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Bacterial Detection &amp; Identification Using Electrochemical Sensors

Electrochemical  sensors are widely used for rapid and accurate measurement of blood glucose and  can be adapted for detection of a wide variety of ...

Veterans Affairs Greater Los Angeles Healthcare System

University of California, Los Angeles 

Here, we report that the smooth muscle and endothelium of the pig coronary artery differ in the profiles of energy metabolism nucleotides. ATP levels in the freshly isolated smooth muscle (1490 +/- 93, all the values are in pmol/mg protein) were significantly greater than in the endothelium (418 +/- 68). In contrast, endothelium contained higher levels of NADH (328 +/- 21), NAD+ (1210 -/+ 28), NADPH (87 +/- 2), and NADP+ (77 +/- 4) than smooth muscle (17 +/- 2, 96 +/- 14, 7 +/- 1, and 8 +/- 1, respectively). However, smooth muscle and endothelium do not differ from each other in the ratios of NADH/NAD+ or NADPH/NADP+. Cells cultured from smooth muscle and endothelium contained less ATP (93 +/- 2, 141 +/- 6) and had lower ratios of NADH/ NAD+ than the freshly isolated tissues but the NADPH/NADP+ ratios remained similar. We conclude that (a) freshly isolated smooth muscle and endothelium differ in their profiles of the energy metabolism nucleotides, and (b) culturing the cells alters the profile.

Endothelium and smooth muscle of pig coronary artery: differences in metabolism.

Nous rapportons ici que le muscle lisse et l&#39;endoth&eacute;lium de l&#39;art&egrave;re coronaire de porc diff&egrave;rent dans les profils des nucl&eacute;otides du m&eacute;tabolisme &eacute;nerg&eacute;tique. Taux d&#39;ATP dans le muscle lisse de la fra&icirc;chement isol&eacute; (1490 +/-93, toutes les valeurs sont en pmol/mg de prot&eacute;ine) ont &eacute;t&eacute; significativement plus &eacute;lev&eacute;e dans l&#39;endoth&eacute;lium (418 +/-68). Par contre, l&#39;endoth&eacute;lium contenue des niveaux plus &eacute;lev&eacute;s de NADH (328 +/-21), NAD + (1210-/ + 28), NADPH (87 + /-2) et le NADP + (77 +/-4) que le muscle lisse (17 +/-2, 96 +/-14, 7 +/-1 et 8 + /-1, respectivement). Cependant, muscle lisse et endoth&eacute;lium ne diff&egrave;rent pas entre eux dans les rapports du NADH / NAD + ou NADPH / NADP +. Les cellules cultiv&eacute;es &agrave; partir de muscles lisses et l&#39;endoth&eacute;lium contenait moins ATP (93 + /-2, 141 +/-6) et avaient des taux plus faibles de NADH / NAD + que les tissus fra&icirc;chement isol&eacute;es mais le NADPH / NADP + rapports reste similaires. Nous concluons que le muscle lisse a fra&icirc;chement isol&eacute; et l&#39;endoth&eacute;lium diff&egrave;rent dans leurs profils des nucl&eacute;otides du m&eacute;tabolisme &eacute;nerg&eacute;tique, et (b) mise en culture des cellules alt&egrave;re le profil.

L&#39;endoth&eacute;lium et muscle lisse de l&#39;art&egrave;re coronaire de porc : diff&eacute;rences de m&eacute;tabolisme.

Qui, segnaliamo che il muscolo liscio e dell&#39;endotelio delle arterie coronarie maiale differiscono nei profili dei nucleotidi del metabolismo energetico. Livelli di ATP nel muscolo liscio appena isolato (1490 + 93, tutti i valori sono in proteina pmol/mg) erano significativamente maggiori nell&#39;endotelio (418 + 68). Al contrario, endotelio conteneva livelli pi&ugrave; elevati di NADH (328 + 21), NAD + (1210-/ + 28), NADPH (87 + /-2) e NADP + (77 + /-4) di tessuto muscolare liscio (17 + 2, 96 + 14, 7 + 1 e 8 + 1, rispettivamente). Tuttavia, muscolo liscio e dell&#39;endotelio non differiscono tra loro in rapporti di NADH / NAD + o NADPH / NADP +. Cellule coltivate da muscolo liscio e dell&#39;endotelio contenuti meno ATP (93 + 2, 141 + /-6) e aveva rapporti inferiori di NADH / NAD + rispetto i tessuti appena isolati ma il NADPH / NADP + rapporti &egrave; rimasta simili. Concludiamo che (a) appena isolato muscolo liscio e dell&#39;endotelio differiscono nei loro profili dei nucleotidi metabolismo energetico, e (b) coltura le cellule altera il profilo.

Endotelio e muscolari lisce di arteria coronaria maiale: differenze nel metabolismo.

