Flow Cytometry-based Purification of <em>S. cerevisiae</em> Zygotes

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Case Western Reserve University School of Medicine

&#x5E7D;&#x95E8;&#x87BA;&#x6746;&#x83CC;&#x662F;&#x87BA;&#x65CB; microaerophilic &#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9634;&#x6027;&#x83CC;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x72EC;&#x7279;&#x548C;&#x7279;&#x8272;&#x4E3A;&#x5176;&#x80FD;&#x591F;&#x4FDD;&#x6301;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7684;&#x80C3;&#x7684;&#x6781;&#x7AEF;&#x9178;&#x6027;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC6;&#x83CC;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F4E; pH &#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5E7D;&#x95E8;&#x87BA;&#x6746;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7814;&#x7A76;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0B;&#x4E2D;&#x6027; (pH 7) &#x5E7D;&#x95E8;&#x87BA;&#x6746;&#x83CC;&#x4E0E;&#x9178;&#x6027; (pH 5) &#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x805A;&#x4E19;&#x70EF;&#x9170;&#x80FA;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3; (2 DE) &#x9075;&#x5FAA; (LC)-nanoESI-&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x5168;&#x7403;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x7684;&#x5E7D;&#x95E8;&#x87BA;&#x6746;&#x83CC;&#x9178;&#x80C1;&#x8FEB;&#x4E0B;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x8D28;&#x8C31; (MS) /MS &#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE;&#x9178;&#x6027;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x975E;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x94C1;&#x542B;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5E7D;&#x95E8;&#x87BA;&#x6746;&#x83CC; (HP-&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;) &#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E00;&#x8D2F;&#x662F;&#x5728; pH 7 &#x6BD4; 5 pH &#x589E;&#x9AD8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x53D1;&#x73B0; HP &#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5207;&#x6362;&#x4ECE;&#x8D2E;&#x5B58;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E; ferroxidase &#x6D3B;&#x52A8;&#x5230;&#x4F53;&#x5916;&#x6761;&#x4EF6;&#x540E;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x9178;&#x6027;&#x73AF;&#x5883;&#x4E0B;&#x7684; DNA-&#x7ED1;&#x5B9A;/&#x4FDD;&#x62A4;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x539F;&#x6838;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5982;&#x975E;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x94C1;&#x7ED3;&#x5408; HP &#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x53CC;&#x91CD;&#x529F;&#x80FD;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x5E7D;&#x95E8;&#x87BA;&#x6746;&#x83CC;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x9002;&#x5E94;&#x6027;&#x8010;&#x9178;&#x80FD;&#x529B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x8132;&#x9176;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x53CC; ferroxidase &#x4E0E; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5728;&#x5E7D;&#x95E8;&#x87BA;&#x6746;&#x83CC;&#x9178;&#x80C1;&#x8FEB;&#x4E0B;&#x975E;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x94C1;&#x542B;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0A;&#x8C03;&#x3002;

Helicobacter pylori is a spiral Gram-negative microaerophilic bacterium. It is unique and distinctive among various bacterial pathogens for its ability to persist in the extreme acidic environment of human stomachs. To address and identify changes in the proteome of H. pylori in response to low pH, we have used a proteomic approach to study the protein expression of H. pylori under neutral (pH 7) and acidic (pH 5) conditions. Global protein-expression profiles of H. pylori under acid stress were analysed by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2-DE) followed by liquid chromatography (LC)-nanoESI-mass spectrometry (MS)/MS and bioinformatics database analysis. Among the proteins differentially expressed under acidic condition, a non-heme iron-containing ferritin of H. pylori (HP-ferritin) was found to be consistently upregulated at pH 5 as compared to pH 7. It was also found that HP-ferritin can switch from an iron-storage protein with ferroxidase activity to a DNA-binding/protection function under in vitro conditions upon exposure to acidic environment. Prokaryotic ferritins, such as non-heme iron-binding HP-ferritin with dual functionality reported herein, may play a significant urease-independent role in the acid adaptation of H. pylori under physiological conditions in vivo.

Upregulation of a non-heme iron-containing ferritin with dual ferroxidase and DNA-binding activities in Helicobacter pylori under acid stress.

