stress oxydatif ; r&ocirc;le possible de l&#39;ARN de navette exosomal.

Exosomes sind kleine extrazellul&auml;re Nanovesicles endocytic Ursprungs, die unterschiedliche Signale zwischen Zellen, indem Oberfl&auml;che Interaktionen und pendelnden funktionalen RNA aus einer Zelle zu einer anderen zu vermitteln. Exosomes werden von vielen Zellen und Mastzellen, dendritische Zellen, Makrophagen, Epithelzellen und Tumorzellen freigegeben. Exosomes unterscheiden sich im Vergleich zu ihren Spenderzellen, nicht nur in der Gr&ouml;&szlig;e, sondern auch in ihrer Zusammensetzung RNA, Proteine und Lipide.

Exosomes kommunizieren sch&uuml;tzende Nachrichten w&auml;hrend der oxidativen Stress; m&ouml;gliche Rolle der Exosomal-Flughafentransfer-RNA.

Fatto &egrave; piccole nanovesicles extracellulare di origine endocitico che mediare diversi segnali tra le cellule, di interazioni di superficie e da RNA funzionale spola da una cella a altra. Fatto &egrave; uscito da molte cellule, tra cui mastociti, cellule dendritiche, macrofagi, cellule epiteliali e cellule tumorali. Fatto differisce rispetto al loro cellule del donatore, non solo nelle dimensioni, ma anche nella loro composizione RNA, proteine e lipidi.

Fatto comunicazione messaggi protettivi durante lo stress ossidativo; possibile ruolo di exosomal navetta RNA.

&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8868;&#x9762;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x5F80;&#x5FA9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027; RNA &#x3092;&#x5225;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916; nanovesicles &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x539F;&#x7523;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;, &#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3001;&#x306E;&#x307F;&#x306A;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x305D;&#x306E; RNA&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x8102;&#x8CEA;&#x7D44;&#x6210;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4FDD;&#x8B77;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30FC;&#x30B8;&#x4E2D;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x901A;&#x4FE1;;exosomal &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB; RNA &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

Exosomes&#xB294; &#xD45C;&#xBA74; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC655;&#xBCF5; &#xAE30;&#xB2A5; RNA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC140; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; endocytic &#xC6D0;&#xC0B0;&#xC9C0;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; nanovesicles. Exosomes&#xB294; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;, &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;, &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;, &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Exosomes &#xD06C;&#xAE30;, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; RNA, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Exosomes &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCF4;&#xD638; &#xBA54;&#xC2DC;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; exosomal &#xC154;&#xD2C0; RNA&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Exosomas son peque&ntilde;os Nanoves&iacute;culas extracelular de origen endoc&iacute;ticas que median diferentes se&ntilde;ales entre las c&eacute;lulas, por interacciones de superficies y por mover ARN funcional de una c&eacute;lula a otra. Exosomas son liberados por muchas c&eacute;lulas incluyendo mastocitos, c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas, macr&oacute;fagos, c&eacute;lulas epiteliales y c&eacute;lulas tumorales. Exosomas difieren con respecto a las c&eacute;lulas del donante, no s&oacute;lo en tama&ntilde;o, sino tambi&eacute;n en su composici&oacute;n de ARN, prote&iacute;nas y l&iacute;pidos.

Exosomas comunican mensajes de protecci&oacute;n durante el estr&eacute;s oxidativo; posible papel del ARN de transporte exosomal.

Exosomas son ves&iacute;culas de membrana 30-100 nm de origen endoc&iacute;ticas producidos por numerosas c&eacute;lulas. Pueden mediar diversas funciones biol&oacute;gicas, incluyendo la presentaci&oacute;n del ant&iacute;geno. Exosomas se han demostrado recientemente que contienen ARN funcional, que puede ser entregado a otras c&eacute;lulas. Exosomas pueden as&iacute; mediar funciones biol&oacute;gicas por interacciones de superficie a superficie con las c&eacute;lulas, o por la entrega de ARN funcional a las c&eacute;lulas. Nuestro objetivo era por lo tanto determinar la presencia de ARN en exosomas de saliva humana, plasma y la leche materna y si estos exosomas pueden ser tomadas por los macr&oacute;fagos.

Humanos saliva, plasma y mama leche exosomas contienen RNA: absorci&oacute;n por los macr&oacute;fagos.

&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x90FD;&#x662F; 30-100 &#x7EB3;&#x7C73;&#x56CA;&#x6CE1;&#x541E;&#x8D77;&#x6E90;&#x65E0;&#x6570;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8C03;&#x89E3;&#x591A;&#x6837;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x6F14;&#x793A;&#x6587;&#x7A3F;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x53D1;&#x73B0;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x5305;&#x542B;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; RNA&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x5176;&#x4ED6;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x53EF;&#x80FD;&#x56E0;&#x6B64;&#x8C03;&#x89E3;&#x751F;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x66F2;&#x9762;&#x81F3;&#x66F2;&#x9762;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x6216;&#x901A;&#x8FC7;&#x5411;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; RNA&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x5B58;&#x5728;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x553E;&#x6DB2;&#x3001; &#x8840;&#x6D46;&#x3001; &#x6BCD;&#x4E73;&#x548C;&#x662F;&#x5426;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7531;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; RNA&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x553E;&#x6DB2;&#x3001; &#x8840;&#x6D46;&#x3001; &#x4E73;&#x817A;&#x725B;&#x5976;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x5305;&#x542B; RNA&#xFF1A; &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5438;&#x6536;&#x3002;