Aqu&iacute;, nos informan que el m&uacute;sculo liso y el endotelio de la arteria coronaria de cerdo difieren en los perfiles de nucle&oacute;tidos de metabolismo de energ&iacute;a. Los niveles de ATP en el m&uacute;sculo liso reci&eacute;n aislado (1490 + /-93, todos los valores est&aacute;n en pmol/mg de prote&iacute;na) fueron significativamente mayores que en el endotelio (418 + /-68). Por el contrario, endotelio contiene niveles m&aacute;s altos de NADH (328 + /-21), NAD + (1210-/ + 28), NADPH (87 + /-2) y el NADP + (77 + /-4) de m&uacute;sculo liso (17 + /-2, 96 + /-14, 7 +-1 y 8 + /-1, respectivamente). Sin embargo, m&uacute;sculo liso y endotelio no difieren entre s&iacute; en las proporciones de la NADH / NAD + o NADPH / NADP +. Las c&eacute;lulas cultivadas de m&uacute;sculo liso y endotelio conten&iacute;a menos ATP (93 + /-2, 141 + /-6) y ten&iacute;a ratios del NADH / NAD + que los tejidos reci&eacute;n aislados pero el NADPH / NADP + ratios se mantuvo similares. Concluimos que (a) recientemente aislado del m&uacute;sculo liso y endotelio difieren en sus perfiles de los nucle&oacute;tidos de metabolismo de la energ&iacute;a, y (b) las c&eacute;lulas de cultivo altera el perfil.

Endotelio y m&uacute;sculo liso de cerdo coronaria: diferencias en el metabolismo.

&#x663E;&#x793A;&#x4E09;&#x5143;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x5355;&#x5C42;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; coassembled &#x5DEF;&#x57FA;&#x6355;&#x83B7;&#x63A2;&#x9488;&#x3001; mercaptohexanol &#x548C;&#x9187;&#x5904;&#x7406;&#xFF0C;&#x662F;&#x4E3A;&#x4E86;&#x63D0;&#x4F9B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5171;&#x540C;&#x7684;&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x819C;&#x7684;&#x7535;&#x5316;&#x5B66; DNA &#x6742;&#x4EA4;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5230;&#x566A;&#x58F0;&#x7279;&#x6027;&#x663E;&#x8457;&#x6539;&#x5584;&#x3002;&#x975E;&#x5E38;&#x4F4E;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9650;&#x5236;&#x5230; 40 zmol (4 &mu;L &#x6837;&#x54C1;&#xFF09; &#x4E2D;&#x7684;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x53EA;&#x6709; 1 CFU &#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x56E0;&#x6B64;&#x662F;&#x4E0D;&#x5E38;&#x7528;&#x7684;&#x8FA3;&#x6839;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;/3&#xFF0C;3&#39;&#xFF0C;5&#xFF0C;5&#39;-tetramethylbenzidine &#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x8FDE;&#x63A5;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x989D;&#x5916;&#x6269;&#x589E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x3002;&#xFF08;&#x76F8;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x4E8C;&#x8FDB;&#x5236;&#x786B;&#x9187;&#x63A5;&#x53E3;&#x548C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x6700;&#x7535;&#x5316;&#x5B66; DNA &#x4F20;&#x611F;&#x65E0;&#x76EE;&#x6807;&#x6216;&#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#x7684;&#x7B56;&#x7565;&#xFF09; &#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9650;&#x5236;&#x8FD9;&#x79CD;&#x620F;&#x5267;&#x6027;&#x6539;&#x5584;&#x4E3B;&#x8981;&#x5F52;&#x529F;&#x975E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5438;&#x9644;&#x660E;&#x663E;&#x504F;&#x9AD8;&#x6297;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#x548C;&#x7EBF;&#x6027;-&#x914D;&#x7F6E;&quot;backfillers&quot;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x975E;&#x5E38;&#x4F4E;&#x7684;&#x80CC;&#x666F;&#x566A;&#x97F3;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x5B58;&#x5728;&#x590D;&#x6742;&#x793A;&#x4F8B;&#x77E9;&#x9635; &#xFF08;&#x5E26;&#x9488;&#x5B54;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x8F83;&#x4F4E;&#xFF09; &#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x538B;&#x7F29;&#x5C42;&#x3002;&#x88AB;&#x8C03;&#x67E5;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x6210;&#x5206;&#xFF0C;&#x800C;&#x6DF7;&#x5408;&#x5355;&#x5C42;&#x4E09;&#x5143;&#x5DF2;&#x88AB;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x4F18;&#x5316;&#x3002;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x963B;&#x6297;&#x8C31;&#x53CA;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4F0F;&#x5B89;&#x7814;&#x7A76;&#x68DA;&#xFF0C;&#x8868;&#x5C42;&#x8986;&#x76D6;&#x5230;&#x6709;&#x76CA;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x5370;&#x8C61;&#x6DF1;&#x523B;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x548C;&#x9AD8;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x975E;&#x5E38;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5F88;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3001; &#x6307;&#x793A;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BCA;&#x65AD;&#x3001; biothreat &#x68C0;&#x6D4B;&#x3001; &#x98DF;&#x54C1;&#x5B89;&#x5168;&#x548C;&#x6CD5;&#x533B;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x8D85;&#x7075;&#x654F; (Zeptomole) &#x5B89;&#x57F9;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x65E0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#x7684;&#x4E09;&#x5143;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x3002;