Helicobacter pylori est une bact&eacute;rie &agrave; Gram n&eacute;gatif microa&eacute;rophiles spirale. Il est unique et distinctif parmi diverses bact&eacute;ries pathog&egrave;nes pour sa capacit&eacute; &agrave; persister dans l&#39;environnement acide extr&ecirc;me des estomacs humains. Pour aborder et identifier les changements dans le prot&eacute;ome de H. pylori en r&eacute;ponse &agrave; un pH faible, nous avons utilis&eacute; une approche prot&eacute;omique pour &eacute;tudier l&#39;expression de la prot&eacute;ine de H. pylori sous neutre (pH 7) et des conditions acides (pH 5). Profils de Global-l&#39;expression de la prot&eacute;ine de H. pylori sous stress acide ont &eacute;t&eacute; analys&eacute;s par &eacute;lectrophor&egrave;se sur gel de polyacrylamide &agrave; deux dimensions (DE-2), suivie par chromatographie liquide (LC) - nanoESI - analyse de spectrom&eacute;trie (SM) / ms et bio-informatique de base de donn&eacute;es de masse. Parmi les prot&eacute;ines diff&eacute;rentiellement exprim&eacute;es dans des conditions acides, une ferritine de contenant du fer non h&eacute;mique de H. pylori (HP-ferritine) s&#39;est av&eacute;r&eacute;e pour &ecirc;tre constamment augment&eacute; &agrave; pH 5 par rapport &agrave; pH 7. On a &eacute;galement constat&eacute; que HP-ferritine passez d&#39;une prot&eacute;ine de stockage du fer avec activit&eacute; ferroxydase &agrave; une fonction de liaison/ADN-protection dans des conditions in vitro par exposition &agrave; l&#39;environnement acide. Ferritines procaryotes, comme non h&eacute;mique liant le fer HP-ferritine avec double fonctionnalit&eacute; rapport&eacute;e ici, jouerait un r&ocirc;le de l&#39;ur&eacute;ase ind&eacute;pendant significatif dans l&#39;adaptation acide de H. pylori dans des conditions physiologiques in vivo.

Stimulation de l&#39;expression d&#39;une ferritine de contenant du fer non h&eacute;mique avec double ferroxydase et les activit&eacute;s de liaison &agrave; l&#39;ADN &agrave; l&#39;Helicobacter pylori sous stress acide.

Helicobacter Pylori ist ein gramnegatives mikroaerophiles Bakterium, Spirale. Es ist einzigartig und unverwechselbar unter verschiedenen bakteriellen Krankheitserregern f&uuml;r seine F&auml;higkeit, auf die extrem sauren Umgebung der menschlichen M&auml;gen zu beharren. Zum l&ouml;sen und Ver&auml;nderungen in der Proteome von H. Pylori als Reaktion auf einen niedrigen pH-Wert zu identifizieren, haben wir einen Proteomic-Ansatz verwendet, der Proteinexpression von H. Pylori unter Neutral (pH-Wert 7) und sauren (pH 5) Bedingungen zu studieren. Globale Protein-Expression-Portraits von H. Pylori unter sauren Stress wurden analysiert, durch zweidimensionale Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese (2-DE) gefolgt von Fl&uuml;ssigchromatographie (LC) - NanoESI - mass-Massenspektrometrie (MS) / MS und Bioinformatik Datenbankanalyse. Unter der Proteine differentiell unter sauren Bedingungen eine nicht-H&auml;m-Eisen-haltigen-Ferritin von H. Pylori (HP-Ferritin) erwies sich konsequent herraufreguliert bei pH 5 im Vergleich zu pH-Wert 7. Ferner wurde festgestellt, dass HP-Ferritin aus einer Eisen-Speicher-Protein mit Ferroxidase Aktivit&auml;t auf eine DNA-Bindung/Schutz-Funktion unter in-vitro-Bedingungen nach Exposition gegen&uuml;ber sauren Umgebung wechseln kann. Prokaryotische Ferritins, wie nicht-H&auml;m-Eisen-Bindung HP-Ferritin mit dual-Funktionalit&auml;t berichtet, k&ouml;nnen erhebliche Urease-unabh&auml;ngige in der S&auml;ure Adaption von H. Pylori unter physiologischen Bedingungen in-vivo Rolle.

Hochregulation von eine nicht-H&auml;m-Eisen-haltigen Ferritin mit dual Ferroxidase und DNA-bindenen Aktivit&auml;ten in Helicobacter Pylori unter sauren Stress.