Exosomes are 30-100 nm membrane vesicles of endocytic origin produced by numerous cells. They can mediate diverse biological functions, including antigen presentation. Exosomes have recently been shown to contain functional RNA, which can be delivered to other cells. Exosomes may thus mediate biological functions either by surface-to-surface interactions with cells, or by the delivery of functional RNA to cells. Our aim was therefore to determine the presence of RNA in exosomes from human saliva, plasma and breast milk and whether these exosomes can be taken up by macrophages.

Human saliva, plasma and breast milk exosomes contain RNA: uptake by macrophages.

Exosomes sont des v&eacute;sicules de la membrane 30-100 nm d&#39;origine endocytose produites par nombreuses cellules. Ils peuvent servir de m&eacute;diateur diverses fonctions biologiques, y compris la pr&eacute;sentation des antig&egrave;nes. Exosomes ont r&eacute;cemment d&eacute;montr&eacute;s que contiennent les ARN fonctionnel, qui peuvent &ecirc;tre livr&eacute; &agrave; d&#39;autres cellules. Exosomes pourrait v&eacute;hiculer ainsi des fonctions biologiques en surface-surface des interactions avec les cellules ou par la fourniture de l&#39;ARN fonctionnelle aux cellules. Notre objectif &eacute;tait donc de d&eacute;terminer la pr&eacute;sence d&#39;ARN dans les exosomes de salive humaine, plasma et du lait maternel et la question de savoir si ces exosomes peuvent &ecirc;tre absorb&eacute;s par les macrophages.

Exosomes de lait maternel, le plasma et la salive humaines contient RNA: captation par les macrophages.

Exosomes sind 30-100 nm Membran Vesikel endocytic Ursprungs, die von zahlreichen Zellen produziert. Sie k&ouml;nnen vielf&auml;ltige biologische Funktionen, einschlie&szlig;lich der Antigen-Pr&auml;sentation vermitteln. Exosomes wurden vor kurzem gezeigt, funktionalen RNA enthalten, die auf andere Zellen geliefert werden kann. Exosomes kann somit biologischen Funktionen durch Fl&auml;che zu Fl&auml;che Interaktionen mit Zellen oder durch die Lieferung von funktionalen RNA auf Zellen vermitteln. Unser Ziel war daher bestimmt das Vorhandensein von RNA in Exosomes von menschlichen Speichel, Plasma und Brust Milch und ob diese Exosomes durch Makrophagen aufgenommen werden k&ouml;nnen.

Menschlicher Speichel, Plasma und Brust Milch Exosomes enthalten RNA: Aufnahme durch Makrophagen.

Fatto &egrave; vescicole di membrana 30-100 nm di origine endocitico prodotto da numerose cellule. Essi possono mediare diverse funzioni biologiche, compresa la presentazione dell&#39;antigene. Fatto hanno recentemente dimostrato di contenere RNA funzionale, che pu&ograve; essere consegnato alle altre cellule. Fatto pu&ograve; quindi mediare funzioni biologiche per superficie--superficie interazioni con le cellule, o la consegna di RNA funzionale alle cellule. Il nostro obiettivo era quindi di determinare la presenza di RNA in fatto da saliva umana, al plasma e al seno il latte e se questi fatto pu&ograve; essere preso dai macrofagi.

Fatto di latte umano saliva, plasma e seno contenga RNA: assorbimento dai macrofagi.

&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; 30-100 nm &#x306E;&#x819C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x539F;&#x7523;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x914D;&#x4FE1;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027; RNA &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6700;&#x8FD1;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x8868;&#x9762;&#x30FB;&#x8868;&#x9762;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BB;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027; RNA &#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x751F;&#x4F53;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3072;&#x3068;&#x553E;&#x6DB2;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x3001;&#x6BCD;&#x4E73;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x304B;&#x3089;&#x306E; RNA &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x553E;&#x6DB2;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x3001;&#x4E73;&#x623F;&#x725B;&#x4E73;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E; RNA &#x3092;&#x542B;&#x3080;: &#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3002;

Exosomes 30-100 nm &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; vesicles endocytic &#xC6D0;&#xC0B0;&#xC9C0; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Exosomes &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; RNA&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Exosomes &#xD45C;&#xBA74;-&#xD45C;&#xBA74; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; RNA&#xC758; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD0C0; &#xC561;, &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBC0F; &#xC720; &#xBC29; &#xC6B0;&#xC720;&#xC640; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; exosomes&#xC5D0; &#xCD2C;&#xC601; &#xC218;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; exosomes&#xC5D0;&#xC11C; RNA&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD0C0; &#xC561;, &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBC0F; &#xC720; &#xBC29; &#xC6B0;&#xC720; exosomes RNA &#xD3EC;&#xD568;: &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xD574;.