A ternary surface monolayer, consisting of coassembled thiolated capture probe, mercaptohexanol and dithiothreitol, is shown to offer dramatic improvements in the signal-to-noise characteristics of electrochemical DNA hybridization biosensors based on common self-assembled monolayers. Remarkably low detection limits down to 40 zmol (in 4 Î¼L samples) as well as only 1 CFU Escherichia coli per sensor are thus obtained without any additional amplification step in connection to the commonly used horseradish peroxidase/3,3',5,5'-tetramethylbenzidine system. Such dramatic improvements in the detection limits (compared to those of common binary alkanethiol interfaces and to those of most electrochemical DNA sensing strategies without target or signal amplification) are attributed primarily to the remarkably higher resistance to nonspecific adsorption. This reflects the highly compact layer (with lower pinhole density) produced by the coupling of the cyclic- and linear-configuration "backfillers" that leads to a remarkably low background noise even in the presence of complex sample matrixes. A wide range of surface compositions have been investigated, and the ternary mixed monolayer has been systematically optimized. Detailed impedance spectroscopy and cyclic voltammetric studies shed useful insights into the surface coverage. The impressive sensitivity and high specificity of the simple developed methodology indicate great promise for a wide range of nucleic acid testing, including clinical diagnostics, biothreat detection, food safety, and forensic analysis.

Ternary Surface Monolayers for Ultrasensitive (Zeptomole) Amperometric Detection of Nucleic Acid Hybridization without Signal Amplification.

Un monocouche de surface ternaire, constitu&#xE9; par une sonde de capture coassembled thiol&#xE9;, mercaptohexanol et le dithiothr&#xE9;itol, est repr&#xE9;sent&#xE9; &#xE0; offrir am&#xE9;liorer consid&#xE9;rablement les caract&#xE9;ristiques de signal sur bruit de biocapteurs &#xE9;lectrochimiques d&#x26;#39;hybridation d&#x26;#39;ADN sur la base de courants monocouches auto-assembl&#xE9;es. Limites de d&#xE9;tection remarquablement bas vers le bas &#xE0; 40 zmol (en 4 &#xE9;chantillons pL) ainsi que seulement une CFU par Escherichia coli capteur sont ainsi obtenu, sans aucune &#xE9;tape d&#x26;#39;amplification suppl&#xE9;mentaire en relation &#xE0; l&#x26;#39;couramment utilis&#xE9; peroxydase de raifort / 3,3 &#x26;#39;, 5,5&#x26;#39; -t&#xE9;tram&#xE9;thylbenzidine syst&#xE8;me. Ces am&#xE9;liorations spectaculaires dans les limites de d&#xE9;tection (par rapport &#xE0; ceux de communes interfaces alcanethiol binaires et &#xE0; ceux de la plupart des strat&#xE9;gies d&#x26;#39;ADN &#xE9;lectrochimiques de d&#xE9;tection sans cible ou d&#x26;#39;amplification du signal) sont attribu&#xE9;es principalement &#xE0; la r&#xE9;sistance bien sup&#xE9;rieure &#xE0; l&#x26;#39;adsorption non sp&#xE9;cifique. Ce qui refl&#xE8;te la couche tr&#xE8;s compacte (avec une densit&#xE9; inf&#xE9;rieure &#xE0; st&#xE9;nop&#xE9;) produit par l&#x26;#39;accouplement des cycliques et lin&#xE9;aires, de configuration &#x26;quot;backfillers&#x26;quot; qui conduit &#xE0; un bruit de fond extr&#xEA;mement faible, m&#xEA;me en pr&#xE9;sence de matrices d&#x26;#39;&#xE9;chantillons complexes. Une large gamme de compositions de surface ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;s, et la monocouche ternaire mixte a &#xE9;t&#xE9; syst&#xE9;matiquement optimis&#xE9;es. Spectroscopie d&#x26;#39;imp&#xE9;dance d&#xE9;taill&#xE9; et cycliques des &#xE9;tudes voltamm&#xE9;triques vers&#xE9; des indications utiles sur la couverture de la surface. La sensibilit&#xE9; impressionnante et une grande sp&#xE9;cificit&#xE9; de la m&#xE9;thodologie simple mise au point d&#x26;#39;indiquer de grandes promesses pour un large &#xE9;ventail de tests des acides nucl&#xE9;iques, y compris les diagnostics cliniques, la d&#xE9;tection de bioterrorisme, la s&#xE9;curit&#xE9; alimentaire et de l&#x26;#39;analyse m&#xE9;dico-l&#xE9;gale.