L&#39;Helicobacter pylori &egrave; un batterio gram-negativo microaerofili. &Egrave; unico e distintivo tra i vari agenti patogeni batterici per la sua capacit&agrave; di persistere nell&#39;estrema ambiente acido dello stomaco umano. Per affrontare e identificare le modifiche apportate nel proteoma di H. pylori in risposta a basso pH, abbiamo usato un approccio proteomico per lo studio dell&#39;espressione della proteina di H. pylori sotto neutro (pH 7) e le condizioni acide (pH 5). Profili di espressione proteica globale di H. pylori sotto stress acido sono stati analizzati mediante elettroforesi bidimensionale del gel di poliacrilammide (2-DE), seguita da cromatografia liquida (LC) - nanoESI - analisi del database MS e Bioinformatica (MS) la spettrometria di massa. Tra le proteine differenzialmente espresse in condizioni acide, una ferritina contenenti ferro non-eme dell&#39;Helicobacter pylori (HP-ferritina) &egrave; stata trovata per essere costantemente sovraregolati a pH 5 rispetto al pH 7. Si &egrave; inoltre constatato che HP-ferritina pu&ograve; passare da una proteina ferro-archiviazione con attivit&agrave; ferroxidase a una funzione di protezione del DNA-binding in condizioni in vitro su esposizione all&#39;ambiente acido. Ferritins procariote, come non-eme ferro-Associazione HP-ferritina con doppia funzionalit&agrave; riportate nel presente documento, pu&ograve; svolgere un ruolo di ureasi-indipendente significativo nell&#39;acido adattamento di H. pylori in condizioni fisiologiche in vivo.

Upregulation di una ferritina contenenti ferro non-eme con dual ferroxidase e attivit&agrave; di DNA-binding in Helicobacter pylori sotto stress acido.

&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x83CC;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30E9;&#x30EB;&#x5FAE;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x80C3;&#x306E;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x9178;&#x6027;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x7D30;&#x83CC;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x72EC;&#x7279;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30B9;&#x3057;&#x3001;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x83CC;&#x306E;&#x4F4E; ph &#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x4E2D;&#x7ACB; (pH 7) &#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x83CC;&#x3068;&#x9178;&#x6027; &#xFF08;pH 5&#xFF09; &#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB; &#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x9178;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x4E0B;&#x306E;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; (LC) - &#x5B89;&#x4FA1; - &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5; (2-DE) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790; (MS)/MS &#x3084;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x9178;&#x6027;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x3001;&#x975E;&#x30D8;&#x30E0;&#x9244;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30C1;&#x30F3; h. &#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x83CC; &#xFF08;HP &#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30C1;&#x30F3;&#xFF09; &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x4EA2;&#x9032;&#x306F; pH 5 pH 7 &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x9178;&#x6027;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x3078;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x306B; in vitro &#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E; DNA-&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;/&#x4FDD;&#x8B77;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B; HP &#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30C1;&#x30F3;&#x306F;&#x9244;&#x8CAF;&#x8535;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089; ferroxidase &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x660E;&#x7D30;&#x66F8;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x975E;&#x30D8;&#x30E0;&#x9244;&#x7D50;&#x5408; HP &#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30C1;&#x30F3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30C1;&#x30F3; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x83CC;&#x306E;&#x9178;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x5927;&#x5E45;&#x30A6;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x72EC;&#x7ACB;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x975E;&#x30D8;&#x30E0;&#x9244;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30C1;&#x30F3; &#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; ferroxidase &#x3068; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x9178;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x30D4;&#x30ED;&#x30EA;&#x83CC;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xD5EC;&#xB9AC;&#xCF54;&#xBC15;&#xD130; &#xD30C;&#xC77C;&#xB85C;&#xB9AC;&#xB294; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; microaerophilic &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xACE0;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC778;&#xAC04; &#xC704;&#xC7A5;&#xC758; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xC0B0; &#xC131; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0; &#xC911; &#xC5D0;&#xC11C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; Ph&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCF54;&#xBC15;&#xD130; &#xD30C;&#xC77C;&#xB85C;&#xB9AC;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634;&#xC758; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4;, &#xC911;&#xC131; (pH 7)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCF54;&#xBC15;&#xD130; &#xD30C;&#xC77C;&#xB85C;&#xB9AC;&#xC640; &#xC0B0; &#xC131; (pH 5) &#xC870;&#xAC74; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xC815; &#xC5F0;&#xAD6C; proteomic &#xC811;&#xADFC; &#xC0AC;&#xC6A9;. 2 &#xCC28;&#xC6D0; polyacrylamide &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; (2-DE) &#xB4A4;&#xC5D0; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; (LC)-nanoESI-&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCF54;&#xBC15;&#xD130; &#xD30C;&#xC774; &#xC0B0; &#xC131; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC758; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xD604; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (MS) /MS &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D;. &#xCC28;&#xB3D9; &#xC0B0; &#xC131; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC911; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCF54;&#xBC15;&#xD130; &#xD30C;&#xC77C;&#xB85C;&#xB9AC; (HP ferritin)&#xC758; heme&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; &#xCCA0; &#xBD84; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; ferritin &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; pH 7&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; pH 5&#xC5D0;&#xC11C; upregulated &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C;&#xB294; HP ferritin&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xD658;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCCA0; &#xBD84; &#xC800;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; ferroxidase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0B0; &#xC131; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB418; &#xBA74; &#xCCB4; &#xC678; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; DNA-&#xBC14;&#xC778;&#xB529;/&#xBCF4;&#xD638; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xBCF4;&#xACE0; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xBE44; heme &#xCCA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; HP ferritin &#xAC19;&#xC740; prokaryotic ferritins vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCF54;&#xBC15;&#xD130; &#xD30C;&#xC77C;&#xB85C;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0B0; &#xC131; &#xC801;&#xC751;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; urease &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB4C0;&#xC5BC; ferroxidase&#xC640; &#xC0B0; &#xC131; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCF54;&#xBC15;&#xD130; &#xD30C;&#xC77C;&#xB85C;&#xB9AC;&#xC758; DNA &#xBB36;&#xB294; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBE44; heme &#xCCA0; &#xBD84; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; ferritin&#xC758; Upregulation.

