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<em>Candida albicans</em> Biofilm Chip (<em>Ca</em>BChip) for High-throughput Antifungal Drug Screening

Candida  albicans remains the main etiological agent of candidiasis, which  currently represents the fourth most common nosocomial bloodstream infection ...

University of Texas at San Antonio  

Systemic bacterial infections elicit inflammatory response that promotes acute or chronic complications such as sepsis, arthritis or atherosclerosis. Of interest, cells in circulation experience hydrodynamic shear forces, which have been shown to be a potent regulator of cellular function in the vasculature and play an important role in maintaining tissue homeostasis. In this study, we have examined the effect of shear forces due to blood flow in modulating the inflammatory response of cells to infection. Using an in vitro model, we analyzed the effects of physiological levels of shear stress on the inflammatory response of monocytes infected with chlamydia, an intracellular pathogen which causes bronchitis and is implicated in the development of atherosclerosis. We found that chlamydial infection alters the morphology of monocytes and trigger the release of pro-inflammatory cytokines TNF-α, IL-8, IL-1β and IL-6. We also found that the exposure of chlamydia-infected monocytes to short durations of arterial shear stress significantly enhances the secretion of cytokines in a time-dependent manner and the expression of surface adhesion molecule ICAM-1. As a functional consequence, infection and shear stress increased monocyte adhesion to endothelial cells under flow and in the activation and aggregation of platelets. Overall, our study demonstrates that shear stress enhances the inflammatory response of monocytes to infection, suggesting that mechanical forces may contribute to disease pathophysiology. These results provide a novel perspective on our understanding of systemic infection and inflammation.

Hydrodynamic regulation of monocyte inflammatory response to an intracellular pathogen.

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We have developed a high-density microarray platform consisting of nano-biofilms of Candida albicans. A robotic microarrayer was used to print yeast cells of C. albicans encapsulated in a collagen matrix at a volume as low as 50 nL onto surface-modified microscope slides. Upon incubation, the cells grow into fully formed "nano-biofilms". The morphological and architectural complexity of these biofilms were evaluated by scanning electron and confocal scanning laser microscopy. The extent of biofilm formation was determined using a microarray scanner from changes in fluorescence intensities due to FUN 1 metabolic processing. This staining technique was also adapted for antifungal susceptibility testing, which demonstrated that, similar to regular biofilms, cells within the on-chip biofilms displayed elevated levels of resistance against antifungal agents (fluconazole and amphotericin B). Thus, results from structural analyses and antifungal susceptibility testing indicated that despite miniaturization, these biofilms display the typical phenotypic properties associated with the biofilm mode of growth. In its final format, the C. albicans biofilm chip (CaBChip) is composed of 768 equivalent and spatially distinct nano-biofilms on a single slide; multiple chips can be printed and processed simultaneously. Compared to current methods for the formation of microbial biofilms, namely the 96-well microtiter plate model, this fungal biofilm chip has advantages in terms of miniaturization and automation, which combine to cut reagent use and analysis time, minimize labor intensive steps, and dramatically reduce assay costs. Such a chip should accelerate the antifungal drug discovery process by enabling rapid, convenient and inexpensive screening of hundreds-to-thousands of compounds simultaneously.

Development of a high-throughput Candida albicans biofilm chip.