Monocouches de surface ternaires pour ultrasensible (Zeptomole) d&#xE9;tection amp&#xE9;rom&#xE9;trique d&#x26;#39;hybridation d&#x26;#39;acides nucl&#xE9;iques sans amplification du signal

Eine tern&auml;re Oberfl&auml;che Monolage, bestehend aus coassembled Thiolated Erfassung Sonde, Mercaptohexanol und Dithiothreitol, zeigt dramatische Verbesserungen in der Signal-Rausch-Merkmale der elektrochemische DNA-Hybridisierung-Biosensoren, die auf der Grundlage gemeinsamer assembled Monolayers bieten. Bemerkenswert niedrige Nachweisgrenzen bis 40 Zmol (in 4 &mu;L Proben) als auch nur 1 KBE Escherichia coli je Sensor werden daher ohne jede zus&auml;tzliche Verst&auml;rkung Schritt in Verbindung zu den h&auml;ufig verwendeten Meerrettich Peroxydase/3, 3&#39;, 5, 5&#39;-Tetramethylbenzidin-System ermittelt. Solche dramatischen Verbesserungen in die Nachweisgrenzen (verglichen mit denen der gemeinsame bin&auml;re Alkanethiol Schnittstellen und denen der meisten elektrochemische DNA Sensorik Strategien ohne Ziel oder Signal-Verst&auml;rkung) sind vor allem auf die auffallend h&ouml;here Resistenz gegen unspezifische Adsorption zur&uuml;ckzuf&uuml;hren. Dies spiegelt die sehr kompakte Schicht (mit niedriger Dichte der Lochkamera) produziert durch die Kopplung von der zyklische und lineare-Konfiguration &quot;Backfillers&quot;, die zu einem bemerkenswert niedrigen Hintergrundger&auml;usche auch in Gegenwart von komplexe Matrizen f&uuml;hrt. Eine Vielzahl von Oberfl&auml;chen Kompositionen haben untersucht wurden, und der tern&auml;ren gemischt Monolage systematisch optimiert wurde. Detaillierte Impedanz Spektroskopie und zyklische voltammetric Studien Schuppen n&uuml;tzliche Einblicke in die Oberfl&auml;che Abdeckung. Die beeindruckende Empfindlichkeit und hoher Spezifit&auml;t der einfachen entwickelten Methodik geben viel versprechend f&uuml;r eine Vielzahl von Nukleins&auml;ure-Tests, einschlie&szlig;lich klinische Diagnostik, Biothreat Erkennung, Lebensmittelsicherheit und forensische Analysen.

TERN&Auml;RE Oberfl&auml;che Monolayers ULTRASENSIBLE (Zeptomole) amperometrisch Nachweis von Nukleins&auml;ure-Hybridisierung ohne Signalverst&auml;rkung.

Un monostrato di superficie ternario, composto da sonda cattura tiolate coassembled, mercaptohexanol e ditiotreitolo, &egrave; mostrato da offrire notevoli miglioramenti nelle caratteristiche di segnale-rumore di biosensori di ibridazione DNA elettrochimici basati su comuni monostrati auto-assemblati. Limiti di rilevabilit&agrave; notevolmente bassa fino a 40 zmol (in 4 campioni &mu;L) cos&igrave; come solo 1 CFU Escherichia coli per sensore sono cos&igrave; ottenuti senza alcun ulteriore amplificazione passo in connessione con il comunemente usato rafano perossidasi/3, 3&#39;, 5, 5&#39;-tetrametilbenzidina sistema. Tali notevoli miglioramenti nei limiti di rilevazione (rispetto a quelli delle comuni interfacce di alcantioli binario e a quelle del DNA pi&ugrave; elettrochimico strategie senza amplificazione target o segnale di rilevamento) sono attribuiti principalmente alla resistenza notevolmente superiore all&#39;adsorbimento non specifico. Questo riflette il livello altamente compatto (con densit&agrave; inferiore a foro stenopeico) prodotto dall&#39;accoppiamento del ciclico e lineare-configurazione &quot;backfillers&quot; che conduce a un rumore di fondo notevolmente basso anche in presenza di matrici complesse campione. Una vasta gamma di composizioni di superficie sono stati indagati, e il ternario miscelati monostrato &egrave; stato ottimizzato sistematicamente. Spettroscopia di impedenza dettagliate e studi voltammetriche ciclici capannone utili approfondimenti la copertura superficiale. L&#39;impressionante sensibilit&agrave; e alta specificit&agrave; della metodologia sviluppata semplice indicare grande promessa per una vasta gamma di acidi nucleici test, tra cui la diagnostica clinica, biothreat rilevazione, sicurezza alimentare e analisi forense.