Exosome &#x7814;&#x7A76;&#x9886;&#x57DF;&#x6B63;&#x5728;&#x8FC5;&#x901F;&#x6269;&#x5927;&#xFF0C;&#x5728;&#x51FA;&#x7248;&#x7269;&#x4E2D;&#x8FD1;&#x5E74;&#x6765;&#x6025;&#x5267;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C0F;&#x6CE1; &#xFF08;30-100 nm&#xFF09; &#x7684;&#x541E;&#x8D77;&#x6E90;&#x88AB;&#x9996;&#x6B21;&#x63D0;&#x51FA;&#x6765;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4E3A;&#x7F51;&#x7EC7;&#x6210;&#x719F;&#x5230; erythrocytes(1)&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x6D88;&#x9664;&#x8F6C;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x540E;&#x6765;&#x88AB;&#x547D;&#x540D;&#x4E3A;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x3002;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x7531;&#x5916;&#x6765;&#x53D1;&#x82BD;&#x665A; endosomes&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x751F;&#x4EA7;&#x591A;&#x6CE1;&#x4F53; (MVBs) &#x548C;&#x88AB;&#x91CA;&#x653E;&#x5230;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x4E0E;&#x8840;&#x6D46; membrane(2) MVBs&#x3002;&#x81EA;&#x4ECE;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x88AB;&#x6240;&#x793A;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x91CA;&#x653E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6C34;&#x6CE1;&#x3002;&#x51E0;&#x79CD;&#x4F53;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8840;&#x6D46;&#x3001; &#x9F3B;&#x704C;&#x6D17;&#x6DB2;&#x3001; &#x553E;&#x6DB2;&#x548C;&#x4E73;&#x817A;&#x764C; milk(3-6) &#x4E2D;&#x4E5F;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5B83;&#x8868;&#x660E;&#x7684;&#x5185;&#x5BB9;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x53D6;&#x51B3;&#x7684;&#x8D77;&#x59CB;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x4EA7;&#x751F;&#x3002;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E3A;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5982;&#x5BF9; allergen(7,8)&#x3001; mice(9)&#x3001; &#x6291;&#x5236;&#x3001; &#x81EA;&#x7136;&#x6740;&#x624B; cells(10-12) &#x6FC0;&#x6D3B;&#x65E2;&#x5B9A;&#x80BF;&#x7624;&#x6D88;&#x9664;&#x3001; &#x4FC3;&#x8FDB;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A; T &#x89C4;&#x7BA1; cells(13)&#x3001; &#x523A;&#x6FC0; T &#x7EC6;&#x80DE; proliferation(14) &#x548C; apoptosis(15) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8010;&#x53D7;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;2007 &#x5E74;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x4ECE;&#x80A5;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CA;&#x653E;&#x5305;&#x542B;&#x4FE1;&#x4F7F;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178; (mRNA) &#x548C; microRNA (&#x7C73;&#x5C14;) &#x548C; RNA &#x53EF;&#x4EE5;&#x5F80;&#x8FD4;&#x4ECE;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E3A;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x901A;&#x8FC7;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x3002;&#x5728;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7531;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x7A7F;&#x68AD;&#x7684; mRNA &#x662F;&#x663E;&#x793A;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6210;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x8F6C;&#x79FB; RNA(16) &#x76D1;&#x7BA1;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x5728;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x72B6;&#x6001;&#x4E0B;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5BF9;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6FC0;&#x8010;&#x53D7;&#x548C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5EFA;&#x8BAE; RNA(17) exosomal &#x822A;&#x5929;&#x98DE;&#x673A;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x6DB2;&#x4F53;&#x6DF7;&#x5408;&#x5305;&#x542B;&#x4E86;&#x6C34;&#x6CE1;&#x548C;&#x68DA;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x8868;&#x5F81;&#x548C;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x5185;&#x5BB9;&#xFF0C;&#x8BC6;&#x522B;&#x4F18;&#x8D28;&#x9694;&#x79BB;&#x65B9;&#x6CD5;&#x56E0;&#x6B64;&#x5173;&#x952E;&#x662F;&#x8981;&#x533A;&#x5206;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x4ECE;&#x5176;&#x4ED6;&#x6CE1;&#x548C;&#x9897;&#x7C92;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x548C;&#x4F53;&#x6DB2;&#x4ECE;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x5206;&#x79BB;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x79BB;&#x65B9;&#x6CD5;&#x57FA;&#x4E8E;&#x53CD;&#x590D;&#x79BB;&#x5FC3;&#x548C;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x6B65;&#x9AA4;&#xFF0C;&#x8DDF;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x8D85;&#x901F;&#x79BB;&#x5FC3;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x9897;&#x7C92;&#x7684;&#x3002;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x548C;&#x8FA8;&#x522B;&#x7684; exosomal &#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x542B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3001; &#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x548C;&#x5370;&#x8FF9;&#x3002;&#x5206;&#x79BB;&#x7EAF;&#x5316;&#x603B; exosomal RNA &#x57FA;&#x4E8E;&#x81EA;&#x65CB;&#x67F1;&#x5C42;&#x6790;&#x548C; exosomal RNA &#x4EA7;&#x91CF;&#x548C;&#x5927;&#x5C0F;&#x5206;&#x5E03;&#x5206;&#x6790;&#x4F7F;&#x7528; &#x25C6; &#x4E00;&#x3002;