Helicobacter pylori es una bacteria espiral de microaerof&iacute;licos gramnegativos. Es &uacute;nico y distintivo entre varios pat&oacute;genos bacterianos por su capacidad para persistir en el extremo ambiente &aacute;cido del est&oacute;mago humano. Para direcci&oacute;n e identificar cambios en el proteoma de H. pylori en respuesta a un pH bajo, hemos utilizado un enfoque prote&oacute;mico para estudiar la expresi&oacute;n de la prote&iacute;na de H. pylori en neutro (pH 7) y condiciones &aacute;cidas (pH 5). Perfiles de expresi&oacute;n de la prote&iacute;na global de H. pylori bajo estr&eacute;s &aacute;cido se analizaron por electroforesis en geles de poliacrilamida bidimensional (2-DE) seguida de cromatograf&iacute;a l&iacute;quida (LC) - nanoESI - an&aacute;lisis de base de datos de acerca y Bioinform&aacute;tica (MS) de espectrometr&iacute;a de masas. Entre las prote&iacute;nas expresadas diferencialmente en condiciones &aacute;cidas, una ferritina de que contienen hierro no heme de H. pylori (HP-ferritina) fue encontrada para ser constantemente alza a pH 5 en comparaci&oacute;n con pH 7. Tambi&eacute;n se constat&oacute; que el HP-ferritina puede cambiar de una prote&iacute;na de almacenamiento de hierro con actividad ferroxidase a una funci&oacute;n de enlace de ADN/protecci&oacute;n en condiciones in vitro con la exposici&oacute;n al ambiente &aacute;cido. Ferritins procariotas, como HP-ferritina de hierro no heme con doble funcionalidad divulgado adjunto, pueden desempe&ntilde;ar un papel significativo de la ureasa-independiente en la adaptaci&oacute;n de &aacute;cido de H. pylori en condiciones fisiol&oacute;gicas en vivo.

Regulaci&oacute;n al alza de una ferritina de que contienen hierro no heme con doble ferroxidase y actividades de la Uni&oacute;n al ADN en Helicobacter pylori bajo estr&eacute;s &aacute;cido.