Monostrati superficie ternari per ultrasensibile rilevazione amperometrica (Zeptomole) di ibridazione degli acidi nucleici senza amplificazione del segnale.

coassembled&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x6355;&#x6349;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3001;mercaptohexanol&#x53CA;&#x3073;&#x30B8;&#x30C1;&#x30AA;&#x30B9;&#x30EC;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x4E09;&#x5143;&#x8868;&#x9762;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;DNA&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5BFE;&#x96D1;&#x97F3;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x6539;&#x5584;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; 40 zmol&#xFF08;4&#x3BC;L&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#xFF09;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3054;&#x3068;&#x306B;1 CFU&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x4F4E;&#x3044;&#x691C;&#x51FA;&#x9650;&#x754C;&#x4E0B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x897F;&#x6D0B;&#x30EF;&#x30B5;&#x30D3;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;/ 3,3 &#x26;#39;&#x3001;5,5&#x26;#39;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3059;&#x308B;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x3092;&#x7D4C;&#x305A;&#x306B;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F; - &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3002;&#x691C;&#x51FA;&#x9650;&#x754C;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x6539;&#x5584;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30EA;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5897;&#x5E45;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;DNA&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6226;&#x7565;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#xFF09;&#x4E3B;&#x306B;&#x975E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5438;&#x7740;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x62B5;&#x6297;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x5DE1;&#x56DE;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3082;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x4F4E;&#x3044;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CE;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x7DDA;&#x5F62;&#x69CB;&#x6210; &#x26;quot;backfillers&#x26;quot;&#x306E;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8;&#x306A;&#x5C64;&#xFF08;&#x4E0B;&#x5074;&#x306E;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x5BC6;&#x5EA6;&#xFF09;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x7269;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306F;&#x8ABF;&#x3079;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x4E09;&#x5143;&#x6DF7;&#x5408;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x306F;&#x3001;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A73;&#x7D30;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x88AB;&#x8986;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x6D41;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5370;&#x8C61;&#x7684;&#x306A;&#x611F;&#x5EA6;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306A;&#x958B;&#x767A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3001;biothreat&#x691C;&#x51FA;&#x3001;&#x98DF;&#x54C1;&#x306E;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C3;&#x30AF;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6838;&#x9178;&#x691C;&#x67FB;&#x3001;&#x5E83;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x5049;&#x5927;&#x306A;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x5897;&#x5E45;&#x306A;&#x3057;&#x6838;&#x9178;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x8D85;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#xFF08;&#x30BC;&#x30D7;&#x30C8;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E09;&#x8868;&#x9762;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;

&#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xB9BD;&#xB41C; monolayers &#xAE30;&#xBC18; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; DNA &#xAD50; &#xC7A1; biosensors&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;-&#xC7A1;&#xC74C; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; coassembled thiolated &#xCEA1;&#xCC98; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;, mercaptohexanol &#xBC0F; dithiothreitol, &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xC0BC;&#xD56D; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E8;&#xCE35; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB0AE;&#xC740; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD55C;&#xACC4; (4 &mu; L &#xC0D8;&#xD50C;)&#xC5D0;&#xC11C; 40 zmol&#xB85C; 1&#xB9CC; CFU &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC13C;&#xC11C; &#xB2F9; &#xCD5C;&#xC800; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC591; &#xACE0;&#xCD94;&#xB0C9;&#xC774; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;/3, 3&#39;, 5, 5&#39;-tetramethylbenzidine &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xCD94;&#xAC00;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC80;&#xCD9C; &#xD55C;&#xACC4; (&#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xC9C4; alkanethiol &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xAC83; &#xBC0F; &#xADF8; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC804;&#xB7B5; &#xB300;&#xC0C1; &#xB610;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC5C6;&#xC774; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; DNA&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;)&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xC120; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC77C;&#xBC18; &#xD761;&#xCC29;&#xC744; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB192;&#xC740; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xD560;&#xB2F9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC758; &#xC21C;&#xD658; &#xBC0F; &#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC131; &quot;backfillers&quot;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0D8;&#xD50C; &#xD589;&#xB82C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB3C4; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB0AE;&#xC740; &#xBC30;&#xACBD; &#xC7A1;&#xC74C; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; (&#xB0AE;&#xC740; pinhole &#xBC00;&#xB3C4;)&#xC640; &#xCD08;&#xC18C;&#xD615; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xB97C; &#xBC18;&#xC601; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xD45C;&#xBA74; &#xC791;&#xACE1;, &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xCE35; &#xD63C;&#xD569; &#xC0BC;&#xD56D; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xC784;&#xD53C;&#xB358;&#xC2A4; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; &#xC21C;&#xD658; voltammetric &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD45C;&#xBA74; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xD758;&#xB838;&#xB2E4;. &#xC778;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xB3C4; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB41C; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xC784;&#xC0C1; &#xC9C4;&#xB2E8;, biothreat &#xAC80;&#xCD9C;, &#xC2DD;&#xD488; &#xC548;&#xC804;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC815;&#xBC00; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD575; &#xC0B0; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC704;&#xB300;&#xD55C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC5C6;&#xC774; &#xD575; &#xC0B0; &#xAD50; &#xC7A1;&#xC758; &#x78C1; (Zeptomole) Amperometric &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; 3 &#xC9C4; &#xD45C;&#xBA74; Monolayers.