&#x9694;&#x79BB;&#x548C; RNA &#x542B;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

The field of exosome research is rapidly expanding, with a dramatic increase in publications in recent years. These small vesicles (30-100 nm) of endocytic origin were first proposed to function as a way for reticulocytes to eradicate the transferrin receptor while maturing into erythrocytes(1), and were later named exosomes. Exosomes are formed by inward budding of late endosomes, producing multivesicular bodies (MVBs), and are released into the environment by fusion of the MVBs with the plasma membrane(2). Since the first discovery of exosomes, a wide range of cells have been shown to release these vesicles. Exosomes have also been detected in several biological fluids, including plasma, nasal lavage fluid, saliva and breast milk(3-6). Furthermore, it has been demonstrated that the content and function of exosomes depends on the originating cell and the conditions under which they are produced. A variety of functions have been demonstrated for exosomes, such as induction of tolerance against allergen(7,8), eradication of established tumors in mice(9), inhibition and activation of natural killer cells(10-12), promotion of differentiation into T regulatory cells(13), stimulation of T cell proliferation(14) and induction of T cell apoptosis(15). Year 2007 we demonstrated that exosomes released from mast cells contain messenger RNA (mRNA) and microRNA (miRNA), and that the RNA can be shuttled from one cell to another via exosomes. In the recipient cells, the mRNA shuttled by exosomes was shown to be translated into protein, suggesting a regulatory function of the transferred RNA(16). Further, we have also shown that exosomes derived from cells grown under oxidative stress can induce tolerance against further stress in recipient cells and thus suggest a biological function of the exosomal shuttle RNA(17). Cell culture media and biological fluids contain a mixture of vesicles and shed fragments. A high quality isolation method for exosomes, followed by characterization and identification of the exosomes and their content, is therefore crucial to distinguish exosomes from other vesicles and particles. Here, we present a method for the isolation of exosomes from both cell culture medium and body fluids. This isolation method is based on repeated centrifugation and filtration steps, followed by a final ultracentrifugation step in which the exosomes are pelleted. Important methods to identify the exosomes and characterize the exosomal morphology and protein content are highlighted, including electron microscopy, flow cytometry and Western blot. The purification of the total exosomal RNA is based on spin column chromatography and the exosomal RNA yield and size distribution is analyzed using a Bioanalyzer.

Isolation and Characterization of RNA-Containing Exosomes.

Le domaine de la recherche de l&#39;exosome est en pleine expansion, avec une augmentation dramatique des publications ces derni&egrave;res ann&eacute;es. Ces petites v&eacute;sicules (30-100 nm) d&#39;origine endocytose &eacute;taient tout d&#39;abord propos&eacute;s de fonctionner comme un moyen pour les r&eacute;ticulocytes &eacute;radiquer le r&eacute;cepteur de la transferrine tout en arrivant &agrave; &eacute;ch&eacute;ance en erythrocytes(1) et ont &eacute;t&eacute; nomm&eacute;s plus tard les exosomes. Exosomes sont form&eacute;s par entrant en herbe de la fin des endosomes, produisant des corps multiv&eacute;siculaires (MVC) et sont lib&eacute;r&eacute;es dans l&#39;environnement par la fusion de la MVC avec la membrane(2) de plasma. Depuis la premi&egrave;re d&eacute;couverte d&#39;exosomes, montrent une large gamme de cellules de lib&eacute;rer ces v&eacute;sicules. Exosomes ont &eacute;galement &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;s dans plusieurs fluides biologiques, y compris le plasma, liquide de lavage nasal, milk(3-6) de salive et de la poitrine. En outre, il a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; que le contenu et la fonction des exosomes d&eacute;pend de la cellule d&#39;origine et les conditions dans lesquelles ils sont produits. Une vari&eacute;t&eacute; de fonctions ont &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;s pour les exosomes, tels que l&#39;induction de la tol&eacute;rance contre allergen(7,8), &eacute;limination des tumeurs &eacute;tablies dans mice(9), l&#39;inhibition et l&#39;activation de cells(10-12) tueuses naturelles, la promotion de diff&eacute;renciation en T cells(13) r&eacute;glementaire, la stimulation des lymphocytes T proliferation(14) et induction de cellules T apoptosis(15). Ann&eacute;e 2007, que nous avons d&eacute;montr&eacute; que les exosomes lib&eacute;r&eacute;s par les mastocytes contiennent l&#39;ARN messager (ARNm) et microARN (miARN), et que l&#39;ARN peut &ecirc;tre fait la navette d&#39;une cellule &agrave; l&#39;autre via les exosomes. Les cellules r&eacute;ceptrices, l&#39;ARNm, transport&eacute; par exosomes a montr&eacute; &agrave; &ecirc;tre traduit en prot&eacute;ine, ce qui sugg&egrave;re une fonction r&eacute;gulatrice de la RNA(16) transf&eacute;r&eacute;s. En outre, nous avons aussi montr&eacute; que les exosomes provenant de cellules cultiv&eacute;es sous stress oxydatif peut induire une tol&eacute;rance contre le stress suppl&eacute;mentaire dans les cellules r&eacute;ceptrices et sugg&egrave;rent donc une fonction biologique de la navette exosomal RNA(17). Milieux de culture de cellules et les liquides biologiques contiennent un m&eacute;lange de v&eacute;sicules et produire des fragments. Une m&eacute;thode d&#39;isolement de haute qualit&eacute; pour les exosomes, suivie de la caract&eacute;risation et l&#39;identification de leur contenu et les exosomes est donc essentielle de distinguer les exosomes d&#39;autres v&eacute;sicules et particules. Nous pr&eacute;sentons ici une m&eacute;thode pour isoler des exosomes de milieu de culture cellulaire et de liquides organiques. Cette m&eacute;thode d&#39;isolement est bas&eacute;e sur la centrifugation r&eacute;p&eacute;t&eacute;e et &eacute;tapes de filtration, suivies d&#39;une ultracentrifugation finale l&#39;&eacute;tape dans laquelle les exosomes sont granul&eacute;es. M&eacute;thodes importantes pour identifier les exosomes et caract&eacute;riser le contenu exosomal de morphologie et de la prot&eacute;ine sont mises en &eacute;vidence, y compris la microscopie &eacute;lectronique, cytom&eacute;trie en flux et Western blot. La purification de l&#39;exosomal total RNA repose sur la chromatographie sur colonne d&#39;essorage et la distribution de rendement et de la taille d&#39;exosomal RNA est analys&eacute;e &agrave; l&#39;aide d&#39;un Bioanalyzer.