Amyloid formation is initiated by protein misfolding, followed by self-association to ultimately form amyloid fibrils. The discovery of toxic prefibrillar oligomers in many amyloidosis underscores the importance of understanding the folding mechanism prior to such aggregation. Here, we investigated the folding properties of the natively unfolded amyloid-Î² (AÎ²) peptide and the familial variants (A21G, E22Q, E22G, E22K, and D23N) in Alzheimer's disease (AD). In combinations of native electrophoresis, analytical ultracentrifugation, fluorescence emission, and far-UV circular dichroism, we showed that all AÎ²40 variants are predominantly monomeric with similar residual secondary structures, but distinct hydrophobic-exposed protein surfaces. Guanidine hydrochloride (GdnHCl) denaturation in the absence and presence of trifluoroethanol (TFE) showed that AÎ² variants adopt an apparent 2-state equilibrium model with different stabilities, in which wild type is less stable than A21G but more stable than D23N and E22 mutants. By correlating the folding stability with the nucleation phase in fibrillization, we found the more stable the variant, the slower the nucleation, except for D23N. Besides, the unfolding of AÎ² conformation leads to reduced formation of mature fibrils, but an increase in nonfibrillar, amorphous type of aggregates. Overall, we demonstrated that folding stability of AÎ² is an important determinant of the nucleation kinetics.

Folding stability of amyloid-beta 40 monomer is an important determinant of the nucleation kinetics in fibrillization.

&#x5F62;&#x6210;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#x6298;&#x53E0;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x81EA;&#x7F14;&#x5408;&#xFF0C;&#x6700;&#x7EC8;&#x5F62;&#x6210;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7531;&#x53D1;&#x8D77;&#x3002;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86;&#x6709;&#x6BD2; prefibrillar &#x4F4E;&#x805A;&#x7269;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x53D8;&#x5F3A;&#x8C03;&#x7406;&#x89E3;&#x8FD9;&#x79CD;&#x805A;&#x5408;&#x4E4B;&#x524D;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x5C5E;&#x6027;&#x672C;&#x8EAB;&#x5C55;&#x5F00;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x86CB;&#x767D;-&beta; (A&beta;) &#x80BD;&#x548C;&#x5BB6;&#x65CF;&#x53D8;&#x79CD; &#xFF08;A21G&#x3001; E22Q&#x3001; E22G&#x3001; E22K&#x3001; D23N) &#x5728;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5; (AD)&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x673A;&#x7535;&#x6CF3;&#x3001; &#x5206;&#x6790;&#x8D85;&#x901F;&#x79BB;&#x5FC3;&#x6CD5;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x53D1;&#x5C04;&#x548C;&#x8FDC;&#x7D2B;&#x5916;&#x5706;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x6240;&#x6709; A&beta;40 &#x53D8;&#x79CD;&#x4E3B;&#x8981;&#x5355;&#x4F53;&#x4E0E;&#x6B8B;&#x4F59;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x76F8;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x66B4;&#x9732;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x80CD;&#x76D0;&#x9178; &#xFF08;&#x76D0;&#x9178;&#x80CD;&#x53D8;&#x6027;) &#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x4E0E;&#x5728;&#x573A;&#x7684;&#x4E09;&#x6C1F;&#x4E59;&#x9187; &#xFF08;TFE&#xFF09; &#x4E2D;&#x663E;&#x793A; A&beta; &#x53D8;&#x79CD;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x91CE;&#x751F;&#x7C7B;&#x578B;&#x660E;&#x663E; 2 &#x72B6;&#x6001;&#x5747;&#x8861;&#x6A21;&#x578B;&#x662F;&#x4F46;&#x66F4;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6BD4; D23N &#x548C; E22 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; A21G &#x7684;&#x6CA1;&#x6709;&#x90A3;&#x4E48;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x5730;&#x6BB5;&#x5728; fibrillization &#x4E2D;&#x7684;&#x6210;&#x6838;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5C31;&#x8D8A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x53D8;&#x79CD;&#xFF0C;&#x6162;&#x5F62;&#x6838;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86; D23N&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;A&beta; &#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x6F14;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x51CF;&#x5C11;&#x5F62;&#x6210;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x589E;&#x52A0; nonfibrillar&#xFF0C;&#x975E;&#x6676;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x6298;&#x53E0; A&beta; &#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x662F;&#x6210;&#x6838;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

&#x6298;&#x53E0; &#xFF0D; &beta; &#xFF0D; &#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x86CB;&#x767D; 40 &#x5355;&#x4F53;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x662F;&#x6210;&#x6838;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5728; fibrillization &#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