Nous avons d&eacute;velopp&eacute; une plate-forme de microarray de haute densit&eacute; compos&eacute; de nano-biofilms de Candida albicans. Un robot microarrayer a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour imprimer des cellules de levure de c. albicans encapsul&eacute;es dans une matrice de collag&egrave;ne &agrave; un volume aussi faible que 50 nL sur lames de microscope &agrave; surface modifi&eacute;e. Lors de l&#39;incubation, les cellules se d&eacute;veloppent dans enti&egrave;rement form&eacute;es &laquo; nano-biofilms &raquo;. La complexit&eacute; morphologique et architecturale de ces biofilms ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;s par microscopie confocale &agrave; balayage de laser et &eacute;lectronique &agrave; balayage. L&#39;&eacute;tendue de la formation de biofilm a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e en utilisant un scanner de microarray de changements dans les intensit&eacute;s de fluorescence en raison de la transformation m&eacute;tabolique FUN 1. Cette technique de coloration a &eacute;t&eacute; &eacute;galement adapt&eacute;e pour les tests de sensibilit&eacute; aux antifongique, qui a d&eacute;montr&eacute; que, semblables &agrave; des biofilms r&eacute;guli&egrave;res, cellules au sein des biofilms sur puce affichent des niveaux &eacute;lev&eacute;s de r&eacute;sistance contre les agents antifongiques (fluconazole et amphot&eacute;ricine B). Ainsi, les r&eacute;sultats des analyses structurales et des tests de sensibilit&eacute; aux antifongique indiquent que malgr&eacute; la miniaturisation, ces biofilms afficher les propri&eacute;t&eacute;s ph&eacute;notypiques typiques associ&eacute;es au mode de biofilm de croissance. Sous sa forme d&eacute;finitive, la puce de biofilm de c. albicans (CaBChip) est compos&eacute;e de 768 &eacute;quivalent et nano-biofilms spatialement distincts sur une seule diapositive ; puces multiples peuvent &ecirc;tre imprim&eacute;es et trait&eacute;es simultan&eacute;ment. Par rapport aux m&eacute;thodes actuelles pour la formation de biofilms microbiens, &agrave; savoir le mod&egrave;le de plaque de microplaque 96 puits, cette puce de biofilms fongiques pr&eacute;sente des avantages en termes de miniaturisation et d&#39;automation, qui s&#39;associent pour couper et analyse la p&eacute;riode de r&eacute;actif, r&eacute;duire au minimum les &eacute;tapes intensive de travail et r&eacute;duire consid&eacute;rablement les co&ucirc;ts de test. Une telle puce devrait acc&eacute;l&eacute;rer le processus de d&eacute;couverte de m&eacute;dicaments antifongiques en activant rapide, pratique et peu co&ucirc;teux de d&eacute;pistage des centaines &agrave; des milliers de compos&eacute;s simultan&eacute;ment.

D&eacute;veloppement d&#39;une puce de biofilm haut d&eacute;bit Candida albicans.

Wir haben eine High-Density Microarray-Plattform bestehend aus Nano-Biofilmen von Candida Albicans entwickelt. Ein Roboter Microarrayer wurde verwendet, um die Hefezellen von C. Albicans gekapselt in einer Kollagen-Matrix in einer Lautst&auml;rke so niedrig wie 50 Drucken nL auf Oberfl&auml;che ver&auml;nderte Objekttr&auml;ger. Nach Inkubation wachsen die Zellen vollst&auml;ndig geformtes &quot;Nano-Biofilme&quot;. Die morphologische und architektonische Komplexit&auml;t der diese Biofilme durch Scannen von Elektron und Scan, Konfokale Lasermikroskopie bewertet wurden. Das Ausma&szlig; der Biofilm Formation wurde mit einen Microarray Scanner von &Auml;nderungen in Fluoreszenz Intensit&auml;t durch metabolische Verarbeitung Spa&szlig; 1 ermittelt. Diese F&auml;rbung Technik wurde auch angepasst, f&uuml;r antimykotische Resistenztestung, die bewies, dass &auml;hnlich wie bei der regul&auml;ren Biofilme Zellen innerhalb der auf dem Chip-Biofilmen erh&ouml;hten Widerstand gegen Antimykotika Agents (Fluconazol und Amphotericin B) angezeigt. Ergebnisse von Strukturanalysen und antimykotische Resistenztestung zufolge somit trotz Miniaturisierung, diese Biofilme die typischen ph&auml;notypischen Eigenschaften mit den Biofilm Wachstum verbundenen anzuzeigen. Im endg&uuml;ltigen Format besteht der C. Albicans-Biofilm-Chip (CaBChip) 768 entspricht und r&auml;umlich unterschiedliche Nano-Biofilmen auf einer einzelnen Folie; mehrere Chips k&ouml;nnen gedruckt und gleichzeitig verarbeitet werden. Im Vergleich zu aktuellen Methoden f&uuml;r die Bildung von mikrobiellen Biofilmen, n&auml;mlich das 96-Well-Mikrotiterplatten-Platte-Modell, dieser pilzartigen Biofilm-Chip hat Vorteile hinsichtlich Miniaturisierung und Automatisierung, die kombinieren, Reagenz Verwendung und Analyse Zeit geschnitten, minimieren Arbeit intensive Schritte und Assay-Kosten drastisch zu reduzieren. Solch ein Chip sollte den Antimykotika Medikament-Discovery-Prozess beschleunigen, indem Sie erm&ouml;glicht schnelle, bequeme und kosteng&uuml;nstige Kontrolle von Hunderte bis Tausende von Verbindungen gleichzeitig.

Entwicklung eines Hochdurchsatz-Candida Albicans-Biofilm-Chips.