Una monocapa superficie ternario, que consta de la sonda de captura coassembled tiolado, mercaptohexanol y ditiotreitol, se muestra para ofrecer mejoras en las caracter&#xED;sticas de la se&#xF1;al-ruido de biosensores electroqu&#xED;micos de hibridaci&#xF3;n de ADN basadas en comunes monocapas auto-ensambladas. L&#xED;mites de detecci&#xF3;n notablemente baja reduce a 40 zmol (en 4 muestras l), as&#xED; como s&#xF3;lo 1 CFU Escherichia coli por sensor de este modo se obtienen sin ning&#xFA;n paso de amplificaci&#xF3;n adicional en relaci&#xF3;n a la com&#xFA;nmente utilizada peroxidasa de r&#xE1;bano picante / 3,3 &#x26;#39;, 5,5&#x26;#39; sistema-tetrametilbencidina. Tales mejoras en los l&#xED;mites de detecci&#xF3;n (en comparaci&#xF3;n con los de las interfaces comunes binarios y alcanotiol a los de la mayor&#xED;a de las estrategias de ADN electroqu&#xED;micas de detecci&#xF3;n sin objetivo o amplificaci&#xF3;n de la se&#xF1;al) se atribuye principalmente a la resistencia notablemente superior a adsorci&#xF3;n no espec&#xED;fica. Esto refleja la capa altamente compacto (con densidad orificio inferior) producida por el acoplamiento de los c&#xED;clicos y lineales en configuraci&#xF3;n &#x26;quot;backfillers&#x26;quot; que lleva a un ruido de fondo notablemente bajo, incluso en presencia de matrices de muestras complejas. Una amplia gama de composiciones de superficie han sido investigados, y la monocapa mixta ternario ha sido optimizado de manera sistem&#xE1;tica. Espectroscop&#xED;a de impedancia detallada y estudios de voltametr&#xED;a c&#xED;clica arrojar informaci&#xF3;n &#xFA;til sobre la cobertura de superficie. La enorme sensibilidad y alta especificidad de la metodolog&#xED;a sencilla desarrollada indican una gran promesa para una amplia gama de pruebas de &#xE1;cido nucleico, incluidos el diagn&#xF3;stico cl&#xED;nico, la detecci&#xF3;n biothreat, seguridad alimentaria, y el an&#xE1;lisis forense.

Monocapas ternarias de superficie para ultrasensible (Zeptomole) la detecci&#xF3;n amperom&#xE9;trica de hibridaci&#xF3;n de &#xE1;cidos nucleicos Sin amplificaci&#xF3;n de la se&#xF1;al

We report the concentration and purification of bacterial 16S rRNA by the use of a biotinylated DNA target-specific capture (TSC) probe. For both cultivated bacterial and urine specimens from urinary tract infection patients, TSC resulted in a 5- to 8-fold improvement in the sensitivity of bacterial detection in a 16S rRNA electrochemical sensor assay.

Target-specific capture enhances sensitivity of electrochemical detection of bacterial pathogens.

On rapport de la concentration et la purification de l&#x26;#39;ARNr 16S bact&#xE9;rienne par l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un ADN sp&#xE9;cifique d&#x26;#39;une cible de capture biotinyl&#xE9; (TSC) de sonde. Pour les deux sp&#xE9;cimens cultiv&#xE9;s bact&#xE9;riennes et l&#x26;#39;urine de patients d&#x26;#39;infection des voies urinaires, TSC a entra&#xEE;n&#xE9; une 5 - &#xE0; 8 fois l&#x26;#39;am&#xE9;lioration de la sensibilit&#xE9; de la d&#xE9;tection bact&#xE9;rienne dans un essai de l&#x26;#39;ARNr 16S capteur &#xE9;lectrochimique.

Sp&#xE9;cifique &#xE0; la cible de capture augmente la sensibilit&#xE9; de d&#xE9;tection &#xE9;lectrochimique de bact&#xE9;ries pathog&#xE8;nes

Wir berichten, der Konzentration und Reinigung von bakterielle 16S rRNA durch den Einsatz von biotinylierten DNA zielspezifische erfassen (TSC) Sonde. F&uuml;r kultivierten Bakterien- und Urinproben von urinausscheidende Fl&auml;che Infektion Patienten f&uuml;hrte TSC eine 5 und 8 8-fach Verbesserung der Empfindlichkeit der bakteriellen Erkennung in einem 16S rRNA elektrochemischer Sensor Probe.