Isolement et caract&eacute;risation des Exosomes contenant du RNA.

Bereich der Exosome Forschung ist, mit einem drastischen Anstieg der Ver&ouml;ffentlichungen in den letzten Jahren rasch. Diese kleinen Bl&auml;schen (30-100 nm) endocytic Ursprungs wurden zuerst die Funktion als eine M&ouml;glichkeit f&uuml;r Retikulozyten des Transferrin-Rezeptors zu beseitigen, w&auml;hrend der Reifung in erythrocytes(1) vorgeschlagen, und wurden sp&auml;ter benannt Exosomes. Exosomes werden gebildet, indem nach innen, die Knospen der sp&auml;ten Endosomen, multivesicular Karosserien (MVBs), und durch die Fusion von MVBs mit der Plasma-membrane(2) in die Umwelt freigesetzt werden. Seit der ersten Entdeckung der Exosomes wurde eine Vielzahl von Zellen angezeigt, diese Bl&auml;schen freizugeben. Exosomes wurden auch in mehreren biologischen Fl&uuml;ssigkeiten, einschlie&szlig;lich Plasma, nasale Lavage-Fl&uuml;ssigkeit, Speichel und Brust milk(3-6) nachgewiesen. Dar&uuml;ber hinaus wurde nachgewiesen, dass die Inhalte und die Funktion des Exosomes h&auml;ngt von der urspr&uuml;nglichen Zelle und die Bedingungen, unter denen sie produziert werden. Eine Vielzahl von Funktionen f&uuml;r Exosomes, z. B. Induktion von Toleranz gegen&uuml;ber allergen(7,8), Beseitigung der etablierten Tumoren in mice(9), Hemmung und Aktivierung der nat&uuml;rlichen killer-cells(10-12), F&ouml;rderung der Differenzierung in regulatorischen T-cells(13), Stimulation der T-Zell-proliferation(14) und Induktion von T-Zell-apoptosis(15) nachgewiesen worden. Jahr 2007 wir bewiesen, dass Exosomes aus Mastzellen freigesetzt Boten-RNA (mRNA) und MicroRNA (MiRNA) enthalten und die RNA von einer Zelle zur anderen &uuml;ber Exosomes pendelte sein kann. In den Empf&auml;nger Zellen zeigte die mRNA von Exosomes pendelte in Protein &uuml;bersetzt werden vorgeschlagen eine regulatorische Funktion der &uuml;bertragenen RNA(16). Dar&uuml;ber hinaus haben wir auch gezeigt, dass Exosomes von Zellen, die unter oxidativem Stress gewachsen abgeleitet k&ouml;nnen Toleranz gegen weitere Stress im Empf&auml;nger Zellen induzieren und so eine biologische Funktion des Exosomal Shuttle RNA(17) suggerieren. Zellkulturmedien und biologischen Fl&uuml;ssigkeiten enthalten eine Mischung aus Bl&auml;schen und Schuppen Fragmente. Eine hochwertige Isolation Methode f&uuml;r Exosomes, gefolgt von Charakterisierung und Identifizierung der Exosomes und ihres Inhalts, ist daher entscheidend f&uuml;r die Exosomes von anderen Bl&auml;schen und Teilchen zu unterscheiden. Hier pr&auml;sentieren wir eine Methode f&uuml;r die Isolierung von Exosomes von Zellkulturmedium und K&ouml;rperfl&uuml;ssigkeiten. Diese Isolation-Methode basiert auf wiederholte Zentrifugierung und Filtrierung Steps, gefolgt von einer endg&uuml;ltigen Ultrazentrifugation Schritt, in denen die Exosomes pelleted sind. Wichtige Methoden zur Ermittlung der Exosomes und Charakterisierung des Exosomal Morphologie und Protein-Inhalts, einschlie&szlig;lich Elektronenmikroskopie, Durchflusszytometrie und Western-Blot, werden hervorgehoben. Die Reinigung der gesamten Exosomal RNA basiert auf Spin-S&auml;ulenchromatographie und die Exosomal RNA-Ausbeute und Gr&ouml;&szlig;e-Verteilung ist mit einem Bioanalyzer analysiert.