Abbiamo sviluppato una piattaforma microarray ad alta densit&agrave; costituito da nano-biofilm di Candida albicans. Un robot microarrayer fu utilizzata per stampare le cellule di lievito di c. albicans incapsulato in una matrice di collagene a volume basso quanto 50 nL su vetrini da microscopio modificato in superficie. Dopo incubazione, le cellule crescono in &quot;nano-biofilm&quot; completamente formato. La complessit&agrave; morfologica e architettonica di questi biofilm sono stati valutati mediante scansione elettronica e microscopia confocale a scansione laser. L&#39;entit&agrave; della formazione di biofilm &egrave; stata determinata utilizzando uno scanner per microarray da cambiamenti nell&#39;intensit&agrave; di fluorescenza a causa della trasformazione metabolica FUN 1. Questa tecnica di colorazione &egrave; stato anche adattata per antibiogramma antifungini, che ha dimostrato che, simili a biofilm normale, le cellule all&#39;interno del biofilm su chip visualizzato elevati livelli di resistenza contro gli agenti antimicotici (fluconazolo e anfotericina B). Cos&igrave;, risultati di analisi strutturali e antibiogramma antifungino indicano che, nonostante la miniaturizzazione, questi biofilm visualizzare la propriet&agrave; fenotipiche tipiche associate con la modalit&agrave; di crescita di biofilm. Nel suo formato finale, il chip di biofilm di c. albicans (CaBChip) &egrave; composta da 768 equivalente e spazialmente distinti nano-biofilm su una singola diapositiva; chip multipli possono essere stampati e trattati contemporaneamente. Rispetto ai metodi attuali per la formazione di biofilm microbici, vale a dire il modello di piastra microtiter a 96 pozzetti, questo chip fungine biofilm presenta vantaggi in termini di miniaturizzazione e automazione, che si combinano per tagliare il tempo di analisi e uso di reagente, ridurre al minimo il lavoro intensivo passi e ridurre drasticamente i costi di analisi. Tale un chip dovrebbe accelerare il processo di scoperta farmaco antifungino abilitando rapido, comodo e poco costoso lo screening di centinaia di migliaia di composti contemporaneamente.

Sviluppo di un chip di biofilm di alto-rendimento Candida albicans.

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&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3001;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7; &#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x5185;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB; (&#x30D5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30CA;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30E0;&#x30DB;&#x30C6;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3; B) &#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x5264;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x8868;&#x793A;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x9069;&#x5FDC;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x85AC;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x5C0F;&#x578B;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0; &#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067; C. albicans &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0; &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7; (CaBChip) 768 &#x7B49;&#x4FA1;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0; &#x30CA;&#x30CE;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x660E;&#x77AD;&#x306A; - 1 &#x679A;&#x306E;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x4E0A;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x5370;&#x5237;&#x3057;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x51E6;&#x7406;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;96 &#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30BF;&#x30A4;&#x30BF;&#x30FC; &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x771F;&#x83CC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x5C0F;&#x578B;&#x5316;&#x306E;&#x9762;&#x3067;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x8A66;&#x85AC;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x6790;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x77ED;&#x7E2E;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B4;&#x50CD;&#x96C6;&#x7D04;&#x7684;&#x306A;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x6291;&#x3048;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x3001;&#x4FBF;&#x5229;&#x3067;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x4F55;&#x767E;&#x3082;&#x306E;-&#x3059;&#x308B;-&#x4F55;&#x5343;&#x3082;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x85AC;&#x63A2;&#x7D22;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3059;&#x308B;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0; &#x30FB; &#x30A2;&#x30EB;&#x30D3;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B9; &#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