Zielspezifische Erfassung erh&ouml;ht die Empfindlichkeit der elektrochemischen Detektion von bakteriellen Krankheitserregern.

Riportiamo la concentrazione e la purificazione di batterico rRNA 16S mediante l&#39;uso di una sonda di cattura specifica della destinazione (TSC) DNA biotinilato. Sia coltivata batterica di campioni di urina da pazienti con infezioni del tratto urinario, TSC portato in un miglioramento di 5 a 8 volte la sensibilit&agrave; di rilevamento batterica in un saggio del sensore elettrochimico di rRNA 16S.

Acquisizione del bersaglio specifico migliora la sensibilit&agrave; di rilevazione elettrochimica di agenti patogeni batterici.

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x7EAF;&#x5316;&#x7EC6;&#x83CC; 16S rRNA &#x7D20; DNA &#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x6355;&#x83B7; (TSC) &#x63A2;&#x9488;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x8015;&#x5730;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x5C3F;&#x8DEF;&#x611F;&#x67D3;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x5C3F;&#x6DB2;&#x6807;&#x672C;&#xFF0C;TSC 5 &#x5230; 8 &#x500D;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x5BFC;&#x81F4; 16S rRNA &#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x3002;

&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x6355;&#x83B7;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x7535;&#x5316;&#x5B66;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;DNA&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#xFF08;TSC&#xFF09;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;16S rRNA&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C3F;&#x8DEF;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x683D;&#x57F9;&#x7D30;&#x83CC;&#x3084;&#x5C3F;&#x691C;&#x4F53;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3001;TSC&#x306F;&#x3001;5&#x306E;&#x7D50;&#x679C; -  16S rRNA&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x304C;8&#x500D;&#x5411;&#x4E0A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC9D1;&#xC911;&#xB825;&#xACFC; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; 16S &#xC815;&#xD654; rRNA biotinylated DNA &#xD2B9;&#xC815; &#xB300;&#xC0C1; &#xCEA1;&#xCC98; (TSC) &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC7AC;&#xBC30; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC640; &#xC694;&#xB85C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xBCC0; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC744; TSC 16S rRNA &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559; &#xC13C;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xADE0; &#xAC80;&#xCD9C; &#xAC10;&#xB3C4; 5-&#xC744; 8 &#xBC30; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC;.

&#xB300;&#xC0C1; &#xD2B9;&#xC815; &#xCEA1;&#xCC98; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC758; &#xC804;&#xAE30; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se presenta la concentraci&#xF3;n y purificaci&#xF3;n de rRNA 16S bacteriano mediante el uso de un ADN biotinilado espec&#xED;fico del destino de captura (TSC) de la sonda. Para ambas muestras cultivadas bacterianas y orina de pacientes del tracto urinario infecci&#xF3;n, TSC result&#xF3; en un 5 - a 8-veces mejora en la sensibilidad de detecci&#xF3;n de bacterias en un ensayo de ARNr 16S sensor electroqu&#xED;mico.

Objetivo espec&#xED;fico de la captura aumenta la sensibilidad de la detecci&#xF3;n electroqu&#xED;mica de los pat&#xF3;genos bacterianos

Precursor rRNA (pre-rRNA) is an intermediate stage in the formation of mature rRNA and is a useful marker for cellular metabolism and growth rate. We developed an electrochemical sensor assay for Escherichia coli pre-rRNA involving hybridization of capture and detector probes with tail sections that are spliced away during rRNA maturation. A ternary self-assembled monolayer (SAM) prepared on gold electrode surfaces by coassembly of thiolated capture probes with hexanedithiol and posttreatment with 6-mercapto-1-hexanol minimized the background signal and maximized the signal-to-noise ratio. Inclusion of internal calibration controls allowed accurate estimation of the pre-rRNA copy number per cell. As expected, the ratio of pre-rRNA to mature rRNA was low during stationary phase and high during log phase. Pre-rRNA levels were highly dynamic, ranging from 2 copies per cell during stationary phase to ~1,200 copies per cell within 60 min of inoculation into fresh growth medium. Specificity of the assay for pre-rRNA was validated using rifampin and chloramphenicol, which are known inhibitors of pre-rRNA synthesis and processing, respectively. The DNA gyrase inhibitor, ciprofloxacin, was found to act similarly to rifampin; a decline in pre-rRNA was detectable within 15 min in ciprofloxacin-susceptible bacteria. Assays for pre-rRNA provide insight into cellular metabolism and are promising predictors of antibiotic susceptibility.

Rapid antimicrobial susceptibility testing by sensitive detection of precursor rRNA using a novel electrochemical biosensing platform.