Formation amylo&iuml;de est initi&eacute;e par la prot&eacute;ine mauvais repliement, suivie d&#39;auto-association pour finalement former des fibrilles amylo&iuml;des. La d&eacute;couverte d&#39;oligom&egrave;res de prefibrillar toxiques dans l&#39;amylose beaucoup souligne l&#39;importance de comprendre le m&eacute;canisme de pliage avant cette agr&eacute;gation. Ici, nous avons &eacute;tudi&eacute; les propri&eacute;t&eacute;s de repliement du peptide amylo&iuml;de-&beta; natives non repli&eacute;es (A&beta;) et les variantes familiales (A21G, E22Q, E22G, E22K et D23N) dans la maladie d&#39;Alzheimer (ma). Dans les combinaisons d&#39;&eacute;lectrophor&egrave;se native, ultracentrifugation analytique et &eacute;mission de fluorescence UV lointain dichro&iuml;sme circulaire, nous avons montr&eacute; que toutes les variantes de A&beta;40 sont principalement monom&egrave;res avec des structures secondaires r&eacute;siduels semblables, mais les surfaces distinctes de prot&eacute;ines hydrophobes expos&eacute;es. Guanidine chlorhydrate (GdnHCl) la d&eacute;naturation en absence et en pr&eacute;sence d&#39;&eacute;thanol (TFE) a montr&eacute; que les variantes A&beta; adoptent un mod&egrave;le apparent 2-&Eacute;tat d&#39;&eacute;quilibre avec des stabilit&eacute;s diff&eacute;rentes, dans le type sauvage est moins stable que le A21G mais plus stables que les mutants D23N et E22. En corr&eacute;lant la stabilit&eacute; repliable avec la phase de nucl&eacute;ation dans fibrillization, nous avons trouv&eacute; le plus stable de la variante, lentement la nucl&eacute;ation, &agrave; l&#39;exception de D23N. En outre, le d&eacute;roulement de la conformation de l&#39;A&szlig; conduit &agrave; la formation r&eacute;duite de fibrilles matures, mais une augmentation de nonfibrillar, type amorphe d&#39;agr&eacute;gats. Dans l&#39;ensemble, nous avons d&eacute;montr&eacute; que le pliage stabilit&eacute; d&#39;A&beta; est un d&eacute;terminant important de la cin&eacute;tique de la nucl&eacute;ation.

Pliage de stabilit&eacute; de la prot&eacute;ine b&ecirc;ta-amylo&iuml;de 40 monom&egrave;re est un facteur d&eacute;terminant de la cin&eacute;tique de nucl&eacute;ation dans fibrillization.

Amyloid Bildung wird durch Protein misfolding, gefolgt von Self-association, letztlich Amyloid-Fibrillen bilden initiiert. Die Entdeckung von toxischen prefibrillar Oligomeren in vielen Amyloidose unterstreicht die Bedeutung der Klappmechanismus vor solchen Aggregation zu verstehen. Hier untersuchten wir die Faltung Eigenschaften des Peptids nativ entfaltet Amyloid-&beta; (A&beta;) und die famili&auml;ren Varianten (A21G, E22Q, E22G, E22K und D23N) bei Alzheimer-Krankheit (AD). Kombinationen von native Elektrophorese, analytische Ultrazentrifugation, Fluoreszenzemission und weit-UV Circulardichroismus zeigten wir, dass alle A&beta;40 Varianten &uuml;berwiegend Monomer mit &auml;hnlichen residual Sekund&auml;rstrukturen, aber unterschiedliche hydrophobe gemachten Protein Oberfl&auml;chen sind. Guanidin-Hydrochlorid (GdnHCl)-Denaturierung in und Abwesenheit von Trifluoroethanol (TFE) zeigte, dass A&beta;-Varianten eine scheinbare 2-Staat Gleichgewichtsmodell mit verschiedenen Stabilit&auml;ten, in welche Wildtyp umzusetzen ist weniger stabil als A21G aber stabiler als D23N und E22 Mutanten. Durch Korrelation der Faltung Stabilit&auml;t mit der Keimbildung-Phase in wichtige, fanden wir die stabilere Variante, desto langsamer die Keimbildung, mit Ausnahme von D23N. Neben f&uuml;hrt die Entfaltung der A&beta;-Konformation reduzierte Bildung von Reifen Fibrillen, aber eine Zunahme der Nonfibrillar, amorphe Typ der Aggregate. Insgesamt wir gezeigt, dass Falten Stabilit&auml;t der A&beta; eine wichtige Determinante Keimbildung Kinetics ist.