Isolierung und Charakterisierung von RNA-haltigen Exosomes.

Il campo di ricerca di exosome &egrave; in rapida espansione, con un aumento drammatico nelle pubblicazioni negli ultimi anni. Queste piccole vescicole (30-100 nm) di origine endocitico in primo luogo sono stati proposti per funzionare come un modo per i reticolociti sradicare il recettore Transferrina durante la stagionatura in erythrocytes(1) e furono pi&ugrave; tardi denominate fatto. Fatto &egrave; formate da verso l&#39;interno in erba di ritardo endosomes, producendo corpi multivesicular (MVBs) e vengono rilasciati nell&#39;ambiente dalla fusione di MVBs con la membrane(2) al plasma. Poich&eacute; la prima scoperta di fatto, una vasta gamma delle cellule hanno dimostrato di rilasciare queste vescicole. Fatto &egrave; stati rilevati anche in diversi liquidi biologici, tra cui plasma, liquido di lavaggio nasale, saliva e seno milk(3-6). Inoltre, &egrave; stato dimostrato che il contenuto e la funzione di fatto dipende dalla cella originaria e le condizioni in cui sono prodotte. Una variet&agrave; di funzioni sono stati dimostrati per fatto, come ad esempio l&#39;induzione di tolleranza contro allergen(7,8), eradicazione di tumori stabiliti in mice(9), inibizione e attivazione di cells(10-12) killer naturale, promozione della differenziazione in T cells(13) normativo, stimolazione delle cellule T proliferation(14) e induzione di cellule T apoptosis(15). Anno 2007 che abbiamo dimostrato che fatto rilasciata da mastociti contenga RNA messaggero (mRNA) e microRNA (miRNA), e che il RNA pu&ograve; essere spola da una cella a altra tramite fatto. In cellule del destinatario, il mRNA di fatto la spola ha dimostrato di essere tradotto in proteina, suggerendo una funzione regolamentare del RNA(16) trasferito. Ulteriormente, abbiamo anche dimostrato che fatto derivato da cellule coltivate sotto stress ossidativo pu&ograve; indurre tolleranza contro ulteriore stress nelle cellule destinatario e quindi suggerire una funzione biologica della navetta exosomal RNA(17). Terreni di coltura delle cellule e fluidi biologici contengono una miscela di vescicole e capannone frammenti. Un metodo di isolamento di alta qualit&agrave; per fatto, seguita dalla caratterizzazione e identificazione del loro contenuto e il fatto &egrave; quindi cruciale per distinguere il fatto da altre vescicole e particelle. Qui di seguito, presentiamo un metodo per l&#39;isolamento di fatto dal terreno di coltura delle cellule e fluidi corporei. Questo metodo di isolamento si basa su ripetute centrifugazione e fasi di filtrazione, seguiti da un finale ultracentrifugazione passo in cui il fatto &egrave; stabulato. Metodi importanti per il fatto di identificare e caratterizzare il contenuto exosomal di morfologia e proteine sono evidenziati, tra cui la microscopia elettronica, citometria a flusso e Western blot. La purificazione della exosomal totale RNA si basa sulla cromatografia a colonna spin e la distribuzione di rendimento e dimensioni exosomal RNA viene analizzata usando una Bioanalyzer.

Isolamento e caratterizzazione di fatto contenente RNA.