ARNr pr&eacute;curseurs (pr&eacute;-ARNr) est un stade interm&eacute;diaire dans la formation des ARNr matures et est un marqueur utile pour des taux de croissance et le m&eacute;tabolisme cellulaire. Nous avons d&eacute;velopp&eacute; un test de capteur &eacute;lectrochimique pour Escherichia coli pr&eacute;-ARNr impliquant hybridation de sondes de capture et d&eacute;tecteur avec des sections de queue qui sont &eacute;piss&eacute;es d&eacute;c&eacute;d&eacute; au cours de la maturation de l&#39;ARNr. Un ternaire Self-Assembled monocouche (SAM) pr&eacute;par&eacute; &agrave; la surface de l&#39;&eacute;lectrode d&#39;or Co-assemblage de sondes de capture THIOL&Eacute;S avec hexanedithiol et apr&egrave;s le traitement avec 6-mercapto-1-hexanol minimis&eacute; le signal de fond et maximiser le rapport signal-sur-bruit. Inclusion des contr&ocirc;les d&#39;&eacute;talonnage interne a permis une estimation pr&eacute;cise du nombre pr&eacute;-ARNr exemplaire par cellule. Comme pr&eacute;vu, le rapport de pr&eacute;-ARNr &agrave; m&ucirc;rir les ARNr &eacute;tait faible au cours de la phase stationnaire et &eacute;lev&eacute; au cours de la phase logarithmique. Pr&eacute;-ARNr niveaux &eacute;taient tr&egrave;s dynamiques, allant de 2 copies par cellule au cours de la phase stationnaire &agrave; ~ 1 200 copies par cellule dans les 60 min apr&egrave;s l&#39;inoculation dans le milieu de croissance fra&icirc;che. Sp&eacute;cificit&eacute; de l&#39;essai pour pr&eacute;-ARNr a &eacute;t&eacute; valid&eacute;e &agrave; l&#39;aide de la rifampicine et le chloramph&eacute;nicol, qui sont connus des inhibiteurs de la synth&egrave;se de la pr&eacute;-ARNr et traitement, respectivement. L&#39;inhibiteur de l&#39;ADN gyrase, ciprofloxacine, s&#39;est av&eacute;r&eacute; pour agir de m&ecirc;me &agrave; la rifampicine ; un d&eacute;clin dans la pr&eacute;-ARNr est d&eacute;celable dans les 15 min chez les bact&eacute;ries sensibles &agrave; la ciprofloxacine. Dosages pour pr&eacute;-ARNr donnent un aper&ccedil;u de m&eacute;tabolisme cellulaire et sont prometteurs pr&eacute;dicteurs de la sensibilit&eacute; aux antibiotique.

La sensibilit&eacute; aux antimicrobiens rapide test de sensibilit&eacute; de d&eacute;tection du pr&eacute;curseur ARNr utilisant une plateforme de biocapteurs &eacute;lectrochimiques roman.

Precursore rRNA (pre-rRNA) &egrave; uno stadio intermedio nella formazione del rRNA maturo ed &egrave; un utile marker per il tasso di metabolismo e la crescita cellulare. Abbiamo sviluppato un test del sensore elettrochimico per l&#39;Escherichia coli pre-rRNA che coinvolgono ibridazione di sonde cattura e rivelatore con sezioni di coda che sono impiombate via durante la maturazione del rRNA. Un ternario self-assembled monostrato (SAM) preparato su superfici elettrodo d&#39;oro di coassembly di tiolate cattura sonde con hexanedithiol e posttreatment con 6-mercapto-1-esanolo minimizzato il segnale di background e massimizzare il rapporto segnale-rumore. Inclusione dei controlli di calibrazione interna ha permesso una stima accurata del numero pre-rRNA copia per ogni cella. Come previsto, il rapporto di pre-rRNA maturare rRNA era bassa durante la fase stazionaria ed alta durante la fase di log. Livelli pre-rRNA sono altamente dinamici, che vanno da 2 copie per cellula durante la fase stazionaria a ~ 1.200 copie per cellula entro 60 min di inoculo nel terreno di coltura fresco. Specificit&agrave; del test per la pre-rRNA &egrave; stato convalidato con rifampicina e cloramfenicolo, che sono noti inibitori della sintesi di pre-rRNA ed elaborazione, rispettivamente. L&#39;inibitore di DNA girasi, ciprofloxacina, &egrave; stato trovato ad per agire analogamente a rifampicina; un declino nella pre-rRNA era rilevabile entro 15 min in batteri ciprofloxacina-sensibili. Saggi per pre-rRNA forniscono informazioni nel metabolismo cellulare e sono promettenti predittori di sensibilit&agrave; agli antibiotici.

Suscettibilit&agrave; antimicrobica rapida test di rilevazione sensibile del precursore rRNA utilizzando una piattaforma romanzo biosensori elettrochimici.

Colin Halford

Research service

Veterans Affairs Greater Los Angeles Healthcare System

Bacterial Detection & Identification Using Electrochemical Sensors