Folding Stabilit&auml;t des Amyloid-Beta 40 Monomer ist eine wichtige Determinante Keimbildung Kinetics in wichtige.

Formazione dell&#39;amiloide &egrave; iniziata da protein misfolding, seguita da moltiplicava per infine formare fibrille amiloidi. La scoperta di tossici oligomeri prefibrillar in molti amiloidosi sottolinea l&#39;importanza di comprendere il meccanismo di ripiegamento prima di tale aggregazione. Qui, abbiamo studiato le propriet&agrave; pieghevole del peptide amiloide-&beta; dispiegata in modo nativo (A&beta;) e le varianti familiari (A21G, E22Q, E22G, E22K e D23N) nella malattia di Alzheimer (AD). Nelle combinazioni di elettroforesi nativa, ultracentrifugazione analitica, emissione di fluorescenza e Dicroismo circolare lontano-UV, abbiamo dimostrato che tutte le varianti A&beta;40 sono prevalentemente monomeriche con simili strutture secondarie residuale, ma superfici distinte proteine idrofobe esposte. Denaturazione della cloridrato (GdnHCl) di guanidina in assenza che in presenza di trifluoroethanol (TFE) ha mostrato che varianti A&beta; adottano un modello di apparente equilibrio 2-stato con stabilit&agrave; differenti, in quale tipo di selvatico &egrave; meno stabile della A21G ma pi&ugrave; stabile di D23N ed E22 mutanti. Correlando la stabilit&agrave; pieghevole con la fase di nucleazione in fibrillization, abbiamo trovato il pi&ugrave; stabile la variante, pi&ugrave; lenta la nucleazione, ad eccezione di D23N. Inoltre, il dispiegarsi di conformazione A&beta; conduce alla ridotta formazione di fibrille mature, ma un aumento di nonfibrillar, tipo amorfo di aggregati. Nel complesso, abbiamo dimostrato che pieghevole stabilit&agrave; di A&beta; &egrave; un determinante importante della cinetica di nucleazione.

Pieghevole stabilit&agrave; di amiloide-beta 40 monomero &egrave; un determinante importante della cinetica di nucleazione in fibrillization.

&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3092;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x5DF1;&#x4F1A;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6709;&#x6BD2;&#x306A; prefibrillar &#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x591A;&#x304F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x96C6;&#x7D04;&#x524D;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x89E3;&#x3051;&#x3066;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &beta; (a &beta;) &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x75C5; &#xFF08;AD&#xFF09; &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x306E;&#x4E9C;&#x7A2E; (A21G&#x3001;E22Q&#x3001;E22G&#x3001;E22K&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; D23N) &#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x5206;&#x6790;&#x8D85;&#x9060;&#x5FC3;&#x6CD5;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x767A;&#x5149;&#x3001;&#x9060;&#x7D2B;&#x5916;&#x5186;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x3001;A&beta;40 &#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;A &beta; &#x306E;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x304C;&#x3069;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3067;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E; 2 &#x72B6;&#x614B;&#x5747;&#x8861;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30B8;&#x30F3;&#x5869;&#x9178;&#x5869; (GdnHCl) &#x306E;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30ED;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB; &#xFF08;TFE&#xFF09; &#x3067;&#x3059; A21G &#x3088;&#x308A;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x308A; D23N &#x3068; E22 &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304C;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6838;&#x5F62;&#x6210;&#x76F8;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3088;&#x308A;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3092;&#x767A;&#x898B; D23N &#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x9045;&#x3044;&#x3001;&#x6838;&#x3002;&#x307B;&#x304B;&#x306B;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x304C; nonfibrillar&#x3001;&#x30A2;&#x30E2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B9;&#x578B;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x5F62;&#x6210; a &beta; &#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027; a &beta; &#x306E;&#x6838;&#x751F;&#x6210;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &beta; 40 &#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5316;&#x306E;&#x6838;&#x751F;&#x6210;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xD615;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; misfolding, &#xB4A4;&#xC5D0; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC18C;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; self-association&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xC791; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3C5;&#xC131; prefibrillar &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB9CE;&#xC740; amyloidosis&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC9D1;&#xACC4; &#xC811;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xBC11;&#xC904;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xC544; &#xBC00; &#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &beta; (A&beta;) &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC0F; &#xC54C; &#xCE20; &#xD558;&#xC774; &#xBA38; &#xBCD1; (AD)&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC871; &#xBCC0;&#xD615; (A21G, E22Q, E22G, E22K, &#xBC0F; D23N)&#xC758; &#xC811;&#xB294; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;, &#xBD84;&#xC11D; ultracentrifugation, &#xD615;&#xAD11; &#xBC29;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xBA40;&#xB9AC; UV &#xC6D0;&#xD615; &#x9EC4; &#xC870;&#xD569;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; A&beta;40 &#xBCC0;&#xC885;&#xC740; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC794;&#xC5EC; 2 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xBA74; monomeric &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. Guanidine &#xC5FC; (GdnHCl) &#xBCC0;&#xC131; trifluoroethanol (TFE)&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; A&beta; &#xBCC0;&#xC885; &#xC57C;&#xC0DD; &#xC885;&#xB958;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; 2 &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD3C9;&#xD615; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xCC44;&#xD0DD; &#xD588;&#xB2E4; D23N &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; e22 &#xAC00;&#xB2A5; &#xBBA4;&#xD134;&#xD2B8; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC548;&#xC815; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; A21G &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Fibrillization nucleation &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xC811;&#xB294; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD00; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC548;&#xC815;, &#xBCC0;&#xC885; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB290;&#xB9B0; nucleation D23N &#xC81C;&#xC678;. &#xAC8C;&#xB2E4;&#xAC00;, &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; nonfibrillar, &#xC9D1;&#xACC4; &#xBE44;&#xC815; &#xC9C8; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xAC10;&#xC18C; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; A&beta; &#xB098; &#xB780;&#xC758; &#xC804;&#xAC1C;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; A&beta;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xC811;&#xB294; nucleation &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC99D;&#xBA85;.