&#x8FD1;&#x5E74;&#x306E;&#x51FA;&#x7248;&#x7269;&#x3067;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x95A2;&#x9023;&#x7814;&#x7A76;&#x5206;&#x91CE;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x62E1;&#x5927;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5C0F;&#x80DE; (30-100 nm) &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8D77;&#x6E90;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x7DB2;&#x72B6;&#x8D64;&#x8840;&#x7403; erythrocytes(1) &#x306B;&#x6210;&#x719F;&#x4E2D;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x6839;&#x7D76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x5F8C;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x540D;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E9;&#x30FC;&#x30DC;&#x30C7;&#x30A3; (MVBs) &#x751F;&#x7523;&#x65B0;&#x9032;&#x306E;&#x5F8C;&#x671F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x74B0;&#x5883;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE; membrane(2) &#x3068; MVBs &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x4EE5;&#x6765;&#x3001;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;.&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3082;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;, &#x9F3B;&#x6D17;&#x6D44;&#x6DB2;, &#x553E;&#x6DB2;&#x3068;&#x80F8;&#x306E; milk(3-6) &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4F53;&#x6DB2;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x3068;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4F9D;&#x5B58;&#x767A;&#x4FE1;&#x5143;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x88FD;&#x9020;&#x6761;&#x4EF6;&#x306B;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;allergen(7,8)&#x3001;mice(9)&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x306E;&#x30AD;&#x30E9;&#x30FC; cells(10-12) &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x64B2;&#x6EC5;&#x3001;T &#x898F;&#x5236; cells(13) &#x3078;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x4FC3;&#x9032;&#x3001;T &#x7D30;&#x80DE; proliferation(14) &#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x304A;&#x3088;&#x3073; T &#x7D30;&#x80DE; apoptosis(15) &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30EC;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2007 &#x5E74;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x80A5;&#x6E80;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC; RNA &#xFF08;mRNA&#xFF09; &#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; Rna &#xFF08;miRNA&#xFF09; &#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x308B;&#x3057;&#x3001;RNA 1 &#x3064;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x5225;&#x306B;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x5F80;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5F80;&#x5FA9; mRNA &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x305F; RNA(16) &#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x80B2;&#x3064;&#x30BB;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x7D30;&#x80DE;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; exosomal &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB; RNA(17) &#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x5A92;&#x4F53;&#x3068;&#x4F53;&#x6DB2;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x6DF7;&#x5728;&#x3057;&#x3001;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x6D41;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x54C1;&#x8CEA;&#x5206;&#x96E2;&#x6CD5;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x540C;&#x5B9A;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4ED6;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7C92;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x57F9;&#x5730;&#x3084;&#x4F53;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7E70;&#x8FD4;&#x3057;&#x9060;&#x5FC3;&#x5206;&#x96E2;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x6CD5;&#x3057;&#x3001;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5C0F;&#x7403;&#x5F62;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x8D85;&#x9060;&#x5FC3;&#x6CD5;&#x3067;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x308D;&#x904E;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x897F;&#x90E8;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;exosomal &#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x304C;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5408;&#x8A08; exosomal RNA &#x306E;&#x6D44;&#x5316;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3; &#x30AB;&#x30E9;&#x30E0;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3067;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;exosomal RNA &#x53CE;&#x91CF;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x5206;&#x5E03;&#x306F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A2;&#x30CA;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B6;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5206;&#x96E2;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E; RNA &#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Exosome &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBD84;&#xC57C;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xD589;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xD655;&#xB300; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Endocytic &#xAE30;&#xC6D0;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC791;&#xC740; &#xC18C;&#xD3EC; (30-100 nm) reticulocytes erythrocytes(1)&#xB85C; &#xC131;&#xC219; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; transferrin &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xADFC;&#xC808; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBA3C;&#xC800; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; exosomes &#xBA85;&#xBA85; &#xB41C; &#xB098;&#xC911; &#xD588;&#xB2E4;. Exosomes multivesicular &#xC2DC;&#xCCB4; (MVBs) &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB2A6;&#xAC8C; endosomes &#xC2E0;&#xC9C4; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xC5EC; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; membrane(2)&#xC640; Mvbs&#xC758; &#xC735;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xD574;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Exosomes&#xC758; &#xCCAB; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC774;&#xD6C4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; vesicles &#xCD9C;&#xC2DC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC140; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Exosomes &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8;, &#xBE44; &#xAC15; &#xC138;&#xCC99; &#xC561;, &#xD0C0; &#xC561; &#xBC0F; &#xC720; &#xBC29; milk(3-6)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xCCB4;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xBC0F; exosomes&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xC6D0;&#xB798; &#xC140;&#xACFC;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC99D;&#xBA85; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Exosomes, allergen(7,8), mice(9), &#xC800;&#xD574; &#xBC0F; &#xC790;&#xC5F0; &#xD0AC;&#xB7EC; cells(10-12)&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC124;&#xB9BD;&#xB41C; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xADFC;&#xC808;, T &#xADDC;&#xC815; cells(13)&#xB85C; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xCD09;&#xC9C4;, T &#xC138;&#xD3EC; proliferation(14)&#xC758; &#xC790;&#xADF9; &#xBC0F; T &#xC138;&#xD3EC; apoptosis(15)&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xC6A9;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xB4F1;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 2007 &#xB144; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xB41C; exosomes &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; RNA (mRNA)&#xC640; microRNA (&#xBBF8;&#xB974;)&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; RNA exosomes&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; shuttled &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;&#xB294; &#xC124;&#xBA85;. &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; exosomes&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; shuttled mRNA &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; RNA(16)&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC81C;&#xC548; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; exosomes &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC218; &#xBC1B;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xB354; &#xC774;&#xC0C1; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; exosomal &#xC154;&#xD2C0; RNA(17)&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xCCB4;&#xC561; vesicles&#xC758; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xC870;&#xAC01; &#xCC3D; &#xACE0;. &#xB4A4;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xACE0;&#xB294; exosomes&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; exosomes&#xC758; &#xACE0;&#xD488;&#xC9C8; &#xACA9;&#xB9AC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; vesicles&#xC640; &#xC785;&#xC790; &#xB2E4;&#xB978; exosomes &#xAD6C;&#xBCC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; exosomes &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC640; &#xCCB4;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC774; &#xACA9;&#xB9AC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB41C; &#xC6D0;&#xC2EC;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xBA70; &#xCD5C;&#xC885; ultracentrifugation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xACFC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; exosomes pelleted &#xB418;&#xB294; &#xB2E8;&#xACC4;. &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;, cytometry &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xB4F1; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; exosomes&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; exosomal &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xAC15;&#xC870; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD1D; exosomal RNA&#xC758; &#xC815;&#xD654; &#xC2A4;&#xD540; &#xCE7C;&#xB7FC; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xBA70; exosomal RNA &#xC218;&#xC728; &#xBC0F; &#xD06C;&#xAE30; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB294; Bioanalyzer&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACA9;&#xB9AC; &#xBC0F; Exosomes &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; RNA&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El campo de la investigaci&oacute;n de los exosomas se est&aacute; expandiendo r&aacute;pidamente, con un aumento dram&aacute;tico en publicaciones en los &uacute;ltimos a&ntilde;os. Estas ves&iacute;culas peque&ntilde;as (30-100 nm) de origen endoc&iacute;ticas se propuso por primera vez para funcionar como una forma de reticulocitos erradicar el receptor de transferrina mientras madur&aacute;ndose en erythrocytes(1) y m&aacute;s tarde fueron nombradas exosomas. Exosomas est&aacute;n formados por interno budding &uacute;ltimamente endosomas, produciendo cuerpos multivesicular (MVBs) y se liberan en el ambiente por la fusi&oacute;n de las MVBs con la membrane(2) del plasma. Desde el primer descubrimiento de exosomas, han demostrado una amplia gama de c&eacute;lulas para liberar estas ves&iacute;culas. Exosomas tambi&eacute;n se han detectado en varios fluidos biol&oacute;gicos, incluyendo el plasma, el l&iacute;quido del lavado nasal, la saliva y mama milk(3-6). Adem&aacute;s, se ha demostrado que el contenido y la funci&oacute;n de exosomas depende la c&eacute;lula originaria y las condiciones bajo las cuales se producen. Han demostrado una variedad de funciones para exosomas, tales como la inducci&oacute;n de tolerancia contra allergen(7,8), erradicaci&oacute;n de tumores establecidos en mice(9), inhibici&oacute;n y activaci&oacute;n de cells(10-12) asesino natural, promoci&oacute;n de diferenciaci&oacute;n en T reguladoras cells(13), estimulaci&oacute;n de c&eacute;lulas T proliferation(14) e inducci&oacute;n de c&eacute;lulas T apoptosis(15). A&ntilde;o 2007 que demostramos que los exosomas liberados de mastocitos contienen ARN mensajero (ARNm) y microARN (miARN), y que el ARN puede ser enviado de una c&eacute;lula a otra mediante exosomas. En las c&eacute;lulas del receptoras, el mRNA enviados por exosomas fue demostrado para ser traducido en prote&iacute;na, sugiriendo una funci&oacute;n reguladora de la RNA(16) transferido. Adem&aacute;s, tambi&eacute;n hemos demostrado que exosomas derivado de las c&eacute;lulas cultivadas bajo estr&eacute;s oxidativo pueden inducir tolerancia contra estr&eacute;s adicional en las c&eacute;lulas receptores y sugieren una funci&oacute;n biol&oacute;gica de la lanzadera de exosomal RNA(17). Medios de cultivo de c&eacute;lulas y fluidos biol&oacute;gicos contienen una mezcla de ves&iacute;culas y arrojan fragmentos. Un m&eacute;todo de aislamiento de alta calidad para exosomas, seguido de caracterizaci&oacute;n e identificaci&oacute;n de los exosomas y su contenido, por lo tanto es fundamental distinguir los exosomas otras ves&iacute;culas y part&iacute;culas. Aqu&iacute;, presentamos un m&eacute;todo para el aislamiento de los exosomas de medio de cultivo de c&eacute;lulas y fluidos corporales. Este m&eacute;todo de aislamiento se basa en repetidas centrifugaci&oacute;n y filtraci&oacute;n pasos, seguidos por una ultracentrifugaci&oacute;n final paso en que los exosomas son peleteados. Se destacan importantes m&eacute;todos para identificar los exosomas y caracterizar el contenido de prote&iacute;na y morfolog&iacute;a de exosomal, microscop&iacute;a electr&oacute;nica, citometr&iacute;a de flujo y Western blot. La purificaci&oacute;n de la exosomal total RNA se basa en la cromatograf&iacute;a de columna de giro y la distribuci&oacute;n de rendimiento y tama&ntilde;o de exosomal RNA es analizada mediante un bioanalizador.

Maria Eldh

Krefting Research Centre,
Department of Internal Medicine,
Sahlgrenska Academy,
Krefting Research Centre, Department of Internal Medicine, Sahlgrenska Academy

University of Gothenburg

Isolation and Characterization of RNA-Containing Exosomes

Maria Eldh

Krefting Research Centre,Department of Internal Medicine,Sahlgrenska Academy,Krefting Research Centre, Department of Internal Medicine, Sahlgrenska Academy

University of Gothenburg

Isolation and Characterization of RNA-Containing Exosomes

Krefting Research Centre,
Department of Internal Medicine,
Sahlgrenska Academy,
Krefting Research Centre, Department of Internal Medicine, Sahlgrenska Academy