&#xB098;&#xB178;-biofilms Candida albicans&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; microarray &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB85C;&#xBD07; microarrayer 50&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xBCFC;&#xB968;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xCEA1;&#xC290;&#xD654; &#xD558;&#xB294; C. albicans&#xC758; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC778;&#xC1C4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC815; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0; nL. &#xBD80; &#xD654;, &#xC2DC; &#xC140; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xD615;&#xC131;&#xB41C; &#xB41C; &quot;&#xB098;&#xB178; biofilms&quot;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5;. &#xC804;&#xC790; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; confocal &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; biofilms&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; &#xAC74;&#xCD95;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. Biofilm &#xD615;&#xC131; &#xC815;&#xB3C4; &#xC7AC;&#xBBF8; 1 &#xB300;&#xC0AC; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xD615;&#xAD11; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; microarray &#xC2A4;&#xCE90;&#xB108;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5BC;&#xB8E9; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0;, &#xC77C;&#xBC18; biofilms &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xB0B4;&#xC7A5; biofilms &#xB0B4; &#xC140; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC800;&#xD56D; antifungal &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; (fluconazole&#xC640; amphotericin B)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; &#xC790;&#xD654; &#xC728; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC751;&#xB3C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; &#xC790;&#xD654; &#xC728; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC18C;&#xD615;&#xD654;&#xC5D0; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; biofilms &#xC131;&#xC7A5;&#xC758; biofilm &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; phenotypic &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC885; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; C. albicans biofilm &#xCE69; (CaBChip)&#xC740; 768 &#xB3D9;&#xB4F1;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB4DC;; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xBCC4;&#xAC1C; &#xB098;&#xB178; biofilms&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xCE69; &#xC778;&#xC1C4; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xCC98;&#xB9AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; biofilms, &#xC989; 96-&#xC798; microtiter &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD604;&#xC7AC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;&#xC774; &#xADE0; biofilm &#xCE69;&#xC740; &#xC18C;&#xD615;&#xD654; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xC810;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xC2DC; &#xC57D; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC808;&#xAC10;, &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB178;&#xB3D9; &#xC9D1;&#xC57D;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE44;&#xC6A9; &#xC808;&#xAC10;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCE69; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xD3B8;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC800;&#xB834; &#xD55C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC218;&#xCC9C;&#xC5D0; &#xC218;&#xBC31;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC0C1;&#xC601; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAC00;&#xC18D; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; Candida albicans biofilm &#xCE69;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Hemos desarrollado una plataforma de microarrays de alta densidad de nano-biopel&iacute;culas de Candida albicans. Un microarrayer rob&oacute;tico fue utilizada para imprimir las c&eacute;lulas de la levadura de C. albicans encapsulados en una matriz de col&aacute;geno en un volumen tan bajo como 50 nL en portaobjetos de superficie modificada. Tras la incubaci&oacute;n, las c&eacute;lulas crecen en completamente formados &quot;nano-biofilms&quot;. La complejidad morfol&oacute;gica y arquitect&oacute;nica de estos biofilms se evaluaron mediante el escaneo de electrones y la microscopia confocal de barrido l&aacute;ser. El grado de formaci&oacute;n de biopel&iacute;culas se determin&oacute; utilizando un esc&aacute;ner de microarray de cambios en la intensidad de la fluorescencia debido a proceso metab&oacute;lico diversi&oacute;n 1. Esta t&eacute;cnica de tinci&oacute;n se ha adaptado tambi&eacute;n para pruebas de sensibilidad antif&uacute;ngica, que demostr&oacute; que, similar a los biofilms regulares, c&eacute;lulas dentro de las en-viruta biofilms muestran niveles elevados de resistencia contra agentes antimic&oacute;ticos (fluconazol y anfotericina B). As&iacute;, los resultados de an&aacute;lisis estructurales y pruebas de sensibilidad antif&uacute;ngica indicaron que a pesar de la miniaturizaci&oacute;n, estos biofilms Mostrar las propiedades fenot&iacute;picas t&iacute;picas asociadas con el modo de biofilm de crecimiento. En su formato final, el chip del biofilm de C. albicans (CaBChip) est&aacute; compuesto por 768 equivalente y nano-biofilms espacialmente distintos en una sola diapositiva; fichas m&uacute;ltiples se pueden imprimir y procesa simult&aacute;neamente. En comparaci&oacute;n con los m&eacute;todos actuales para la formaci&oacute;n de biofilms microbianos, es decir, el modelo de placa de 96 pocillos de microtitulaci&oacute;n, este chip de biofilm hongos tiene ventajas en t&eacute;rminos de la miniaturizaci&oacute;n y automatizaci&oacute;n, que se combinan para reducir tiempo de uso y an&aacute;lisis de reactivo, minimizar pasos intensivo de mano de obra y reducir dr&aacute;sticamente los costes de ensayo. Tal un chip debe acelerar el proceso de descubrimiento de antimic&oacute;ticos al permitir la detecci&oacute;n r&aacute;pida, conveniente y barata de cientos a miles de compuestos simult&aacute;neamente.

Anand K. Ramasubramanian

Department of Biomedical Engineering

University of Texas at San Antonio

Candida albicans Biofilm Chip (CaBChip) for High-throughput Antifungal Drug Screening

Anand K. Ramasubramanian

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University of Texas at San Antonio

Candida albicans Biofilm Chip (CaBChip) for High-throughput Antifungal Drug Screening

Department of Biomedical Engineering