&#xC544; &#xBC00; &#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBCA0;&#xD0C0; 40 &#xBAA8;&#xB178; &#xBA38;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xC811;&#xB294; fibrillization&#xC5D0;&#xC11C; nucleation &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC774;&#xB2E4;.

Formaci&oacute;n de amiloide se inicia por la prote&iacute;na mal plegamiento, seguido de autoasociaci&oacute;n para finalmente formar fibrillas amiloideas. El descubrimiento de olig&oacute;meros prefibrillar t&oacute;xicos en amiloidosis muchos subraya la importancia de comprender el mecanismo de plegado antes de dicha agregaci&oacute;n. Aqu&iacute;, hemos investigado las propiedades plegables del p&eacute;ptido amiloide nativamente desplegado-&beta; (A&beta;) y las variantes familiares (A21G, E22Q, E22G, E22K y D23N) en la enfermedad de Alzheimer (EA). En combinaciones de electroforesis nativa, ultracentrifugaci&oacute;n, emisi&oacute;n de fluorescencia y dicro&iacute;smo circular lejos-UV, se mostr&oacute; que todas las variantes de A&beta;40 son predominantemente monom&eacute;ricas con similares estructuras secundarias residuales, pero las superficies distintas prote&iacute;nas hidrof&oacute;bicas expuestas. Desnaturalizaci&oacute;n de guanidina clorhidrato (GdnHCl) en la ausencia y presencia de trifluoroethanol (TFE) demostrada que variantes de A&szlig; adoptaran un modelo de aparente equilibrio 2-Estado con diferentes estabilidades, de tipo salvaje es menos estable que A21G pero m&aacute;s estable que D23N y E22 mutantes. Al correlacionar la estabilidad plegable con la fase de nucleaci&oacute;n en fibrillization, encontramos la m&aacute;s estable de la variante, m&aacute;s lenta la nucleaci&oacute;n, excepto D23N. Adem&aacute;s, el despliegue de conformaci&oacute;n de A&szlig; conduce a reducida formaci&oacute;n de fibrillas maduras, pero un aumento en la nonfibrillar, tipo amorfo de agregados. En general, hemos demostrado que plegado estabilidad de A&szlig; es un factor determinante de la cin&eacute;tica de nucleaci&oacute;n.

Chun-Lun Ni

Department of Pathology,
Cell Biology Program

Case Western Reserve University School of Medicine

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Chun-Lun Ni

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Pathology,Cell Biology Program

Case Western Reserve University School of Medicine

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Department of Pathology,
Cell Biology Program